一水合4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉的製作方法

2023-09-21 09:46:15 2

專利名稱：：一水合4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲氧基)喹唑啉的製作方法一水合4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-甲氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基甲IUO喹唑啉本發明涉及ZD6474的新型形式。更具體地，本發明涉及一水合ZD6474,涉及一水合ZD6474的製備方法，涉及包含一水合ZD6474作為活性成分的藥物組合物，涉及一水合ZD6474用於製造在溫血動物(如人類)體內產生抗血管生成和/或降低血管滲透性作用的藥物的用途，還涉及一水合ZD6474在治療溫血動物(如人類)體內與血管生成和/或提高的血管滲透性相關的疾病(如癌症)的方法中的用途。正常的血管生成在包括胚胎發育、傷口癒合和女性生殖功能的幾個部分在內的多種過程中起到重要作用。不需要的或病理性的血管生成與疾病狀態相關，這類疾病包括糖尿病性視網膜病、4艮屑病、癌症、類風溼性關節炎、動脈粥樣化、卡波濟肉瘤(Kaposi'ssarcoma)和血管瘤(Fan等人，1995,TrendsPharmacol.Sci.16:57-66;Folkman，1995,NatureMedicine1:27-31)。血管滲透性的改變械j人為在正常和病理性生理過程中起到一定作用(CulUnan-Bove等人，1993，Endocrinology133:829-837;Senger等人，1993，CancerandMetastasisReviews,12:303-324)。已經確定出具有體外內皮細胞生長促進活性的幾種多肽，包括酸性和鹼性成纖維細胞生長因子(aFGF&bFGF)及血管內皮生長因子(VEGF)。由於其受體的有限表達，與FGF相比，VEGF的生長因子活性對內皮細胞具有相對特異性。近來證椐表明VEGF是正常血管生成和病理性血管生成(Jakeman等人，1993,Endocrinology,133:848-859;Kolch等人，1995,BreastCancerResearchandTreatment,36:139-155)以及血管滲透性(Connolly等人，1989，J.Biol.Chem.264:20017-20024)的重要刺激物。通過VEGF與抗體的螯合的VEGF拮抗作用可導致抑制腫瘤生長(Kim等人，1993，Nature362:841-844)。受體酪氨酸激酶(RTK)在生物化學信號跨越細胞質膜的傳遞過程中是重要的。這些跨膜分子的特徵在於由通過質膜中的片段連接到細胞內酪氨酸激酶區域上的細胞外配體結合區域組成。配體與受體結合導致刺激與受體相關的酪氨酸激酶活性，這導致受體和其它細胞內分子上的酪氨酸殘基的磷酸化。酪氨酸磷酸化的這些改變引發信號級聯，導致各種細胞響應。迄今為止，已經識別出由氬基酸序列同源性確定的至少19種顯著不同的RTK亞類。這些亞類之一目前由fms樣酪氨酸激酶受體Flt-l、含激酶插入區域的受體KDR(也稱為Fk-1)和另一種fms樣酪氨酸激酶受體Flt-4組成。這些相關RTK、Flt-l和KDR中的兩種已顯示出以高親合力結合VEGF(DeVries等人，1992，Science255:989-991;Te廳n等人，1992,Biochem.Biophys.Res.Comm.1992,187:1579-1586)。VEGF與在異種細胞中表達的這些受體的結合與細胞蛋白的酪氨酸磷酸化狀況的變化和4丐通量的變化相關。VEGF為血管發生和血管生成的關鍵刺激物。該細胞因子通過誘導內皮細胞增殖、蛋白酶表達和遷移、和細胞的隨後組織化形成毛細管來誘導血管萌發顯型(Keck,P.J.，Hauser,S.D.，Krivi,G.,Sanzo,K.，Warren，T.，Feder，J.和Connolly,D.T.，Science(WashingtonDC),246:1309-1312,1989;Lamoreaux,W.J.,Fitzgerald,ME.，Reiner,A.,Hasty,K.A.和Charles,S.T.,Microvasc.Res.，55:29-42，1998;Pepper,M.S.,Montesano,R.，Mandroita，S.J.，Orci,L.和Vassalli,J.D.,EnzymeProtein,49:138-162，1996.)。另夕卜，VEGF誘導顯著的血管滲透性(Dvorak,H.F.，Detmar，M.,Claffey，K.P.，Nagy，J.A.，vande\Vater,L.和Senger，D.R.，(IntArch.AllergyImmunol.,107:233-235，1995;Bates,D.O.,Heald，R.I.,Curry，F.E.和Williams,B.J.Physiol.(Lond.),533:263-272,2001),促進高滲透的未成熟血管網的形成，此為病理性血管生成的特徵。已經表明，單獨的KDR激活就足以促進對VEGF的所有主要顯型響應，包括內皮細胞增殖、遷移和存活以及血管滲透性的誘導(Meyer,M.，Clauss,M,Lepple-Wienhues，A.,Waltenberger，J.，Augustin，H.G.,Ziche,M.，Lanz,C.，Biittner，M.，Rziha，H曙J.和Dehio,C.,EMBOJ.，18:363-374,1999;Zeng,H.，Sanyal，S.和Mukhopadhyay，D.，J.Biol.Chem.，276:32714-32719，2001;Gille,H.，Kowalski，丄，Li,B.,LeCouter,J.，Moffat,B，Zioncheck，T.F.,Pelletier,N.和Ferrara,N.，J.Biol.Chem.,276:3222-3230,2001)。抑制VEGF作用的化合物在與血管生成和/或提高的血管滲透性相關的疾病治療中具有價值，這類疾病例如癌症(包括白血病、多發性骨髓瘤和淋巴瘤)、糖尿病、牛皮癬、類風溼性關節炎、卡波濟肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、血管瘤、急性和慢性腎病、動脈粥樣化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性炎症、過度瘢痕形成和粘連、子宮內膜異位、淋巴水肺、功能失調性子宮出血和具有視網膜血管增生的眼病，包括黃斑變性。在WO98/13354和WO01/32651中描述了作為VEGF受體酪氨酸激酶抑制劑的喹唑啉衍生物。在WO98/13354和WO01/32651中描述了具有抗VEGF受體酪氨酸激酶(VEGFRTK)的活性同時具有一定的抗表皮生長因子(EGF)受體酪氨酸激酶(EGFRTK)的活性的化合物。ZD6474是4-(4-溴-2-氟苯胺基)-6-曱氧基-7-(1-甲基哌啶-4-基曱M)ZD6474在WO98/13354的寬公開範圍內，並在WO01/32651中例舉。ZD6474為VEGFRTK的有力抑制劑，也具有一定的抗EGFRTK活性。在一系列;f莫型中M天一次口服給藥，ZD6474已顯示出產生廣鐠抗瘤活性(WedgeS.R.,OgilvieD.J.,DukesM.等人，Proc.Am.Assoc.Canc.Res.2001;42:摘要3126)。WO01/32651描迷了ZD6474的製備。在WO01/32651的實施例2a中，製備並分離ZD6474鹽酸鹽。在WO01/32651的實施例2b中，製備和分離ZD6474游離鹼。在分離步驟中，使用硫酸鎂乾燥產物。分離的ZD6474游離鹼的元素分析表明其不含水。換言之，分離的ZD6474游離鹼是無水形式。在WO01/32651的實施例2c中，製備和分離ZD6474鹽酸鹽。一方面，將分離的ZD6474鹽酸鹽溶解在二甲亞碸中並通過添加固體碳酸鉀來轉化成ZD6474游離鹼(在二甲亞碸溶液中)。二曱亞碸溶液中的ZD6474游離鹼是無水形式。隨後通過添加三氟乙酸，將二甲亞碸溶液中ZD6474的ZD6474游離鹼轉化成ZD6474的三氟乙酸鹽。在WO01/32651的實施例2c的另一方面中，作為固體分離ZD6474游離鹼。首先，通過使ZD6474鹽酸鹽懸浮在二氯甲烷中並用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌該懸浮液以提供ZD6474游離鹼在二氯甲烷中的溶液，將分離的ZD6474鹽酸鹽轉化成ZD6474游離鹼。ZD6474游離鹼的二氯甲烷溶液隨後使用硫酸鎂乾燥，並蒸發去除揮發物。如本申請的實施例1那樣重複該程序並提供結晶的無水形式的ZD6474游離鹼。由此，WO01/32651公開了ZD6474鹽酸鹽和ZD6474游離鹼。在WO01/32651的實施例中作為固體獲得的ZD6474游離鹼是無水形式。WO01/32651中所述的用於製備ZD6474鹽酸鹽和ZD6474游離鹼無水形式的方法也在涉及包括ZD6474的聯合治療的出版文獻中描述和/或提及，例如WO03/039551、WO2004/014383、WO2004/014426、WO2004/032937、WO2004/071397和WO2005/004870。為避免疑問，除非另行指明，術語"ZD6474"在下文中用於表示ZD6474游離鹼。ZD6474的無水形式可以使用WO01/32651中所述的方法製備。在本申請的實施例2中描述了製備和分離ZD6474游離鹼的無水形式的另一方法。ZD6474的無水形式在環境條件下是結晶固體。根椐下文所述的方法在ZD6474的無水形式上進行差示掃描量熱(DSC)分析，並顯示由熔融引起的大的急銳的吸熱線，其具有230。C至240'C的開始溫度(圖1)。要理解的是，DSC的開始溫度和/或峰值溫度值可以隨機器或樣品不同而略微變化，因此所列的值不被視為絕對的。根據下文所述的方法在ZD6474的無水形式上進行熱重量(TGA)分析並顯示在熔融之前沒有表現出重量損失(圖1)。這象徵著ZD6474的無水形式。根據下文所述的方法在ZD6474的無水形式上進行KarlFischer分析並產生0.01至0.23%重量/重量的數值。這象徵著ZD6474的無水形式。ZD6474的無水形式的特徵在於，提供使用CuKa輻射測得的下列26值的至少一個15.0。和21.4。。ZD6474的無水形式的特徵在於，提供如圖2中所示的CuKaX-射線粉末衍射圖。在表l中顯示IO個最顯著的峰。表1ZD6474的無水形式的10個最顯著的X省線粉末衍射峰tableseeoriginaldocumentpage7vs=非常強；s-強根據下述方法進行動態蒸氣吸附(DVS)分析並表明ZD6474的無水形式是非吸溼的(圖3)。在95%相對溼度下，ZD6474的無水形式僅吸收0.63%重量/重量水，這表明沒有轉化成ZD6474的水合形式。因此，ZD6474的無水形式在DVS時標上是動力學穩定的。確定藥物活性化合物的替代性穩定形式是理想的。藥物活性化合物的替代性穩定形式，例如替代性穩定結晶形式有利於工業規模的配製和加工。例如，穩定的結晶形式提供了低的在配製過程中轉化成另一形式的風險，這提供了最終製劑性質的可預測性。本發明涉及替代性ZD6474形式，例如與ZD6474的無水形式不同並在某些環境中具有改進的固態性質的形式的確定。例如，一方面，本發定。、-'''、、、',替代性ZD6474形式的一個實例是ZD6474的水合形式。在WO01/32651中，其描述的化合物據說可以以溶劑合物形式以及非溶劑合物形式，例如水合形式存在。WO01/32651沒有一處提到其中所迷的特定化合物的特定水合物具有意外和/或有益的性質。我們現在已經發現，ZD6474的一水合物形式是在環境溫度和溼度下有利地穩定的ZD6474結晶形式。ZD6474的結晶一水合物形式尤其適合用在含水環境，例如水懸浮液製劑中和/或高溼環境中。此外，得自ZD6474的結晶一水合物形式的加工簡單。例如，ZD6474的這種形式可以容易地在大約30-40。C的溫度下大規模千燥(例如通過配製過程中的流化床乾燥)而沒有顯著脫水，其可以在沒有水合風險的情況下進行溼粒化，並可以儲存在多種溼度下。另外，製備ZD6474的結晶一水合物形式的方法也能夠簡單去除特定的水溶性雜質。根據本發明，提供了一水合ZD6474。一水合ZD6474容易結晶，高度結晶並且非吸溼(通過DVS測量)。結晶形式的一水合ZD6474的特徵在於，提供使用CuKa輻射測得的下列26值的至少一個10.8°和21.0°。結晶形式的一水合ZD6474的特徵在於，提供基本如圖4中所示的X-射線粉末衍射圖。在表2中顯示IO個最顯著的峰表2ZD6474的一水合物形式的10個最顯著的X-射線粉末衍射峰tableseeoriginaldocumentpage8vs=非常強根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少一個位於大約2-6-10.8°的特徵峰(specificpeak)。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少一個位於大約2-e=21.0°的特徵峰。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474,其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少兩個位於大約2-e=10.8。和21.0。的特徵峰。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474，其中該一水合物的乂-射線粉末衍射圖具有位於大約2-6=10.8°、21.0°、18.4。、11.9°、18.9°、18.1°、22.1。、11.4°、20.1。和24.0。的特徵峰。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖與圖4中所示的X-射線粉末衍射圖基本相同。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474,其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少一個位於2-e=10.8。±0.5°2-6的特徵峰。根椐本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474,其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少一個位於2-0=21.0°±0.5°2-0的特徵峰。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少兩個位於2-e-10.8°和21.0。的特徵峰，其中所述值可以偏差土0.5。2-e。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474,其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有位於2-6-10.8、21.0、18.4、11.9、18.9、18.1、22.1、11.4、20.1和24.0。的特徵峰，其中所述值可以偏差±0.5°2-9。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少一個位於2-0-10.8。的特徵峰。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少一個位於2-0=21.0。的特徵峰。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少兩個位於2-e=10.8°和21.0°的特徵峰。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474,其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有位於2-e=10.8°、21.0°、18.4。、11.9°、18.9。、18.1°、22.1。、11.4。、20.1。和24.0。的特徵峰。根據本發明，提供結晶形式的一水合ZD6474,其中該一水合物具有如圖4中所示的X-射線粉末衍射圖。在界定結晶形式的一水合ZD6474的X-射線粉末衍射峰的前述段落中，術語"位於大約"在辭句"......位於大約2-e-......"中用於表示峰的確切位置(即所列2-e角度值)不應該被視為絕對值，因為本領域技術人員會認識到，峰的確切位置可以隨機器不同、隨樣品不同、或由於所用測量條件的略微變化而略微變化。在一個實施方案中，大約2-9=10.8°是指平均2-6-10.8±0.5。，在另一實施方案中，2-0=10,8±0.2°,在再一實施方案中，2-e=io.8±o.r。在前述段落中還應該指出，結晶形式的一水合ZD6474提供了與圖4中所示的X-射線粉末衍射圖"基本"相同的X-射線粉末衍射圖。應該認識到，在本文中，術語"基本"的使用也旨在表明X-射線粉末衍射圖的2-0角度值可以隨機器不同、隨樣品不同或由於所用測量條件的略微變化而略微變化，因此圖中所示的峰位置也不被4見為絕對值。在一水合ZD6474上進行DSC分析(下面給出細節)並顯示出由於脫水(從而產生ZD6474的無水形式)引起的具有5(TC至120'C開始溫度的大的寬的吸熱線，以及由ZD6474的無水形式的熔融引起的具有23(TC至240。C開始溫度的大的窄的吸熱線(圖5)。對一水合ZD6474進行TGA分析(下面給出細節)並顯示出在69°C至lirC之間大約3.7%的重量損失(圖5)，這相當於由一水合ZD6474產生的水合水損失。要理解的是，TGA的溫度值可以隨機器或樣品不同而略微變化，因此所列的值不被視為絕對的。約3.9%的數值，表明所有重量損失均由於水損失。本領域技術人員會認識到，一水合ZD6474中水的重量百分比為3.65%。對在一水合ZD6474進行動態蒸氣吸附(DVS)分析(下面給出細節)並表明一水合ZD6474是非吸溼的(圖6)。DVS分析表明，一水合ZD6474在25'C和0%相對溼度下乾燥的過程中基本(少於5%)不轉化成ZD6474的無水形式。一7jc合ZD6474在0%相對溼度和25。C下儲存時的重量變化百分比圖(圖7)表明，一旦去除表面溼度，重量損失速率極低。一水合ZD6474在0%相對溼度和40'C下儲存時的重量變化百分比圖(圖8)表明，在此溫度下，重量損失速率4吏快，但對於該環境中的水合化合物而言，仍然驚人地慢。因此，一水合ZD6474在DVS時標上動力學穩定。如本申請的實施例3中所述(並如Zhu,H丄，Yuen，C.,Grant,D丄W.,Int.J.Pharm.,(1996)135(1，2)151-160中所述)進行淤漿實驗以確定一水合ZD6474為最穩定結晶形式時的條件。這些實驗表明，在25'C下，ZD6474的無水形式在小於或等於30%相對溼度下是熱力學穩定形式。在25。C下，一水合ZD6474在大於或等於40%相對溼度下是熱力學穩定形式。因此，在25。C和50。/。相對溼度下，一水合ZD6474是最穩定的形式。當指出本發明涉及一水合ZD6474的結晶形式時，結晶度適當地大於大約60%,更適當大於大約80%，優選大於大約90%，更優選大於大約95%。最優選地，結晶度大於大約98%。為避免疑問，術語"環境條件"是指環境溫度和溼度。術語"環境溫度"是指15至3(TC的溫度，特別是大約25。C的溫度。術語"環境溼度"是指大約45至60°/。相對溼度。術語"相對溼度"是指相對於空氣飽和時存在的量而存在的大氣溼度量(％)。本領域技術人員會理解，相對溼度隨溼含量和溫度而變。一水合ZD6474結晶形式提供與圖4中所示的X-射線粉末衍射圖基本相同的X-射線粉末衍射圖並具有表2中所示的基本10個最顯著峰(角度2-e值)。要理解的是，x-射線粉末衍射圖的2-e值可以隨機器或樣品不同而略微變化，因此所列的值不禎^見為絕對的。已知的是，可以獲得隨測量條件(例如所用設備或機器)具有一個或更多測量變化的X-射線粉末衍射圖。特別地，公知的是，X-射線粉末衍射圖中的強度可以隨測量條件(例如優選取向)而波動。因此，應該理解的是，本發明的一水合ZD6474形式不限於提供與圖4中所示的X-射線粉末衍射圖相同的X-射線粉末衍射圖的晶體，提供與圖4中所示基本相同的X-射線粉末衍射圖的任何晶體都落在本發明的範圍內。X-射線粉末衍射領域技術人員能夠判斷X-射線粉末衍射圖的基本相同性。X-射線粉末衍射領域技術人員會認識到，例如尺寸大於30微米的顆粒和可能影響樣品分析的非歸一的縱橫比可能影響峰的相對強度。技術人員也會認識到，樣品在衍射計中的確切高度和衍射計的0校準可以影響反射位置。樣品的表面平面度也可能具有小的影響。因此，所示衍射圖數據不被視為絕對值(Jenkins,R&Snyder，R丄.'IntroductiontoX-RayPowderDiffractometry'JohnWiley&Sons1996;Bunn,C.W.(1948),ChemicalCrystallography,ClarendonPress,London;Klug,H.P.&Alexander,L.E.(1974)，X-RayDiffractionProcedures)。通常，X-射線粉末衍射圖中衍射角度的測量誤差為+A0.5。2-e或更小，例如0.2。2-e或理想地0.1。2-e，當考慮圖2和4中的x-射線粉末衍射圖時和當閱讀表1和2時，這類測量誤差度應該計入考慮。此外，應該理解的是，強度可能隨實驗條件和樣品製備(例如優選取向)而波動。為避免疑問，術語"ZD6474游離鹼"是指ZD6474游離鹼的每一形式，而"無水ZD6474"是指ZD6474游離鹼的特定無水形式，"一水合ZD6474"是指ZD6474游離鹼的特定一水合物形式。根據本發明的另一方面，提供了包含如上定義的一水合ZD6474以及可藥用賦形劑或栽體的藥物組合物。該組合物可以是適合口服的形式(例如片劑、錠劑、硬或軟膠嚢、水性懸浮液或油性懸浮液、乳劑、可分散粉末或顆粒、糖漿或酏劑)，適合吸入給藥的形式(例如細碎粉末或液體氣溶膠)，適合吹入的形式(例如細碎粉末)、適合腸道外注射的形式(例如用於靜脈內、皮下、肌肉內或輸液給藥的無菌溶液、懸浮液或乳劑)、適合局部給藥的形式(例如乳霜、油膏、凝膠或水性或油性溶液或懸浮液)、或適合直腸給藥的形式(例如作為栓劑)。優選地，一水合ZD6474口服給藥。一般而言，上述組合物可以使用傳統賦形劑以傳統方式製備。本發明的組合物有利地呈現單位劑型。一水合ZD6474通常以10至500毫克/平米動物身體面積，例如大約0.3至15毫克/千克人的單位劑量施用於溫血動物。考慮例如0.3至15毫克/千克，例如0.5至5毫克/千克的單位劑量，這通常是治療有效劑量。單位劑型，例如片劑或膠嚢，通常含有例如25至500毫克活性成分。優選地，使用0.5至5毫克/千克每曰劑量。特定疾病的治療性或預防性治療所需的劑量必定隨所治療的主體、給藥途徑和要治療的疾病嚴重性而變。相應地，治療特定患者的從業醫師可以確定最佳劑量。根據本發明的另一方面，提供了用在人類或動物治療法中的如上定義的一水合ZD6474。本發明的另一特徵是用作藥物的如上定義的一水合ZD6474,方便地是用作在溫血動物(如人類)體內產生抗血管生成和/或降低血管滲透性作用的藥物的如上定義的一水合ZD6474。因此，根椐本發明的另一方面，提供了如上定義的一水合ZD6474用於製造在溫血動物(如人類)體內產生抗血管生成和/或降低血管滲透性作用的藥物的用途。根據本發明的另一特徵，提供了在需要治療的溫血動物(如人類)體內產生抗血管生成和/或降低血管滲透性作用的方法，其包括對所述動物施用有效量的如上定義的一水合ZD6474。一水合ZD6474是抗血管生成和/或降低血管滲透性的試劑並可以作為唯一療法使用或可以除了一水合ZD6474外還包括一種或多種其它物質和/或治療。這類聯合治療可以通過獨立治療組分的同時、相繼或單獨給藥來實現。在醫療腫瘤學領域中，普通實踐是使用不同治療形式的組合來治療每一癌症患者。在醫療腫瘤學中，這類聯合治療的除一水合ZD6474外的其它一種或多種部分可以是手術、放射療法或化學療法。這類化學療法可以包括三種主要類別的治療劑(i)其它抗血管生成劑，例如抑制血管內皮生長因子的那些(例如抗血管內皮細胞生長因子抗體貝伐單抗[阿瓦斯丁tm]，和通過與上文定義的不同的機制發揮作用的那些(例如三羧氨基喹啉(Linomide)、整聯蛋白ocv(33功能的抑制劑、血管抑素、雷佐生(razoxin)、沙利度胺)，並包括血管把向劑(例如combretastatinphosphate和國際專利申請WO00/40529、WO00/41669、WO01/92224、WO02/04434和WO02/08213中公開的化合物，和國際專利申請WO99/02166中所迷的血管破壞刑，該文獻公開的內容經此引用併入本文(例如N-乙醯基秋水仙醇-O-磷酸酯))；(ii)細胞生長抑制劑，例如抗雌激素劑(antioestrogens)(例如他莫昔芬、託瑞米芬、雷洛昔芬、屈洛昔芬、iodoxyfene)、雌激素受體下調劑(例如氟維斯群)、孕激素類(例如醋酸甲地孕酮)、芳香酶抑制劑(例如阿那曲唑、來曲唑、伏氯唑(vorazole)、依西美坦)、抗黃體酮類藥物(antiprogestogens)、抗雄激素物質(例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、醋酸環丙氯地孕酮)、LHRH激動劑和拮抗劑(例如醋酸戈舍瑞林、luprolide、布舍瑞林)、5a-還原酶的抑制劑(例如非那甾胺)、抗入侵劑(例如金屬蛋白酶抑制劑，例如馬立馬司他，和尿激酶血纖維蛋白溶酶原活化劑受體功能的抑制劑)、和生長因子功能的抑制劑(這類生長因子包括例如血小板源生長因子和肝細胞生長因子)，這類抑制劑包括生長因子抗體、生長因子受體抗體(例如抗-erbb2抗體曲妥珠單抗[赫賽汀tm]和抗-erbbl抗體西妥昔單抗[C225])、法尼基轉移酶抑制劑、酪氨酸激酶抑制劑，例如表皮生長因子屬抑制劑(例如EGFR屬酪氨酸激酶抑制劑，例如N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基-6-(3-嗎啉代丙M)喹唑啉-4-胺(吉非替尼，ZD1839)、N-(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)咬唑啉-4-胺(埃羅替尼，OSI-774)和6-丙烯醯氨基-M-(3-氯-4-氟苯基)-7-(3-嗎啉代丙氧基)喹唑啉-4-胺(CI1033))和絲氨酸/蘇氨酸激酶抑制劑)；和(iii)用在醫療腫瘤學中的抗增殖/抗腫瘤藥及其組合，例如抗代謝物(例如抗葉酸物，如氨甲"萊呤，氟嘧啶類，如5-氟尿嘧啶、替加氟、噪呤和腺苷類似物、阿糖胞苷)；抗腫瘤抗生素(例如蒽環類，如阿黴素、博來黴素、多柔比星、柔紅黴素、表阿黴素和依達比星，絲裂黴素C、放線菌素、光神黴素)；鉑衍生物(例如順鉑、卡鉑)；烷基化劑(例如氮芥、美法侖、苯丁酸氮芥、白消安、環磷醯胺、異環磷醯胺、亞硝基脲、塞替派)；抗有絲分裂劑(例如長春花生物鹼，如長春新鹼、長春花鹼、長春地辛、長春瑞賓，和紫杉類，如紫杉醇、泰索帝)；拓樸異構酶抑制劑(例如表鬼臼毒素，如依託泊甙和替尼泊苷，安吖啶、拓樸替康、喜樹鹼以及伊立替康)以及酶(例如天門冬醯胺酶)和胸苷酸合成酶抑制劑(例如雷替曲塞)；其它類型的化學治療劑包括(iv)生物響應改性劑(例如幹擾素)；(v)抗體(例如依決洛單抗)；(vi)反義療法,例如指向上列靶的那些，例如ISIS2503,—種反義抗-ras;(vii)基因療法，包括例如代替異常基因，例如異常p53或異常BRCA1或BRCA2的方法，GDEPT(基因導向酶前藥療法)方法，例如使用胞嘧啶脫氨酶、胸苷激酶或細菌硝基還原酶的那些，和提高患者對化學療法或放射療法的耐受性的方法，例如多重耐藥基因療法；和(viii)免疫療法，包括例如提高患者瘤細胞的免疫原性的體外和體內方法，例如用細胞因子(例如白介素2、白介素4和粒細胞巨噬細胞克隆刺激因子)轉染，降低T-細胞無變應性(anergy)的方法、使用轉染免疫細胞(例如細胞因子轉染的樹突細胞)的方法，使用細胞因子轉染的瘤細胞系的方法，和使用抗獨特型抗體。例如，可以通過如上定義的一水合ZD6474與WO99/02166中所述的血管耙向劑(例如N-乙醯基秋水仙醇-O-磷酸酯(WO99/02166的實施例l))的同時、相繼或單獨給藥實現這類聯合治療。從WO01/74360中獲知，抗血管生成藥(antiangiogenics)可以與抗高血壓藥結合。本發明的一水合ZD6474也可以與抗高血壓藥結合給藥。抗高血壓藥是降低血壓的藥劑(參見，例如WO01/74360，其經此引用併入本文)。因此，根據本發明，提供了治療與血管生成相關的疾病的方法，其包括對溫血動物(如人類)施用有效量的如上定義的一水合ZD6474與抗高血壓藥的組合。根據本發明的另一特徵，提供了如上定義的一水合ZD6474與抗高血壓藥的組合用於製造治療溫血哺乳動物(如人類)體內與血管生成相關的疾病的藥物的用途。根據本發明的另一特徵，提供了用於治療溫血哺乳動物(如人類)體內與血管生成相關的疾病的包含如上定義的一水合ZD6474與抗高血壓藥的藥物組合物。根據本發明的另一方面，提供了在溫血動物(如人類)體內產生抗血管生成和/或降低血管滲透性作用的方法，其包括對所述動物施用有效量的如上定義的一水合ZD6474與抗高血壓藥。根據本發明的另一方面，提供了如上定義的一水合ZD6474與抗高血壓藥的組合用於製造在溫血哺乳動物(如人類)體內產生抗血管生成和/或降^氐血管滲透性作用的藥物的用途。優選的抗高血壓藥是鉤通道阻滯藥、血管緊張素轉化酶抑制劑(ACE抑制劑)、血管緊張素II受體拮抗劑(A-II拮抗劑)、利尿劑、p-腎上腺素能受體阻滯藥(P-阻滯藥)、血管擴張劑和ot-腎上腺素能受體阻滯藥(ot-阻滯藥)。特別的抗高血壓藥是鈣通道阻滯藥、血管緊張素轉化酶抑制劑(ACE抑制劑)、血管緊張素II受體拮抗劑(A-II拮抗劑)、和|3-腎上腺素能受體阻滯藥(|3-阻滯藥)，尤其是鈣通道阻滯藥。如上所述，一水合ZD6474以其抗血管生成和/或降低血管滲透性作用受到關注。一水合ZD6474預計可用於多種疾病，包括癌症、糖尿病、牛皮癬、類風溼性關節炎、卡波濟肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、血管瘤、淋巴水腫、急性和慢性腎病、動脈粥樣化、動脈再狹窄、自身免疫性疾病、急性炎症、過度瘢痕形成和粘連、子宮內膜異位、功能失調性子宮出血和具有視網膜血管增生的眼病，包括年齡相關性黃斑變性。癌症可能影響任何組織並包括白血病、多發性骨髓瘤和淋巴瘤。特別地，本發明的這類化合物預計有利地減緩例如結腸、乳腺、前列腺、肺和皮膚的原發性和再發性實體瘤的生長。更特別地，本發明的這類化合物預計抑制與VEGF相關的任何形式的癌症，包括白血病、多發性骨髄瘤和淋巴瘤，以及，例如，與VEGF相關的那些原發性和再發性實體瘤的生長，尤其是生長和蔓延顯著取決於VEGF的那些腫瘤的生長，包括，例如結腸、乳腺、前列腺、肺、腦、外陰和皮膚的某些腫瘤。除了其在治療藥物中的應用外，如上定義的一水合ZD6474也可用作評測VEGF受體酪氨酸激酶活性抑制劑在實驗室動物(例如貓、狗、兔、猴、大鼠和小鼠)中的效果用的體外和體內試驗系統的開發和標準化中的藥理學工具以作為探尋新型治療劑的一部分。WO01/32651中詳述的和用於測試ZD6474的試驗法如下(a)體外受體酪氨酸激酶抑制試驗該試驗法測定受試化合物抑制酪氨酸激酶活性的能力。VEGF或表皮生長因子(EGF)受體細胞質域的編碼DNA可以通過全基因合成法(EdwardsM,InternationalBiotechnologyLab5(3),19-25,1987)或通過克隆法獲得。這些可以隨後在合適的表達體系中表達以獲得具有酪氨酸激酶活性的多肽。例如，通過昆蟲細胞中重組蛋白的表達獲得的VEGF和EGF受體細胞質域據發現表現出固有的酪氨酸激酶活性。在VEGF受體Fit(基因庫登記號X51602)的情況下，Shibuya等人(Oncogene,1990,5:519-524)描述的為多數細胞質域編碼的1.7kbDNA片段(從蛋氨酸783開始並包括終止密碼子)從cDNA上分離並克隆到杆狀病毒4昔位栽體(例:i口pAcYMl(參見TheBaculovirusExpressionSystem:ALaboratoryGuide,LA.KingandR.D,Possee,ChapmanandHall，1992)或pAc360或pBlueBacHis(可獲自InvitrogenCorporation))中。這種重組構造與病毒DNA(例如PharmingenBaculoGold)共轉染到昆蟲細胞(例如Spodopterafrugiperda21(Sf21))中以製備重組杆狀病毒。(重組DNA分子的裝配方法和重組杆狀病毒的製備和應用的細節可以在標準教科書中找到，例如Sambrook等人，1989,Molecularcloning-ALaboratoryManual,第二版，ColdSpringHarbourLaboratoryPress和O'Reilly等人，1992,BaculovirusExpressionVectors-ALaboratoryManual,W.H.FreemanandCo,NewYork)。對於試驗法中使用的其它酪氨酸激酶，可以以類似方式克隆和表達從蛋氨酸806(KDR,基因庫登記號L04947和蛋氨酸668(EGF受體，基因庫登記號X00588)開始的細胞質片段。為了表達cFlt酪氨酸激酶活性，使Sf21細胞以3的感染多樣性感染plaque-purecFlt重組病毒並在48小時後收取。將收取的細胞用水冷的磷酸鹽緩衝鹽水溶液(PBS)(10mM磷酸鈉pH7.4,138mM氯化鈉，2.7mM氯化鉀)洗滌，然後再懸浮在水冷的HNTG/PMSF(20mMHepespH7.5，150mM氯化鈉，10%v/v甘油，l°/。v/vTritonX100,1.5mM氯化鎂，1mM乙二醇-雙((3絲乙基醚)N,N,N，，N，-四乙酸(EGTA),1mMPMSF(苯基曱基磺醯基氟)中；PMSF在剛要使用之前由新製成的在曱醇中1OOmM溶液加入)，每1千萬細胞使用1毫升HNTG/PMSF。將該懸浮液在4。C下以13,000rpm離心IO分鐘，去除上清液(酶儲料)並等分儲存在-70。C下。每一批新的儲料酶在該試驗法中通過用酶稀釋劑(100mMHepespH7.4,0.2mM原釩酸鈉，0.1%v/vTritonX100,0.2mM二疏蘇糖醇)稀釋來滴定。對於典型批料，儲料酶用酶稀釋劑稀釋2000倍並對每一試驗孔使用50微升稀釋酶。由含酪氨酸的無規共聚物，例如Poly(Glu，Ala，Tyr)6:3:1(SigmaP3899)製備底物儲液，作為在PBS中的1毫克/毫升儲料儲存在-20'C下並用PBS稀釋500倍以用於板塗布。在試驗前一天，將100微升稀釋底物溶液分配到試驗板(Nuncmaxisorp96-孔免疫板)的所有孔中，將其密封並在4。C下放置過夜。在試驗當天，丟棄底物溶液並將試驗板孔用PBST(含0.05%v/vTween20的PBS)洗塗一次，用50mMHepespH7.4洗滌一次。將受試化合物用10%二曱亞碸(DMSO)稀釋並將25微升稀釋化合物轉移到洗過的試驗板的孔中。"完全(total)"對照孔含有10%DMSO以代替化合物。在所有試驗孔中加入25微升含8|laM腺苷-5，-三磷酸鹽(ATP)的40mM氯化錳(II)，但含有氯化錳(II)而不含ATP的"空白，，對照孔除外。為了啟動反應，在每個孔中加入50微升的新稀釋的酶，並將板在室溫下培養20分鐘。然後丟棄液體並將孔用PBST洗滌兩次。在每個孔中加入用含有0.5%w/v牛血清白蛋白(BSA)的PBST稀釋6000倍的100微升鼠IgG抗磷酸酪氨酸抗體(UpstateBiotechnologyInc.產品05-321)並將板在室溫下培養1小時，然後丟棄液體並將孔用PBST洗滌兩次。加入用含有0.5%w/vBSA的PBST稀釋500倍的100微升辣根過氧化物酶(HRP)連接的羊抗鼠Ig抗體(Amersham產品NXA931)並將板在室溫下培養l小時，然後丟棄液體並將孔用PBST洗滌兩次。將使用一個50毫克ABTS片劑(Boehringer1204521)在50毫升新制50mM磷酸鹽-檸檬酸鹽緩沖劑pH5.0+0.03%過硼酸鈉(每100毫升蒸餾水使用1個含過硼酸鈉(PCSB)的磷酸鹽檸檬酸鹽緩衝劑膠嚢(SigmaP4922)製成)中新製成的一百微升2，2，-連氮基-雙(3-乙基苯噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)溶液加入每個孔。然後將板在室溫下培養20-60分鐘直至使用板讀數分光光度計在405納米下測得的"完全"對照孔的光學密度值為大約1.0。使用"空白"(無ATP)和"完全"(無化合物)對照值測定產生50%酶活性抑制的受試化合物稀釋範圍。(b)體外HUVEC增殖試驗該試驗測定受試化合物抑制生長因子刺激的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)增殖的能力。在MCDB131(GibcoBRL)+7.5%v/v胎牛血清(FCS)中分離HUVEC細胞並在96孔板中以1000個細胞/孔的濃度種在(在第2至8通道(passage))MCDB131+2%v/vFCS+3pg/ml肝素+1(^g/ml氫化可的木〉中。在最少4小時後，在它們中加入適當的生長因子(即VEGF3ng/ml，EGF3ng/ml或b-FGF0.3ng/ml)和化合物。然後將培養物用7.5%二氧化碳在37。C下培養4天。在第4天，在培養物中脈沖加入1iuCi/孔的氚化胸苷(Amersham產品TRA61)並培養4小時。使用96孔板收集器(Tomtek)收集細胞，然後用Beta板計數器檢測氚的併入。使用以cpm表示的併入細胞的放射能力測量化合物對生長因子刺激的細胞增殖的抑制。(c)體內實體瘤疾病模型該試驗測量化合物抑制實體瘤生長的能力。在雌性無胸腺的Swissnu/nu小鼠的脅腹中，通過皮下注射在100微升50%(v/v)Matrigel的無血清培養基溶液中的lx106CaLu-6細胞/小鼠建立CaLu-6腫瘤異種皮移植。在細胞植入後的十天，將小鼠分成8-10組，從而實現相當的組平均體積。使用遊標卡尺測量腫瘤並如下計算體積(1xw)x々(1xw)x(ti/6),其中l是最長直徑，w是與最長直徑垂直的直徑。每天口服受試化合物最少21天，對照動物接受化合物稀釋劑。每周兩次測量腫瘤。通過比較對照組與處理組的平均腫瘤體積，計算生長抑制程度，並使用t-試驗和/或Mann-WhitneyRankSum試驗測定統計顯著性。當pO.05時，化合物處理的抑制效果被視為顯著。本發明的化合物的毒物學可以例如使用如下所述的大鼠14天研究評估。(d)在大鼠中的14天毒性試驗該試驗測量化合物增加末梢股骨和近端脛骨的股骨骨骺生長板中的肥大區域的能力，並能夠評估其它組織中的組織病理學變化。血管生成是長骨伸長過程中軟骨骨化中的必不可少事件，且生長板的血管入侵經教導取決於肥大軟骨細胞引起的VEGF生成。在用特異性螯合VEGF的試劑處理後，表現出肥大軟骨細胞區域的膨脹和血管生成的抑制，這類試劑例如(i)小鼠中的可溶VEGF受體嵌合體蛋白質(Flt-(l-3)-IgG)(Gerber，H-P.,Vu,T.H.,Ryan,A.M.,Kowalski,J.，Werb,Z.和Ferrara，N.VEGFcoupleshypertrophiccartilageremodelling,ossificationandangiogenesisduringendochondralboneformation,NatureMed.,5:623-628,1999)和(ii)食蟹猴(cynomologusmonkey)中的重組人化抗-VEGF單克隆IgGl抗體(Ryan,A.M.,Eppler，D.B.,Hagler,K.E.,Bruner,R.H.，Thomford，P丄，Hall，R丄.，Shopp,GM.和O'Niell,C.A.PreclinicalSafetyEvaluationofrhuMAbVEGF,anantiangiogenichumanisedmonoclonalantibody,Tox.Path.，27:78-86,1999)。VEGF受體酪氨酸激酶活性的抑制劑因此也應該抑制軟骨的血管入侵，並增加生長動物中末梢股骨和近端脛骨的股骨骨骺生長板中的肥大區域。最初通過懸浮在聚氧乙烯(20)山梨糖醇肝單油酸酯在去離子水中的1%(v/v)溶液中，通過在4'C下球磨過夜(至少15小時)，配製化合物。通過剛要定量進料之前攪拌，使化合物再懸浮。通過口服管飼法，每天一次用化合物(0.25毫升/100克體重)或栽體餵祠YoungAlderleyPark大鼠(來自Wistar,135-150克體重，4至8周大，每組5-6隻)連續14天。在第15天，使用升高濃度的二氧化碳，人道殺死15隻動物，並進行屍體檢驗(post-mortem)。收集一系列組織(包括股脛骨關節)並通過標準組織學技術加工以產生石蠟切片。將組織學切片用蘇木精和曙紅染色並通過光學顯微術檢測組織病理學。使用形態學圖像分析法測量股骨和脛骨切片中末梢股骨和近端脛骨的股骨骨骺生長板。通過比較對照組和處理組的平均骨骺生長板區域來測定肥大區域的增加，並使用單尾t-試驗測定統計顯著性。當p3|liM的Basal-IC50(c)在50毫克/千克下78。/。的腫瘤生長抑制；p0.001(Mann-WhitneyRankSumTest);(d)在雌鼠中在100毫克/千克/天下75%的骨骺生長板肥大增長；p<0.001(單尾t-試驗)。如上定義的一水合ZD6474可以通過已知適用於製備化學相關化合物的任何方法製備。提供這類方法作為本發明的另一特徵並如以下所述。必要的原材料可以通過有機化學的標準程序獲得。ZD6474的無水形式可以根據WO01/32651中所迷的任何方法製備，參見WO01/32651的具體實施例2b和2c。或者，必要的原材料可通過與在有機化學家的普通技術範圍內的例舉程序類似的程序獲得。下列方法構成本發明的另一方面。一水合ZD6474的合成(a)這類方法提供了本發明的另一方面並包含，例如，下列步驟U)將ZD6474游離鹼溶解在含水有機溶劑混合物中以形成溶液；(ii)發生自髮結晶；和(iii)分離由此形成的結晶固體。(b)另一這類方法提供了本發明的另一方面並包含，例如，下列步驟(i)將ZD6474游離鹼溶解在含水有機溶劑混合物中以形成溶液；(ii)加入一水合ZD6474的晶種以引發一水合ZD6474的結晶；和(iii)分離由此形成的結晶固體。對於上述(a)和(b)的部分(i)，所用有機溶劑可以是任何非溶劑合溶劑。術語"非溶劑合溶劑"是指不會與ZD6474形成結晶溶劑合物的溶劑。更具體地，有機溶劑包括水，水的量提供大約0.4至1.0，尤其是大約0.5至0.95的水活性。術語"水活性"是指底物(例如溶劑)中可得的水，其作為底物與在特定相對溼度下的周圍環境平衡時存在的量的十進位分數。換言之，底物周圍70%的平衡相對溼度是指底物具有0.70的水活性。例如對於上述(a)和(b)的部分(i)，有機溶劑可以是醚，例如四氬呔喃。特別地，四氫呋喃可以含有5至10體積％,特別是100/。的水以提供含水有機溶劑混合物。換言之，該混合物可以含有95至90體積％，特別是90%的四氫呋喃和5至10體積％，特別是10°/。的水。對於(a)和(b)的部分(i)，如果需要，該混合物可以被加熱至回流直至發生溶解。或者，該混合物可以例如加熱至低於溶劑混合物的回流溫度的溫度，只要基本所有固體材料發生溶解。要認識到，可以通過溫熱混合物的過濾去除少量不溶材料。在上述(a)和(b)中，可以通過任何傳統方法，例如通過過濾，分離由此形成的結晶固體。分離出的結晶固體可以隨後乾燥。例如，當結晶固體在不增溼的情況下乾燥時，合適的乾燥溫度為大約20至3(TC，尤其是大約25。C。當結晶固體在增溼的情況下乾燥時，乾燥溫度為大約30至5(TC，尤其是大約40'C。下面藉助下列非限制性實施例、數據和附圖例示本發明，其中，除非另行指明(i)通過在真空中旋轉蒸發來進行蒸發並在過濾去除殘留固體，例如乾燥劑後進行後加工(work-up)程序；(ii)收率僅示例性給出而不必是可實現的最大值；(iii)熔點未校正，並使用MettlerDSC820e測定；(iv)最終產物的結構通過核(通常質子)磁共振(NMR)和質譜技術證實；質磁共振化學位移值以△標度測量，並如下顯示峰多樣性s,單峰；d，雙峰；t,三重峰；m，多重峰；br,寬；q,四重峰，quin，五重峰；所有樣品均在BrukerDPX400MHz上，在300K下，在所示溶劑中，以16次掃描，脈衝重複時間10秒處理。(v)中間體通常不充分表徵並通過NMR分析估測純度；和(vi)使用下列縮寫RH相對溼度THF四氬吹喃IPA異丙醇DMSO二曱亞碸DSC差示掃描量熱法TGA熱重量分析v/v體積/體積比w/w重量/重量比實施例1:重複WO01/32651的實施例2c的ZD6474游離鹼分離歩猓如上所述，在WO01/32651的實施例2c中，ZD6474游離鹼作為固體分離。在WO01/32651的實施例2c中，通過使ZD6474鹽酸鹽懸浮在二氯甲烷中並用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌該懸浮液以提供ZD6474游離鹼在二氯甲烷中的溶液，將ZD6474鹽酸鹽轉化成ZD6474游離鹼。ZD6474游離鹼的二氯甲烷溶液隨後使用硫酸鎂乾燥，並蒸發去除揮發物。在本申請的此實施例中，從由此提供ZD6474游離鹼在二氯甲烷中的溶液(其用水洗滌)的步驟開始重複WO01/32651的實施例2c的分離步驟。本領域技術人員會認識到，在分離步驟之前使用的製備ZD6474游離鹼在二氯曱烷中的溶液的步驟與藉助特定分離步驟提供的ZD6474的形式無關。另外，任何一個或多個中和步驟對提供的ZD6474的形式沒有影響。將ZD6474樣品(250.5毫克)裝在Wheaton—次性玻璃閃爍瓶中並加入二氯甲烷(10毫升)。將該瓶加蓋並將混合物溫和渦旋10分鐘以使固體溶解。然後在溶液中加入水(5毫升)並將混合物劇烈搖振30秒。使該混合物靜置2分鐘，然後用玻璃吸移管去除二氯曱烷層並裝在另一玻璃閃爍瓶中。在該溶液中加入硫酸鎂並使該混合物渦旋以使固體充分分散。繼續加入硫酸鎂直至固體不再團塊(clump)在一起而在渦旋時形成微細分散體。使該混合物靜置過夜。然後過濾去除疏酸鎂並用二氯甲烷(l毫升)漂洗。合併濾液和洗液並使其蒸發產生微細的白色結晶固體。然後通過XRPD(根椐下述方法)分析該材料。XRPD跡線(圖9)表明該材料是ZD6474的無水形式(見圖2)。本領域技術人員會認識到，峰高度的任何差異歸因於優選結晶取向。實施例2:無水ZD6474的製備根據WO01/32651的實施例2b中所述的程序製備ZD6474游離鹼。將ZD6474游離鹼(IO克)懸浮在四氫呋喃(50毫升)、水(25毫升)和乙酸正丁酯(40毫升)中，並將該懸浮液加熱至回流以產生溶液。分離水相，過濾有4幾相併用四氫呋喃(5毫升)洗滌。加入乙酸正丁酯(60毫升)並將該混合物在大氣壓下蒸餾直至達到106。C的內容物溫度。將所得ZD6474淤漿冷卻並通過過濾分離固體，用乙酸乙酯(20毫升)洗滌並乾燥提供無水ZD6474(9.2克，92%);NMR譜(吡啶-d5)1.49(2H，m),1.75-1.90(5H，m),2.15(3H,s),2.76(2H,m),3.63(3H,s)，3.97(2H,d)，7.38(1H，ddd)，7.49(1H，dd),7.64(1H，s),7.88(1H,t)，7.89(1H,s)，9.01(lH,s)，10.37(1H，s);質譜固+475。實施例3:在特定水活性下在含水異丙酵中的淤漿實驗以研究不同相對溼度下ZD6474的最穩定形式將無水ZD6474(50毫克)和一水合ZD6474(50毫克)在水活性為0.3、0.4和0.5(分別相當於30%相對溼度,40%相對溼度和50%相對溼度)的不同比率的異丙醇/水中在25'C下製漿24小時。然後濾除所得材料並風乾。這些實驗表明，在25。C下，無水ZD6474是在S30。/。相對溼度下的熱力學穩定形式，一水合ZD6474是在240%相對溼度下的熱力學穩定形式。實施例4:一水合ZD6474的製備根椐WO01/32651的實施例2b中所述的程序製備ZD6474游離鹼。將ZD6474游離鹼(10.06克)在環境溫度下加入含水四氫呋喃(90%四氬呋喃/10%水，體積/體積)。將該混合物攪拌並升溫至40'C直至所有固體溶解。在42。C下向該混合物中進一步加入ZD6474游離鹼U.44克)，並將該混合物攪拌20分鐘以提供清澈溶液。將該溶液升溫至50。C並在此溫度下攪拌4小時。然後將溶液冷卻至室溫並攪拌12天以提供淤漿。在真空(600至700毫巴)下過濾所得固體並在空氣中在真空(200毫巴)下乾燥1小時。根據下述方法在乾燥的ZD6474產物上進行KarlFischer分析並產生3.904%的數值，其與一水合ZD6474相符；NMR語(吡啶-d5)1.49(2H,m),1.75-1.90(5H,m),2.15(3H,s),2.76(2H，m)，3.63(3H,s)，3.97(2H，d)，7.38(1H,ddd),7.49(1H,dd)，7.64(1H,s)，7.88(1H，t),7,89(lH，s),9.01(lH,s),10.37(1H，s);質譜MH+475。實施例5:—水合ZD6474的另一製備方法在設定於3(TC的溫控玻璃反應器中製備。在該容器中裝入無水ZD6474。向其中加入3相對體積的四氫呋喃(穩定化的)和7相對體積的純淨水(即對於1千克ZD6474,使用3升THF和7升水)。將該內容物攪動形成乳脂色淤漿。反應通常在不到1小時內完成，但可以在1小時後提取小的淤漿樣品，過濾，然後獲取粉末XRD謙以證實這一點。在分流布氏(Buchner)漏鬥上過濾分離固體。將反應容器用2相對體積的水洗滌。然後在布氏漏鬥中使用反應容器洗液作為濾餅的置換洗液。使用添加到反應容器中的另外2相對體積的水進行進一步洗滌，其再用於洗滌濾餅。將固體轉移到真空爐中並在環境溫度下乾燥至千。在乾燥過程中，將固體定期製漿。乾燥非常緩慢，通常350克批料的乾燥花費大約2周。實施例6:—水合ZD6474的另一製備方法根據WO01/32651的實施例2b中所述的程序製備ZD6474游離鹼。在溫控玻璃反應容器中，將ZD6474游離鹼(10.06克)在環境溫度下加入含水四氬呔喃(90%四氬呋喃/10%水，體積/體積)。將該混合物攪拌並升溫至40。C直至所有固體溶解。在42。C下向該混合物中進一步加入ZD6474游離鹼(1.44克)，並將該混合物攪拌20分鐘以提供清澈溶液。任選在此時將該溶液篩分。然後將該溶液升溫至50。C並在此溫度攪拌4小時。然後將該溶液冷卻至室溫並攪拌1天以提供淤漿。然後提取小的淤漿樣品過濾，並獲得粉末XRD譜。如果XRD譜表明所有無水ZD6474已經轉化成一水合物，如下詳述將其分離。如果XRD語顯示無水ZD6474和一水合ZD6474的混合物，則將該溶液在環境溫度下，理想地在20。C下再攪拌4小時然後再測試。如果XRD譜顯示幾乎所有都是無水ZD6474,則一水合ZD6474的晶種(0.1-1重量％理論最終收率)和該溶液在環境溫度下，理想地在大約20。C下再攪拌4小時，然後可以再測試。可以重複該過程直至所有無水ZD6474轉化成一水合ZD6474。在分流布氏漏鬥上通過過濾分離固體。用2相對體積的水洗滌反應容器。然後在布氏漏鬥中使用反應容器洗液作為濾餅的置換洗液。使用添加到反應容器中的另外2相對體積的水進行進一步洗滌，其再用於洗滌濾餅。將固體轉移到真空爐中並在環境溫度下乾燥至幹。在乾燥過程中，將固體定期製漿。乾燥非常緩慢，通常350克批料的乾燥花費大約2周。附圖簡述圖1:無水ZD6474的DSC和TGA熱分析圖-以'C計的溫度繪製在橫軸上，熱流/%重量損失繪製在縱軸上。上部圖是TGA圖，下部圖是DSC圖。TGA圖y軸上的刻度如該圖中所示為2毫克，DSC圖y軸上的刻度如該圖中所示為10mW。圖2:無水ZD6474的X-射線粉末衍射圖-20值繪製在橫軸上，相對線強度(計數)繪製在縱軸上。圖3:無水ZD6474在25'C下的DVS等溫線困-目標相對溼度在才黃軸上，質量變化(％)在縱軸上，其中菱形代表周期1吸附，正方形代表周期1解吸，三角形代表周期2吸附，正方形代表周期2解吸。圖4:一水合ZD6474的X-射線粉末衍射圖-29值繪製在橫軸上，相對線強度(計數)繪製在縱軸上。圖5:—水合ZD6474的DSC和TGA熱分析田-以'C計的溫度繪製在橫軸上，熱流/%重量損失繪製在縱軸上。上部圖是TGA圖，下部圖是DSC圖。TGA圖y軸上的刻度如該圖中所示為2毫克，DSC圖y軸上的刻度如該圖中所示為10mW。圖6:—水合ZD6474在25'C下的DVS等溫線困-目標相對溼度(%)在橫軸上，質量變化(％)在縱軸上，其中菱形代表周期1吸附，正方形代表周期1解吸，三角形代表周期2吸附，正方形代表周期2解吸。圖7:—水合ZD6474在0%相對溼度和25'C下的DVS等溫線困-以分鐘計的時間在^f黃軸上，質量變化(初始重量的％)在縱軸上。圖8:—水合ZD6474在0%相對溼度和40'C下的DVS等溫線困一以分鐘計的時間在^t黃軸上，質量變化(初始重量的°/。)在縱軸上。圖9:在本申請的實施例1中形成的無水ZD6474的X-射線粉末衍射圖-2e值繪製在橫軸上，相對線強度(計數)繪製在縱軸上。所用技術細節x-射線粉末衍射表3tableseeoriginaldocumentpage26*相對強度來自用固定狹縫測得的衍射圖分析設備SiemensD5000，使用石英校準。通過將結晶ZD6474材料的樣品安裝在Siemens單晶矽(SSC)晶片底座上並藉助顯微鏡載玻片將樣品鋪開成薄層，測定X-射線粉末衍射譜。樣品以30轉/分鐘旋轉(以改進計數統計學)並使用波長1.5406埃的CuKa輻射，用在40kV和40mA下操作的銅長-細焦點管產生的X-射線照射。準直的X-射線源通過設為V20的自動可變發散狹縫，反射的輻射被引導通過2毫米抗散射狹縫和0.2毫米檢測器狹縫。在e-e模式中在2。至40。2-9的範圍內，樣品在每0.02度2-e增量下曝光1秒(連續掃描模式)。運行時間為31分41秒。該設備配有閃爍計數器作為檢測器。藉助用Diffract+軟體操作的DellOptiplex686NT4.0Workstation進行控制和數椐捕獲。X-射線粉末衍射領域的技術人員會認識到，例如尺寸大於30微米的顆粒和可能影響樣品分析的非單一縱橫比可能影響峰的相對強度。技術人員也會認識到，樣品在衍射計中的確切高度和衍射計的0校準可以影響反射位置。樣品的表面平面度也可能具有小的影響。因此，所示衍射圖數據不被視為絕對值。動態蒸氣吸附分析設備SurfaceMeasurementsSystemsDynamicVapourSorptionAnalyser(表面測量系統動態蒸氣吸附分析器)，用飽和鹽溶液，例如氯化鈉校準。大約5毫克在指定溫度下容納在石英儲器中的材料一式雙份地承受在下列相對溼度(RH):0、20、40、60、80、95、80、60、40、20、0%RH下流速200毫升/分鐘氮氣的潤溼氮氣。始終使用原位天平監測特定相對溼度下的材料重量直至其根據每分鐘0.002重量。/。變化(經過10分鐘平均化)的重量標準是穩定的。如果重量仍然改變，則其留在特定相對溼度下直至重量穩定(直至最多12小時)。差示掃描量熱法(DSC)分析設備MettlerDSC820e使用銦金屬作為標準校準，通過熱回流DSC進行DSC。通常將裝在配有穿孔蓋的40微升鋁盤中的少於5毫克材料以10。C/分鐘的恆定加熱速率在25。C至325。C的溫度範圍內加熱。使用氮氣吹掃氣體-流速100毫升/分鐘。關於DSC的進一步信息，讀者參考DSC/TGAInstrumentalanalysis1986Christian&O'Reilly,AllynandBacon出版ISBN00205086853。熱重量分析(TGA)分析設備MettlerTG851,使用標準校準重量進行重量校準。通常將裝在70微升alox(氧化鋁)坩鍋中的3至12毫克材料以10。C/分鐘的恆定加熱速率在25。C至325。C的溫度範圍內加熱，同時始終使用原位天平監測重量。使用氦氣吹掃氣體-流速50毫升/分鐘。關於TGA的進一步信息，讀者參考DSC/TGAInstrumentalanalysis(1986)Christian&O'Reilly,AllynandBacon出版ISBN00205086853。KarlFischer水含量分析設備MitsubishiMoistureMeterCA-05.通常使用大約50毫克材料.關於KarlFischer水含量測量的進一步信息，讀者參考Skoog，West和Holler的FundamentalsofAnalyticalChemistry(1996)，Brooks/Cole出版ISBNO-03-005938-0權利要求1.一水合ZD6474。2.根據權利要求1的一水合ZD6474，其為結晶形式，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少一個位於大約2-e=10.8。的特徵峰。3.根據權利要求1的一水合ZD6474，其為結晶形式，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少一個位於大約2-e=21.0。的特徵峰。4.根據權利要求1的一水合ZD6474，其為結晶形式，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有至少兩個位於大約2-e=10.8和21.0°的特徵峰。5.根據權利要求1的一水合ZD6474,其為結晶形式，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖具有位於大約2-e=10.8°、21.0°、18.4°、11.9°、18.9。、18.1。、22.1。、11.4。、20.1。和24.0。的特徵峰。6.根據權利要求1的一水合ZD6474,其為結晶形式，其中該一水合物的X-射線粉末衍射圖與圖4中所示的X-射線粉末衍射圖基本相同。7.—種藥物組合物，其包含根據權利要求1至6任一項的一水合ZD6474以及可藥用賦形劑或載體。8.製備處於結晶形式的如權利要求1至6任一項所述的一水合ZD6474的方法，其包括(i)將ZD6474游離鹼溶解在含水有機溶劑混合物中以形成溶液；(ii)發生自髮結晶；和(iii)分離由此形成的結晶固體。9.如權利要求8所述的製備處於結晶形式的一水合ZD6474的方法，其中含水有機溶劑混合物包含90體積％的四氫呋喃和10體積％的水。10.如權利要求l至6任一項所述的一水合ZD6474用於製造在溫血動物如人類體內產生抗血管生成和/或降低血管滲透性作用的藥物的用途。11.在需要治療的溫血動物如人類體內產生抗血管生成和/或降低血管滲透性作用的方法，其包括對所迷動物施用有效量的如權利要求1至6任一項所述的一水合ZD6474。全文摘要本發明涉及一水合ZD6474，涉及一水合ZD6474的製備方法，涉及包含一水合ZD6474作為活性成分的藥物組合物，涉及一水合ZD6474用於製造在溫血動物(如人類)體內產生抗血管生成和/或降低血管滲透性作用的藥物的用途，還涉及一水合ZD6474在治療溫血動物(如人類)體內與血管生成和/或提高的血管滲透性相關的病狀(如癌症)的方法中的用途。文檔編號C07D401/12GK101277947SQ200680036335公開日2008年10月1日申請日期2006年9月27日優先權日2005年9月30日發明者B·R·梅裡克,R·A·斯託裡,R·J·布思,Z·帕特爾申請人:阿斯利康(瑞典)有限公司