家蠶種成品檢疫方法
2023-09-13 13:56:00
專利名稱：家蠶種成品檢疫方法
技術領域：
本發明涉及一種蠶病防治方法。
家蠶微粒子病是蠶業生產上具有災難性和毀滅性的蠶病。法國生物學家巴斯德於1865年創立了「母蛾檢疫淘汰蠶種法」，即以產卵母蛾為檢測對象，推知其所產蠶卵是否帶有微粒子病毒的方法。由此至今，母蛾檢疫方法便成為防除家蠶微粒子病害的唯一方法。在此之後，國內外眾多專家學者對母蛾檢疫方法進行了不斷研究總結，提出了多種改進方案，如成都科技大學出版社出版的《家蠶微粒子病資料選編》一書中所載「蠶種的新法抽檢與集團磨蛾檢查及其經濟益分析」一文中所介紹的「新法抽檢」和「集團磨蛾檢查法」等。但是，這些改進方案依然沒有突破以母蛾作為檢測對象的母蛾檢疫方法和原理。與上述母蛾檢疫法相對應，在現有的家蠶種製作過程中，通常是先採用母蛾檢疫方法對產卵母蛾進行檢疫，如沒有發現微粒子病毒，再將其所產蠶卵加工為家蠶種成品。而對於加工製得的家蠶種成品來說，則不再作更進一步的檢疫。也即是說，現有的家蠶種成品僅僅是在其為半成品時利用母蛾檢疫方法同接地進行了一次檢疫，而在其真正成為成品之後，則並沒有對蠶種本身直接進行檢疫。就上述僅僅利用母蛾檢疫方法檢驗了其半成品的家蠶種來說，由於是以母蛾為檢驗對象，即通過檢驗上代樣本，間接判定下代樣本，從而存在以下局限1、隨著生物的進化，各種原蟲孢子在母蛾體內不斷出現，加之對病原的檢驗是在顯微鏡下進行形態識別，極難準確判別微粒子的種群。科研和生產部門在未弄清楚之前，很難科學地斷言和判定這些蠶種成品的合格性。
2、在母蛾批毒率相同時，不同的胚傳率也可造成下代病蟻率的較大差異，上述現有檢疫方法中以母蛾的批毒率推測下代病蟻率是不準確的，有可能對蠶種成品造成錯判。
3、在利用母蛾實施家蠶種半成品檢疫的過程中，如因監管不嚴或經營思想不端正，造成母蛾抽樣裝盒無代表性或人為地用無病母蛾或殺毒處理過的母蛾配以有病蠶卵的弄虛作假現象，就會出現誤檢，造成不合格蠶種的發放使用。
4、如因管理疏忽，造成母蛾抽樣裝盒量不足，或因其它因素損失母蛾抽樣量，蛾體腐爛發黴，烘烤時間偏早，高溫烘烤使蛾體烘焦等情況，都會影響母蛾中微粒子孢子的檢出和蠶種合格性的判定，失去蠶種檢疫的真實性。
5、蠶種作為商品流通，通常是查看蠶種生產者的母蛾檢疫報表或聽生產者的介紹。對使用者來說，無法直接判定蠶種的合格性，由於聽信生產方的一面之詞，結果往往造成蠶繭減收，產生諸多糾紛。
由於上述局限性，使農村絲繭育暴發微粒子病的事例不斷出現。據不完全統計，僅四川省1989年至1990年兩年間，因微粒子病害無繭可收的蠶種達17餘萬張，減收五成以上的蠶種50餘萬張，直接經濟損失達1億元以上。這不僅造成了重大的經濟損失，而且還汙染了環境，導致惡性循環，對蠶業生產和發展構成嚴重威脅。因此，為了避免和減輕微粒子病的危害，僅僅採用母蛾檢疫方法對蠶種的半成品進行檢疫是不完備的，有必要提供一種可直接檢疫家蠶種成品的家蠶種成品檢疫方法。
本發明的目的即是提供一種可直接檢疫家蠶種成品的家蠶種成品檢疫方法。
本發明的家蠶種成品檢疫方法按以下步驟進行a、從相同產卵時間產下的一批蠶卵中隨機抽取部分蠶卵作為蠶卵卵樣；b、將所取蠶卵卵樣在溫度為25～31℃、相對溼度為80～98％的環境中孵化；c、以蠶卵卵樣中即將孵出蟻蠶的轉青卵或巳由蠶卵孵成蟻蠶、而又在溫度為25～31℃、相對溼度為80～98％的環境中絕食放置、自然死亡的死蟻及其卵殼為檢驗對象；d、在轉青卵或死蟻及其卵殼中滴入KOH或NaOH液，並研磨均勻；e、用顯微鏡對經上述步驟製得的製取物進行檢測。本發明方法的機理是當蠶卵在上述溫度、溼度的環境中孵化時，微粒子孢子易於發育和增殖，從而易於檢出。通常情況下，以對在上述環境中死亡的死蟻及其卵殼進行檢驗效果最好。但在急於獲得初步檢驗結果的情況下，也可對上述轉青卵進行檢驗。另外，在用顯微鏡進行檢測之前，在磨碎後的轉青卵或死蟻及其卵殼中滴入KOH或NaOH液並研磨均勻的目的是消除檢測物中的脂肪球，並讓轉青卵或死蟻及其卵殼充分磨細，使觀察微粒子孢子更為容易。通常可在磨碎的100粒轉青卵或100隻死蟻及其卵殼中滴入0.5～3毫升2％KOH或NaOH液。在本發明中，為了讓所取蠶卵具有普遍性，提高檢疫的可靠性，在從蠶卵中提取蠶卵卵樣時，可以多個分離點作為取樣點提取卵樣。實際操作時，通常可在均布的5個取樣點以上共隨機抽取蠶卵6～10克作為蠶卵卵樣。
本發明的方法與前述現有家蠶種檢疫方法相比，由於採用蠶卵作為檢疫材料，而不是通過檢驗母蛾這一上代樣本來間接判定下代樣本，從而可對蠶種成品本身進行檢疫，並使檢疫更為直接、準確和真實，防止和避免蠶種檢疫中存在的弄虛作假現象等諸多弊端，確保蠶種成品的合格性。另外，本方法還可用於有爭議的蠶種的仲裁鑑定，以判別經母蛾檢疫的蠶種是否有弄虛作假的現象。本發明的方法於1991年開始在四川省部分地區試用，對該省省內及調入該省使用的蠶種分季別、品種、批次進行成品檢疫。從1992年至1995年，每年平均查出超毒不合格成品蠶種10萬張，並及時給予了淘汰處理，為農村絲繭育年挽回直接經濟損失2000萬元，減少環境淨化消毒費300萬元。同時，彌補了以母蛾檢疫法檢疫蠶種的蠶種場因母蛾抽樣不足或母蛾烘焦不能檢種的損失，年挽回合格蠶種15萬張，直接經濟效益300萬元。另外，每年平均仲裁有爭議蠶種15萬張，挽回直接經濟損失100萬元。
本發明的內容結合以下實施例作更進一步的說明，但本發明的內容不僅限於實施例中所涉及的內容。另外，在以下實施例中，判定蠶種成品是否合格可按附表1所列的標準進行。在附表1中，「制種數量」一欄的盒數是指蠶卵盒數，每盒裝蠶卵25000粒；「集團」是指以100粒蠶卵為一集團。同時，判定過程還應遵循下述規則a、在第一次檢查完畢後，如沒有檢出病卵集團，則判定該蠶種成品為合格品；如檢出的病卵集團數已達到表列不合格判定標準，則判定該蠶種成品為不合格品，亦不作第二次檢查。b、第一次檢出的病卵集團個數未達到不合格判定標準，則作第二次檢查。c、兩次檢出的病卵集團個數合併計算，如仍未達到不合格判定標準，則判該蠶種成品為合格品，達到者為不合格品。
實施例1在由相同產卵時間產下的一批蠶卵製得的家蠶種成品35盒中共隨機取蠶卵6克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵，並把小紙袋封貼在蠶連紙上，標明場別、品種、季別、批號。將所取蠶卵卵樣在溫度為26℃、相對溼度為80％的環境中孵化12天後，得到即將孵出蟻蠶的轉青卵。此後，取小紙袋中的轉青卵3200粒，並將其分為每集團100粒放置於乳缽中。在每100粒轉青卵中滴入1毫升2％KOH液，用乳棒磨碎。再按乳缽序號點板製片2套，送檢測員2人用顯微鏡輪流檢測，每點樣本看10個視野以上。檢測時未發現有微粒子孢子。根據判定規則，第一次檢測無微粒子孢子則僅進行一次檢測，且判定此蠶種成品為合格品。
實施例2在由相同產卵時間產下的一批蠶卵製得的家蠶種成品50盒中從均布的5個取樣點共隨機取蠶卵8克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵，並將小紙袋封貼在蠶連紙上，標明場別、品種、季別、批號。所取蠶卵卵樣在溫度為28℃、相對溼度為90％的環境中孵化10天後，得到即將孵出蟻蠶的轉青卵。此後，取小紙袋中的轉青卵3200粒，分為每集團100粒放於乳缽中，在每100粒轉青卵中滴入2毫升2％KOH液並用乳棒磨碎。再按乳缽序號點板製片2套，送檢測員2人用顯微鏡輪流檢測，每點樣本看10個視野以上。檢測時未發現有微粒子孢子。根據判定規則，第一次檢測無微粒子孢子則不需進行第二次檢測，且判定此蠶種成品為合格品。
實施例3在由相同產卵時間產下的一批蠶卵製得的家蠶種成品60盒中從均布的5個取樣點共隨機取蠶卵8克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵，並將小紙袋封貼在蠶連紙上，標明場別、品種、季別、批號。並將所取蠶卵卵樣在溫度為30℃、相對溼度為95％的環境中孵化8天後，得到即將孵出蟻蠶的轉青卵。此後，取小紙袋中的轉青卵3200粒，分為每集團約100粒放於乳缽中，在每100粒轉青卵中滴入3毫升2％NaOH液並用乳棒磨碎。此後，按乳缽序號點板製片2套，送檢測員2人用顯微鏡輪流檢測，每點樣本看10個視野以上。檢測時在一個集團中發現有微粒子孢子，即病卵集團數為1。根據判定規則，第一次檢測發現微粒子孢子則需進行第二次檢測，即再取小紙袋中的轉青卵2200粒，分為每集團100粒放於乳缽中，在每100粒轉青卵中滴入3毫升2％NaOH液並用乳棒磨碎，點盤製片檢測。經檢測又發現二個集團中有微粒子孢子，即經兩次檢測共發現三個集團有微粒子孢子，其病卵集團數為3。按照附表1所列標準，判定此家蠶種成品為不合格品。
實施例4在由相同產卵時間產下的一批蠶卵製得的家蠶種成品75盒中從均布的5個取樣點共隨機取蠶卵8克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵，並將小紙袋封貼在蠶連紙上，標明場別、品種、季別、批號。此後，將所取蠶卵卵樣在溫度為26℃、相對溼度為82％的環境中孵化至孵出蟻蠶，並使孵得的蟻蠶在溫度為26℃、相對溼度為82％的環境中絕食放置、自然死亡。在蟻蠶死亡後，取小紙袋中的死蟻及其卵殼3200隻，分為每集團100隻放於乳缽中，在每100隻死蟻及其卵殼中滴入1毫升2％KOH液並用乳棒磨碎。此後，按乳缽序號點板製片2套，送檢測員2人用顯微鏡檢測對檢，每點樣本看10個視野以上。檢測時未發現有微粒子孢子。根據判定規則，第一次檢測無微粒子孢子則不再進行下一次檢測，且判定此蠶種成品為合格品。
實施例5在由相同產卵時間產下的一批蠶卵製得的家蠶種成品100盒中從均布的6個取樣點共隨機取蠶卵8克作為蠶卵卵樣。將所抽取的蠶卵放入小紙袋中，每袋裝1克蠶卵。將小紙袋封貼在蠶連紙上，標明場別、品種、季別、批號。此後，將所取蠶卵卵樣在溫度為28℃、相對溼度為90％的環境中孵化至孵出蟻蠶，並使孵得的蟻蠶在溫度為28℃、相對溼度為90％的環境中絕食放置、自然死亡。蟻蠶死亡後，取小紙袋中的死蟻及其卵殼3400隻，分為每集團100隻放於乳缽中，在每100隻死蟻及其卵殼中滴入2毫升2％NaOH液並用乳棒磨碎。此後，按乳缽序號點板製片2套，送檢測員2人用顯微鏡輪流檢測，每點樣本看10個視野以上。檢測時在二個集團中發現有微粒子孢子。根據判定規則，需進行第二次檢測，即再取小紙袋中的死蟻及其卵殼4200隻，分為每集團100隻放於乳缽中，在每100隻死蟻及其卵殼中滴入2毫升2％NaOH液並用乳棒磨碎，點盤製片檢測。經檢測又發現二個集團中有微粒子孢子，即經兩次檢測共發現四個集團有微粒子孢子，其病卵集團數為4。按照附表1所列標準，判定此家蠶種成品仍為合格品。
權利要求
1.一種家蠶種成品檢疫方法，其特徵是按以下步驟進行a、從相同產卵時間產下的一批蠶卵中隨機抽取部分蠶卵作為蠶卵卵樣；b、將所取蠶卵卵樣在溫度為25～31℃、相對溼度為80～98％的環境中孵化；c、以蠶卵卵樣中即將孵出蟻蠶的轉青卵或已由蠶卵孵成蟻蠶、而又在溫度為25～31℃、相對溼度為80～98％的環境中絕食放置、自然死亡的死蟻及其卵殼為檢驗對象；d、在轉青卵或死蟻及其卵殼中滴入KOH或NaOH液，並研磨均勻；e、用顯微鏡對經上述步驟製得的製取物進行檢測。
2.如權利要求1所述的檢疫方法，其特徵是從相同產卵時間產下的一批蠶卵中提取蠶卵卵樣時，是在均布的5個取樣點以上共隨機取蠶卵6～10克作為蠶卵卵樣。
3.如權利要求1或2所述的檢疫方法，其特徵是在每100粒轉青卵或100隻死蟻及其卵殼中滴入0.5～3毫升2％KOH或NaOH液。
全文摘要
一種家蠶種成品檢疫方法，按以下步驟進行a.從相同產卵時間產下的一批蠶卵中隨機抽取部分蠶卵作為蠶卵卵樣；b.將所取蠶卵卵樣在溫度為25～31℃，相對溼度為80～98％的環境中孵化；c.以蠶卵卵樣中即將孵出蟻蠶的轉青卵或已由蠶卵孵成蟻蠶、而又在溫度為25～31℃，相對溼度為80～98％的環境中絕食放置，自然死亡的死蟻及其卵殼為檢驗對象；d.在轉青卵或死蟻及其卵殼中滴入KOH或NaOH液，並研磨均勻；e.用顯微鏡對製取物進行檢測。
文檔編號G01N33/48GK1162744SQ9611776
公開日1997年10月22日 申請日期1996年11月1日 優先權日1996年11月1日
發明者曾華明, 葉永林, 馮永德, 潘榮, 潘傑, 陳佑偉, 王升華, 鄧德菊 申請人:四川省蠶種管理總站