一種同時檢測蘋果中五種多酚並進行品種識別的hplc方法
2023-12-12 04:31:02 1
專利名稱：一種同時檢測蘋果中五種多酚並進行品種識別的hplc方法
技術領域：
本發明涉及一種蘋果中五種多酚的檢測方法，特別涉及利用多酚檢測含量進行不同品種的識別方法的建立。
背景技術：
多酚類物質是具有苯環並結合有多個羥基化學結構的物質總稱，包括黃酮類、單寧類、酚酸類以及花色苷類等。一般作為生長代謝中的次生產物，廣泛存在於植物的組織中，對植物的生長發育和調節，基因的誘導表達，信號轉導，紫外輻射的吸收，生物固氮以及果蔬加工過程中風味的形成，顏色變化(如褐變)，果蔬飲料的混濁與沉澱，等都有一定的影響。其中，沒食子酸，綠原酸，咖啡酸，原兒茶酸和蘆丁是植物中廣泛存在的五種多酚，以其抗病毒，抗癌症等藥理特性越來越受到中外學者的關注。這五種化合物的結構式如下所
不
權利要求
1.一種同時檢測蘋果中五種多酚的HPLC方法，其特徵是，包括以下步驟(1)蘋果的前處理將蘋果去核，加入足量的抗壞血酸水溶液，用榨汁機粉碎後採用超聲、氮氣保護或加熱方法防止褐變；(2)多酚物質的提取採用甲醇-水溶液或乙酸乙酯提取，所述甲醇-水溶液提取為稱取粉碎好的蘋果樣品，加入甲醇-水溶液，渦旋震蕩後超聲；離心，將上清液過濾至燒瓶，然後重複萃取一次， 合併上清液；取上清液過0. 45 μ m的濾膜，然後用HPLC檢測；所述乙酸乙酯提取為稱取粉碎好的蘋果樣品，加入乙酸乙酯，渦旋震蕩後超聲；離心，將上清液過濾至燒瓶，然後重複萃取一次，合併上清液；旋轉蒸乾後用乙腈定容，然後用HPLC檢測；(3)五種多酚的同時檢測HPLC-DAD檢測色譜柱=Atlantis C18，規格為5 μ m, 250mmX 4. 5mm，選擇柱溫，選擇流動相梯度洗脫，選擇測定波長後檢測；(4)多酚含量測定方法的建立用甲醇-水溶液逐級稀釋五種多酚標準品，配製成一組混合工作標準溶液，以每個濃度下的標準溶液所得的相對響應值為縱坐標，標準溶液的濃度為橫坐標，分別建立標準校正曲線，在檢測樣品時，根據樣品所得的相對響應值，然後分別從標準曲線中讀出樣品中各種多酚含量。
2.如權利要求1所述的同時檢測蘋果中五種多酚的HPLC方法，其特徵是，所述步驟(1)採用超聲方法防止褐變，所述抗壞血酸溶液的質量百分濃度為1%。
3.如權利要求1所述的同時檢測蘋果中五種多酚的HPLC方法，其特徵是，所述步驟(2)多酚物質的提取為稱取5g粉碎好的蘋果樣品，加入20mL甲醇-水溶液，渦旋震蕩IOs 後超聲30min，以4000rpm離心5min，將上清液過濾至150ml燒瓶，然後重複萃取一次，合併上清液；取2. Oml上清液過0. 45 μ m濾膜後，取40 μ L用HPLC檢測，所述甲醇-水溶液中甲醇與水的體積比為1 1。
4.如權利要求1-3中任意-項所述的同時檢測蘋果中五種多酚的HPLC方法，其特徵是，所述步驟(3)流動相為A 乙酸-水溶液，B:乙腈；所述梯度洗脫為流速為Iml/ min，初始比例為流動相A B體積比95 5，到18min時流動相A B體積比變為65 35， 到19min時恢復為95 5，柱溫35°C，檢測波長為270nm，檢測時間20min。
5.如權利要求1-3中任意一項所述的同時檢測蘋果中五種多酚的HPLC方法，其特徵是，所述驟(4)多酚含量測定方法的建立為首先稱取五種多酚標準品各10mg，分別用甲醇-水溶液溶解為lmg/mL的標準儲備液於_20°C保存，然後用甲醇-水溶液繼續稀釋到 10ug/mL的中間液，密封保存於4°C ；配製混合標準溶液，用甲醇-水溶液逐級稀釋使綠原酸含量為1-100 μ g/mL，其他四種多酚含量為0. 5-50μ g/mL ；然後以每個濃度下的標準溶液所得的相對響應值為縱坐標，標準溶液的濃度為橫坐標，分別建立標準校正曲線，在檢測樣品時，根據樣品所得的相對響應值，然後分別從標準曲線中讀出樣品中各種多酚含量，所述甲醇-水溶液中甲醇與水的體積比為1 1。
6.利用蘋果中五種多酚的含量進行品種識別的方法，其特徵是，將不同品種不同地區的蘋果按照權利要求1所述方法進行處理，並對其五種多酚含量數據進行比較，選擇含量差距較大的兩種多酚作為分布圖的橫縱坐標做出分布圖，然後利用測定的待測蘋果的多酚含量數據，通過分布圖找出待測蘋果所對應的品種和產地。
7.如權利要求6所述的利用蘋果中五種多酚的含量進行品種識別的方法，其特徵是， 選擇綠原酸和蘆丁含量作為分布圖的橫縱坐標做分布圖。
8.如權利要求6或7所述的利用蘋果中五種多酚的含量進行品種識別的方法，其特徵是，所述不同品種不同地區蘋果的處理方法為稱取5g勻質好的蘋果樣品，加入20mL體積比1 1的甲醇-水溶液，渦旋震蕩IOs後超聲30min，以4000rpm離心5min，將上清液過濾至150ml燒瓶，然後重複萃取一次，合併上清液；取2. Oml上清液過0. 45 μ m濾膜後，取 40yL用HPLC檢測；根據樣品所得的相對響應值，然後分別從標準曲線中讀出樣品中各種多酚含量。
全文摘要
本發明公開了一種同時檢測蘋果中五種多酚並進行品種識別的HPLC方法。它首先將蘋果去核，加入抗壞血酸，粉碎後採用超聲、氮氣保護或加熱方法防止褐變，然後加入甲醇-水溶液或乙酸乙酯超聲提取，收集上清液後重複提取一次，合併上清液，進行HPLC檢測。根據不同品種不同地區所測五種多酚含量分析，採用綠原酸和蘆丁作為目標化合物對七個不同蘋果品種進行識別。本發明採用HPLC同時快速分離測定五種多酚，並達到對不同品種的蘋果識別的目的，此方法樣品前處理簡單，成本低，可同時測定，實現了對不同品種蘋果的識別。
文檔編號G01N30/06GK102175790SQ20111000217
公開日2011年9月7日 申請日期2011年1月7日 優先權日2011年1月7日
發明者呂瀟, 李增梅, 苑學霞, 谷小紅, 趙善倉, 鄧立剛, 郭長英, 陳學兵, 陳寧寧 申請人:山東省農業科學院中心實驗室