包載水溶性藥物脂質體的製備方法
2023-09-12 03:09:25 3
專利名稱：包載水溶性藥物脂質體的製備方法
包載水溶性藥物脂質體的製備方法
技術領域：
本發明屬於藥物製劑學領域，更具體地說，本發明涉及一種包載水溶性藥物脂質體的製備方法。
背景技術：
脂質體(liposomes)是一種由排列有序的脂質雙分子層組成的單層或多層微囊。 脂質體屬於膠體系統，具有類似細胞的結構，與細胞膜親和力強，可以增加被包封藥物透過細胞膜的能力。脂質體生物相容性好，可實現藥物體內靶向遞送，具有延長藥物作用時間、 增加藥物的體內外穩定性、降低藥物毒性，增強藥理作用等諸多優點。製備脂質體的方法很多，有薄膜分散法、逆相蒸發法、冷凍乾燥法、注入法、超聲波分散法等，其中注入法操作較為簡便。注入法是將磷脂與膽固醇等類脂質及脂溶性藥物共溶於乙醚或乙醇中，然後將此藥液經注射器緩緩注入於攪拌下的50°C磷酸鹽緩衝液(可含有水溶性藥物)中，加完後，不斷攪拌，採用低溫蒸發方法除去乙醚或乙醇，即製得脂質體。可以將脂質體混懸液通過高壓乳勻方法，得到粒徑均一的單室脂質體。該方法目前用於製備空白脂質體或包載脂溶性藥物的脂質體，而製備包載水溶性藥物的脂質體的包封率不高。目前採用薄膜分散法、逆相蒸發法等其它製備脂質體的方法包載水溶性藥物，儘管有時包封率較高，但操作較為繁瑣，重現性差，很難工業化批量製備。提高脂質體包載水溶性藥物的方法分為主動載藥技術和被動載藥技術。利用被動載藥技術很難將水溶性的弱酸或弱鹼藥物包載入脂質體，人們採用主動載藥技術進行這類藥物的包載。主動載藥技術是利用一些兩親性的弱酸或弱鹼能夠以電中性的形式跨越脂質雙層，但其電離形勢卻不能跨越脂質雙層的原理來實現的。主動載藥技術中又分為PH梯度法、硫酸銨梯度法、醋酸鈣梯度法等。主動載藥技術中的PH梯度法過程如下採用逆相蒸發法等方法製備包裹酸性緩衝鹽(如檸檬酸緩衝鹽)的空白脂質體，然後用鹼把外相調成中性，建立脂質體內外的PH 梯度。藥物在外相的中性PH環境下以親脂性的中性形式存在，能夠透過脂質雙層膜，而在脂質體內水相中被質子化轉化成離子形式，不能再透過脂質雙層回到外水相，從而包載到脂質體內。但已有的主動載藥技術PH梯度法均是先形成空白脂質體，然後利用調整外相pH 值，利用PH梯度將藥物由外相轉入內相體系，操作分為製備空白脂質體、調整pH值形成pH 梯度後包載藥物兩個過程，較為複雜。
發明內容本發明要解決的技術問題是針對現有pH梯度法製備包載水溶性藥物脂質體的不足之處，提供一種快速方便的包載水溶性藥物脂質體的製備方法。本發明的目的是針對現有的pH梯度法製備包載水溶性藥物脂質體的不足之處，
提供一種解決方案。我們在研究pH梯度法製備載藥脂質體的實驗中發現，有些弱酸或弱鹼的藥物成鹽後可以溶解於甲醇、乙醇等有機溶劑中，而乙醇注入法是空白脂質體的一種常用製備方法。我們試將一些成鹽後弱酸或弱鹼的藥物溶於乙醇，然後採用注入法轉入到不同PH值的水性緩衝體系中，得到包載藥物的脂質體。該方法將乙醇注入法製備空白脂質體和利用PH 梯度包載藥物兩個過程合二為一，簡化了操作過程，快捷方便。經過多次試驗，為提高載藥脂質體製備效率，本發明採用了以下的技術方案本發明涉及一種包載水溶性藥物脂質體的製備方法，是將成鹽形式的藥物、磷脂材料溶於有機溶劑中，形成有機相體系；配製與有機相體系PH值不同的水溶液緩衝體系作為水相體系；有機相體系採用注入法與水相體系混合，形成脂質體，藥物在從有機相體系混合到水相體系過程中因PH值的改變導致溶解度降低，從而包載於脂質體中形成包載水溶性藥物的脂質體。上述的成鹽形式的藥物是指酸性藥物與無機鹼或有機鹼鹽形成的鹽，或鹼性藥物與無機或有機酸形成的鹽。上述的磷脂材料包括氫化磷脂、合成磷脂、膽固醇和表面活性劑，氫化磷脂包括 氫化蛋黃磷脂和/或氫化大豆磷脂；合成磷脂是指藥學已公知的合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物，包括二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯甘油、二棕櫚醯磷脂酸其中一種或幾種以及它們的聚乙二醇修飾衍生物；表面活性劑包括吐溫、司盤、油酸、十六醇、十八醇、甘油、丙二醇、泊洛沙姆。上述的有機溶劑是中等或強極性有機溶劑，優選乙醇。上述的配製與有機相體系pH值不同的水溶液緩衝體系，是採用藥學上公知的無機或有機緩衝對配製的水溶液，或採用無機或有機酸溶液，或採用無機或有機鹼溶液。上述的水溶液緩衝體系中可以含有藥學公知的表面活性劑、多元醇或糖類、水溶性高分子聚合物、抗氧劑、穩定劑。上述的包載水溶性藥物的脂質體可以進一步通過高壓均質方法得到粒徑在 IO-IOOOnm範圍內的單室脂質體。上述的包載水溶性藥物的脂質體可以進一步通過透析、離心、層析的處理方法去除脂質碎片和多餘鹽離子，然後經過乾燥方法得到載藥脂質體乾燥品。上述的包載水溶性藥物脂質體可以進一步加工，形成口服、黏膜、注射、皮膚給藥製劑的原料，製成發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的具體製劑。上述的包載水溶性藥物脂質體的製備方法具有以下優點1.本發明的包載水溶性藥物脂質體的製備方法將傳統乙醇注入法結合pH梯度法，在內相注入外相同時利用內外相PH差異，一步完成脂質體的製備和藥物包載，減少傳統包載水溶性藥物脂質體的製備方法的複雜性。2.本發明的包載水溶性藥物脂質體的製備方法提高水溶性藥物在脂質體的包封率，明顯減少包載水溶性藥物的滲漏。3.本發明的包載水溶性藥物脂質體的製備方法適於包裹多種水溶性藥物，結合減壓蒸發技術，可以適用於包載易氧化的藥物、熱不穩定的藥物。4.本發明包載水溶性藥物脂質體的製備方法適於包裹多種成鹽形式的藥物，所製備的載藥脂質體可以進一步加工，形成口服、黏膜、注射、皮膚給藥製劑的原料，製成發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的具體製劑。
具體實施方式現結合下列實例來進一步描述本發明。以下通過幾個實施例來進一步說明本發明。實施例1 鹽酸伊立替康脂質體本發明的第一個實施方案製備強酸弱鹼鹽的脂質體，採用鹽酸伊立替康為靶藥， 脂質體成膜材料選用二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、聚乙二醇2000接枝的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(DSPE-PEG2000)、膽固醇和吐溫85，有機相溶劑為乙醇，水相為含有水溶性高分子聚合物羥乙基澱粉的磷酸鹽緩衝液(pH7. 5-8. 0)，製備包載鹽酸伊立替康的脂質體。製備方法5mg鹽酸伊立替康、5mg 二硬脂醯磷脂醯膽鹼(DSPC)、0. 5mg聚乙二醇 2000接枝的二硬脂醯磷脂醯乙醇胺(DSPE-PEG2000)、2mg膽固醇和2mg吐溫85加入到25ml 無水乙醇中，60°C水浴中加熱至完全溶解，構成有機相。0.4g羥乙基澱粉(型號130/0.4) 加入pH = 8. 0的50ml 0. 025mol/L磷酸鹽緩衝液(PBS)中，溶解後構成水相。將有機相用注射器吸取，注入到lOOOr/min攪拌的(55士2) °C的水相中，保持lOOOr/min攪拌lOmin，形成脂質體混懸液，水浴35°C真空旋轉蒸發除盡乙醇，濃縮至總體積50ml，得到包載鹽酸伊立替康的脂質體混懸液。包封率測定取包載鹽酸伊立替康的脂質體混懸液經過lOOOOr/min離心lmin，吸取2ml含有游離鹽酸伊立替康的上層溶液，用紫外-可見分光光度計於370nm測吸收度，代入鹽酸伊立替康標準曲線，利用「包封率(％)=[(鹽酸伊立替康總量-游離鹽酸伊立替康量)/鹽酸伊立替康總量]X 100」公式計算鹽酸伊立替康脂質體的包封率。鹽酸伊立替康脂質體混懸液樣品25°C放置0. 5h後再次測定包封率。鹽酸伊立替康標準曲線精密稱取鹽酸伊立替康標準品，用蒸餾水配製成0. 25、 0.5,1.0,2.0,5. 0mg/ml的系列標準溶液，於370nm測吸收度，得到鹽酸伊立替康濃度與吸收度的標準曲線，利用該標準曲線計算鹽酸伊立替康的濃度。結果鹽酸伊立替康脂質體包封率平均值為82%，251放置.證後鹽酸伊立替康脂質體包封率平均值為69%，0. 5h藥物釋放率低於40%。結果表明，本發明製備的鹽酸伊立替康脂質體藥物的包封率高，達到藥典相應的規定，沒有突釋效應。實施例2 雙氯芬酸鈉脂質體本發明的第二個實施方案製備強鹼弱酸鹽的脂質體，採用雙氯芬酸鈉為靶藥，脂質體成膜材料選用氫化大豆磷脂、膽固醇、司盤80和十六醇，有機相溶劑為乙醇，水相為醋酸-醋酸鈉緩衝液，加入水溶性高分子聚合物聚乙烯醇(PVA)，製備包載雙氯芬酸鈉的脂質體。製備方法5mg雙氯芬酸鈉、40mg氫化大豆磷脂、IOmg膽固醇脂質和3mg司盤80加入到25ml無水乙醇中，60°C水浴中加熱至完全溶解，構成有機相。0. Ig丙二醇和0. 5g聚乙烯醇(PVA)加入pH = 5. 5的30ml 0. 035mol/L醋酸-醋酸鈉緩衝液中，溶解後構成水相。 將有機相用注射器吸取，注入到lOOOr/min攪拌的60°C的水相中，55°C水浴中lOOOr/min攪拌，蒸發至無乙醇味，得到包載雙氯芬酸鈉的脂質體混懸液。包封率測定取雙氯芬酸鈉脂質體混懸液經過lOOOOr/min離心lmin，吸取含有游離雙氯芬酸鈉的上層溶液anl，用紫外-可見分光光度計於274nm測吸收度，代入雙氯芬酸鈉標準曲線，利用「包封率(％)=[(雙氯芬酸鈉總量-游離雙氯芬酸鈉量)/雙氯芬酸鈉總量]X 100」公式計算雙氯芬酸鈉脂質體的包封率。雙氯芬酸鈉脂質體混懸液樣品25°C放置0. 後再次測定包封率。雙氯芬酸鈉標準曲線精密稱取雙氯芬酸鈉標準品，用蒸餾水配製成0.05、0. 1， 0. 25,1.0, 2. Omg/ml的系列標準溶液，於274nm測吸收度，得到雙氯芬酸鈉濃度與吸收度的標準曲線，利用該標準曲線計算雙氯芬酸鈉的濃度。結果實驗組雙氯芬酸鈉脂質體包封率平均值為81%，251放置0.證後實驗組雙氯芬酸鈉脂質體包封率平均值為68%，0. 5h藥物釋放率低於40%。結果表明，本發明製備的鹽酸阿黴素脂質體藥物的包封率高，達到藥典相應的規定，沒有突釋效應。實施例3 鹽酸阿黴素脂質體本發明的第一個實施方案製備納米級脂質體，採用鹽酸阿黴素為靶藥，脂質體成膜材料選用氫化蛋黃磷脂、膽固醇、吐溫80，有機相溶劑為乙醇，水相為含穩定劑丙二醇和水溶性高分子聚合物泊洛沙姆(Poloxamer 188)的磷酸鹽緩衝液(pH7. 5-8. 0)，通過高壓均質方法得到粒徑在納米範圍內的包載鹽酸阿黴素的單室脂質體。製備方法5mg鹽酸阿黴素、IOmg氫化蛋黃磷脂、5mg膽固醇和!Mg吐溫80加入到 25ml無水乙醇中，60°C水浴中加熱至完全溶解，構成有機相。0. Ig丙二醇和0. 5g泊洛沙姆 (Poloxamer 188)加入pH = 8. 0的30ml 0. 035mol/L磷酸鹽緩衝液(PBS)中，溶解後構成水相。將有機相用注射器吸取，注入到lOOOr/min攪拌的(55士2) °C的水相中，保持IOOOr/ min攪拌lOmin，形成脂質體混懸液，水浴35°C真空旋轉蒸發除盡乙醇，濃縮至總體積30ml， 得到包載鹽酸阿黴素的脂質體混懸液，經高壓通過0. 65 μ m濾膜，得到包載鹽酸阿黴素的單室脂質體。包封率測定取包載鹽酸阿黴素的脂質體混懸液經過lOOOOr/min離心lmin，吸取 2ml含有游離鹽酸阿黴素的上層溶液，用紫外-可見分光光度計於480nm測吸收度，代入鹽酸阿黴素標準曲線，利用「包封率(％)=[(鹽酸阿黴素總量-游離鹽酸阿黴素量)/鹽酸阿黴素總量]X 100」公式計算鹽酸阿黴素脂質體的包封率。鹽酸阿黴素脂質體混懸液樣品 25°C放置0. 5h後再次測定包封率。鹽酸阿黴素標準曲線精密稱取鹽酸阿黴素標準品，用蒸餾水配製成0.05、0. 1， 0. 5，1. 0，2. 5mg/ml的系列標準溶液，於480nm測吸收度，得到鹽酸阿黴素濃度與吸收度的標準曲線，利用該標準曲線計算鹽酸阿黴素的濃度。結果經過雷射粒徑分析儀測定，鹽酸阿黴素脂質體粒徑分布400-650nm，粒子分布均勻。鹽酸阿黴素脂質體包封率平均值為82%，25°C放置0.證後鹽酸阿黴素脂質體包封率平均值為65%，0. 5h藥物釋放率低於40%。結果表明，本發明製備的鹽酸阿黴素納米級脂質體微粒形態好，藥物的包封率高，達到藥典相應的規定，沒有突釋效應。例4 鹽酸阿黴素脂質體注射劑本發明的第四個實施方案採用實施例3製備的鹽酸阿黴素脂質體進一步加工，製備鹽酸阿黴素脂質體注射劑。製備方法將實施例3製得的鹽酸阿黴素脂質體混懸液經葡聚糖凝膠柱洗脫，去除游離的鹽酸阿黴素和脂質碎屑，分離出包載鹽酸阿黴素的脂質體。將包載鹽酸阿黴素脂質體定溶於5ml pH = 7. 5磷酸鹽緩衝液(PBS)中，加200mg甘露醇作為支持劑，分裝於IOml 的西林瓶中，_30°C冷凍5小時，冷凍乾燥(5\10_41^，201!)，製成鹽酸阿黴素脂質體凍幹注射劑。 結果鹽酸阿黴素脂質體凍幹注射劑，以生理鹽水溶解後進行電鏡形態觀察，包載鹽酸阿黴素的脂質體形態圓整，粒徑略有增加，範圍500-700nm，分布均勻，無聚團現象。結果表明包載鹽酸阿黴素的脂質體可以製成注射劑等具體製劑，形態保持較好，穩定性較高。
權利要求
1.一種包載水溶性藥物脂質體的製備方法，其特徵在於將成鹽形式的藥物、磷脂材料溶於有機溶劑中，形成有機相體系；配製與有機相體系PH值不同的水溶液緩衝體系作為水相體系；有機相體系採用注入法與水相體系混合，形成脂質體，藥物在從有機相體系混合到水相體系過程中因PH值的改變導致溶解度降低，從而包載於脂質體中形成包載水溶性藥物的脂質體。
2.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的成鹽形式的藥物是指酸性藥物與無機鹼或有機鹼鹽形成的鹽，或鹼性藥物與無機酸或有機酸形成的鹽。
3.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的磷脂材料包括氫化磷脂、合成磷脂、膽固醇和表面活性劑，氫化磷脂包括氫化蛋黃磷脂和氫化大豆磷脂；合成磷脂是指藥學已公知的合成磷脂及其聚乙二醇修飾衍生物，包括二棕櫚醯磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二硬脂醯磷脂醯膽鹼、二肉豆蔻醯磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯乙醇胺、二棕櫚醯磷脂醯甘油、二棕櫚醯磷脂酸其中一種或幾種以及它們的聚乙二醇修飾衍生物；表面活性劑包括吐溫、司盤、油酸、十六醇、十八醇、甘油、丙二醇、泊洛沙姆。
4.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的有機溶劑是中等或強極性有機溶劑。
5.根據權利要求4所述的製備方法，其特徵在於所述的有機溶劑是乙醇。
6.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的配製與有機相體系PH值不同的水溶液緩衝體系，是採用藥學上公知的無機或有機緩衝對配製的水溶液，或採用無機或有機酸溶液，或採用無機或有機鹼溶液。
7.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的水溶液緩衝體系中含有藥學公知的表面活性劑、多元醇或糖類、水溶性高分子聚合物、抗氧劑、穩定劑中的一種或幾種。
8.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的包載水溶性藥物的脂質體進一步通過高壓均質方法得到粒徑在IO-IOOOnm範圍內的單室脂質體。
9.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的包載水溶性藥物的脂質體進一步通過透析、離心、層析的處理方法去除脂質碎片和多餘鹽離子，然後經過乾燥方法得到載藥脂質體乾燥品。
10.根據權利要求1所述的製備方法，其特徵在於所述的包載水溶性藥物的脂質體進一步加工，形成口服、黏膜、注射、皮膚給藥製劑的原料，製成發揮預防、治療、保健、清潔、美容作用的具體製劑。
全文摘要
本發明涉及一種包載水溶性藥物脂質體的製備方法。該製備方法包括將成鹽形式的藥物、磷脂材料溶於有機溶劑中，形成有機相體系；配製與有機相體系pH值不同的水溶液緩衝體系作為水相體系；有機相體系採用注入法與水相體系混合，形成脂質體，藥物在從有機相體系混合到水相體系過程中因pH值的改變導致溶解度降低，從而包載於形成的脂質體中。本發明的製備方法將傳統乙醇注入法結合pH梯度法，在內相注入外相同時利用內外相pH差異，一步完成脂質體的製備和藥物包載，減少傳統包載水溶性藥物脂質體的製備方法的複雜性。
文檔編號A61K47/28GK102188378SQ201010131308
公開日2011年9月21日 申請日期2010年3月18日 優先權日2010年3月18日
發明者趙應徵, 魯翠濤 申請人:魯翠濤