腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器的製作方法
2023-09-18 19:20:10
專利名稱：腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及國際專利分類C12N微生物或酶繁殖變異或遺傳工程技術領域，尤其是腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器。
背景技術：
目前，腫瘤幹細胞的定義之一是:腫瘤中具有自我更新能力並能產生異質性腫瘤細胞的細胞。傳統觀念認為，腫瘤是由體細胞突變而成，每個腫瘤細胞都可以無限制地生長。但這無法解釋腫瘤細胞似乎具有無限的生命力以及並非所有腫瘤細胞都能無限制生長的現象。腫瘤細胞生長、轉移和復發的特點與幹細胞的基本特性十分相似，因此，有學者提出腫瘤幹細胞的理論。這一理論為重新認識腫瘤的起源和本質，以及臨床腫瘤治療提供了新的方向和視覺角度。腫瘤幹細胞對腫瘤的存活、增殖、轉移及復發有著重要作用。從本質上講，腫瘤幹細胞通過自我更新和無限增值維持著腫瘤細胞群的生命力；腫瘤幹細胞的運動和遷徙能力又使腫瘤細胞的轉移成為可能；腫瘤幹細胞可以長時間處於休眠狀態並具有多種耐藥分子而對殺傷腫瘤細胞的外界理化因素不敏感，因此腫瘤往往在常規腫瘤治療方法消滅大部分普通腫瘤細胞後一段時間復發。培養即將取得的組織細胞接入培養瓶或培養板中的過程稱為培養。如系組織塊培養，則直接將組織塊接入培養器皿底部，幾個小時後組織塊可貼牢在底部，再加入培養基。如系細胞培養，一般應在接入培養器皿之前進行細胞計數，按要求以一定的量，以每毫升細胞數表示，接入培養器皿並直接加入培養基。細胞進入培養器皿後，立即放入培養箱中，使細胞儘早進入生長狀態。正在培養中的細胞應每隔一定時間觀察一次，觀察的內容包括細胞是否生長良好，形態是否正常，有無汙染，培養基的PH是否太酸或太鹼，由酚紅指示劑指示，此外對培養溫度和CO2濃度也要定時檢查。一般原代培養進入培養後有一段潛伏期，數小時到數十天不等，在潛伏期細胞一般不分裂，但可貼壁和遊走。過了潛伏期後細胞進入旺盛的分裂生長期。細胞長滿瓶底後要進行傳代培養，將一瓶中的細胞消化懸浮後分至兩到三瓶繼續培養。每傳代一次稱為「一代」。二倍體細胞一般只能傳幾十代，而轉化細胞系或細胞株則可無限地傳代下去。轉化細胞可能具有惡性性質，也可能僅有不死性而無惡性。培養正在生長中的細胞是進行各種生物醫學實驗的良好材料。在腫瘤幹細胞研究中應用軟性接觸鏡材料是新的發展，而軟性接觸鏡材料中，應用最廣泛的是由甲基丙烯酸-2-羥基乙酯HEMA單體為主組成的共聚物水凝膠。近年來的研究進行綜述公開了相應的知識，總結了 HEMA類接觸鏡的發展和分類，HEMA單體的共聚、材料性能及其在藥物緩釋中的應用，尤其是新近公開的文獻認為poly-hema聚甲基丙烯酸羥乙基酯應用特性更為突出。鑑於此，建立一種能夠快速有效的、且能夠降低成本的檢測方法十分必要。中國專利申請200410084407涉及細胞的分離培養方法及其應用，具體涉及一種脂肪間充質幹細胞的分離培養方法及其應用。它包括取人體脂肪組織，用膠原酶消化，經梯度離心、過濾，隨後在體外培養體系中進行擴增培養，其中所述體外培養體系含有D M EM / F 12、E F G和 F C S。中國專利申請201120530645 —種細菌培養瓶，包括瓶身、設於瓶身頂端的瓶口和設於瓶身下端的瓶底、以及瓶蓋，所述瓶身的橫截面為矩形，所述瓶底為斜面，所述瓶底斜面與所述瓶身中的兩個相對的側面相垂直。
發明內容本實用新型的發明目的在於提供一種腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器。實現本實用新型的發明目的措施在於:培養容器內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理塗層，培養容器上部有器蓋。本實用新型的優點在於，通過設置在培養基瓶內壁設置優化塗層，可以節約培養基的使用量，以促進培養基保持活性，可防止培養基中多餘水分和菌液對培養的幹擾，使培養結果的讀值更加可靠，且生物安全性優異。降低了實驗成本且簡化了操作步驟；操作方便、省時省力、能夠快速滅菌、利於生物製品的生產，便於監控檢測，便於研究細胞代謝、物理、化學、生物因素的影響，顯著提高研究工作效率。
圖1是本實用新型中一種的培養皿容器結構示意圖圖2是本實用新型中的另一種的培養板容器結構示意圖附圖標記包括:培養容器1，底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理塗層2，器蓋3，板孔4，板座5。
具體實施方式
以下通過實施例進一步說明。培養容器I內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理塗層2，培養容器I上部有器蓋3。前述中，培養容器I為培養皿，該培養皿培養容器I內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理塗層2 ;另外，培養容器I上部有器蓋3，該器蓋3開口與培養容器I培養皿上部配
八
口 ο前述中，培養容器I為培養板，培養容器I上布均勻分布有板孔4 ;另外，培養容器I底部安裝板座5 ;同時，培養容器I上部器蓋3，該器蓋3開口與培養容器I培養板上部配
入
口 ο實施例1:如附圖1所示，培養容器I為培養皿。器蓋3與培養容器I培養皿橫截面均呈圓形。培養容器I為用於盛載液體培養液或固體瓊脂培養液進行細胞培養的玻璃或塑料圓形器皿。培養容器I一般由玻璃或者塑料作成。前述中，在培養容器I為培養皿應用於傳代培養時:I).培養容器I培養皿中的細胞覆蓋率達到80%_90%時要傳代。2).把原有培養基吸掉。[0023]3).加適當的胰蛋白酶，能覆蓋細胞就行，消化1-2分鐘。4).細胞都變圓後加如入等體積的含血清的培養基終止消化。5).用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。6).把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。7).倒掉上清液，加l_2ml培養基，把細胞都吹起來。8).根據細胞種類把細胞傳到幾個培養容器I培養皿中。一般情況下，癌細胞分5個，正常細胞傳3個，然後繼續培養。前述中，將SW480細胞培養於培養容器I為培養皿底部的DMEM培養基內，添加10%胎牛血清，置於37°C、含5%C02的恆溫培養箱內培養，每天更換一次培養液；待細胞培養至約85%貼壁時，更換培養液，繼續在相同條件下培養24小時；選擇狀態良好，95%匯合且位於指數生長期的細胞備用。加入0.25%胰酶-EDTA消化貼壁細胞；4°C下1500rpm離心5min收集細胞沉澱,用TSC Medium,即DMEM無血清培養基,添加10ng/ml EGF+10ng/mlbFGF+10ng/mlNoggin + 1000U/ml insulin,重懸細胞沉澱，然後放入polyhema處理的培養瓶中進行克隆形成培養。實施例2:如附圖2所示，培養容器I為培養板，培養容器I上布均勻分布有板孔4 ;板孔4為平底或圓底，即U型和V型；板孔4孔數為6、12、24、48或96孔；而且，根據材質的不同，培養容器I為培養板為Terasaki板和普通細胞培養板，培養板培養容器I上部加蓋方形器蓋3。在以上實施例中，未及敘述的涉及實施的其他必要技術等採用現有技術，不再依次列舉詳述。
權利要求1.腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器，其特徵是:培養容器(I)內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理塗層(2)，培養容器(I)上部有器蓋(3)。
2.如權利要求1所述的腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器，其特徵在於，培養容器(I)為培養皿，該培養皿培養容器(I)內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理塗層⑵。
3.如權利要求1所述的腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器，其特徵在於，培養容器(I)為培養板，培養容器(I)上布均勻分布有板孔(4)。
4.如權利要求3所述的腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器，其特徵在於，培養容器(I)底部安裝板座(5)。
5.如權利要求3所述的腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器，其特徵在於，板孔(4)孔數為6、12、24、48或96孔。
專利摘要腫瘤幹細胞聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理培養容器，培養容器(1)內具有底部聚甲基丙烯酸羥乙基酯處理塗層(2)，培養容器(1)上部有器蓋(3)。通過設置在培養基瓶內壁設置優化塗層，可以節約培養基的使用量，以促進培養基保持活性，可防止培養基中多餘水分和菌液對培養的幹擾，使培養結果的讀值更加可靠，且生物安全性優異。降低了實驗成本且簡化了操作步驟；操作方便、省時省力、能夠快速滅菌、利於生物製品的生產，便於監控檢測，便於研究細胞代謝、物理、化學、生物因素的影響，顯著提高研究工作效率。
文檔編號C12M3/00GK203159624SQ20122074529
公開日2013年8月28日 申請日期2012年12月31日 優先權日2012年12月31日
發明者黃盼華 申請人:上海基賽生物醫藥科技有限公司