從構樹葉中提取一種黃酮類物質在製備抗皮膚真菌感染藥物的應用的製作方法
2023-09-14 21:05:10 1
專利名稱：從構樹葉中提取一種黃酮類物質在製備抗皮膚真菌感染藥物的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，特別一種從構樹葉中提取一種黃酮類物質在製備抗 皮膚真菌感染藥物的應用。
二背景技術：
構樹葉來源於桑科構屬植物構樹(Broussonetia papyrifera (Ll)Vent .)的葉
片，構樹葉又名構葉、谷樹葉，性味甘、涼，功效清熱涼血，收斂利溼。 通常用於鼻衄、吐血、崩漏、腸炎、痢疾、白濁、溼疹，歷代本草及民間用藥 均表明其具有治療皮膚病，如皮癬、溼癢、癬瘡等功效，《本草綱目》雲"去 風溼腫脹……，癬瘡"，皮膚真菌感染是一種常見病症，有人研究發現，構樹葉 乙醇提取物具有抗真菌感染的作用，提示構樹葉中的生物鹼、苷類及苷元、萜 類等極性較強的物質具有抗菌活性，隨著菌株的變異和耐藥性的增強，加之化 學藥物本身的副作用，使化學藥物的應用受到了限制，從而使眾多學者對中草 藥抗真菌進行了大量研究，但至今未見有從構樹葉中提取黃酮類物質用於製備 抗皮膚真菌感染藥物的報導。構樹在我國分布十分廣泛，藥材來源充足，那麼 能否從構樹葉中提取用於研製出新的抗皮膚真菌感染的藥物呢？如能成功，不 但可以充分利用資源，減少皮膚病患者的痛苦，還可以創造出更大經濟效益和 社會效益。
三
發明內容
針對上述情況，本發明之目的就是提供一種從構樹葉中提取一種黃酮類物 質在製備抗皮膚真菌感染藥物的應用，可有效用於製備抗皮膚真菌感染的藥物， 解決抗皮膚真菌感染的藥物問題，其解決的技術方案是，取構樹葉，粉碎，打
成粗粉，加入10-8倍量構樹葉粗粉重量體積的質量濃度為70%的乙醇，加熱回 流提取2次，每次兩小時，合併兩次的提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味， 所得濃縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收 正丁醇，得構樹葉黃酮類浸膏，即得抗皮膚真菌感染的黃酮類物質，得率為0.2%， 將其溶於適量水中並加入吐溫-80溶解均勻，每200g構樹葉粗粉提取的黃酮類物質中加吐溫-80 3g溶解，得溶解液，使溶解液每毫升含2g黃酮類物質，作為 藥液，藥液經10(TC， 45min滅菌，然後4"C保存，備用；所說的重量體積是指 固體物質(構樹葉)用g，液體(乙醇)用ml，如構樹葉IO倍量重量體積的乙 醇，即lg構樹葉加10ml乙醇，以此類同。本發明方法簡便，所得黃酮類物質 純度高達95%，穩定性好，有效用於製備抗皮膚真菌感染的藥物，開闢了構樹 葉製備藥物的新領域，是中醫藥學上的一大創新，造福於人類。
具體實施例方式
以下結合實際情況對本發明的具體實施方式
作詳細說明。 在具體實施中，本發明可取粉碎後的構樹葉粗粉200g，加入10倍量構樹葉 粗粉重量體積的質量濃度為70M的乙醇2000ml，加熱回流提取兩小時，備用； 再取構樹葉粗粉加8倍量構樹葉粗粉重量體積的質量濃度為70%的乙醇1600ml， 加熱回流提取兩小時，合併兩次的提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味，所 得提取的濃縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位， 回收正丁醇，得構樹葉黃酮類浸膏，將其溶於適量水中並加入吐溫-80 3g，溶解 至100ml，得溶解液，使溶解液成為每毫升含2g黃酮類物質的藥液，藥液經100 °C， 45min滅菌，4"C保存，備用。
本發明的黃酮類物質有效用於製備抗皮膚真菌感染的藥物，並為試驗所證 明，有關試驗資料如下
經以下對比試驗，結果表明，本發明對各種真菌抑制作用比較穩定
1、 藥物培養基的製作將本發明藥液2ml加入8ml沙氏瓊脂培養基(蛋白 腖10g,水1000毫升,瓊脂15g,葡萄糖40g)中混勻，使成為終濃度為400 mg/ml的 藥物培養基,分裝大試管並作等倍稀釋，即第一管至第八管依次為400mg/ml,200 mg/ml， 100mg/ml, 50mg/ml, 25 mg/ml，12.5mg/ml, 6.25 mg/ml, 3.125 mg/ml的濃度。
2、 對照藥液的製備取硝酸咪康唑軟膏(每克含硝酸咪康唑20毫克)10g， 溶於適量水中並加入數滴吐溫-80增溶，最後定容至100ml，使硝酸咪康唑濃度 為0.2g/ml。 100°C， 45min滅菌後低溫保存。3、 對照培養基的製作硝酸咪康唑培養基濃度為含硝酸咪康唑20mg/ml; 另設不含任何抗菌成分的空白對照培養基。
4、 供試菌種紅色毛癬菌(Trichophyton rubmm)、克柔氏念珠菌(Candidiasis kmsei)、緊密著色黴菌(Fonsecaea compactum)、 石膏樣毛癬菌(Trichophyton mentagrophytes)、 皮炎著色黴菌(Exophiala dermatitides)、 申克氏孢子絲菌
(Sporothrix schenckii)、煙燻色麴黴菌(Aspergillus flimigatus)、白色念珠菌 (Candidiasis albicans)、 新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)、 熱帶念珠菌 (Candidiasis tropicalis)。
取各培養基試管，分為本發明黃酮類物質組、對照組、空白組，放入高壓 滅菌鍋中進行滅菌，滅菌後必須在37t:下恆溫培養24h，確定無菌生長，方可 使用，用斜面接種法接種相應菌種，置2Sr培養箱中培養，5天後觀察，以肉 眼未見菌落生長的最低濃度為該部位的最小抑菌濃度(MIC)，通過觀察，構樹 葉不同溶劑提取物黃酮類物質的抑菌效果如下
構樹葉黃酮浸膏的最低抑菌濃度(mg/ml)
白色念煙燻色 珠菌 麴黴菌紅色毛 癬菌皮炎著 色黴菌石膏樣 毛癬菌新型隱 球菌申克氏 抱子絲 菌熱帶念 珠菌克柔氏 念珠菌緊密著 色黴菌
黃酮組— —50■400—200400400200
空白組
對照組20 202020202020202020
"一"表示不能完全抑制真菌生長
構樹葉黃酮浸膏對致病真菌的抑制作用
白色念 煙燻色 珠菌 麴黴菌紅色毛 癬菌皮炎著 色黴菌石膏樣 毛癬菌新型隱 球菌申克氏 孢子絲 菌熱帶念 珠菌克柔氏 念珠菌緊密著 色黴菌
黃酮組+++ ++一一—++————
空白組+++ +++十+++++++十+++十十十+十十++++++
對照組
+++表示菌落生長旺盛；++表示菌落明顯，但不如空白組旺盛；+表示有零 星或少量菌落存在； 一表示真菌被抑制。並經多次試驗(20次以上)，並對不同 皮膚真菌感染試驗，均取得了相同或類似的結果，表明本發明抗皮膚真菌感染 性能穩定、可靠，有臨床意義。
5綜上所述，構樹葉黃酮類提取物對多種皮膚病致病真菌都有抑制作用。通
過以上試驗，經計算黃酮類提取物對10種致病真菌MIC值的標準差為173.85， 表明構樹葉中黃酮類化合物不但抗菌譜較廣，而且對各種真菌抑制作用比較穩 定，故其抑制皮膚病致病真菌效果較為理想，由於其來源於天然植物成分，毒 副作用相對較小，具有開發成為廣譜抗菌藥物的潛力。
權利要求
1、一種從構樹葉中提取一種黃酮類物質，其特徵在於，所說的該黃酮類物質是由構樹葉，粉碎，打成粗粉，加入10-8倍量構樹葉粗粉重量體積的質量濃度為70％的乙醇，加熱回流提取2次，每次兩小時，合併兩次的提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味，所得濃縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收正丁醇，得構樹葉黃酮類浸膏，即得抗皮膚真菌感染的黃酮類物質，得率為0.2％，將其溶於適量水中並加入吐溫-80溶解均勻，每200g構樹葉粗粉提取的黃酮類物質中加吐溫-803g溶解，得溶解液，溶解液每毫升含2g黃酮類物質。
2、 根據權利要求1所述的從構樹葉中提取一種黃酮類物質，其特徵在於， 所說的該黃酮類物質是由構樹葉粗粉200g，加入IO倍量構樹葉粗粉重量體積的 質量濃度為7(P/。的乙醇2000ml，加熱回流提取兩小時，備用；再取構樹葉粗粉 加8倍量構樹葉粗粉重量體積的質量濃度為70%的乙醇1600ml，加熱回流提取 兩小時，合併兩次的提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味，所得提取的濃縮 液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收正丁醇， 得構樹葉黃酮類浸膏，將其溶於適量水中並加入吐溫-80 3g，溶解至100ml，得 溶解液，溶解液每毫升含2g黃酮類物質。
3、 權利要求1或2所述的從構樹葉中提取一種黃酮類物質，在於製備抗皮 膚真菌感染藥物的應用。
全文摘要
本發明涉及從構樹葉中提取一種黃酮類物質在製備抗皮膚真菌感染藥物的應用，可有效用於製備抗皮膚真菌感染的藥物，解決抗皮膚真菌感染的藥物問題，其解決的技術方案是，取構樹葉，粉碎，打成粗粉，加入乙醇，加熱回流提取提取液，減壓濃縮，回收溶劑至無醇味，所得濃縮液，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇、水萃取，取正丁醇部位，回收正丁醇，得構樹葉黃酮類浸膏，即得抗皮膚真菌感染的黃酮類物質，得率為0.2％，將其溶於適量水中並加入吐溫-80溶解均勻，得溶解液，溶解液每毫升含2g黃酮類物質，本發明方法簡便，所得黃酮類物質純度高，穩定性好，有效用於製備抗皮膚真菌感染的藥物，是中醫藥學上的一大創新，造福於人類。
文檔編號A61K36/185GK101439093SQ20081023159
公開日2009年5月27日 申請日期2008年12月31日 優先權日2008年12月31日
發明者璨 崔, 陳隨清, 魏雅磊 申請人:河南中醫學院