一株施氏假單胞菌及其培養方法與應用的製作方法

2023-09-19 22:54:20

專利名稱：一株施氏假單胞菌及其培養方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一株菌種及其培養方法與應用，具體涉及一株施氏假單胞菌及其培養方法與應用。
背景技術：
聚合物生產菌株在採油上的應用主要在微生物調剖方面，微生物調剖(Microbial plugging)技術，是通過注入微生物或激活地層本源微生物，利用微生物生長繁殖及代謝過程中產生的氣體、生物聚合物和無機鹽沉澱形成生物膜的作用，調整注入井吸水剖面，達到調剖堵水提高採收率的目的，而目前的現有技術中，缺少優秀的生物聚合物生產菌株應用於微生物採油現場，限制了生物聚合物生產菌株的在採油作業中作用的發揮。

發明內容
本發明的目的是提供一株能發酵生成生物聚合物、調剖堵水提高採收率的施氏假單胞菌及其培養方法與應用。本發明所採用的技術方案是
一株施氏假單胞菌(/^ewi/offloaas stutzeri)W\ CGMCC Νο·5Μ1，其 16S rDNA 基因序列為
CGAGCTACCATGCAGTCGAGCGGATGAAGAGAGCTTGCTCTCCGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCC TAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAG GGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCG ACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGC AGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAA GCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGCTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTA ACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGT GGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTATGGCA GAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCT GGGCTAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAAC GATGTCGACTAGCCGTTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACG GCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACG CGAAGAACCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAGCTCTGACACAGG TGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGT TACCAGCACGTTAAGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCA TCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCT AATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTG AATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAG AAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGACGGTACCACG ；上述16S rDNA基因序列的長度為1417個核苷酸。一株施氏假單胞菌 G^ei/i/offloaas stutzeri) DPI CGMCC No. 5M1 的培養方法，是將施氏假單胞菌(/^ei/i/offloaas StutzerOWl CGMCC No. 5241接種到專用培養基，在50°C 的培養溫度下，搖床轉速120轉/分，培養72小時；
所述的專用培養基的配方為
種子瓶葡萄糖2. 0g、玉米漿0. Sg、澱粉1. 0g、硝酸鈉0. 3g、磷酸氫二鈉0. lg、磷酸氫二鉀0. lg、磷酸二氫鉀0. 05g、硫酸鎂0. 05g、氯化鈉0. lg、氯化鈣0. 005g、pH值7. 3 ；
發酵瓶葡萄糖6. 0g、玉米漿1. Sg、澱粉3. 0g、硝酸鈉0. 5g、磷酸氫二鈉0. 15g、磷酸氫二鉀0. lg、磷酸二氫鉀0. 05g、硫酸鎂0. 05g、氯化鈉0. 5g、氯化鈣0. 005g、pH值7. 3。所述的一株施氏假單胞菌G^ei/i/offloaas stutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在提高油田採收率中的應用。所述的一株施氏假單胞菌G^ei/i/offloaas stutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在製備油田開發生物解堵劑中的應用。本發明具有以下優點
本發明提供的施氏假單胞菌株，可應用於低滲透性油田的三次開發，通過注入微生物， 利用微生物生長繁殖及代謝過程中產生的氣體、生物聚合物和無機鹽沉澱形成生物膜的作用，菌體細胞及其代謝產出的生物聚合物對高滲透層帶起較好的選擇性封堵作用，從而改善層間油水運動狀況，擴大波及區域，調整注入井吸水剖面，達到調剖堵水提高採收率的目的。應用光學和電子顯微鏡對聚合物進行了觀察，發現生物聚合物是一種水不溶性的相互纏繞的網狀結構；利用紙層析分析其酸水解產物是葡萄糖，推斷生物聚合物為纖維素類物質。此外，該菌培養方法簡單易操作，生長繁殖迅速，具有擴大化生產的可行性，具有較高的研究、應用及市場價值。


圖1為不同溫度條件下施氏假單胞菌菌株DPl的生長曲線。圖2為不同培養時間施氏假單胞菌菌株DPl的生長曲線。圖3為巖心1中0. IPV施氏假單胞菌菌株DPl的採收率與壓力曲線。圖4為巖心2中0. 3PV施氏假單胞菌菌株DPl的採收率與壓力曲線。圖5為巖心3中0. 5PV施氏假單胞菌菌株DPl的採收率與壓力曲線。圖6為巖心4中0. 7PV施氏假單胞菌菌株DPl的採收率與壓力曲線。圖7為不同巖心即不同滲透率模型中施氏假單胞菌菌株DPl的採收率曲線。
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明進行詳細的說明。本發明所涉及的施氏假單胞菌G^ewi/offloaas stutzeri) DPI,已於2011年9月9 日保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No. 5241。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法；下述實施例中所用的實驗材料，如無特殊說明，均為常規生化試劑。一、施氏假單胞菌菌株G^ei/i/offloftas stutzeri) DPI CGMCC No. 5M1 的分離篩選與純化
1、培養基
種子瓶糖2. Og,玉米槳0. 6g，硝酸鈉0. 2g，磷酸氫二鈉0. Ig,磷酸二氫鉀0. 05g,硫酸鎂0. 05g,氯化鈉0. 5g，氯化鉀0. 2g，氯化鈣0. 005g, pH 7. 2
發酵瓶糖10g，玉米槳1. 8g，硝酸鈉0. 6g，磷酸氫二鈉0. 2g，磷酸氫二鉀0. lg，硫酸鎂0. 05g,氯化鈉0. 5g，氯化鉀1. Og,氯化鈣0. 05g, ρΗ7· 2
2、培養條件
培養溫度50°C，搖床轉速120轉/分。通過顯微鏡觀察菌株的生長情況。圖1為不同溫度條件下施氏假單胞菌菌株DPl的生長曲線，圖2為不同培養時間施氏假單胞菌菌株DPl 的生長曲線。施氏假單胞菌菌株DPl在50°C條件下培養，測定72小時內發酵液黏度，見表1。表1發酵液粘度隨培養時間變化
權利要求
1.一株施氏假單胞菌 O^ewi/offloaas stutzeri)Wl CGMCC Νο·5Μ1，其 16S rDNA 基因序列為CGAGCTACCATGCAGTCGAGCGGATGAAGAGAGCTTGCTCTCCGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCC TAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTTCGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAG GGGACCTTCGGGCCTTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAAGGCTCACCAAGGCG ACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGC AGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAA GCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGCTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTA ACTTCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGCGCGTAGGT GGTTCGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTGGCGAGCTAGAGTATGGCA GAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCT GGGCTAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAAC GATGTCGACTAGCCGTTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCATTAAGTCGACCGCCTGGGGAGTACG GCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACG CGAAGAACCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAGCTCTGACACAGG TGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGT TACCAGCACGTTAAGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCA TCATGGCCCTTACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCT AATCCCATAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGTG AATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAG AAGTAGCTAGTCTAACCTTCGGGGGACGGTACCACG ；上述16S rDNA基因序列的長度為1417個核苷酸。
2.一株施氏假單胞菌(/^ewi/offloaas stutzeri)W\ CGMCC No. 5241的培養方法，是將施氏假單胞菌(/^ei/i/offloaas StutzerOWl CGMCC No. 5241接種到專用培養基，在50°C的培養溫度下，搖床轉速120轉/分，培養72小時；所述的專用培養基的配方為種子瓶葡萄糖2. 0g、玉米漿0. Sg、澱粉1. 0g、硝酸鈉0. 3g、磷酸氫二鈉0. lg、磷酸氫二鉀0. lg、磷酸二氫鉀0. 05g、硫酸鎂0. 05g、氯化鈉0. lg、氯化鈣0. 005g、pH值7. 3 ；發酵瓶葡萄糖6. 0g、玉米漿1. Sg、澱粉3. 0g、硝酸鈉0. 5g、磷酸氫二鈉0. 15g、磷酸氫二鉀0. lg、磷酸二氫鉀0. 05g、硫酸鎂0. 05g、氯化鈉0. 5g、氯化鈣0. 005g、pH值7. 3。
3.權利要求1所述的一株施氏假單胞菌O^ei/i/offloaasstutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在提高油田採收率中的應用。
4.權利要求1所述的一株施氏假單胞菌O^ei/i/offloaasstutzeri)W\ CGMCC No. 5241 在製備油田開發生物解堵劑中的應用。
全文摘要
本發明涉及一株施氏假單胞菌菌株DP1CGMCCNo.5241及其培養方法與應用。施氏假單胞菌DP1的培養方法是將施氏假單胞菌DP1接種到專用培養基，50℃下，搖床轉速120轉/分，培養72小時；專用培養基的配方為種子瓶葡萄糖、玉米漿、澱粉、硝酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈉、氯化鈣；發酵瓶葡萄糖、玉米漿、澱粉、硝酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、硫酸鎂、氯化鈉、氯化鈣。本發明應用於低滲透性油田的三次開發，利用微生物生長繁殖及代謝過程中產生的氣體、生物聚合物和無機鹽沉澱形成生物膜的作用，改善層間油水運動狀況，達到調剖堵水提高採收率的目的。
文檔編號C12N1/20GK102559551SQ201210001458
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月5日 優先權日2012年1月5日
發明者張積耀, 李世強, 梁凱強, 江紹靜, 洪玲, 王香增, 薛媛, 趙麗, 高瑞民 申請人:陝西延長石油(集團)有限責任公司研究院