鋰診斷/測定試劑盒及鋰濃度測定方法
2023-09-18 08:36:00
專利名稱：鋰診斷/測定試劑盒及鋰濃度測定方法
技術領域：
本發明涉及一種鋰診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定鋰濃度的 方法，屬於醫學/工業/環境檢驗測定技術領域。
背景技術：
20世紀40年代，Cade首次用鋰鹽治療躁狂症成功，總有效率約70%， 鋰鹽對躁狂和抑鬱的復發有預防作用，也用於治療分裂情感性精祌病。另 外，鋰鹽可使雙相障礙維持治療階段的自殺行為減少86%，而當停用鋰鹽 後，自殺危險性會增加7.5倍。當血鋰濃度達到或超過1.5mmol/L，會出 現不同程度的中毒症狀，血鋰濃度3.0mmo1 / L以上可危及生命。
近幾年，臨床實驗室多數方法學都有了新的發展，但鋰的測定方法基本 維持火焰原子發射法、火焰原子吸收法及離子選擇電極法。原子吸收的 方法是將稀釋的標本吸入乙炔火焰中，利用空心陰極元素燈光源發出被測 元素的特徵輻射光，為火焰原子化器產生的樣品蒸汽中的待測元素基態原 子所吸收。鋰在波長670.8 nm處的被吸光的特徵輻射光的大小與標本中的 鋰濃度成正比。但目前國內的臨床實驗室沒有統一的實驗方法和實驗操作 規程，也很難在精神病醫院的實驗室中查找到其使用情況。
自然界中無游離鋰，因此實際指鋰離子或鋰鹽，而碳酸鋰是最重要的鋰 化物。碳酸鋰被用於陶瓷釉料的生產、特種玻璃、鋁的熔煉和鋼鐵鑄造粉 末。氫氧化鋰和氯化鋰應用在潤滑劑、空調和乾燥系統中。丁基鋰、鋰金 屬、特種無機物和特種有機物，被用於製藥、合成橡膠等領域。鋰是一種 稀有金屬，鋰電池就以它為主要原料，航空航天工業也離不開鋰。金屬鋰與鋰合金在核能發電、輕質高比強合金、輕金屬焊接等諸多領域都有著廣闊
的開發利用前景。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提出一種利用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)及酶(偶)聯法(Couple Reaction)技術，監測還原 型煙醯胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定鋰 濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的鋰診斷/測定試劑盒， 採用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行 鋰濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。 本發明鋰濃度測定方法原理如下
肌醇-l-磷酸+水肌醇-1-磷酸酶艦^+/1^+肌醇+磷酸根 磷酸根+蔗糖蔗糖磷酸化酶D-果糖+^0-葡萄糖-1-磷酸 果糖+還原型輔酶甘露醇2-脫氫酶甘露醇+輔酶 這種方法應用能被鋰抑制活性的肌醇-l-磷酸酶(inositol-l-phosphase; EC 3丄3.25)酶(偶)聯蔗糖磷酸化酶(Disaccharide phosphorylases; EC 2.4.1.7)、甘露醇2-脫氫酶(Mannitol dehydrogenase; EC 1丄1.138; EC 1丄1.67)酶促反應連續監測法/速率比色法。肌醇-l-磷酸酶(需要鎂離子 激活其活件，鋰離子能抑制鎂離子的激活作用)酶解肌醇-l-磷酸反應產生 磷酸根，再通過(偶)聯合蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶的作用，最終 將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸 收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度/速度，比 較對照及鋰樣品吸光度下降的程度/速度的差別，可以測算鋰的濃度大小。 實驗表明，從測定結果的準確性和配製成本的經濟性兩方面綜合考慮， 無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關係的本發明鋰診斷/測定試劑盒較為理想:
緩衝液100 mmol/L
穩定劑500 mmol/L
還原型輔酶0.25 mmol/L
氯化鎂0.6 mmol/L
肌醇-l-磷酸酶10000U/L
蔗糖磷酸化酶10000U/L
廿露醇2-脫氫酶10000 U/L
肌醇-l-磷酸8 mmol/L
蔗糖20 mmol/L
氯化鎂可以用其它鎂鹽取代；如硫酸鎂等。 本發明的鋰診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括
緩衝液、穩定劑、還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸 化酶、甘露醇2-脫氫酶、肌醇-l-磷酸、蔗糖。 試劑盒可以是乾粉狀態，在使用前加水溶解後使用；也可以配製成液體 試劑，直接使用。
也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑 試劑1
緩衝液、穩定劑、還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸、蔗糖。 試劑2
緩衝液、穩定劑、肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶。
還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫 酶、肌醇-l-磷酸、蔗糖在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是乾粉狀態，在使用前加水溶解後使用；也可以配製成液體試劑，直接使用。
還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑 試劑1
緩衝液、穩定劑、還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸、蔗糖。
試劑2
緩衝液、穩定劑、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶。 試劑3
緩衝液、穩定劑、肌醇-l-磷酸酶。 還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫 酶、肌醇-l-磷酸、蔗糖在試劑l、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試 劑盒可以是乾粉狀態，在使用前加水溶解後使用；也可以配製成液體試劑， 直接使用。
無論是單劑、雙劑還是三劑，本發明測定鋰濃度的方法，其還原型輔酶 可以是NADPH、 NADH或thio- NADH屮的一種。
具體實施例方式
下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。
實施例一
本實施例的鋰診斷/測定試劑為單試劑，包括 三(羧甲基)氨基甲垸一鹽酸緩衝液 穩定劑 還原型輔酶 氯化鎂
肌醇-l-磷酸酶
100 mmol/L 500 mmol/L 0.25 mmol/L 0.6 mmol/L 10000 U/L蔗糖磷酸化酶 甘露醇2-脫氫酶 肌醇-l-磷酸
蔗糖
10000U/L 10000 U/L 8 mmol/L 20 mmol/L
試劑全部溶解配好後，分裝入瓶，進行冷凍乾燥，製成乾粉試劑；使用 前，加入純淨水，復溶後使用。
在全自動生化分析儀上設定溫度37。C，反應時間10分鐘，起始吸光 度1.8±0.7，測試主波長340nm，測試副波長405nm，被測對照及鋰樣品 與試劑的體積比例為1/25，反應方向為負反應(下降反應)，延遲時間大約 l分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。
分別加入對照及樣品和試劑後，使之混合併發生反應，最終將反應物置 於牛化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度卜—降的程度/速度，比較對照及 鋰樣品吸光度下降的程度/速度的差別，從而測算出鋰的濃度大小。 實施例二
本實施例的鋰診斷/測定試劑為雙試劑，包括 試劑1
三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩衝液 穩定劑 還原型輔酶 氯化鎂 肌醇-l-磷酸 蔗糖 試劑2
三(羧甲基)氨基甲烷—鹽酸緩衝液 10Ommol/L
100 mmol/L 50 mmol/L
0.25 mmol/L 0.6 mmol/L 8 mmol/L 20 mmol/L穩定劑
肌醇-I-磷酸酶
蔗糖磷酸化酶 甘露醇2-脫氫酶
500 mmol/L 層00U/L 10000 U/L 10000U/L
試劑全部溶解配好後，分裝入瓶，製成液體雙試劑，可以直接使用。 在全自動生化分析儀上設定溫度37i:，反應時間10分鐘，起始吸光 度1.8±0.7，測試主波長340nm，測試副波長405nm，被測對照及鋰樣品 與試劑l、試劑2的體積比例為2/20/5，反應方向為負反應(下降反應)， 延遲時間大約1分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。
分別加入對照及樣品和試劑後，使之混合併發生反應，最終將反應物置 於生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度下降的程度/速度，比較對照及 鋰樣品吸光度下降的程度/速度的差別，從而測算出鋰的濃度大小。 實施例三
本實施例的鋰診斷/測定試劑為三試劑，包括 試劑1
三(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩衝液 穩定劑 還原型輔酶 氯化鎂 肌醇-l-磷酸
100 mmol/L 50 mmol/L 0.25 mmol/L 0.6 mmol/L 8 mmol/L 20 mmol/L
試劑2
三(羧甲基)氨基甲烷—鹽酸緩衝液 穩定劑
100 mmol/L 500 mmol/L蔗糖磷酸化酶
10000 U/L
甘露醇2-脫氫酶
10000 U/L
試劑3
(羧甲基)氨基甲烷一鹽酸緩衝液
100 mmol/L
穩定劑
500 mmol/L
肌醇-l-磷酸酶
10000 U/L
試劑全部溶解配好後，分裝入瓶，製成液體三試劑，可以直接使用。 測定鋰濃度時，在全自動生化分析儀上設定溫度37"C，反應時間10 分鐘，起始吸光度1.8±0.7，測試主波長340nm，測試副波長405nm，被 測對照及鋰樣品與試劑l、試劑2、試劑3的體積比例為4/40/5/5，反應方 向為負反應(下降反應)，延遲時間大約O分鐘左右，檢測時間5分鐘左右。 分別加入對照及樣品和試劑後，使之混合併發生反應，最終將反應物置 於生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度下降的程度/速度，比較對照及 鋰樣品吸光度下降的程度/速度的差別，從而測算出鋰的濃度大小。
申請人經過實驗驗證，採用以上發明內容中記載的測定方法均能達到 本發明的目的，鑑於測定步驟等情況與以上實施例類同，不另一一例舉。
總之，實驗證明採用本發明的測定方法完全可以通過一般生化分析 儀器得出所需的測定結果——空白試劑吸光度變化(AA/min)《0.0015; 吸光度時間反應曲線應呈直線下降；試劑可測有效(R》0.99)線形範圍可 達0.50mmol/L;試劑測試的不準確度，其相對偏差不超過土5 %;試劑測 試的精密度(重複性)的變異係數(CV)《2%;試劑的靈敏度可達0.080 ± 0.04 AA/mmol/L——本發明靈敏度高、精確度好，線形範圍寬廣，足以 便於推廣應用。
權利要求
1. 一種利用能被鋰抑制活性的酶比色法及酶聯法技術的鋰濃度測定方法，其方法原理如下肌醇-1-磷酸+水 肌醇-1-磷酸酶/Mg2+/Li+肌醇+磷酸根磷酸根+ 蔗糖蔗糖磷酸化酶 D-果糖+a-D-葡萄糖-1-磷酸果糖+還原型輔酶 甘露醇2-脫氫酶 甘露醇+輔酶將最終反應物置於紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測主波長340nm吸光度下降的程度/速度，比較對照及鋰樣品吸光度下降的程度/速度的差別，測算出鋰的濃度大小測定結果。
2. —種鋰診斷/測定試劑盒，主要成分包括緩衝液20——500 mmol/L穩定劑1———4000 mmol/L還原型輔酶0.1—0.35 mmol/L氯化鎂0.1—50 mmol/L肌醇-l-磷酸酶1000———80000 U/L蔗糖磷酸化酶IOOO-——80000 U/L甘露醇2-脫氫酶IOOO-——80000 U/L肌醇-l-磷酸1—50 mmol/L蔗糖l一50 mmol/L試劑成分的濃度不一定只限於上述範圍；在此範圍內效果較好，在 此範圍外，試劑仍會反應作用。其特徵在於試劑盒可以是乾粉狀態，在使用前加水溶解後使用； 也可以配製成液體試劑，直接使用。氯化鎂可以用其它鎂鹽取代。
3.根據權利要求2所述鋰診斷/測定試劑盒，其特徵在於由緩衝液、穩定劑、還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸化 酶、甘露醇2-脫氫酶、肌醇-l-磷酸、蔗糖組成單劑試劑。
4. 根據權利要求2所述鋰診斷/測定試劑盒，其特徵在於由緩衝液、穩定劑、還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸 化酶、甘露醇2-脫氫酶、肌醇-l-磷酸、蔗糖組成雙劑試劑；試劑1， 由緩衝液、穩定劑、還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸、蔗糖組成； 試劑2，由緩衝液、穩定劑、肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶組成。還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶、肌醇-l-磷酸、蔗糖在試劑1或試劑2中的位置可以不限。
5. 根據權利要求2所述鋰診斷/測定試劑盒，其特徵在於由緩衝液、穩定劑、還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶、肌醇-l-磷酸、蔗糖組成多劑試劑；試劑1， 由緩衝液、穩定劑、還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-l-磷酸、蔗糖組成； 試劑2，由緩衝液、穩定劑、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶組成；試劑3，由緩衝液、穩定劑、肌醇-l-磷酸酶組成。還原型輔酶、氯化鎂、 肌醇-l-磷酸酶、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶、肌醇-l-磷酸、蔗糖 在試劑l、試劑2或試劑3中的位置可以不限。
6. 根據權利要求2所述鋰診斷/測定試劑盒，其特徵在於還包括穩定劑 1—4000 mmol/L或0.1%-100%體積比。所述穩定劑為硫酸銨(Ammonia Sulfate)、甘油(Glycerol)、丙二醇(Propylene Glycol)、乙二醇(Ethylene glycol)及防腐劑中的至少一種。
全文摘要
本發明涉及一種利用能被鋰抑制活性的酶比色法及酶聯法技術的鋰診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定鋰濃度的方法原理、試劑的組成及成分，屬於醫學/工業/環境檢驗測定技術領域。本發明的試劑盒主要成分包括緩衝液、還原型輔酶、氯化鎂、肌醇-1-磷酸、蔗糖、肌醇-1-磷酸酶、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶及穩定劑；通過分別將對照及鋰樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發生一系列的酶促反應，再將反應物置於紫外/可見光分析儀下，檢測主波長340nm處吸光度下降的程度/速度，比較對照及鋰樣品吸光度下降的程度/速度的差別，從而測算出鋰的濃度大小。
文檔編號G01N21/31GK101464326SQ200710192119
公開日2009年6月24日 申請日期2007年12月19日 優先權日2007年12月19日
發明者王爾中 申請人:蘇州艾傑生物科技有限公司