趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質量檢測方法

2023-09-17 01:54:10

專利名稱：趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質量檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物製劑中活性成分的質量檢測方法，具體來說，涉及的是一種治療黃褐斑的中藥膠囊製劑中槲皮素的質量檢測方法，屬於藥品質量控制技術領域。
背景技術：
本發明具體涉及的治療黃褐斑的中藥膠囊製劑即趕黃祛斑膠囊，由趕黃草835g和丹參300g製成稠膏後，經加入適當的輔料製備得到，其具體製備方法及用途已記載於公開號為CN101700276的發明專利中，該製劑具有退黃、化瘀、祛斑的作用，臨床上擬用於治療由於肝氣鬱結引起的女性黃褐斑的治療。趕黃祛斑膠囊中含有趕黃草和丹參，經研究證明，趕黃草的主要有效成分一槲皮素具有祛斑、抗炎、抗過敏，增強皮膚毛細血管通透性功能；丹參中的主要成分有丹參酮II Λ和丹酚酸B，其中:丹參酮II 4具有抗炎的功能，丹酚酸B具有強大的抗氧化的作用。在對趕黃祛斑膠囊的分析中也發現本品中的主要有效成分為槲皮素，丹參酮II八和丹酚酸B。通過查詢目前國內外的相關文獻發現，僅有單獨測定趕黃草製劑中的槲皮素或單獨測定丹參製劑中的丹參酮II八和丹酚酸B的報導，還沒有關於對由趕黃草、丹參兩味藥組成的複方製劑中的槲皮素，丹參酮II八和丹酚酸B進行檢測的文獻報導。為了更好的控制趕黃祛斑膠囊的質量，保證臨床用藥的安全性，有必要建立一套完整的質量控制標準以更好的控制本品的質量。趕黃祛斑膠囊的製備工藝中主要涉及的稠膏製備方法為:丹參300g，加90%乙醇回流1.5小時，濾過，濾液回收乙醇至稠膏；丹參藥渣與趕黃草835g，加水煎煮2次，每次2小時，合併煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.15 1.18 (60 65°C)的清膏，冷卻，力口乙醇使含醇量達60%，攪拌，靜置，濾過，沉澱用60%乙醇洗滌三次，合併洗液與濾液，回收乙醇並濃縮成相對密度1.30 1.32的稠膏；合併上述兩種稠膏，備用。取稠膏，加入適量澱粉、微晶纖維素、滑石粉、硬脂酸鎂等，混勻，制粒乾燥後分裝或浸膏直接乾燥後打成粉末直接分裝，即得。這裡得到的其實是膠囊的內容物，經過分析可以得知，整個生產工藝中質量控制比較簡單和粗糙，可能會因為生產批次的不一樣，或者就算是同一批次也會生產出含量各不相同、品質不均勻的廣品。如果在內容物製備完成或者在內容物製備過程中，就對內容物進行適當的鑑別和含量檢測，這無疑對產品的質量穩定和療效穩定起著至關重要的作用。

發明內容
本發明的目的是針對目前國內還沒有上市的藥物製劑趕黃祛斑膠囊，提供一種可以全面鑑別及檢測該試劑有效成分之一槲皮素的質量檢測方法，確保了該藥物製劑的安全有效。為實現上述發明目的，本發明採用的具體技術方案如下: 趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質量檢測方法，其特徵在於:以槲皮素為對照品，以甲苯、乙酸乙酯、甲酸的混合物為展開劑，甲苯:乙酸乙酯:甲酸v/v/v=5:2:1，用薄層色譜法進行鑑另O，並以甲醇和0.4%磷酸水溶液的混合物為流動相，磷酸水溶液:甲醇v/v=54:46，用高效液相色譜法測定含量。所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以甲醇-0.4%磷酸水溶液(46:54)為流動相，檢測波長為370nm，理論板數按槲皮素峰計算應不低於2000。所述磷酸水溶液的濃度為質量百分比。所述薄層色譜法鑑別的具體步驟如下:
A供試品溶液的製備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內容物3g，加入25ml乙酸乙酯，在水浴條件下回流30分鐘，濾過、濾液蒸乾，殘渣加入2ml甲醇使溶解，作為供試品溶液；
B對照品溶液的製備:精密稱取槲皮素對照品適量，以甲醇製成每Iml中含0.5mg的對照品溶液；
C薄層色譜法鑑別:分別吸取供試品溶液與對照品溶液，點於同一矽膠G薄層板上，展開後取出，晾乾，噴以顯色劑，並在105°C加熱2-20分鐘後取出，置365nm的紫外燈下檢視，在與對照品色譜相應的位置上，供試品色譜中顯相同顏色的斑點。所述含量檢測的具體步驟如下:
A對照品溶液的製備:精密稱取槲皮素對照品適量，用80%甲醇水溶液製成每Iml中含
0.04mg的對照品溶液；
B供試品溶液的製備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內容物0.5g，置錐形瓶內，加入80%鹽酸甲醇溶液50ml，精密稱定後在水浴條件下回流1.0小時，取出，放冷，再次精密稱定並採用80%甲醇水溶液補足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液；
C液相色譜測定含量:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。步驟B所述80%鹽酸甲醇溶液由甲醇3份、鹽酸I份混合而成。發明人對鑑別方法和含量測定方法的可行性進行了驗證研究；具體實驗資料如下:
1、槲皮素的薄層鑑別研究 方法:薄層色譜法
樣品和對照品處理方法:取趕黃祛斑膠囊內容物約30g，精密稱定，加入25ml乙酸乙酯，在水浴條件下回流30分鐘，濾過、濾液蒸乾，殘渣加入2ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取槲皮素對照品適量，以甲醇製成每Iml中含0.5mg的對照品溶液。薄層板:矽膠G薄層板，
展開劑:甲本:乙Ife乙酷:甲Ife =5:2: I,
顯色劑:3%三氯化鋁乙醇溶液
顯色方法:噴以顯色劑。在105°C加熱2-20分鐘後取出。結果:在擬定條件下，樣品中有與對照品斑點呈現一致性的斑點，並且申請人通過改變薄層展開劑確認了斑點純度。2、槲皮素的高效液相含量測定研究2.1儀器與實驗藥
Alltech-426型高效液相，CQX25-06超聲波清洗器。甲醇為色譜級，磷酸為分析純。槲皮素對照品為中國藥品生物製品檢定所提供，趕黃祛斑膠囊由成都力思特藥物研究有限公司提供。2.2方法與結果
色譜條件:
色譜柱:月旭 XB-C18 (250mmX 4.6mm, 5 μ m)
流動相:甲醇-0.4%磷酸水溶液(46:54)
檢測波長:370nm 流速:1.0ml/min 2.3溶液製備
2.3.1精密稱取槲皮素對 照品適量，加80%甲醇水溶液製成每Iml中含0.04mg的對照品溶液液。2.3.2供試品溶液製備:稱取供試品0.5g，精密稱定，置錐形瓶內，加50ml 80%鹽酸甲醇溶液，精密稱定後在水浴條件下回流1.0小時，取出，放冷，再精密稱定並採用80%甲醇水溶液補足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。2.4系統適用性實驗:分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 μ 1，注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，結果槲皮素的保留時間為15.627min,槲皮素峰與前後色譜峰的分離度均大於1.5，理論塔板以槲皮素峰計算為7654。.2.5線性關係:分別精密吸取2.2.1項下對照品溶液2.5，5，7.5，10，15，20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，以峰面積積分值A對進樣量C進行回歸，得標準曲線方程:A=647847C+11214 r=0.9995，結果表明槲皮素進樣量在0.1-0.8ng範圍內峰面積與進樣量有良好的線性關係。2.6精密度研究，精密吸取2.2.1項下對照品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，重複進樣6次，測得槲皮素峰面積RSD為1.02%，表明儀器精密度良好。2.7穩定性研究，精密吸取2.2.2項下對照品溶液20 μ 1，分別在O，2,4,6,8小時注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，測得槲皮素峰面積RSD為0.82%，表明供試品溶液在8小時內穩定。2.8重複性實驗精密吸取2.2.2項下樣品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀中，按照上述色譜條件測定峰面積，重複進樣6次，測得槲皮素峰面積RSD為0.92%，表明儀器精密度良好。2.9回收率實驗:精密稱取已知含量的本品9份，每份0.5g，分成3組，每組3份，分別緊密添加槲皮素對照溶液適量，在、按照2.2.2項下方法製備供試品溶液，按照上述色譜條件測定峰面積，計算回收率，回收率為98.25%，RSD=0.99%。實驗結果表明本品具有良好的回收率。本發明的優點是:採用薄層色譜法對槲皮素進行鑑別以及採用高效液相色譜法對槲皮素的含量進行檢測，方法更科學，檢測手段更先進，定性定量更準確，不僅可以更好更全面的反映趕黃祛斑膠囊的有效成分，而且還可以杜絕採用其他藥材代替趕黃草投料生產的情況，從而保證該藥品的質量，保證人民用藥安全有效。本發明的另一優點是，通過對槲皮素的鑑別和含量檢測，可以在膠囊填充之前就進行質量控制，以便生產出質量合格的產品，同時，也可以為市售的流通產品提供一種科學合理的檢測方法，以便從生產和流通領域控制產品質量。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明的上述內容再作進一步的詳細說明，但不應將此理解為本發明技術方案僅限於以下實施例。實施例1 槲皮素的鑑別
取趕黃祛斑膠囊內容物適量研細，稱取粉末3.0g，加入25ml乙酸乙酯，在水浴條件下回流30分鐘，濾過、濾液蒸乾，殘渣加入2ml甲醇使溶解，作為供試品溶液。另取槲皮素對照品適量，用甲醇製成每Iml中含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，分別吸取上述兩種溶液各3 μ 1，點於同一矽膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，在105°C加熱2-20分鐘後取出，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。實施例2 槲皮素的含量測定
用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸水溶液(46:54)為流動相；檢測波長為370nm ;理論板數按槲皮素峰計算應不低於2000。精密稱取槲皮素對照品適量，用80%甲醇水溶液製成每Iml中含0.04mg的對照品溶液。取趕黃祛斑膠囊內容物粉末約
0.5g，精密稱定，置於錐形瓶內，加50ml 80%鹽酸甲醇溶液(配製方法:取甲醇3份，鹽酸溶液I份混合而成)，精密稱定後在水浴條件下回流1.0小時，取出，放冷，再次精密稱定並採用80%甲醇水溶液補足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液。分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。
權利要求
1.趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質量檢測方法，其特徵在於:以槲皮素為對照品，以甲苯、乙酸乙酯、甲酸的混合物為展開劑，甲苯:乙酸乙酯:甲酸v/v/v=5:2:1，用薄層色譜法進行鑑別，並以甲醇和0.4%磷酸水溶液的混合物為流動相，磷酸水溶液:甲醇v/v=54:46，用高效液相色譜法測定含量。
2.根據權利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質量檢測方法，其特徵在於:所述高效液相色譜的條件為:用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以體積比46:54的甲醇-0.4%磷酸水溶液為流動相，檢測波長為370nm，理論板數按槲皮素峰計算不低於2000。
3.根據權利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質量檢測方法，其特徵在於:所述薄層色譜法鑑別的具體步驟如下: A供試品溶液的製備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內容物3g，加入25ml乙酸乙酯，在水浴條件下回流30分鐘，濾過、濾液蒸乾，殘渣加入2ml甲醇使溶解，作為供試品溶液； B對照品溶液的製備:精密稱取槲皮素對照品適量，以甲醇製成每Iml中含0.5mg的對照品溶液； C薄層色譜法鑑別:分別吸取供試品溶液與對照品溶液，點於同一矽膠G薄層板上，展開後取出，晾乾，噴以顯色劑，並在105°C加熱2-20分鐘後取出，置365nm的紫外燈下檢視，在與對照品色譜相應的位置上，供試品色譜中顯相同顏色的斑點。
4.根據權利要求1所述的趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質量檢測方法，其特徵在於:所述含量檢測的具體步驟如下: A對照品溶液的製備:精密稱取槲皮素對照品適量，用80%甲醇溶液製成每Iml中含0.04mg的對照品溶液； B供試品溶液的製備:精密稱定趕黃祛斑膠囊內容物0.5g，置於錐形瓶內，加入80%鹽酸甲醇溶液50ml，精密稱定後在水浴條件下回流1.0小時，取出，放冷，再次精密稱定並採用80%甲醇溶液補足重量，搖勻，濾過，濾液作為供試品溶液； C液相色譜測定含量:分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1，注入液相色譜儀中，測定，即得。
5.根據權利要求4所述的趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質量檢測方法，其特徵在於:步驟B所述80%鹽酸甲醇溶液由甲醇3份、鹽酸I份混合而成。
全文摘要
本發明公開了一種趕黃祛斑膠囊中槲皮素的質量檢測方法，屬於藥品質量控制技術領域。以槲皮素為對照品，趕黃祛斑膠囊內容物為供試品，分別通過薄層色譜法、高效液相色譜法進行鑑別和含量檢測。高效液相色譜條件為用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以甲醇-0.4%磷酸水溶液(4654)為流動相，檢測波長為370nm，理論板數按槲皮素峰計算應不低於2000。本發明採用薄層色譜法、高效液相色譜法分別對槲皮素進行鑑別和含量檢測，方法更科學，檢測手段更先進，定性定量更準確，不僅可以更好更全面的反映趕黃祛斑膠囊的有效成分，而且還可以杜絕採用其他藥材代替趕黃草投料生產的情況，從而確保了該藥品的質量，保證了用藥的安全有效。
文檔編號G01N30/06GK103115974SQ201310029038
公開日2013年5月22日 申請日期2013年1月25日 優先權日2013年1月25日
發明者張玲, 張熠, 趙力科 申請人:成都力思特藥物研究有限公司