一種用於免疫分析的化學發光試劑amppd的合成方法
2023-09-20 10:16:10 1
一種用於免疫分析的化學發光試劑amppd的合成方法
【專利摘要】本發明公開了一種用於免疫分析的化學發光試劑AMPPD的合成方法。該方法以價格便宜的3-甲氧基苯甲醛為原料，經縮醛化、取代、縮合、脫甲基、磷酸化和光氧化六步反應，以36%的總收率高效合成了AMPPD。本發明從價格便宜的3-甲氧基苯甲醛出發，大大降低了成本；在合成路線中改進了磷酸化的方法，提高了磷酸化反應的產率；合成路線中不涉及嚴格的無水無氧操作，合成過程中反應產率均很高，適合於工業生產，解決了目前市場合成路線不易放大生產的缺點。
【專利說明】—種用於免疫分析的化學發光試劑AMPPD的合成方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及化學發光試劑的製備方法，尤其是4-甲氧基-4-(3-磷酸醯苯基)螺[1,2-二氧環乙烷-3，2』 一金剛燒]二鈉鹽(簡稱AMPH))的合成方法。
【背景技術】
[0002]AMPro是鹼性磷酸酶的化學發光底物，在適宜的緩衝溶液中，隨著酶的催化水解作用，AMPPD分解成AMP-D，後者發出強度很高的光信號，其發光的速度取決於鹼磷酶的濃度。當鹼磷酶偶合到雜交的探針時，便可以通過此系統檢測到雜交分子的存在量。目前已廣泛用作化學發光免疫分析的發光底物，具有很高的檢測靈敏度、適用於檢測各種分子量的物質、穩定的發光底物、檢測結果穩定、重複性好、檢測線性範圍寬、不需要特殊的發光底物-抗原/抗體連接物、方便，容易使用、可應用多種分析模式(夾心、競爭、抗體檢測等)等優點，已在醫學上推廣使用。但由於其價格較高，限制了其大規模的發展使用。價格高的主要原因是該物質製備較為困難，合成工藝複雜。
[0003]目前其製備主要有四條路線。
[0004]第一種合成方法是歐洲的一篇專利(專利號EP0518387)，通過2-金剛烷酮與3-羥基苯甲酸甲酸在金屬化合物為原料製備出關鍵中間體取代苯基甲氧基甲叉基金剛烷，然後通過常規的光氧化製備AMPro (見式三)，該反應方法流程短，效率高，但製備關鍵中間體所用到的關鍵催化劑是以四氫鋁鋰/無水三氯化鈦組成的催化體系來完成反應，但無水三氯化鈦性能活潑，屬自燃物品，遇空氣及水燃燒或爆炸，具強刺激性，對黏膜、上呼吸道、眼和皮膚有強烈的刺激性。吸入後，可因喉及支氣管的痙攣、炎症、水腫，化學性肺炎或肺水腫而致死。接觸後引起燒灼感、咳嗽、喘息、喉炎、氣短、頭痛、噁心、嘔吐等，目前尚未見規模化生產，還沒有依此方法的規模化商品供應。
[0005]
【權利要求】
1.一種用於免疫分析的化學發光試劑AMPro的合成方法，其特徵在於:該方法合成路線如下所示:
2.根據權利要求1所述用於免疫分析的化學發光試劑AMPH)的合成方法，其特徵在於:所述化合物I通過下述方法合成:
3.根據權利要求2所述的合成方法，其特徵在於:合成所述化合物I的縮醛化反應步驟中，甲醇與原甲酸三甲酯的體積比為0.9: f 1.26:1，酸為濃硫酸、乙酸和對甲基苯磺酸一水合物中的任一種，3-甲氧基苯甲醛與酸的物質的量比為1:0.1，反應溫度為65°C~80°C。
4.根據權利要求2所述的合成方法，其特徵在於:合成所述化合物I的取代反應步驟中，Lewis酸為無水氯化鋅或三氟化硼乙醚，Lewis酸加入時體系的溫度為一 20°C~一 5°C。
5.根據權利要求2所述 的合成方法，其特徵在於:合成所述化合物I的縮醛化反應步驟中，酸為乙酸，甲醇與原甲酸三甲酯的體積比為1:1;合成所述化合物I的取代反應步驟中，亞磷酸酯為亞磷酸三乙酯，Lewis酸為無水氯化鋅。
6.根據權利要求1或2所述的合成方法，其特徵在於:所述步驟a中鹼為LDA或LHMDS，加入鹼時體系的溫度為一 75°C~-50°C，反應溶劑為甲基叔丁基醚或四氫呋喃。
7.根據權利要求1或2所述的合成方法，其特徵在於:所述步驟b中乙硫醇鈉與化合物2的物質的量比為1.05:1~2:1，反應溫度為IOO0C~140。。。
8.根據權利要求1或2所述的合成方法，其特徵在於:所述步驟c中磷酸化過程的溶劑為四氫呋喃、縛酸劑為吡啶或三乙胺。
9.根據權利要求1或2所述的合成方法，其特徵在於:所述步驟d中光源為800W的高壓鈉燈，光氧化催化劑為亞甲基藍，化合物4與亞甲基藍的重量投料比為100:5~100:0.1。
10.根據權利要求1或2所述的合成方法，其特徵在於:所述步驟a中鹼為LHMDS，反應溶劑為甲基叔丁基醚；所述步驟b中乙硫醇鈉與化合物2的物質的量比為1.2:1，反應溶劑為DMF ;所述步驟c中磷酸化過程的溶劑為四氫呋喃、鹼為吡啶，磷酸二丙腈酯水解時的無機鹼為NaOH ;所述步驟d中化合物4與亞甲基藍的重量投料比為197:1。
【文檔編號】C07F9/655GK103772433SQ201210397604
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年10月18日 優先權日:2012年10月18日
【發明者】馬宇衡, 劉棟, 裴劍鋒, 袁亞明 申請人:深圳市美凱特科技有限公司