一種黃芩中黃芩素與漢黃芩素同時定量測定方法
2023-09-21 19:29:45 2
專利名稱：一種黃芩中黃芩素與漢黃芩素同時定量測定方法
技術領域：
本發明涉及一種黃芩質量控制方法，具體地，涉及一種黃芩中黃芩素與漢黃芩素 同時定量測定方法，屬中藥質量控制領域。
背景技術：
黃芩是一種常用中藥，為中國藥典歷版所收載品種，具清熱燥溼、瀉火解毒、止血 安胎之功效。用於溼溫，暑溫，胸悶嘔惡，溼熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱，咳嗽，高熱，煩咳，血 熱吐衄，癰腫瘡毒，胎動不安。黃芩中的有效成分主要有黃芩苷、漢黃芩苷及其苷元等黃酮 類化合物。其中黃芩苷含量最高，可達18%，中國藥典一部黃芩項下規定黃芩苷不得少於 9. 0%，所以不論是藥材還是製劑都是以黃芩苷為指標進行質量控制。但近年來，有不少文 獻報導，黃芩中的苷元類，如黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A等具有非常強的抗菌、消炎、解 熱、鎮痛等生物活性，遠較其苷類的生物活性強，在人體內的吸收是苷類的數倍至數十倍， 且毒副作用更低。因為在黃芩藥材中苷元類含量低微，無直接提取價值，所以引發了不少酶 解或水解黃芩中的黃芩苷類來提取其苷元類的提取專利與文章問世。但有關黃芩藥材中 具體含多少可水解黃芩素等苷元類，卻未查閱到一篇有關其含量測定的報導，黃芩藥材中 的黃芩素含量都是由黃芩苷的含量按分子量推算出來的，推算的理論值是否與真實含量一 致，是不得而知的。鑑於上述歷史背景情況，為給黃芩中黃芩素和漢黃芩素的充分提取、分離，提供真 實的基礎含量數據，探討簡便、快捷的黃芩中黃芩素與漢黃芩素同時定量測定方法，成為當 務之急。
發明內容
經多途徑多因素探討研究，發明人在適宜溫度下，利用黃芩本身所含的酶，在水溶 液中酶解黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素-7-0- β -吡喃葡萄糖苷、木蝴蝶苷B等化合物，酶解完 成後，加酸性甲醇殺滅黃芩酶的同時保持黃芩素的穩定性，並使酶解的黃芩苷元類充分溶 解，濾過，續濾液作為供試品溶液。以甲醇-0. 1 %磷酸溶液，體積比為51 M 49 46 為流動相，275nm為檢測波長，同時測定黃芩中的黃芩素與漢黃芩素，方法簡便、快捷、待測 成分酶解完全、波峰分離良好。首次為黃芩中黃芩素和漢黃芩素的充分提取、分離，提供了 真實的基礎含量數據。黃芩素的實測數值遠大於以黃芩苷推算出的黃芩素理論含量數值。 以此，進一步證實最終測定的黃芩素是由多種黃芩苷類酶解，以及原藥材中存在的微量遊 離體相加而得到的總和，以單一的黃芩苷含量推算出的黃芩素理論含量僅為實際含量的約 85%左右。通過方法學考察，黃芩素的進樣量在0. 0992-1. 984 μ g/ml範圍內呈良好線 性關係，見
圖1，回歸方程為Y = 5354. 6Χ-96. 788，r = 0. 99988 ；漢黃芩素進樣量在 0. 037488-3. 124 μ g/ml範圍內呈良好線性關係，見圖2，回歸方程為=Y = 5854. 6x_29，r = 0.99997。採用加樣回收實驗，結果表明黃芩素的平均回收率為96. 45% (n = 9)，RSD為1. 34%，見表1 ；漢黃芩素的平均回收率為97. 86% (η = 9)，RSD為1. 89%，見表2。表1黃芩素回收率測定結果
權利要求
1.一種黃芩中黃芩素與漢黃芩素定量測定方法，其特徵在於(1)色譜條件與系統適用性試驗色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動 相甲醇-0. 1 %磷酸溶液，體積比為51 M 49 46 ；檢測波長275nm ；柱溫室溫；流 速1. Oml/min ；理論板數按黃芩素峰計算應不低於3000。(2)對照品溶液的製備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對照品適量於棕色量瓶中，分別 加甲醇製成每Iml含黃芩素30 35 μ g、漢黃芩素10 8 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的製備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置於50ml量瓶中，加入 35 55°C水5 8ml，並在相同溫度的水浴中酶解2 2. 5小時後，取出，加入體積比為 200 1的甲醇-鹽酸的混合液37 35ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為 200 1的甲醇-鹽酸的混合液至刻度，搖勻，濾過，即得。(4)測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀， 測定，按外標一點法計算黃芩中黃芩素與漢黃芩素含量。
2.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於(1)色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相甲醇-0.磷酸 溶液，體積比為51 49;檢測波長275nm;柱溫室溫；流速1. Oml/min;理論板數按黃 芩素峰計算應不低於3000。(2)對照品溶液的製備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對照品適量於棕色量瓶中，分別加 甲醇製成每Iml含黃芩素30 μ g、漢黃芩素8 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的製備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置於50ml量瓶中，加入35°C 水8ml，並在相同溫度的水浴中酶解2小時後，取出，加入體積比為200 1的甲醇-鹽酸的 混合液35ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸的混合液至 刻度，搖勻，濾過，即得。(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色譜儀，測 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，並計算含量。
3.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於(1)色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相甲醇-0.磷 酸溶液，體積比為52 48 ；檢測波長275nm ；柱溫室溫；流速1. Oml/min ；理論板數按 黃芩素峰計算應不低於3000。(2)對照品溶液的製備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對照品適量於棕色量瓶中，分別加 甲醇製成每Iml含黃芩素33g、漢黃芩素9 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的製備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置於50ml量瓶中，加入45°C 水5ml，並在相同溫度的水浴中酶解2小時後，取出，加入體積比為200 1的甲醇-鹽酸的 混合液37ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸的混合液至 刻度，搖勻，濾過，即得。(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色譜儀，測 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，並計算含量。
4.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於(1)色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相甲醇-0. 磷 酸溶液，體積比為53 47 ；檢測波長275nm ；柱溫室溫；流速1. Oml/min ；理論板數按黃芩素峰計算應不低於3000。(2)對照品溶液的製備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對照品適量於棕色量瓶中，分別 加甲醇製成每Iml含黃芩素35 μ g、漢黃芩素10 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的製備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置於50ml量瓶中，加入50°C 水6ml，並在相同溫度的水浴中酶解2. 5小時後，取出，加入體積比為200 1的甲醇-鹽酸 的混合液36ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸的混合液 至刻度，搖勻，濾過，即得。(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，並計算含量。
5.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於(1)色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相甲醇-0.磷酸 溶液，體積比為M 46 ；檢測波長275nm ；柱溫室溫；流速1. Oml/min ；理論板數按黃 芩素峰計算應不低於3000。(2)對照品溶液的製備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對照品適量於棕色量瓶中，分別加 甲醇製成每Iml含黃芩素30 μ g、漢黃芩素10 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的製備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置於50ml量瓶中，加入55°C 水7ml，並在相同溫度的水浴中酶解2.5小時後，取出，加入體積比為200 1的甲醇-鹽酸 的混合液36ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸的混合液 至刻度，搖勻，濾過，即得。(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各ΙΟμΙ，注入液相色譜儀，測 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，並計算含量。
6.根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於(1)色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；流動相甲醇-0.磷 酸溶液，體積比為討46 ；檢測波長275nm ；柱溫室溫；流速1. Oml/min ；理論板數按 黃芩素峰計算應不低於3000。(2)對照品溶液的製備精密稱取黃芩素和漢黃芩素對照品適量於棕色量瓶中，分別 加甲醇製成每Iml含黃芩素35 μ g、漢黃芩素8 μ g的溶液，即得。(3)供試品溶液的製備取黃芩藥材中粉0.02g，精密稱定，置於50ml量瓶中，加入 40°C水8ml，並在相同溫度的水浴中酶解2. 5小時後，取出，加入體積比為200 1的甲 醇-鹽酸的混合液35ml，超聲處理20分鐘，取出，放冷，加體積比為200 1的甲醇-鹽酸 的混合液至刻度，搖勻，濾過，即得。(4)測定方法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測 定黃芩素和漢黃芩素以及供試品溶液的峰面積，並計算含量。
7.根據權利要求1-6所述的測定方法，其特徵在於供試品溶液的濾過係指先用快速定 量濾紙濾過，再用0. 45 μ m微孔濾膜濾過。
全文摘要
本發明公開了一種黃芩中黃芩素與漢黃芩素同時定量測定方法。本發明測定方法在適宜溫度下，利用黃芩本身所含的酶，在水溶液中酶解黃芩苷、漢黃芩苷等苷類化合物，酶解完成後，加酸性甲醇，殺滅黃芩酶的同時保持黃芩素的穩定性，並使酶解的黃芩苷元類充分溶解，濾過，續濾液作為樣品溶液。用HPLC法，以甲醇-0.1％磷酸溶液，體積比為51～54∶49～46為流動相，275nm為檢測波長，同時測定黃芩中的黃芩素與漢黃芩素，方法簡便、快捷、待測成分酶解完全、波峰分離良好。黃芩中黃芩素與漢黃芩素同時定量測定方法為首次報導，為該成分的充分提取、分離，提供了真實的基礎含量數據。黃芩素的含量實測值大於以黃芩苷和黃芩素分子量推算的理論值。
文檔編號A61K36/539GK102128889SQ201010588509
公開日2011年7月20日 申請日期2010年12月15日 優先權日2010年12月15日
發明者李曉燕, 趙韶華, 韓桂茹 申請人:李曉燕