一種人工合成的麥胚肽及其製備方法與應用的製作方法
2023-10-17 06:02:44 1
一種人工合成的麥胚肽及其製備方法與應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及生物醫藥領域，公開了一種人工合成的具有抗氧化應激活性的麥胚肽，並公開了其製備方法和作為抗氧化劑的應用。本發明所述麥胚肽利用Fmoc固相化學法合成，含有3個胺基酸殘基，序列為Arg-Val-Phe，結構式如下。試驗表明其可通過維護細胞膜完整性、提高細胞活力、增強線粒體膜酶活等方式保護氧化損傷的神經細胞，對H2O2誘導人神經細胞的氧化應激和凋亡具有顯著的保護作用。
【專利說明】一種人工合成的麥胚肽及其製備方法與應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物醫藥領域，具體地說，涉及一種人工合成的麥胚肽及其製備方法與應用。
【背景技術】
[0002]據統計，全世界60歲以上老年人口總數已達到6億，其中有60多個國家的老年人口達到或超過人口總數的10%，進入了老齡化社會行列。人口老齡化的迅速發展及引起的一系列問題，引起了世界各國政府的重視和關注。截至目前，我國60歲及以上老年人口達
1.85億，佔總人口的比重達13.7%，預計到「十二五」末，全國老年人口將增加4300多萬，達到2.21億。隨著年齡的增長，許多器官可能會出現功能障礙，這種功能障礙發展到一定程度便表現出症狀，這便是「老年病」。我國兩大主要老年病阿爾茨海默病(AD)和帕金森病(PD)的患病人數已達1500萬以上，由於目前尚無有效的治療藥物，使得這些疾病嚴重降低了患者的生活質量，也給整個社會和家庭帶來巨大壓力和負擔。而根據流行病學日前的研究發現，老年人群若長期補充一定劑量的抗氧化劑，可以有效降低心腦血管疾病和癌症的發病率。因此，減少自由基、抗氧化治療在ro和AD患者治療中的作用日益受到藥物研究者和臨床醫學家的重視。
[0003]近年來，抗氧化肽類作為一種非酶類自由基清除劑的研究正在興起。現已經報導從食物蛋白源中酶解或提取的具有抗氧化活性的肽包括麥胚肽，大豆肽、牛乳清蛋白肽、玉米肽、小麥谷蛋白肽等。
[0004]麥胚是小麥加工的副產物，是具有生命活力的植物胚胎。麥胚蛋白經過適當的蛋白酶水解及純化後，生成的麥胚多肽不僅易於消化吸收，更具有清除自由基、抑制脂質過氧化的作用，可將其作為食品和醫藥領域潛在的抗氧化劑來進行開發。目前研究已證實麥胚肽在體外具有較強的清除自由基的能力。然而，麥胚肽的提取、分離純化過程過於繁瑣、複雜，不能保證廣品品質的穩定。
【發明內容】
[0005]為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的在於提供一種人工合成的麥胚肽及其製備方法，以及其作為抗氧化劑在製備預防與神經細胞氧化應激相關疾病藥物中的應用。
[0006]為了實現本發明目的，本發明首先提供一種人工合成的具有抗氧化應激活性的麥胚肽，其胺基酸序列為Arg-Val-Phe，結構式如下:
[0007]
【權利要求】
1.一種人工合成的具有抗氧化應激活性的麥胚肽，其特徵在於，其胺基酸序列為Arg-Val-Phe,結構式如下。
2.如權利要求1所述的麥胚肽，其特徵在於，其是以N-芴甲氧羰基保護的苯丙氨酸為原料，通過兩次縮合反應，依次分別連接由N-芴甲氧羰基保護的纈氨酸和精氨酸，生成麥胚肽。
3.權利要求1所述的麥胚肽的製備方法，其特徵在於，包括如下步驟: (1)樹脂溶脹； (2)脫除氨基保護； (3)二肽的合成； (4)三肽的合成； (5)麥胚肽樹脂切割； (6)析出麥胚肽。
4.如權利要求3所述的製備方法,其特徵在於,所述步驟(1)為將30mmol的Fmoc-L-苯丙氨酸-王樹脂置於反應器中，用300mL 二氯甲烷浸泡，待樹脂膨脹，溶脹30min，抽濾除去二氯甲烷。
5.如權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，所述步驟(2)為加入體積比為2:8的六氫吡啶與N，N- 二甲基甲醯胺混合溶液浸泡步驟(1)所得樹脂，使用氮氣鼓動，反應結束後用N，N- 二甲基甲醯胺洗滌樹脂。
6.如權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，所述步驟(3)為將溶有ISmmolFmoc-L-糹顏氨酸的溶液150mL與溶有IOOmmolN, N' - 二異丙基碳醯亞胺和90mmoll_羥基苯駢三氮唑的溶液120mL在冰浴下混合，反應0.5h ;然後與步驟(2)處理過的樹脂混合，再加 16.5mmoI的4- 二甲氨基吡唆，室溫下反應5h ;過濾，用N，N- 二甲基甲醯胺、二氯甲烷、甲醇分別洗滌三次，每次3min ;將450mL無水吡啶、90mL乙酸酐溶於600mL N, N- 二甲基甲醯胺後倒入樹脂中，反應2h ;反應結束後用N，N- 二甲基甲醯胺、二氯甲烷、甲醇各1000mL輪流洗滌樹脂三次，每次3min，真空乾燥。
7.如權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，所述步驟(4)為重複步驟(2)-(3)，將步驟(3)中的Fmoc-L-糹顏氨酸替換為Fmoc-L-精氨酸,連接Fmoc-L-精氨酸完成三肽合成，將樹脂用二氯甲烷和乙醚浸泡後抽乾。
8.如權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，所述步驟(5)為將所得三肽-樹脂置於砂芯反應器中，加入750mL切割試劑，反應2h，過濾，旋轉蒸發濃縮濾液，在濃縮液中加入.600mL冰乙醚,析出沉澱,在5000r/m下離心IOmin,然後棄去上清液,真空乾燥沉澱；其中，所述切割試劑為體積分數為2.5%水，2.5%三異丙基矽烷和95%三氟乙酸混合而成。
9.如權利要求3所述的製備方法，其特徵在於，所述步驟(6)為濾去樹脂，向濾液中加入無水乙醚,用離心機離心後獲得固體,加入無水乙醚洗滌,再離心,重複數次後經HPLC脫鹽、凍幹即可獲得麥胚肽。
10.權利要求1所述的麥胚肽作為抗氧化劑在製備預防與神經細胞氧化應激相關疾病藥物中的應用。
【文檔編號】C07K5/09GK103626844SQ201310589424
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年11月20日 優先權日:2013年11月20日
【發明者】程雲輝 申請人:長沙理工大學