一種xanthene衍生物及其製備方法和應用的製作方法
2023-09-18 06:24:40 2
專利名稱：一種xanthene衍生物及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種從兩株海洋植物內生真菌的共培養發酵液中提取分離的 xanthene tti 生物 8-hydroxy-3-methyl-9-oxo-9H-xanthene-l-carboxylic acid methyl ether及其製備方法和作為防治植物病原菌的農藥殺菌劑的應用。
背景技術：
自從19 年從真菌中製備出青黴素以來，真菌的代謝產物成為藥物的豐富來源， 絕大多數應用的抗生素都來源於真菌和細菌。由於海洋環境的特殊性，海洋真菌發展出了獨特的代謝方式，提供了在陸地真菌中未遇到過的代謝產物。植物內生真菌在演化過程中與寄主協同進化，其次生代謝物質是內生真菌及植物共同防禦與病害的適應演變協同進化的結果，多具有良好的抗病害活性。而海洋植物內生真菌兼具海洋真菌和植物內生真菌生理特點，從中尋找新的微生物農藥的前景十分廣闊。混合發酵主要用於提高酶和抗生素的產量，目前尚未見到利用混合發酵從海洋植物內生真菌中獲得有價值的防治植物病原菌的農藥。
發明內容
本發明的目的在於提供-
-種來源於海洋植物內生真菌共培養發酵液的xanthene
8-hydroxy-3-methyl-9-oxo-9H-xanthene-l-carboxylic acid methyl ether及其製備方法和作為防治植物病原菌農藥的應用。它能滿足現有技術的上述需求。
一種xanthene衍生物，其特徵在於分子式為C16H12O5,結構式為
O-O.
O卜
上述xanthene衍生物的製備方法，其特徵在於先在培養基中對兩株海洋植物內生真菌分別進行菌種培養，然後對兩株菌進行混合發酵，將所得發酵液過濾，除去菌體，低溫減壓濃縮發酵液，用有機溶劑萃取；萃取液濃縮後進行色譜分離，將所得洗脫液濃縮，用有機溶劑重結晶得到黃色晶體，即為該xanthene衍生物。上述的xanthene衍生物在防治植物病原菌農藥殺菌劑上的應用。與現有技術相比，本發明具有如下有益效果
本發明的xanthene衍生物具有很強的抑制柑橘青黴、大豆疫黴、香蕉炭疽、荔枝霜疫黴的作用，可用作微生物農藥殺菌劑，而且原料可以大規模生產，應用前景廣闊。
具體實施例方式製備本發明化合物時採取下述各步驟
(1)先在培養基裡分別對秋茄內生真菌K38和麒麟菜內生真菌E33進行菌種培養，所用培養基為含有葡萄糖0. 8-3. 0% (重量百分數，下同)，酵母膏0. 1-1. 5%，蛋白腖0. 2-1. 5%，瓊脂1. 0-1. 5%，氯化鈉0. 3-1. 5%，其餘為水，使用時將其製成試管斜面，上述菌種在下培養3-10天。(2 )再對秋茄內生真菌K38和麒麟菜內生真菌E33進行混合發酵培養，所用培養基為含有葡萄糖1. 5-5. 0%，酵母膏0. 5-2. 5%，蛋白腖0. 5-2. 5%，氯化鈉1-3. 5%，其餘為水，將斜面培養好的兩菌種分別相隔0-7天內挑入發酵培養基，於室溫25-30°C下靜置培養25-40天。(3)將上述培養好的發酵液過濾得到培養液，在溫度不超過50°C條件下，將培養液加熱濃縮成原體積的1/10-1/5，用乙酸乙酯萃取多次(乙酸乙酯可用氯仿、石油醚、正丁醇代替)，濃縮萃取液，在矽膠柱中進行色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑梯度洗脫。(4)梯度洗脫過程中，收集29Γ40%石油醚/乙酸乙酯洗脫液，濃縮，然後在矽膠柱中以10%石油醚/乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，濃縮得到固體，再用氯仿(可用丙酮、乙酸乙酯代替)進行重結晶純化，得到黃色針狀結晶，即為8-hydrOXy-3-methyl-9-OXO-9H-xanthe ne-l-carboxylic acid methyl ether。所得化合物的波譜數據 8-hydroxy-3-methyl-9-oxo-9H-xanthene-l-carboxylic acid methyl ether:
FABMS:285, 283; Elemental anal. C 67. 59%, H 4. 26%, N 0. calcd for C16H12O5, C 67.60%, H 4. 25%, N 0. IR bands (neat) : 3438，2923，2853，1705，1634，1610， 1272，1238，822cm_1 ； 1HNMR (600 MHz CDCl3) : 7. 15 (d, 1. 2Hz, 1H)， 7. 35 (d, 1. 2Hz, 1H), 6. 91 (dd, 1.2，8. 4Hz, 1H)，7. 59 (dd, 7.8，8. 4Hz, 1H)，6. 80 (dd, 1.2，7. 8Hz, 1H), 2. 52 (s, 3H), 4. 03 (s, 3H)，12. 31 (br s, 1H) ； 13C NMR (150 MHz CDCl3): 133. 3(C), 124. 2 (CH), 147. 0(C), 119. 2 (CH), 106. 9 (CH)，136. 9 (CH), 110. 8 (CH), 161. 7(C), 180. 8(C), 115. 3(C), 156. 2(C), 155. 8(C), 108. 9(C), 22. O(CH3), 169. 7 (C)，53. 2 (CH3)。本發明的化合物對柑橘青黴、大豆疫黴、香蕉炭疽、荔枝霜疫黴抑菌活性試驗
採用菌絲生長速率法測定本發明化合物對柑橘青黴、大豆疫黴、香蕉炭疽、荔枝霜疫黴抑菌活性，稱取化合物15mg，用DMSO將其溶解定容到10 mL，用移液槍吸取1 mL加入到裝有15 mL已融化PDA培養基(溫度約60°C )的三角瓶中，充分搖勻，再倒入直徑90 mm的培養皿中製成濃度為100μ g/mL的含藥培養基平板，將6mm經連續傳代三次培養好的植物病原菌餅放置在平板上，以含等量DMSO的PDA培養基作為對照，28°C條件下培養，培養7 後用十字交叉法測量供試菌種的菌落直徑，按以下公式計算菌絲生長抑菌率相對抑菌率 =(對照菌落直徑-處理菌落直徑)X 100%/對照菌落直徑。每個處理3個重複。實驗結果見表1，表中數據以三次測量的平均值士標準誤表示。
表1本發明化合物對植物病原菌的菌絲生長抑制率(100 μ g/mL)
權利要求
1. 一種xanthene衍生物，其特徵在於所述衍生物的分子式為C16H12O5,結構式如式( I )所示式(I)。
2.權利要求1所述的xanthene衍生物的製備方法，其特徵在於包括如下步驟(1)先在培養基裡分別對秋茄內生真菌K38和麒麟菜內生真菌E33進行菌種培養， 所用培養基為含有葡萄糖0. 8 3. 0wt%,酵母膏0. Γ1. 5wt%,蛋白腖0. 2 1. 5wt%,瓊脂 1. (Tl. 5wt%，氯化鈉0. 3^1. 5wt%，其餘為水，使用時將其製成試管斜面，上述菌種在下培養3-10天；(2)再對秋茄內生真菌K38和麒麟菜內生真菌E33進行混合發酵培養，所用培養基為含有葡萄糖1. 5 5. 0wt%,酵母膏0. 5 2. 5wt%，蛋白腖0. 5 2. 5wt%，氯化鈉廣3. 5wt%，其餘為水，將斜面培養好的兩菌種分別相隔(Γ7天內挑入發酵培養基，於室溫25 30°C下靜置培養 25 40天；(3)將上述培養好的發酵液過濾得到培養液，在溫度不超過50°C條件下，將培養液加熱濃縮成原體積的1/1(Γ /5，用有機溶劑萃取，濃縮萃取液，在矽膠柱中進行色譜分離，以石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑梯度洗脫；(4)梯度洗脫過程中，收集29Γ40%石油醚/乙酸乙酯洗脫液，濃縮，然後在矽膠柱中以 10%石油醚/乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，濃縮得到固體，再用氯仿進行重結晶純化，得到黃色針狀結晶，艮口為 8-hydroxy-3-methyl-9-oxo-9H-xanthene-l-carboxylic acid methyl ether。
3.根據權利要求1所述的xanthene衍生物在防治植物病原菌農藥中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種從兩株海洋植物內生真菌的共培養發酵液中提取分離的xanthene衍生物8-hydroxy-3-methyl-9-oxo-9H-xanthene-1-carboxylicacidmethylether及其製備方法和作為防治植物病原菌農藥的應用。製備時先在培養基中對兩株海洋植物內生真菌分別進行菌種培養，然後對兩株菌進行混合發酵，將所得發酵液過濾，除去菌體，低溫減壓濃縮發酵液，用有機溶劑萃取；萃取液濃縮後進行色譜分離，將所得洗脫液濃縮，用有機溶劑重結晶得到該化合物。本發明來源於兩株海洋植物內生真菌混合發酵代謝產物的xanthene衍生物具有抗真菌活性，能有效抑制植物病原真菌菌絲生長，可用於農藥抗生素的開發，而且原料可以大規模生產，應用前景廣闊。
文檔編號A01P3/00GK102180857SQ20111006338
公開日2011年9月14日 申請日期2011年3月16日 優先權日2011年3月16日
發明者丁唯嘉, 佘志剛, 李春遠, 林永成 申請人:華南農業大學