瘦肉精多殘留聯檢試紙卡的製作方法

2023-09-16 04:39:20 1

專利名稱：瘦肉精多殘留聯檢試紙卡的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種快速檢測微量「瘦肉精」的器具，特別是涉及一種「瘦肉精」多殘留分析的金標層析檢測試紙卡。
背景技術：
「瘦肉精」是指一類藥物，任何能夠促進瘦肉生長、減少脂肪沉積的物質都可以叫做「瘦肉精」，包括「克倫特羅」(Clenbuterol，CL)，鹽酸克倫特羅是其鹽酸鹽，「萊克多巴胺」 aactopamine，RAC，也譯為雷託巴胺)、「沙丁胺醇」(Salbutamol，SAL)、「特布他林」 (Terbutaline, TBL)和「西馬特羅」(Cimaterol，CIM)等。「瘦肉精」在肉用動物生產中劑量為治療量的5-10倍時，具有促進肌肉發育和脂肪分解作用，可以提高肉用動物胴體瘦肉率。因為消費者對瘦肉的特殊偏好，瘦肉產出率高的豬可以賣個好價錢，添加「瘦肉精」給養殖戶帶來了額外收益。因此，受不法利益的驅使，養殖戶常在養殖環節添加「瘦肉精」到動物飼料中去。但是「瘦肉精」是一種選擇性β2_腎上腺素受體激動劑，副作用極大，當攝入量較大時會造成心血管系統的損害和出現嚴重的神經症狀。當人們食用了含「瘦肉精」殘留的動物內臟和肉品後，會造成急性或慢性食肉中毒，危害消費者的健康安全。目前為止沒有一個國家批准「鹽酸克倫特羅」可用於動物生產中，但長期以來一直存在著非法使用，在世界各地造成嚴重食物中毒的事件並不鮮見。在我國北京、香港、上海、浙江、廣東、山東、河北、 廣西、黑龍江和安徽等地也出現了「瘦肉精」的中毒事件，極大地威脅著消費者的身心健康。 因國家對鹽酸克倫特羅的嚴格管控，現在出現了「萊克多巴胺」、「沙丁胺醇」等所謂的「新型瘦肉精」產品。用於「瘦肉精」殘留檢測的方法較多，(1)理化分析方法，如高壓液相色譜儀 (High performance liquid chromatography, HPLC)、氣相色譜(Gas chromatography, GC)、薄層層析(Thin-layer chromatography，TLC)、毛細管區域電泳法(Capillary zone electrophoresis，CE)等；(2)免疫分析法，如放射免疫法(Radio-immunoassay，RIA)、酶聯免疫吸附實驗(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)等；(3)生物測定法，如微生物學測定法(microbiological assays,ΜΑ)、 放射受體測定法(rediorec印tor assays,RA) 等。但這些方法有的需要昂貴的儀器設備，需要熟練的專業人員操作，操作過程複雜，需要時間較長，限制了其應用範圍，難以在生產實際中推廣應用。免疫試紙法具有半定量和一定的定量能力，可以提供待測物的初步信息，該法靈敏度高，分析過程簡單，用作「瘦肉精」的篩查有獨特的優勢，是需要優先發展的檢測技術，但目前「瘦肉精」多殘留試紙檢測技術在國內尚屬空白，急待研究解決。

實用新型內容本實用新型要解決的技術問題提供一種適用於現場檢測的特異、敏感、快速和簡便的瘦肉精多殘留聯檢試紙卡。[0006]本實用新型的技術方案一種瘦肉精多殘留聯檢試紙卡，包括塑料支撐物和試紙芯，塑料支撐物包括底座和面板，其中底座上設有安裝試紙芯的固定槽，面板上設有加樣孔和結果顯示窗，試紙芯由樣品墊、金標物結合墊、層析膜和吸水墊依次粘貼到襯板上製成，層析膜上設有檢測線和對照線，所述金標物結合墊為吸附有二 五種混合金標抗體的玻璃纖維棉，金標抗體為膠體金標記的抗瘦肉精的單克隆抗體或多克隆抗體，檢測線為二 五條相應的瘦肉精-載體蛋白結合抗原或人工合成的模擬結合抗原，對照線為羊抗或兔抗小鼠IgG、羊抗兔IgG或兔抗載體蛋白IgG抗體印製而成，檢測線和對照線沿層析膜橫向平行排列。所述金標抗體和相應的瘦肉精-載體蛋白結合抗原或人工合成的模擬結合抗原為第一組金標抗鹽酸克倫特羅CL抗體，檢測線為CL-載體蛋白結合抗原；第二組金標抗萊克多巴胺RAC抗體，檢測線為RAC -載體蛋白結合抗原；第三組金標抗沙丁胺醇SAL 抗體，檢測線為SAL-載體蛋白結合抗原；第四組金標特步特林TBL抗體，檢測線為TBL-載體蛋白結合抗原；第五組金標抗西馬特羅CIM抗體，檢測線為CIM-載體蛋白結合抗原；採用其中的二組、三組、四組或五組，分別組成二聯檢試紙卡、三聯檢試紙卡、四聯檢試紙卡或五聯檢試紙卡。所述吸水墊採用濾紙、海綿或無紡布製作，所述襯板用不吸水的硬質塑膠條製作。所述樣品墊採用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜製作；層析膜採用尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜、硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜製成，對照線採用硝酸纖維素膜、 純纖維素膜或羧化纖維素膜製成。所述載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清白蛋白、人血清白蛋白或鑰孔血藍蛋白。本實用新型的積極有益效果①試紙卡特異性強，敏感性高，最低檢出限可達到lppb，符合我國瘦肉精的限量檢測要求。②試紙卡實現了「瘦肉精」多殘留金標層析的快速檢測，用同一試紙卡一次加樣， 可同時檢測多種「瘦肉精」殘留物，克服了常規單項檢測試紙卡一次只能檢測一種藥物的不足，實現了較高通量的檢測，大大節省了檢測時間，在提高工作效率的同時節省了檢測成本。G")使用該試紙卡時，無需其它額外試劑和儀器，用於現場檢測在5min內即可判定檢測結果，簡便、快速。④使用該試紙卡以棕紅色線條「 I 」顯示檢測結果，判定依據形象、直觀，簡單明了，不易出現人為誤判。⑤本實用新型的試紙卡可節省檢測費用，適用範圍廣。使用該試紙卡比用儀器分析和常規單項檢測試紙條的費用大幅下降；同時該試紙卡適用範圍廣，可滿足不同層次人員的需要，包括專業檢驗、海關檢疫、衛生檢疫、質量監測、加工企業和養殖場戶等，可保持對非法添加瘦肉精的威懾，保障食品安全，便於推廣應用。

圖1、試紙芯側視結構示意圖。[0019]圖2、試紙芯俯視結構示意圖。圖3、二項聯檢試紙卡面板構造俯視圖。圖4、試紙卡底座構造示意圖。圖5、三項聯檢試紙芯俯視結構示意圖。圖6、三項聯檢試紙卡面板構造俯視圖。圖7、五項聯檢試紙芯俯視結構示意圖。圖8、五項聯檢試紙卡面板構造俯視圖。圖中，1 襯板；2 樣品墊；3 金標物結合墊；4 層析膜；5 吸水墊；6 對照線；7:檢測線；8:加樣孔；9:顯示窗；10:面板；11:底座；12:固定槽。
具體實施方式
在製備「瘦肉精」多殘留聯檢層析試紙卡時，需要先製備某種「瘦肉精」-載體蛋白結合抗原、「瘦肉精」金標物，製備羊抗或兔抗小鼠IgG抗體或羊抗兔IgG抗體，或兔抗載體蛋白IgG抗體，進而製備成試紙芯，並安裝在塑料殼底座的固定槽中，最後和面板嵌合在一起。實施例一「瘦肉精」 二項聯檢金標層析試紙卡。在得到瘦肉精-載體蛋白結合抗原、瘦肉精金標物和IgG抗體的基礎上，組裝得到本發明的試紙卡(以鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺二聯檢為例)。試紙卡塑料殼包括底座11和面板10，底座上設有安裝試紙芯的固定槽12，面板上設有加樣孔8和顯示窗9，顯示窗旁邊設有1\、T2和C標識，參見圖1-4。試紙芯的構造襯板1用硬質塑膠條製成；樣品墊2用玻璃纖維棉製成；金標物結合墊3為吸附有膠體金標記的抗CL和抗RAC單克隆抗體的玻璃纖維棉；層析膜4用硝酸纖維素膜，其上分別用偶聯CL-載體蛋白和RAC-載體蛋白的結合抗原製備兩條檢測線7 (隱形)，載體蛋白為牛血清白蛋白。兩條檢測線由樣品端依次排列，用羊抗小鼠IgG抗體製備對照線6 (隱形)，對照線6採用硝酸纖維素膜；檢測線和對照線平行排列成「 I I |」;吸水墊5用吸水濾紙製成。將樣品墊、金標物結合墊、層析膜、吸水墊依次相互搭接並粘貼固定在襯板上，組裝成CL和RAC聯檢試紙芯。將試紙芯安裝在底座11上的固定槽12內，樣品墊和層析膜分別與面板上的加樣孔和顯示窗相對應，兩條隱形檢測線和隱形對照線分別與顯示窗旁邊的1\、T2和C相對應， 嵌合面板後即製成試紙卡。檢測樣品檢測樣品可為尿樣。檢測樣品製備尿樣無需特殊處理，如過於渾濁，靜置後離心取上清即可。操作方法檢測時，將試紙卡平放，從加樣孔滴加待測樣品，1 5min內從顯示窗判定檢測結果。結果判定如只有C位置隱形對照線處顯示一條棕紅色線「 I 」，表示CL和RAC檢測結果均為陽性，說明在待測樣品中含有這兩種待測藥物；如在T1和C位置顯示兩條棕紅色線「 I I 」時，表示CL檢測結果為陽性，RAC檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含CL而不含RAC;如在T2和C位置顯示兩條棕紅色線「 I I 」，表示CL檢測結果為陽性，RAC檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含CL而不含RAC ；如在I\、T2和C位置顯示三條棕紅色線「 II I 」，表示CL和RAC檢測結果均為陰性，說明在待測樣品中不含CL和RAC;如在層析膜上沒有棕紅色線顯示，則表明試紙卡已失效。實施例二「瘦肉精」二項聯檢金標層析試紙卡(以鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺二聯檢為例)試紙卡結構和實施例一基本相同，不同之處在於樣品墊採用尼龍膜製成；用抗 CL和抗RAC的多克隆抗體替代抗CL和抗RAC的單克隆抗體，製備金標結合墊；層析膜用尼龍膜製成，用羊抗兔IgG抗體替代羊抗鼠IgG抗體在層析膜上製備隱形對照線「 I 」，對照線採用純纖維素膜製成；其它如檢測樣品製備、操作方法和結果判定等均同實施例一，不再贅述。實施例三「瘦肉精」二項聯檢金標層析試紙卡(以鹽酸克倫特羅和萊克多巴胺二聯檢為例)。試紙卡結構和實施例一基本相同，不同之處在於樣品墊採用聚偏二氟乙烯膜製成；用CL-載體蛋白和RAC-載體蛋白結合抗原替代抗CL和抗RAC的單克隆抗體，製備金標結合墊；層析膜用聚偏二氟乙烯膜，用兔抗載體蛋白IgG抗體替代羊抗鼠IgG抗體在層析膜上製備隱形對照線「 I 」，對照線採用羧化纖維素膜製成；其它如檢測樣品製備、操作方法和結果判定等均同實施例一，不再贅述。實施例四「瘦肉精」三項聯檢金標層析試紙卡(以鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇三聯檢為例)。試紙卡塑料殼的構造包括底座和面板，底座設有安裝試紙芯的固定槽，面板上設有加樣孔和顯示窗，顯示窗旁邊設有I\、T2、T3和C標識。參見圖5-6。試紙芯的構造襯板用硬質塑膠條製成；樣品墊採用聚酯膜製成；金標物結合墊為吸附有膠體金標記的抗CL、抗RAC和抗SAL單克隆抗體的玻璃纖維棉；層析膜用醋酸纖維素膜，其上分別用偶聯CL-載體蛋白、RAC-載體蛋白和SAL-載體蛋白結合抗原製備的三條隱形檢測線「 I 」，所述載體蛋白為雞卵清白蛋白。三條隱形檢測線由樣品端依次排列，用兔抗小鼠IgG抗體製備隱形對照線「 I 」，對照線採用純纖維素膜，三條檢測線和對照線平行排列組合成「 Illl 」；吸水墊用吸水濾紙製成。將樣品墊、金標物結合墊、層析膜、吸水墊依次相互搭接粘貼固定在襯板上，組裝成CL、RAC和SAL聯檢試紙芯。將試紙芯安裝在底座的固定槽內，試紙芯的樣品墊和層析膜分別與面板上的加樣孔和顯示窗相對應，層析膜上的三條檢測線和對照線分別與顯示窗旁邊的1\、T2、T3和C相對應，嵌合面板後製成試紙卡。其它包括檢測樣品製備和操作方法均同實施例一，不再贅述。結果判定如只有C位置顯示1條棕紅色線「 I 」時，表示CL、RAC和SAL檢測結果均為陽性，說明在待測樣品中含這3種待測藥物；如顯示1條棕紅色T線和1條棕紅色C線 「 I I 」時，表示2種藥物檢測結果為陽性，另外1種藥物檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含對應的2種藥物而不含另外1種藥物；如顯示2條棕紅色T線和1條棕紅色C線「 I
I I 」時，表示1種藥物檢測結果為陽性，另外2種藥物檢測結果為陰性，說明在待測樣品中含1種藥物而不含另外2種藥物；如顯示3條棕紅色T線和1條棕紅色C線「 I I I |」 時，表示3種藥物檢測結果均為陰性；如在層析膜上沒有棕紅色線顯示，則表明試紙卡已失效。[0046]實施例五「瘦肉精」三項聯檢金標層析試紙卡(以克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇三聯檢試紙為例)試紙卡構造和實施例四基本相同，不同之處在於樣品墊採用玻璃纖維棉製成； 用抗CL、抗RAC和抗SAL的多克隆抗體替代抗CL、抗RAC和抗SAL的單克隆抗體，製備金標結合墊；用羊抗兔IgG抗體替代兔抗鼠IgG抗體在層析膜上製備隱形對照線「 I 」。其它包括檢測樣品製備、操作方法和結果判定等均同實施例四，不再重述。實施例六「瘦肉精」三項聯檢金標層析試紙卡(以克倫特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇三聯檢試紙為例)。試紙卡構造和實施例四基本相同，不同之處在於用CL-載體蛋白、RAC-載體蛋白和SAL-載體蛋白結合抗原替代抗CL、抗RAC和抗SAL的單克隆抗體，製備金標結合墊； 用兔抗載體蛋白IgG抗體替代兔抗鼠IgG抗體在層析膜上製備隱形對照線「 I 」。其它包括檢測樣品製備、操作方法和結果判定等均同實施例四，不再重述。實施例七「瘦肉精」五項聯檢金標層析試紙卡試紙卡塑料殼的構造包括底座和面板，底座上設有安裝試紙芯的固定槽，面板上設有加樣孔和顯示窗，顯示窗旁設有1\、112、113、114、115和(標識。參見圖7-8。試紙芯的構造襯板用硬質塑膠條製成；樣品墊用玻璃纖維棉製成；金標物結合墊為吸附有膠體金標記的抗CL、抗RAC、抗SAL、抗CML和抗TBL單克隆抗體的玻璃纖維棉； 層析膜用硝酸纖維素膜，其上分別用偶聯CL-載體蛋白、RAC-載體蛋白、SAL-載體蛋白、 CML-載體蛋白和TBL-載體蛋白結合抗原製備的隱形檢測線「 I 」，載體蛋白為人血清白蛋白或鑰孔血藍蛋白。五條檢測線由樣品端依次排列，用羊抗兔IgG抗體製備隱形對照線「 I 」，對照線採用羧化纖維素膜，六條線平行排列組合成「 I Illl I」;吸水墊用吸水濾紙製成。將樣品墊、金標物結合墊、層析膜、吸水墊依次相互搭接粘貼固定在襯板上，組裝成CL、RAC、SAL、 CML和TBL聯檢試紙芯。將試紙芯安裝在底座的固定槽內，試紙芯的樣品墊和層析膜分別與面板上加樣孔和顯示窗相對應，層析膜上的五條檢測線和對照線分別與顯示窗旁邊的1\、 T2> T3、T4、T5和C相對應，嵌合面板後製成試紙卡。其它包括檢測樣品製備和操作方法均同實施例一，不再贅述。結果判定若C位置不顯示1條棕紅色線「 I 」時，表示本次檢測無效；C位置顯示 1條棕紅色線「 I 」時，表示本次檢測有效，並且Ι\、τ2、τ3、τ4、τ5哪一條顯色即表示對應的那種待測物在本次檢測中未檢出，不顯色的即表示對應的那種待測物在本次檢測中被檢出， 結果為陽性。如此可在一次測定中判斷五種被檢物的陰陽性，即五聯檢試紙卡。實施例八瘦肉精五項聯檢金標層析試紙卡試紙卡構造和實施例七基本相同，不同之處在於用抗CL、抗RAC、抗SAL、抗CML 和抗TBL的多克隆抗體替代抗抗CL、抗RAC、抗SAL、抗CML和抗TBL的單克隆抗體，製備金標結合墊；用兔抗鼠IgG抗體替代羊抗兔IgG抗體在層析膜上製備隱形對照線「 I 」。其它包括檢測樣品製備、操作方法和結果判定等均同實施例七，不再贅述。實施例九瘦肉精五項聯檢金標層析試紙卡試紙卡構造和實施例七基本相同，不同之處在於用CL-載體蛋白、RAC-載體蛋白、SAL-載體蛋白、CML-載體蛋白和TBL-載體蛋白結合抗原替代抗CL、抗RAC、抗SAL、抗CML和抗TBL的單克隆抗體，製備金標結合墊；用兔抗載體蛋白IgG抗體替代羊抗兔IgG抗體在層析膜上製備隱形對照線「 I 」。 其它包括檢測樣品製備、操作方法和結果判定等均同實施例七，不再贅述。
權利要求1.一種瘦肉精多殘留聯檢試紙卡，包括塑料支撐物和試紙芯，塑料支撐物包括底座和面板，其中底座上設有安裝試紙芯的固定槽，面板上設有加樣孔和結果顯示窗，試紙芯由樣品墊、金標物結合墊、層析膜和吸水墊依次粘貼到襯板上製成，層析膜上設有檢測線和對照線，其特徵是所述金標物結合墊為吸附有二 五種混合金標抗體的玻璃纖維棉，金標抗體為膠體金標記的抗瘦肉精的單克隆抗體或多克隆抗體，檢測線為二 五條相應的瘦肉精-載體蛋白結合抗原或人工合成的模擬結合抗原，對照線為羊抗或兔抗小鼠IgG、羊抗兔 IgG或兔抗載體蛋白IgG抗體印製而成，檢測線和對照線沿層析膜橫向平行排列。
2.根據權利要求1所述的試紙卡，其特徵是所述金標抗體和相應的瘦肉精-載體蛋白結合抗原或人工合成的模擬結合抗原為第一組金標抗鹽酸克倫特羅CL抗體，檢測線為CL-載體蛋白結合抗原；第二組金標抗萊克多巴胺RAC抗體，檢測線為RAC -載體蛋白結合抗原；第三組金標抗沙丁胺醇SAL抗體，檢測線為SAL-載體蛋白結合抗原；第四組 金標特步特林TBL抗體，檢測線為TBL-載體蛋白結合抗原；第五組金標抗西馬特羅CIM抗體，檢測線為CIM-載體蛋白結合抗原；採用其中的二組、三組、四組或五組，分別組成二聯檢試紙卡、三聯檢試紙卡、四聯檢試紙卡或五聯檢試紙卡。
3.根據權利要求1所述的試紙卡，其特徵是所述吸水墊採用濾紙、海綿或無紡布製作，所述襯板用不吸水的硬質塑膠條製作。
4.根據權利要求1所述的試紙卡，其特徵是所述樣品墊採用玻璃纖維棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜製作；層析膜採用尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜、硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜製成，對照線採用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜製成。
5.根據權利要求1所述的試紙卡，其特徵是所述載體蛋白為牛血清白蛋白、雞卵清白蛋白、人血清白蛋白或鑰孔血藍蛋白。
專利摘要本實用新型公開一種「瘦肉精」多殘留分析的金標層析檢測試紙卡，包括塑料支撐物和試紙芯，試紙芯由樣品墊、金標物結合墊、層析膜和吸水墊依次粘貼到襯板上製成，金標物結合墊為吸附有二～五種混合金標抗體的玻璃纖維棉，金標抗體為膠體金標記的抗瘦肉精的單克隆抗體或多克隆抗體，檢測線為二～五條相應的瘦肉精-載體蛋白結合抗原，對照線為羊抗或兔抗小鼠IgG、羊抗兔IgG或兔抗載體蛋白IgG抗體印製而成，檢測線和對照線沿層析膜橫向平行排列。本實用新型特異性強，敏感性高，最低檢出限可達到1ppb，實現了「瘦肉精」多殘留金標層析的快速檢測，用同一試紙卡一次加樣，可同時檢測多種「瘦肉精」殘留物，大大節省了檢測時間，在提高工作效率的同時節省了檢測成本。
文檔編號G01N33/577GK202133666SQ201120205560
公開日2012年2月1日 申請日期2011年6月17日 優先權日2011年6月17日
發明者劉慶堂, 張改平, 李孟順, 李青梅, 楊繼飛, 楊豔豔, 柴書軍, 滕蔓, 職愛民, 胡驍飛, 趙東, 鄧瑞廣, 邢廣旭 申請人:河南省農業科學院