用於識別改進的非鎮靜α－2激動劑的方法

2023-11-09 20:42:22

專利名稱：用於識別改進的非鎮靜α－2激動劑的方法
本專利申請根據35 USC § 119(e)要求2003年9月12日提交的臨時專利申請60/502,840的優先權，該臨時專利申請的內容通過引用納入本說明書中。
背景技術：
發明領域本發明總體涉及分子醫學，更具體地說，涉及相對於α-1腎上腺素能受體而言對α-2腎上腺素能受體具有高度選擇性的α-2腎上腺素能激動劑。
背景技術：
多種疾病至少部分地受交感神經系統的介導(mediate)，所述疾病包括多種與應激(stress)相關的疾病。這樣的交感神經增強(sympathetically-enhanced)疾病包括，但不限於，感覺超敏反應，例如，與纖維肌痛或頭痛例如偏頭痛相關的感覺超敏反應；胃腸疾病，例如應激性腸道症候群和消化不良；皮膚病，例如牛皮癬；心血管障礙；心動過速；外周血管收縮障礙，例如雷諾症候群(Raynaud’sSyndrome)和硬皮病；恐慌發作；代謝障礙，例如II型糖尿病、胰島素抗性和肥胖症；肌肉收縮障礙，包括骨骼肌收縮障礙、平滑肌收縮障礙、痙攣以及與緊張型頭痛相關的肌肉收縮障礙；行為失常，例如暴食和藥物依賴；以及性功能障礙。
不幸的是，由於伴隨的鎮靜作用，用α-2激動劑治療交感神經增強疾病的效果不能令人滿意。同樣的問題限制了α-2腎上腺素能激動劑對其它疾病的有效治療，所述其它疾病包括神經疾病、眼病和慢性痛。因此，需要新的預防或減輕交感神經增強疾病、神經疾病、眼病和慢性痛，且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，以及用於識別有效的非鎮靜α-2激動劑以用作治療劑的方便的篩選方法。本發明滿足了這些需要，並具有所述優點。

發明內容
本發明提供一種預防或減輕交感神經增強疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法通過將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，從而預防或減輕交感神經增強疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效，或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。
本發明進一步提供一種預防或減輕慢性痛、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法通過將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，從而預防或減輕慢性痛，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效，或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。
本發明還提供一種預防或減輕神經疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法通過將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，從而預防或減輕神經疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效，或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。
本發明還提供一種預防或減輕眼病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法通過將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，從而預防或減輕眼病，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效，或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。
本發明進一步提供一種α-2A/α-1A選擇性激動劑的篩選方法，所述激動劑在外周給藥時預防或減輕交感神經增強疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用。該篩選方法通過下述步驟實施確定一種藥劑相對於α-1A受體而言激活α-2A受體的功能選擇性，其中相對於α-1A受體而言對激活α-2A受體具有高度選擇性的藥劑即為在外周給藥時預防或減輕交感神經增強疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的α-2A/α-1A選擇性激動劑。


圖1示出了採用幾種不同的化學模型觀察到的觸覺超敏感性。每個試驗組包括5-6隻野生型小鼠。按如下所述對觸覺超敏感性進行評定；將35分鐘的測定期間內每5分鐘測得的敏感分數相加，並計算得到平均值+/-SEM。採用非配對雙尾t-檢驗(unpaired two-tailedt-test)(*p＜.01，**p＜.001)將每組與賦形劑對照進行對比。(a)α-1激動劑苯腎上腺素的脊椎注射以劑量依賴的方式引起觸覺超敏感性。苯腎上腺素(實心圓)以不同的劑量進行鞘內注射。在鞘內注射30ng的苯腎上腺素之前15分鐘，給藥α-1拮抗劑5-MU(30ug/kgi.p.；實心方塊)。(b)苯腎上腺素的全身給藥以劑量依賴的方式引起觸覺超敏感性。苯腎上腺素(實心圓)以不同的劑量進行腹膜內注射。在注射30ng/kg的苯腎上腺素之前15分鐘，給藥α-1拮抗劑5-MU(30ug/kg i.p.；實心方塊)。(c)選擇性EP1/EP3激動劑硫前列酮的脊椎給藥以劑量應答的方式引起化學觸覺超敏感性。硫前列酮(實心圓)以漸增的劑量進行鞘內注射。在注射200ng的硫前列酮之前15分鐘，注射EP1拮抗劑(100ng i.t.；實心方塊)。(d)NMDA的脊椎給藥以劑量應答的方式引起觸覺超敏感性。NMDA(實心圓)以不同的劑量進行鞘內注射。在注射100ng的NMDA之前15分鐘，注射NMDA拮抗劑二甲金剛胺(1ug i.t.；實心方塊)。
圖2表明，α-2A和α-2C基因敲除小鼠的交感緊張(sympathetictone)的增加提高了α-1受體激活對觸覺超敏感性的誘導。對野生型(實心圓)、α-2A基因敲除(實心方塊)和α-2C基因敲除(實心三角)小鼠以漸增的劑量腹膜內注射苯腎上腺素，並評定觸覺超敏感性。在苯腎上腺素的i.p.注射之前24至30小時，用50mg/kg i.p.呱乙啶預處理α-2A基因敲除小鼠，以引起暫時的化學交感神經切除(空心方塊)。每組有5至6隻小鼠。計算出平均敏感分數和SEM，並採用非配對雙尾t-檢驗(*p＜.01，**p＜.001)與賦形劑對照組比較。
圖3表明，交感神經系統提高硫前列酮引起的觸覺超敏感性。對野生型(實心圓)、α-2A基因敲除(實心方塊)和α-2C基因敲除(實心三角)小鼠以漸增的劑量鞘內注射硫前列酮，並測定觸覺超敏感性。在硫前列酮的鞘內注射之前24小時，用呱乙啶(50mg/kg i.p.)預處理α-2A基因敲除小鼠，以引起暫時的化學交感神經切除(空心方塊)。每組有5至6隻小鼠。計算出平均敏感分數和SEM，並採用非配對雙尾t-檢驗(*p＜.01，**p＜.001)與賦形劑對照組比較。
圖4表明，α-2基因敲除小鼠未表現出NMDA引起的觸覺超敏感性變化。對野生型(實心圓)、α-2A基因敲除(實心方塊)和α-2C基因敲除(實心三角)小鼠以漸增的劑量鞘內注射NMDA。對各組的5至6隻小鼠進行觸覺超敏感性評分。計算出平均應答和SEM，並採用非配對雙尾t-檢驗(*p＜.01，**p＜.001)與賦形劑對照組比較。
圖5表明，α-腎上腺素能激動劑在減輕交感神經增強感覺超敏反應方面表現不同。對每組5至6隻小鼠的應答進行評分；平均應答和SEM按上述方法計算。將每個藥物治療組採用非配對雙尾t-檢驗(*p＜.01，**p＜.001)與賦形劑對照組進行比較。(a)脊椎給藥的溴莫尼定和可樂定減輕野生型小鼠的NMDA引起的觸覺超敏感性。對小鼠鞘內注射DMSO賦形劑，或將100ng NMDA與生理鹽水、0.4μg溴莫尼定(UK14304)或1μg可樂定(「CLON」)共同進行鞘內注射。(b)脊椎給藥的溴莫尼定和可樂定減輕野生型小鼠的硫前列酮引起的觸覺超敏感性。對小鼠鞘內注射DMSO賦形劑，或將200ng硫前列酮與生理鹽水、0.4μg溴莫尼定(UK14304)或0.4μg可樂定共同進行鞘內注射。(c)脊椎給藥的溴莫尼定和可樂定減輕α-2C基因敲除小鼠的NMDA引起的觸覺超敏感性，但不減輕α-2A基因敲除小鼠的NMDA引起的觸覺超敏感性。對小鼠鞘內注射DMSO賦形劑，或將100ng NMDA與生理鹽水、0.4μg溴莫尼定(UK14304)或1μg可樂定共同進行鞘內注射。(d)脊椎給藥的溴莫尼定和可樂定減輕α-2C基因敲除小鼠的硫前列酮引起的觸覺超敏感性的能力不同。對小鼠注射DMSO賦形劑，或將200ng(α-2C基因敲除)或30ng(α-2A基因敲除)硫前列酮與生理鹽水、0.4μg溴莫尼定(UK14304)或0.4μg可樂定共同進行鞘內注射。在α-2A基因敲除小鼠中不存在α-2激動劑止痛作用；在α-2C基因敲除小鼠中也喪失了可樂定止痛作用。
圖6表明，溴莫尼定在不存在鎮靜作用的情況下減輕硫前列酮引起的觸覺超敏感性，而可樂定或替扎尼定則不能。將三種α-2激動劑(替扎尼定，三角；可樂定，方塊；以及溴莫尼定，圓)的劑量應答的抗超敏感性和鎮靜作用分別在硫前列酮引起的觸覺超敏感性和運動活性模型中進行比較。計算平均總敏感分數和平均值的標準誤差，並表示為實線(左軸)。將相對於賦形劑治療的動物的運動活性表示為百分數，鎮靜百分比按100％減去運動活性百分比計算，並表示為虛線(右軸)。
圖7示出了α-腎上腺素能激動劑可樂定和溴莫尼定的α-2對α-1激動劑選擇性的變化。採用基於細胞的體外功能檢測方法檢測了濃度漸增的苯腎上腺素(實心方塊)、可樂定(實心菱形)、替扎尼定(實心圓)、美託咪定(實心三角)和溴莫尼定(實心倒三角)的α-1和α-2激動劑活性。(a，b)α-腎上腺素能激動劑的α-1A和α-1B激動劑活性。加入不同濃度的α-腎上腺素能激動劑之後，在穩定表達牛α-1A受體(a)或倉鼠α-1B受體(b)的HEK細胞中，通過測定鈣敏感染料的螢光的變化測定細胞內鈣的增加。對激動劑檢測6至15次，每次重複三遍，並計算各濃度下的螢光平均值及SEM。圖中示出了有代表性的實驗結果。(c，d)α-腎上腺素能激動劑的α-2A和α-2C激動劑活性。加入不同濃度的α-腎上腺素能激動劑之後，在穩定表達人類α-2A受體(c)或人類α-2C受體(d)的PC12細胞中測定對由毛喉素(forskolin)誘導的cAMP累積的抑制。對激動劑檢測3至5次，每次重複三遍，並計算各濃度下的抑制百分比的平均值及SEM。圖中示出了有代表性的實驗結果。(e)在α-2C基因敲除小鼠中，共同給藥哌唑嗪和可樂定恢復了可樂定介導的止痛作用。對野生型(空心柱)和α-2C基因敲除(陰影線柱)小鼠注射賦形劑(「DMSO」)、哌唑嗪(「PRAZ」，100ng/kg i.p.)、硫前列酮(「SULP」，200ngi.t.)、可樂定(「CLON」，400ng i.t.)或所示的各種組合。對每組5至6隻小鼠的觸覺超敏感性評分，並計算平均應答和SEM。採用非配對雙尾t-檢驗(*p＜.01，**p＜.001)將各藥物治療組與賦形劑對照組進行比較。
圖8表明，化合物1在不存在鎮靜作用的情況下減輕硫前列酮引起的觸覺超敏感性的能力優於溴莫尼定。以硫前列酮引起的觸覺超敏感性和運動活性為模型，對4種α-2激動劑的劑量應答的抗超敏感效果和鎮靜效果進行了比較。左上框I.P.溴莫尼定。右上框I.P.美託咪定。左下框口服化合物1。右下框I.P.化合物2。計算了總敏感性分數的平均值以及平均值的標準誤差(見實線和實心記號，左軸)。將相對於賦形劑治療的動物的運動活性表示為百分比，鎮靜百分比按100％減去運動活性百分比計算(見虛線和空心記號，右軸)。
具體實施例方式
腎上腺素能受體介導對兒茶酚胺、去甲腎上腺素和腎上腺素的生理響應，並且屬於具有七個跨膜區(transmembrane domain)的G蛋白耦聯受體超家族(superfamily)。這些受體按藥理學分為α-1、α-2和β-腎上腺素能受體型，它們涉及包括心血管和中樞神經系統功能在內的多種生理功能。α-腎上腺素能受體介導刺激和抑制功能α-1腎上腺素能受體是典型的刺激性突觸後受體，通常在效應器官中介導應答，而α-2腎上腺素能受體既位於突觸前也位於突觸後，在其中抑制神經遞質的釋放。α-2腎上腺素能受體的激動劑目前在臨床上用於高血壓、青光眼、痙攣和注意力短缺症的治療，用於抑制戒毒反應(opiate withdrawal)，用作全身麻醉的輔助劑以及用於腫瘤疼痛的治療。
α-2腎上腺素能受體目前根據其藥理和分子特徵分為三個亞型α-2A/D(人類為α-2A，大鼠為α-2D)；α-2B；以及α-2C(Bylund等，Pharmacol.Rev.46121-136(1994)；以及Hein和Kobilka，Neufopharmacol.34357-366(1995))。α-2A和α-2B亞型能夠在一些血管床中調節動脈收縮，α-2A和α-2C亞型介導交感神經末梢釋放去甲腎上腺素的反饋抑制作用。α-2A亞型還介導α-2腎上腺素能激動劑的很多中樞作用(central effect)(Calzada和ArtiZano，Pharmacol.Res.44195-208(2001)；Hein等，Ann.NY Acad.Science881265-271(1999)；以及Ruffolo(編輯)，α-AdrenoreceptorMolecular Biology，Biochemistry and PharmacologyS.KargerPublisher’s Inc.Farmington，CT(1991))。
之前的研究表明，去甲腎上腺素對α-2C受體的親和力(Ki＝650nM)大於對α-2A受體的親和力(Ki＝5800nM；Link等，Mol.Pharm.4216-27(1992))。因此，對去甲腎上腺素釋放的自抑制作用在去甲腎上腺素濃度低時通過α-2C受體介導，在去甲腎上腺素濃度高時通過α-2A受體介導(Altman等，Mol.Pharm.56154-161(1999))。結果，去甲腎上腺素基礎釋放的反饋抑制由α-2C受體介導，而在高頻刺激情況下的釋放的反饋抑制由α-2A受體介導(Hein等，Ann.N.Y.Acad.Sci.881265-271(1999))。如本說明書在實施例I中所公開，在基礎(或低頻刺激)條件下交感傳出的突觸前抑制降低的α-2C基因敲除小鼠，對苯腎上腺素治療導致的α-1受體活性增加更敏感(見圖2)。此外，如本說明書的圖3所示，α-2A基因敲除小鼠對硫前列酮引起的觸覺超敏感性更敏感，而在α-2C基因敲除小鼠中，硫前列酮敏感性與野生型小鼠相同。這些結果表明，硫前列酮處理導致高頻的交感神經刺激，這被以下事實證實僅有缺乏對高頻交感傳出的突觸前抑制的α-2A基因敲除小鼠，表現出對硫前列酮引起的觸覺超敏感性的閾值的降低。
如本說明書在實施例II中所公開，溴莫尼定在具有硫前列酮引起的觸覺超敏感性的野生型小鼠和α-2C基因敲除小鼠中都是止痛的。相反，可樂定在野生型小鼠中是止痛的，但在α-2C基因敲除小鼠中不是(比較圖5b和圖5d)。正如所料，可樂定和溴莫尼定在α-2A基因敲除小鼠中都不止痛，所述小鼠缺乏介導止痛活性的脊椎α-2A腎上腺素能受體。這樣，在充當交感神經增強疾病模型的用硫前列酮處理的α-2C基因敲除小鼠中，全激動劑(pan-agonist)溴莫尼定和可樂定具有截然不同的活性。本說明書公開的其它結果表明，在野生型小鼠中，是溴莫尼定，而不是其它全激動劑例如替扎尼定或可樂定，具有止痛活性且沒有伴隨的鎮靜作用(見圖6)。此外，與其它全激動劑例如可樂定和替扎尼定的小於10倍的選擇性(見圖7和表3)相比，溴莫尼定在功能檢測中相對於α-1受體而言對α-2腎上腺素能受體具有更高的選擇性(大於1000倍)。這些結果表明了全激動劑溴莫尼定和可樂定的不同的功能活性，並且表明α-2對α-1功能選擇性有利於在不存在伴隨的鎮靜作用的情況下治療交感神經增強及其它疾病。
如本說明書的實施例V所進一步公開，採用基於細胞的體外檢測方法檢測了幾種α-2激動劑的α-2A/α-1A功能選擇性。如表4所示，化合物2是具有高度α-2/α-1選擇性的物質，比溴莫尼定的選擇性更高，這已被它較高的α-1A/α-2A效能比所表明。此外，另一種α-2激動劑化合物1也具有高度α-2/α-1選擇性，這已被基於細胞的功能檢測中觀察到的該化合物的α-1A活性水平檢測不到所證明。這些結果表明，相對於α-1A受體而言，化合物1和2對α-2A受體的激活作用具有高度選擇性。此外，雖然美託咪定對α-2A受體的效能比溴莫尼定更高，但是美託咪定的α-2A/α-1A選擇性比溴莫尼定低(見表3和4)。
如本說明書在實施例V中所進一步公開的，在基於細胞的檢測中，治療劑量所表現出來的α-2/α-1功能選擇性與體內鎮靜活性成反比。如圖8所示，在體外具有最高的α-2/α-1功能選擇性的α-2激動劑，也就是減輕硫前列酮引起的觸覺敏感且沒有伴隨的鎮靜作用的激動劑。具體而言，以1μg/kg的劑量口服化合物1產生50％的敏感降低(實線，左軸)，而比1μg/kg有效劑量大100倍甚至1000倍的劑量產生小於30％的鎮靜(空心菱形，右軸)(見圖8，左下框)。採用腹膜內給藥得到類似的結果。此外，以10μg/kg的劑量將化合物2腹膜內給藥也產生大於50％的敏感降低(實線，左軸)，而大10倍的劑量產生小於30％的鎮靜。總之，這些結果表明，基於細胞的體外功能檢測中的α-2激動劑，在治療劑量下全身給藥或以其它方式外周給藥後，其α-2A/α-1A腎上腺素能受體選擇性，與體內的鎮靜活性成反比。這些結果還表明，特別有用的α-2激動劑，是表現出類似於或好於溴莫尼定的α-2A/α-1A腎上腺素能受體功能選擇性的α-2激動劑。
基於這些發現，本發明提供了篩選α-2A/α-1A選擇性激動劑的方法，所述選擇性激動劑在外周給藥時預防或減輕交感神經增強疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用。所述篩選方法通過如下步驟實施確定一種藥劑相對於α-1A受體而言激活α-2A受體的功能選擇性，其中相對於α-1A受體而言對激活α-2A受體具有高度選擇性的藥劑即為在外周給藥時預防或減輕交感神經增強疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的α-2A/α-1A選擇性激動劑。如本說明書所進一步討論，所述α-2A/α-1A選擇性激動劑也可用於預防或減輕神經疾病、眼病、慢性痛和其它疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用。
在一個實施方案中，本發明提供一種在外周給藥時預防或減輕交感神經增強疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的α-2A/α-1A選擇性激動劑的篩選方法，所述方法包括(a)測定一種藥劑對α-2A受體的效能、活性或EC50；以及(b)測定該藥劑對α-1A受體的效能、活性或EC50，其中具有小於溴莫尼定的α-1A功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比的藥劑，就是預防或減輕交感神經增強疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的α-2A/α-1A選擇性激動劑。在本發明的方法中，所識別的選擇性激動劑可以具有，但不限於，小於溴莫尼定的α-1A功效，或比溴莫尼定的α-1A/α-2A EC50比大至少30％、2倍、5倍或10倍的α-1A/α-2A EC50比。在另一個實施方案中，可用於本發明的選擇性激動劑可以具有比溴莫尼定的α-1A/α-2A EC50比至少大20倍、30倍、40倍、50倍、60倍、70倍、80倍、90倍或100倍的α-1A/α-2A EC50比。
多種檢測方法中的任意一種可用於本發明的篩選方法。在一個實施方案中，藥劑對α-2A受體的功效、活性或EC50通過檢測腺苷酸環化酶活性的抑制來測定。作為非限制性的例子，可以在穩定表達α-2A受體、例如人類α-2A受體的PC12細胞中檢測腺苷酸環化酶活性的抑制。在另一個實施方案中，藥劑對α-1A受體的功效、活性或EC50通過檢測細胞內鈣測定。作為非限制性的例子，細胞內鈣可以在穩定表達α-1A受體、例如牛α-1A受體的HEK293細胞中檢測。
激動劑選擇性可以用多種常規功能檢測方法中的任一種進行表徵，例如，測量藥劑接近(proximal)受體激活應答的基於細胞的體外檢測方法。有用的檢測方法包括但不限於，用於分析接近α-2受體激活功能的體外檢測方法，例如環腺苷酸檢測或GTPγS結合(incorporation)檢測(Shimizu等，J.Neurochem.161609-1619(1969)；Jasper等，Biochem.Pharmacol.551035-1043(1998))；以及用於分析接近α-1受體激活功能的細胞內鈣檢測方法，例如FLIPR檢測和通過fluo-3檢測鈣脈衝(calcium pulse)(Sullivan等，Methods Mol.Biol.114125-133(1999)；Kao等，J.Biol.Chem.2648179-8184(1989))。本說明書下面公開的實施例II公開了α-2A選擇性檢測，所述檢測基於在穩定表達α-2A受體的PC12細胞中對毛喉素誘導cAMP累積的抑制，以及在穩定表達α-1A受體的HEK293細胞中細胞內鈣的增加。其它有用的檢測方法包括但不限於，肌醇磷酯檢測，例如親近閃爍(scintillation proximity)檢測(Brandish等，Anal.Biochem.313311-318(2003))；對β-抑制蛋白GPCR螯合的檢測，例如生物發光共振能量傳遞檢測(Bertrand等，J.ReceptorSignal Transduc.Res.22533-541(2002))；以及細胞傳感器微生理(cytosensor microphysiometry)檢測(Neve等，J.Biol.Chem.26725748-25753(1992))。這些和其它檢測接近α-2和α-1受體功能的方法是常規的，並在本領域是公知的。
作為非限制性的例子，GTPγS檢測是一種可用於在本發明的方法中，測定藥劑相對於α-1A受體而言激活α-2A受體的功能選擇性的檢測方法。α-2腎上腺素能受體通過鳥苷5』-O-(γ-硫代)三磷酸([35S]GTPγS)對GDP的受體催化交換，介導[35S]GTPγS結合入分離膜中的G蛋白。一種基於[35S]GTPγS結合的檢測可以基本上如Jasper等，supra，1998中所述進行。簡單地說，從磷酸鹽緩衝溶液中的組織培養板中收穫用待測藥劑處理過的匯合細胞(confluent cell)，然後在4℃、300×g離心5分鐘。用Polytron Disrupter(setting#6，5秒)將細胞沉澱(cell pellet)再懸浮於冷的溶胞緩衝液中(5mMTris/HCl，5mM EDTA，5mM EGTA，0.1mM PMSF，pH 7.5)，並在4℃、34,000×g離心15分鐘，然後如上再次在冷的溶胞緩衝液中再懸浮並離心。第二次洗滌步驟後，將膜製劑的等分試樣置於膜緩衝液中(50mM Tris/HCl，1mM EDTA，5mM MgCl2，0.1mM PMSF，pH 7.4)並在-70℃冷凍，直至在結合檢測中使用。
使用[35S]GTPγS在比活性1250Ci/mmol對GTPγS結合進行檢測。將冷凍的膜等分試樣解凍並在培養緩衝液(50mM Tris/HCl，5mMMgCl2，100mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，1mM普萘洛爾(propranolol)，2mM GDP，pH 7.4)中稀釋，並在25℃、用最終濃度0.3nM的放射性配體培養60分鐘。培養後，將樣品通過玻璃纖維過濾器(WhatmanGF/B，用0.5％的牛血清白蛋白預處理)在96孔細胞收集器中過濾，並用4ml冰冷洗滌緩衝液(50mM Tris/HCl，5mM MgCl2，100mM NaCl，pH 7.5)快速洗滌4次。在烘箱中乾燥後，將過濾器移入閃爍管中，所述閃爍管中含有5ml Beckman’s Ready Protein閃爍雞尾酒用於計數。這樣就測得了待測藥劑的α-2A受體的EC50和最大效果(功效)。
可以理解的是，有用的檢測方法通常採用僅自然表達一種顯著水平的α-腎上腺素能受體亞型的細胞，或採用僅表達一種顯著水平的重組α-腎上腺素能受體亞型的轉染細胞。作為非限制性的例子，所述腎上腺素能受體可以是人類受體或其具有相似藥理學的同系物。如本發明所公開，本發明的篩選方法優選用受體接近檢測方法(receptor-proximal assay)實施，即，其中受體應答未放大或僅有最低程度的放大，或檢測快速信號。因此，本領域技術人員將會優選除受體選擇和擴增技術(RSAT)及類似的檢測方法之外的方法，所排除的方法中不能很好地區分部分和完全激動。
本說明書公開的治療方法依賴於「α-2A/α-1A選擇性激動劑」，這裡使用的術語「α-2A/α-1A選擇性激動劑」指的是滿足以下條件的化合物(1)具有在一種或多種α-2腎上腺素能受體上—包括α-2A腎上腺素能受體上—比溴莫尼定大25％的功效，並且(2)還具有小於溴莫尼定的α-1A功效，或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。這樣的化合物對α-2A腎上腺素能受體可以是選擇性的或非選擇性的。因此，術語α-2A/α-1A選擇性激動劑包括，但不限於，全α-2激動劑；α-2A選擇性激動劑；以及對α-2A腎上腺素能受體具有特異性的激動劑。在具體的實施方案中，本發明的方法採用的α-2A/α-1A選擇性激動劑在α-2A受體上具有比溴莫尼定的功效大30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或200％的功效。在另一個實施方案中，本發明的方法通過使用在受體接近檢測中缺乏可檢測的α-1A功效的α-2A/α-1A選擇性激動劑實施，所述受體接近檢測包括例如測定穩定表達牛α-1A受體的HEK293細胞中的細胞內鈣水平的FLIPR檢測。
功效，也稱內在活性，是一種藥劑能達到的最大受體激活的度量。就本發明的篩選方法而言，功效優選採用任何一種不明顯放大受體應答的功能檢測方法來測定。功效可以用該藥劑的最大效果對各受體亞型的標準激動劑的最大效果的比率或百分比來表示。溴莫尼定(UK14304)通常用作α-2A、α-2B和α-2C受體的標準激動劑，並用作本說明書中定義α-2受體的相對功效時的標準。苯腎上腺素是一種公認的α-1A、α-1B和α-1D受體標準激動劑，並用作本說明書中定義α-1受體的相對功效時的標準。
如本說明書所公開，可用於本發明的α-2A/α-1A選擇性激動劑相對於α-2腎上腺素能受體而言對α-2A受體可以是選擇性的或非選擇性的。這樣，α-2A/α-1A選擇性激動劑可以是全α-2激動劑或對α-2A受體具有選擇性或特異性的激動劑，條件是，如上所述，所述激動劑具有小於溴莫尼定的功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。在具體的實施方案中，本發明的方法採用的α-2A/α-1A選擇性激動劑在α-2A腎上腺素能受體上具有比溴莫尼定的功效大30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或200％的功效。可用於本發明的治療方法中的示例性的α-2A/α-1A選擇性激動劑包括本說明書公開的化合物1和2。化合物1或2的可藥用的鹽、酯、醯胺、立體異構體或外消旋混合物也可用於本發明。可以理解的是，除α-2A激動劑活性之外，可用於本發明的α-2A/α-1A選擇性激動劑可任選地在一個或多個另外的腎上腺素能受體或其它受體上具有激動劑或拮抗劑活性，條件是所述選擇性激動劑滿足上述關於α-1A受體的標準。
可用於本發明的α-2A/α-1A選擇性激動劑可以是全α-2激動劑，本說明書使用的術語全激動劑指的是在各α-2A、α-2B和α-2C腎上腺素能受體上具有比溴莫尼定大25％的功效的藥劑。在具體的實施方案中，本發明方法通過這樣的α-2A/α-1A選擇性激動劑實施所述選擇性激動劑是在α-2A、α-2B和α-2C腎上腺素能受體上具有比溴莫尼定大30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或200％的功效的全α-2激動劑。可以理解的是，全α-2激動劑在不同的α-2受體上的功效可以不同；作為非限制性的例子，全α-2激動劑可以在α-2A受體上具有大80％的功效，在α-2B受體上具有大25％的功效，在α-2C受體上具有大25％的功效。
在本發明的篩選方法中，將藥劑的α-1A功效或α-1A/α-2A效能比或兩者與溴莫尼定進行比較。本發明中所使用的術語「溴莫尼定」指的是具有以下化學式的化合物
或其可藥用衍生物。術語溴莫尼定包括但不限於，5-溴-6-(2-咪唑啉-2-基氨基)喹喔啉D-酒石酸鹽(1∶1)、AlphaganTM和UK14304。溴莫尼定及其可藥用衍生物可通過商業渠道購得或由常規方法製備，例如如美國專利No.6,323,204中所述。
本發明也提供了基於α-2A/α-1A選擇性激動劑的治療方法。本發明提供，例如，預防或減輕交感神經增強疾病且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法通過將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑通過外周給藥到研究對象而進行，從而預防或減輕交感神經增強疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效，或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。在本發明的方法中，選擇性激動劑可以具有，但不限於，小於溴莫尼定的α-1A功效，或比溴莫尼定的α-1A/α-2A EC50比大至少30％、2倍或10倍的α-1A/α-2AEC50比。多種交感神經增強疾病中的任意一種都可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用，所述疾病包括但不限於，感覺超敏反應，例如，與纖維肌痛或頭痛例如偏頭痛相關的感覺超敏反應；胃腸疾病，例如應激性腸道症候群和消化不良；皮膚病，例如牛皮癬；心血管障礙；心動過速；外周血管收縮障礙，例如雷諾症候群和硬皮病；恐慌發作；代謝障礙，例如II型糖尿病、胰島素抗性和肥胖症；肌肉收縮障礙，包括骨骼肌收縮障礙、平滑肌收縮障礙、痙攣以及與緊張型頭痛有關的肌肉收縮障礙；行為失常；以及性功能障礙。在一個實施方案中，所述交感神經增強疾病是除交感神經維持性疼痛(sympathetically maintained pain)之外的疾病，所述交感神經維持性疼痛是任何能通過交感神經阻斷緩解的疼痛。作為非限制性的例子，所述α-2A/α-1A選擇性激動劑可以採用口服或局部給藥例如貼片的方式進行外周給藥。在一個實施方案中，將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑全身給藥至研究對象，以預防或減輕交感神經增強疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用。
在一個實施方案中，本發明的方法可用於預防或減輕與頭痛相關的感覺超敏反應，且沒有伴隨的鎮靜作用。在另一個實施方案中，本發明的方法可用於預防或減輕與偏頭痛相關的感覺超敏反應，且沒有伴隨的鎮靜作用。偏頭痛是一種困擾10％以上人口且可能與血管成分(vascular component)相關的頭痛。在一個實施方案中，本發明的方法預防或減輕與偏頭痛相關的眼超敏反應，例如畏光，且沒有伴隨的鎮靜作用。可以理解的是，本發明的方法可用於預防或減輕與多種形式的偏頭痛中的任意一種相關的感覺超敏反應，所述偏頭痛包括但不限於，無預兆偏頭痛(「MO」)、預兆偏頭痛(「MA」)、偏頭痛障礙，以及，作為非限制性的例子，腹型偏頭痛、急性紊亂偏頭痛、基底(基底動脈)偏頭痛、偏癱性或家族性偏癱性偏頭痛、閃電狀偏頭痛、眼性(眼相關的)偏頭痛、眼肌麻痺性偏頭痛或視網膜性偏頭痛。此外，本發明的方法可用於預防或減輕與偏頭痛等同疾病(migraineequivalent)相關的感覺超敏反應，所述偏頭痛等同疾病有偏頭痛預兆但並無頭痛。偏頭痛預兆是伴隨偏頭痛的視覺、運動、精神、感覺異常或其它神經異常。見Elrington，J.Neurol.Neurosurg.Psychiatry72增補本IIii10-ii15(2002)；Anderson，supra，1994；Bennett and Plum，supra，1996。
可以理解的是，本發明的方法可用於預防或減輕與偏頭痛或其它頭痛相關的多種類型的感覺超敏反應中的一種或多種。感覺超敏反應的類型包括但不限於，噁心；嘔吐；腹瀉；畏光(不耐光)；以及聲音恐懼症(不耐噪音)。感覺超敏反應的類型還包括，但不限於，視覺異常例如強光(bright flashing light)視覺異常(閃光暗點或強化暗點)，或單眼(視網膜)視覺異常，或視覺偏盲損失；感覺異常(異常的觸感)例如單側感覺異常；失語症(語言或理解能力喪失)；輕偏癱(身體一側肌無力或不全麻痺)；單側感覺缺陷；以及眩暈、共濟失調(肌肉協調性喪失)或復視。可以理解的是，本發明的方法可用於預防或減輕這些或其它類型的感覺超敏反應的一種，所述感覺超敏反應發生於偏頭痛或其它頭痛之前、過程中或之後，或在沒有頭痛的情況下，例如作為偏頭痛等同疾病的一部分發生。
本發明的方法也可用於預防或減輕與除頭痛之外的其它疾病相關的多種類型的感覺超敏反應中的任意一種，例如纖維肌痛，也稱為纖維織炎。纖維肌痛是一種在沒有結締組織或其它肌肉骨骼疾病信號的情況下，涉及多個部位的普遍的慢性肌肉骨骼疼痛和觸痛的疾病。具體地說，根據美國風溼病學院(American College of Rheumatology)的規定，纖維肌痛定義為在18個部位中的11個或更多部位的疼痛或觸痛。纖維肌痛經常與睡眠紊亂、慢性疲勞、頭痛以及應激性腸道症候群相關(Bennett and Plum，supra，1996)。
多種類型的感覺超敏反應可以與纖維肌痛相關，且可以根據本發明的方法預防或減輕且沒有伴隨的鎮靜作用，所述感覺超敏反應包括但不限於，對光、噪聲、觸摸或氣味的超敏反應，不耐冷或熱，噁心或在沒有真正的變態反應的情況下出現變應性樣症狀，例如鼻炎、瘙癢或疹。本領域技術人員理解，本發明的方法可用於預防或減輕與纖維肌痛相關的這些或其它類型的感覺超敏反應，且沒有伴隨的鎮靜作用。
根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的交感神經增強疾病也可以是胃腸疾病。炎性腸道疾病(IBD)和應激性腸道症候群(IBS)是在一半美國人的一生中產生影響的胃腸疾病，其中為炎性腸道疾病花費超過26億美元，為應激性腸道症候群花費超過80億美元。與這些和其它胃腸疾病相關的內臟超敏反應的頻繁性和嚴重性因壓力而加劇。如本發明所公開，本發明的方法可用於預防或減輕胃腸疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用，所述胃腸疾病包括但不限於，潰瘍性結腸炎(UC)、克羅恩病(CD)、應激性腸道症候群和消化不良。
胃腸疾病消化不良通常被歸類為生物心理社會性障礙，通常至少部分地具有飯後上腹部不適的特徵。除了飯後上腹部不適或疼痛之外，消化不良的特徵可以有，在不存在器質性疾病情況下的早飽(earlysatiety)、噁心、嘔吐、腹脹、胃氣脹或厭食(Thumshirn，Gut51增補本1i63-66(2002)；Anderson，Dorland’s Illustrated MedicalDictionary第28版，W.B.Saunder』Company，費城(1994))。本說明書所使用的術語「消化不良」指的是任何形式的消化受損。多種類型的消化不良中的任意一種可用本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用，所述消化不良包括但不限於，酸性消化不良，它與胃酸過多相關；闌尾炎性消化不良，又稱闌尾炎消化不良，其中消化不良症狀伴有慢性闌尾炎；卡他性消化不良，它伴有胃炎；米粉性消化不良，這是一種見於營養不良的嬰兒的澱粉營養不良疾病；膽石性消化不良，它涉及與膽囊障礙相關的消化不良突然發作；結腸性消化不良，它涉及大腸的功能障礙；發酵性消化不良，它具有攝入的食物發酵的特徵；胃積氣性消化不良，它與胃中形成氣體相關，且通常涉及伴有頻繁打嗝的上腹部不適；胃消化不良，它起源於胃；以及腸消化不良，它起源於腸。可以理解的是，該疾病的這些和其它輕度的或急性的症狀都包括於本說明書所使用的「消化不良」的定義中。在一個實施方案中，本發明的方法用於預防或減輕除了與胃炎相關的消化不良以外的消化不良。
本發明還提供了預防或減輕皮膚病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法。多種炎性和非炎性的皮膚病中的任意一種都可用本發明的方法預防或減輕，例如，但不限於，所述炎性皮膚病包括多種形式的急性或慢性皮炎中的任意一種，例如牛皮癬，過敏性皮炎例如過敏性接觸性皮炎，特應性皮炎、熱激性皮炎、接觸性皮炎、化妝品皮炎、溼疹、剝脫性皮炎、人為性皮炎、刺激性皮炎、慢性單純性苔蘚、海水皮炎、神經性皮炎、口周皮炎、光毒性皮炎、脂溢性皮炎、停滯性皮炎和增殖性皮炎。可以根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的皮膚病還包括非炎性皮膚病，所述非炎性皮膚病是任何非由發炎引起或不伴有發炎的皮膚病或其它皮膚疾病或病症。作為非限制性的例子，可以根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的非炎性皮膚病包括，非炎性皰病(blistering disease)例如表皮水泡症和卟啉病；魚鱗病；毛髮角化病；青少年蹠皮膚病(JPD)；扁平苔蘚(lichen plantus)皮膚病；以及乾燥病。本領域技術人員理解，這些和其它本領域公知的炎性和非炎性皮膚病可以根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。
在一個實施方案中，本發明的方法預防或減輕牛皮癬，且沒有伴隨的鎮靜作用。牛皮癬是一種常見的、具有波動的病程的慢性鱗狀皮膚病。原理性組織學發現包括孟羅膿腫和海綿狀膿皰。也可能在例如伸肌表面、指甲、頭皮、外生殖器和腰骶區域出現圓形的、有確定界限的(circumscribed)、紅斑狀的、乾燥的鱗斑，其上覆蓋有灰白色或銀白色的、臍狀的薄片狀鱗屑。可由本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的牛皮癬的形式包括，但不限於，環狀牛皮癬(annular psoriasis)、牛皮癬性關節炎、巴伯爾牛皮癬、頰黏膜白斑病、環形牛皮癬(circinate psoriasis)、盤狀牛皮癬(discoidpsoriasis)、紅皮性牛皮癬(erthrodermic psoriasis)、剝脫性牛皮癬、圖狀牛皮癬(figurata psoriasis)、屈側牛皮癬(皮褶牛皮癬、脂溢性牛皮癬(sebborrheic psoriasis)、掌蹠牛皮癬)、毛性牛皮癬、滴狀牛皮癬、慢性頑固性牛皮癬、舌牛皮癬、蠣殼狀牛皮癬(牡蠣殼狀牛皮癬)、掌牛皮癬以及局部的和全身的膿皰性牛皮癬。
根據本發明的方法預防或減輕的交感神經增強疾病也可以是外周血管收縮障礙，包括例如但不限於雷諾症候群，也稱為雷諾現象或雷諾病。雷諾症候群的特徵是手指或腳趾的、有時是耳或鼻的局部缺血的間歇性bitlaterial發作，通常伴有嚴重的蒼白，並經常伴有感覺異常或疼痛。雷諾症候群和其它外周血管收縮疾病可以是交感神經增強的，例如由情緒刺激或寒冷引起。輕度的雷諾症候群是常見的，通常不是臨床嚴重殘疾的先兆。然而，更多重度的雷諾症候群可以是健康狀況差的首要原因，或與潛在的疾病例如全身風溼病或全身硬化症相關(Block和Sequeira，Lancet3572042-2048(2001)；Wigley，N.Eng.J.Med.3471001-1018(2002)；以及Pope，Cochrane DatabaseSyst.Rev.CD000956(2000))。輕度和重度的雷諾症候群，以及其它外周血管收縮障礙—包括但不限於硬皮病(WO 00/76502)，也可用本說明書所公開的α-2/α-1選擇性激動劑預防或減輕。
本發明的方法也可用於預防或減輕心動過速，且沒有伴隨的鎮靜作用。本說明書所使用的術語「心動過速」指的是心率過快，包括快速性心律失常。對於成人，心動過速通常指的是心率大於每分鐘100次。術語心動過速包括繼發於多種疾病的心動過速，包括但不限於陣發性心動過速和非陣發性心動過速，在所述陣發性心動過速中，心動過速突然發作和停止，它可以是室性的或室上性的；所述非陣發性心動過速是一種慢發作的心動過速，通常具有每分鐘70至130次的心率。在一個實施方案中，本發明提供一種預防或減輕心動過速、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述心動過速與心肌缺血不相關。在另一個實施方案中，本發明提供一種預防或減輕自發性心動過速、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述自發性心動過速與心肌缺血不相關。在再一個實施方案中，本發明的方法預防或減輕成人或兒童的心動過速，且沒有伴隨的鎮靜作用。
可根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的心動過速包括源於心臟的任何部分的心動過速，例如室性心動過速和室上性心動過速，所述心動過速可分為例如房性和交接區性(結性)心動過速。這樣，本發明的方法可用於預防或減輕—但不限於—室性心動過速，所述室性心動過速是異常快的心室節律，具有心室異常興奮，經常超過每分鐘150次，它產生於心室中，有時與房室分離同時發生。本發明的方法還可用於預防或減輕室上性心動過速(SVT)，所述室上性心動過速是規則的(regular)心動過速，其中的興奮點位於束支之上，例如位於竇結、心房或房室交接處中，或所述室上性心動過速產生於包括心房和心室部位的大的折返迴路(reentrant circuit)。在一個實施方案中，本發明的方法用於預防或減輕房性心動過速，其特徵是通常每分鐘160至190次的快速心率，它產生於心房部位；這樣的心動過速包括但不限於陣發性房性心動過速。在另一個實施方案中，本發明的方法用於預防或減輕交接區性心動過速，這是一種應房室交接處所產生的刺激而發生的心動過速，它通常具有心率大於每分鐘75次的特徵。交接區性心動過速包括非陣發性和陣發性交接區性心動過速，例如源於折返或增強的自主性的交接區性心動過速。可以理解的是，本發明的方法也可用於預防或減輕多種其它心動過速，包括但不限於，雙重性心動過速，其中涉及兩種異位性心動過速；竇性心動過速，它源於竇結，可與休克、低血壓、充血性心力衰竭或發熱相關；直立性心動過速，其特徵是當從斜躺位置起身至直立位置時，心率不相稱地加速；以及紊亂性房性心動過速，其特徵是每分鐘100至130次的心房率、明顯變化的P波形態以及不規則的P-P間期(Anderson，supra，1994)。
本領域技術人員理解，根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的心動過速可以與諸如肺部疾病、糖尿病或外傷的疾病相關，所述心動過速可發生於，例如，老年人中。作為非限制性的例子，紊亂性房性心動過速(多源性房性心動過速)可存在於慢性阻塞性肺病病人、糖尿病病人以及老年人中。作為進一步的非限制性的例子，非陣發性交接區性心動過速可與外傷相關。本領域技術人員理解，這些和其它自主性以及其它心動過速可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。
本發明的方法也可用於預防或減輕恐慌發作，且沒有伴隨的鎮靜作用。恐慌發作是常見病，在總人口中具有大約3％的發病率(Potokar和Nutt，Int.J.Clin.Pract.54110-114(2000))。涉及復發性恐慌發作的恐慌障礙常見於青少年中，其平均發作年齡為24歲，且女性比男性更常見。本發明書中使用的術語「恐慌發作」指的是一段不連續的強烈恐懼期或不適期，並伴有一個或多個以下症狀心跳加速或心悸；胸痛；冷或熱潮紅；現實感解體或人格解體；死亡恐懼；失控或發瘋的恐懼；眩暈或昏厥；窒息感；噁心或腹部窘迫感；感覺異常；呼吸短促感或窒息感；出汗；震顫或顫抖。恐慌發作通常開始於強烈憂慮或恐懼的突然發作，通常具有約5至20分鐘的持續期。術語恐慌發作既包括全面(full-blown)發作，也包括症狀有限的(limited-symptom)發作；全面發作涉及四個或四個以上的上述症狀，而症狀有限的發作涉及少於四個症狀。本發明的方法可預防或減輕上述伴隨症狀中的一個或任意組合的嚴重性，且沒有伴隨的鎮靜作用。在一個實施方案中，本發明的方法完全預防恐慌發作。
一些具有恐慌發作的病人發展為「恐慌障礙」，所述「恐慌障礙」也可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。本說明書使用的術語恐慌發作包括恐慌障礙，所述恐慌障礙被定義為復發性的恐慌發作，且伴有對再次發作或發作的後果的持續擔憂，或在一次或多次恐慌發作後經歷至少一個月的顯著行為變化。在一些情況下，恐慌障礙與其它精神疾病例如抑鬱症相關。
中樞交感神經系統可在代謝失調的發展中起重要作用，所述代謝失調包括例如II型糖尿病的特徵—胰島素抗性和高血壓(Rocchini等，Hypertension33[第II部分]548-553(1999))。這樣，本發明進一步提供了預防或減輕代謝障礙、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法。所述代謝障礙可以是，但不限於，II型糖尿病、胰島素抗性、肥胖症，或具有高血壓、高脂血症和胰島素抗性特徵的障礙。
本發明的方法也可用於預防或減輕多種肌收縮障礙中的任意一種，且沒有伴隨的鎮靜作用。肌收縮障礙是至少部分地因不適當的肌收縮而引起的疾病，它包括但不限於，骨骼肌收縮障礙、平滑肌收縮障礙、與腺相關的肌收縮障礙，以及心肌收縮障礙例如充血性心力衰竭；這些和其它可根據本發明的方法預防或減輕的、且沒有伴隨的鎮靜作用的肌收縮障礙包括那些肌細胞受神經支配的肌收縮障礙，也包括肌細胞不受神經支配的肌收縮障礙。作為非限制性的例子，本發明的方法可用於預防或減輕下述肌收縮障礙，例如背痙攣或其它肌痙攣；與膀胱炎相關的肌收縮；與非細菌性前列腺炎相關的肌收縮；與磨牙相關的肌收縮；與緊張型頭痛相關的肌收縮；以及與充血性心力衰竭相關的肌收縮。
在一個實施方案中，肌收縮障礙是肌痙攣。本說明書使用的術語「痙攣」指的是肌肉或肌肉群突然的、無意的收縮，並伴有疼痛和功能衝突。痙攣可以產生例如無意的運動或扭曲。在一個實施方案中，本發明的方法預防或減輕背痙攣，且沒有伴隨的鎮靜作用。
與膀胱炎相關的肌收縮也是一種肌收縮障礙，可根據本發明的方法預防或減輕且沒有伴隨的鎮靜作用。本說明書使用的術語「膀胱炎」指的是膀胱的炎症。術語膀胱炎包括但不限於，變應性膀胱炎、細菌性膀胱炎、急性卡他性膀胱炎、膀胱囊腫、白喉性(格魯布性)膀胱炎、嗜酸細胞性膀胱炎、剝脫性膀胱炎、濾泡性膀胱炎、腺性膀胱炎、結痂性膀胱炎、慢性間質性(慢性間質性、黏膜下)膀胱炎、機械刺激性膀胱炎、乳頭狀瘤性(papillomatosa)膀胱炎以及老年性女性膀胱炎(cystitiss enilis feminarum)。參見例如Anderson，supra，1994。膀胱炎可伴有一個或多個下列臨床症狀尿頻、尿灼、恥骨弓上不適、倦怠、尿混濁或淡血尿，以及有時低燒(Bennett和Plum(編輯)，Cecil Textbook of Medicine第六版，W.B.Saunders Company，費城1996)。本領域技術人員理解，與這些或其它形式的輕度或重度、急性或慢性膀胱炎相關的肌收縮可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。
與非細菌性前列腺炎相關的肌收縮也是一種肌收縮障礙，可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。約有50％的男性在成人階段經歷過前列腺炎症狀，其中約有95％是由非細菌感染因素引起的。本說明書使用的術語「非細菌性前列腺炎」與「無菌性前列腺炎」同義，指的是非由細菌感染引起的前列腺炎症。非細菌性前列腺炎包括但不限於，慢性非細菌性前列腺炎、變應性或嗜酸性前列腺炎以及非特異性肉芽腫性前列腺炎。可以理解的是，術語非細菌性前列腺炎包括但不限於，具有異常前列腺分泌(EPS)和正常細菌培養特徵的不明病因的前列腺炎。可以理解的是，與這些和其它形式的輕度或重度、急性或慢性非細菌性前列腺炎相關的肌收縮可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。
與緊張型頭痛(TTH)相關的肌收縮也可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。緊張型頭痛是一種常見的頭痛類型，影響達90％之多的成年美國人。本說明書使用的術語「緊張性頭痛」指的是一種至少部分地由肌收縮引起的頭痛，它可由例如壓力或勞累引起。術語「緊張型頭痛」包括陣髮式頭痛和慢性頭痛，包括但不限於普通的緊張性頭痛。緊張型頭痛通常涉及頭和頸的後部，但也可能出現在頭骨的頂部或前部。緊張型頭痛通常還具有對稱性和嚴重性非致殘(non-disabling)的特徵。雖然不一定有全部的診斷特徵，但緊張型頭痛的診斷特徵包括兩側痛；輕度到中度的嚴重性；具有壓迫狀特徵且狀態穩定；隨時間而加重；可能高頻度，例如每天或連續發作；較少見的偏頭痛特徵，例如噁心、光敏感性、聲敏感性，以及因身體活動例如頭部運動而加重。
緊張型頭痛由例如壓力、勞累、眼睛疲勞或不良姿態等導致的面部、頸部和頭皮肌肉繃緊而引起。這樣的頭痛可以持續數天或數周，並可導致各種強度的疼痛。持續長時間、例如數周或數月的緊張性頭痛稱為慢性緊張型頭痛，它包括在本說明書使用的術語緊張型頭痛中。
緊張型頭痛不存在血管特徵以及諸如噁心、嘔吐、對光敏感的症狀，且不存在預兆，可據此將其與偏頭痛區分開(Spira，Austr.FamilyPhys.27597-599(1998))。術語緊張型頭痛指的是沒有明顯的血管成分的頭痛，在本說明書中用於區別緊張性血管性頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛以及其它主要具有血管成分的頭痛。然而，本發明的方法也可用於預防或減輕與其它頭痛相關的感覺超敏反應，所述其它頭痛包括但不限於，頸源性頭痛、創傷後頭痛、叢集性頭痛和顳下頜關節障礙(TMJ)。
本發明的方法還可用於預防或減輕行為失常，且沒有伴隨的鎮靜作用。在一個實施方案中，所述失常是與壓力相關的行為失常，即由壓力引起或加重的任何行為失常。作為非限制性的例子，與壓力相關的行為失常可以是因壓力引起或加重的強迫行為或重複的有害行為，例如暴食或肥胖症、強迫症(OCD)、抽搐、圖雷特症候群(TS)、酒精濫用、藥物濫用、賭博、自殘性行為(self-inflicted injuriousbehavior)例如抓傷或拉扯頭髮，或性無能或性喚起。在一個實施方案中，與壓力相關的行為失常是除藥物濫用之外的失常。在另一個實施方案中，與壓力相關的行為失常是除藥物濫用或酒精濫用之外的失常。
本發明的方法還可用於預防或減輕精神障礙，且沒有伴隨的鎮靜作用。在一個實施方案中，精神障礙是由壓力引起或加重的精神障礙。作為非限制性的例子，本發明的方法可用於預防或減輕精神分裂症，且沒有伴隨的鎮靜作用。
本發明的方法可用於預防或減輕本說明書所公開的多種交感神經增強疾病、神經疾病、眼病、多種類型的慢性痛以及其它疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用。本說明書使用的術語「減輕」指的是將待治療的特定疾病或慢性痛類型的至少一個症狀降低至少約50％。
術語鎮靜指的是降低運動活性。在本說明書中用於涉及激動劑時，短語「沒有伴隨的鎮靜作用」指的是，在外周給藥時，在十倍於將待治療的特定疾病或慢性痛類型的一個或多個症狀降低50％所需激動劑的劑量下，產生小於大約30％的鎮靜作用。例如，如圖8所示(左下框)，以1μg/kg的劑量口服給藥化合物1使敏感分數降低50％(實線，左軸)，而比1μg/kg有效量大100倍甚至1000倍的劑量產生小於30％的鎮靜作用(空心菱形，右軸)。此外，如圖8E中所示，將化合物2以10μg/kg的劑量腹膜內給藥使敏感分數降低超過50％(實線，左軸)，而比該有效量大10倍(100μg/kg)的劑量產生小於30％的鎮靜作用。這樣，化合物1和2具有有效的治療活性，「且沒有伴隨的鎮靜作用」。相反，美託咪定在劑量大於將敏感分數降低50％所需劑量的10倍時是完全鎮靜的。
作為非限制性的例子，產生約30％的鎮靜作用(運動活性降低)所需的劑量可以比將待治療的特定疾病或慢性痛類型的一個或多個症狀降低50％所需劑量大至少25倍、50倍、100倍、250倍、500倍、1000倍、2500倍、5000倍或10000倍。本說明書中描述了測定症狀減輕程度以及鎮靜程度的方法，所述方法也是本領域公知的。
本說明書還提供一種在將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象時預防或減輕慢性痛、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，藉以預防或減輕慢性痛且沒有伴隨的鎮靜作用，其中的選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。在本發明的預防或減輕慢性痛、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法中，所述選擇性激動劑可以具有，但不限於，小於溴莫尼定的α-1A功效，或比溴莫尼定的α-1A/α-2A EC50比大至少30％、2倍或10倍的α-1A/α-2A EC50比。
多種類型的慢性痛中的任意一種都可用本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用，所述慢性痛包括但不限於，神經病變性疼痛，例如與糖尿病性神經病變或皰疹後神經痛有關的神經病變性疼痛；與腫瘤有關的慢性痛；術後疼痛；異常性疼痛(allodynic)，例如纖維肌疼痛(fibromyalgic pain)；與複雜性局部疼痛症候群(CRPS)有關的慢性痛；慢性內臟痛，例如與應激性腸道症候群或痛經(dysmennorhea)有關的慢性內臟痛；慢性頭痛，例如偏頭痛、非血管性(non-vascular)頭痛、叢發性頭痛或日常緊張性頭痛；以及慢性肌肉痛，例如與背痙攣有關的慢性肌肉痛。本發明的用於預防或減輕慢性痛、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法可通過多種外周給藥路線中的任意一種實施，所述給藥路線包括但不限於，口服以及局部給藥，例如通過貼片。在一個實施方案中，將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑向研究對象全身給藥，以預防或減輕慢性痛，且沒有伴隨的鎮靜作用。
本說明書使用的術語「慢性痛」指的是除急性痛之外的其它疼痛，包括但不限於，神經病變性疼痛、內臟疼痛、炎性疼痛、頭痛、肌肉痛和牽涉痛。可以理解的是，慢性痛相對來說是長期的，例如幾年，且可以是持續的或間歇的。慢性痛區別於急性痛，後者是快速的、通常具有高閾值(threshold)的疼痛，由損傷引起，例如切割、擠壓、燒灼，或化學刺激，例如暴露於辣椒的活性成分辣椒素中。
在一個實施方案中，本發明的用於預防或減輕慢性痛、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法用於治療「神經病變性疼痛」，本說明書使用的術語「神經病變性疼痛」指的是因神經損傷引起的疼痛。神經病變性疼痛不同於傷害感受性疼痛，是因涉及小的皮膚神經、肌肉或結締組織中的小神經的急性組織損傷而引起的疼痛。與神經病變性疼痛相反，涉及傷害感受機理的疼痛通常限於組織修復期間，並且通常可通過止痛劑或類鴉片物質緩解(Myers，Regional Anesthesia20173-184(1995))。慢性神經病變性疼痛可以在最初的急性組織損傷之後發展數天或數月，並可涉及持續自發性疼痛以及異常性疼痛或痛覺過敏，所述異常性疼痛是一種對通常不痛的刺激所產生的疼痛反應，所述痛覺過敏是一種對通常輕微的疼痛刺激(例如針刺)所產生的強化的反應。
多種類型的神經病變性疼痛中的任意一種可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。作為非限制性的例子，神經病變性疼痛可由外周神經、背根神經節、脊髓、腦幹、丘腦或皮層的外傷、損傷或疾病引起，或與所述外傷、損傷或疾病相關。可根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的神經病變性疼痛包括，但不限於，神經痛例如帶狀皰疹後神經痛和三叉神經痛；去傳入痛；糖尿病性神經病變；缺血性神經病變；以及藥物引起的疼痛，例如紫杉酚治療伴有的疼痛。可以理解的是，本發明的方法可用於預防或減輕神經病變性疼痛，且沒有伴隨的鎮靜作用，而不論所述神經病變性疼痛的病因如何。本發明的方法可用於，但不限於，預防或減輕由下述原因導致的神經病變性疼痛外周神經障礙例如神經瘤；神經壓迫；神經壓傷或拉伸，或神經不完全橫切；或單一神經病變或多發性神經病變。作為進一步的非限制性的例子，本發明的方法可用於預防或減輕下述疾病引起的神經病變性疼痛，例如背根神經節壓迫；脊髓發炎；脊髓挫傷、脊髓瘤或脊髓半切除(hemisection)；以及腦幹、丘腦或皮層的瘤或損傷。
如上所述，本發明的方法可用於預防或減輕單一神經病變或多發性神經病變導致的神經病變性疼痛，且沒有伴隨的鎮靜作用。神經病變是外周神經系統中的機能失調或病變，其臨床特徵是感覺或運動神經元異常。單一神經病變是其中僅單一外周神經受影響的神經病變，而多發性神經病變是其中多個外周神經受影響的神經病變。根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的神經病變的病因可以是已知的或未知的。已知的病因包括，但不限於，疾病或中毒狀態的併發症，所述疾病或中毒狀態包括例如引起神經病變的最常見的代謝失調—糖尿病，或輻射、缺血或脈管炎。可根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的多發性神經病變包括，但不限於，由脊髓灰質炎後症候群、糖尿病、酒精、澱粉狀蛋白、毒素、HIV、甲狀腺機能減退、尿毒症、維生素缺乏、化療、ddC或法布裡病(Fabry’sdisease)引起的多發性神經病變。可以理解的是，本發明的方法可用於預防或減輕這些或其它類型的、病因已知或未知的慢性神經病變性疼痛。
作為另外的非限制性例子，本發明的方法可用於預防或減輕下列疼痛與腫瘤相關的慢性痛，這是一種由腫瘤引起的或伴隨於腫瘤治療的慢性痛，例如伴隨於化療或放療的慢性痛；術後疼痛；異常性疼痛，例如纖維肌疼痛；與複雜性局部疼痛症候群(CRPS)有關的慢性痛；慢性內臟痛，例如與應激性腸道症候群或痛經(dysmennorhea)有關的慢性內臟痛；由例如脊椎炎或關節炎引起的慢性炎性疼痛，所述關節炎包括例如類風溼性關節炎、痛風性關節炎或骨關節炎；由慢性胃腸炎引起的慢性炎性疼痛，所述慢性胃腸炎包括例如克羅恩病、潰瘍性結腸炎、胃炎或應激性腸病；或其它類型的慢性炎性疼痛，例如角膜疼痛，或由自身免疫性疾病、例如紅斑狼瘡引起的疼痛。本發明的方法還可用於，但不限於，治療慢性頭痛，例如與偏頭痛相關的疼痛、非血管性頭痛、叢集性頭痛、緊張性頭痛或慢性日常頭痛；肌肉痛，包括但不限於與背痙攣或其它痙攣相關的疼痛；與物質濫用或戒除相關的疼痛，以及其它類型的病因已知或未知的慢性痛。
本發明還提供一種通過將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象預防或減輕神經疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，藉以預防或減輕神經疾病且沒有伴隨的鎮靜作用，其中的選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。在本發明的預防或減輕神經疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法中，所述選擇性激動劑可以具有，但不限於，小於溴莫尼定的α-1A功效，或比溴莫尼定的α-1A/α-2A EC50比大至少30％、2倍或10倍的α-1A/α-2A EC50比。多種神經疾病可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用，所述神經疾病包括急性和慢性神經疾病。作為非限制性的例子，可預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的急性神經疾病包括中風；頭和脊髓損傷；以及癲癇發作。可根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的慢性神經疾病包括，但不限於，神經變性疾病，例如阿爾茨海默病；帕金森病；亨廷頓舞蹈病；肌萎縮性側索硬化症和多發性硬化；HIV相關痴呆和神經病變；眼病，例如青光眼、糖尿病性神經病變和年齡相關的黃斑變性；以及精神分裂症、藥癮、停藥和賴藥性，以及抑鬱和焦慮。在本發明的一個實施方案中，急性或慢性神經疾病可通過多種外周給藥路線中的任意一種預防或減輕，所述給藥路線包括，但不限於，口服和局部給藥，例如通過貼片。在一個實施方案中，將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑向研究對象全身給藥，以預防或減輕神經疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用。
本說明書使用的術語「神經疾病」包括所有至少部分地影響神經元的急性和慢性疾病。因此，術語神經疾病包括但不限於，缺氧缺血(中風)；頭和脊髓損傷；癲癇；神經變性疾病，例如帕金森病、亨廷頓舞蹈病、阿爾茨海默病、肌萎縮性側索硬化症或多發性硬化；視神經病變，例如青光眼、光誘導視網膜變性例如光感受器變性，以及黃斑變性；光感受器變性疾病，例如視網膜色素變性；代謝、線粒體和傳染性腦異常，例如腦炎；以及神經病變疼痛(Lipton和Rosenberg，New Engl.J.Med.330613(1994))。慢性神經疾病包括，但不限於，神經變性疾病，例如阿爾茨海默病、帕金森病、帕金森症候群；亨廷頓舞蹈病；肌萎縮性側索硬化症和多發性硬化；光感受器變性疾病，例如視網膜色素變性和光誘導視網膜變性；視網膜黃斑變性和其它眼病，例如青光眼和糖尿病性視網膜病變；HIV相關痴呆(獲得性免疫缺陷症候群痴呆復徵(complex))和HIV相關神經病變；神經病變疼痛症候群，例如灼痛或疼痛性外周神經病變；橄欖體腦橋小腦萎縮；線粒體異常和其它生物化學疾病，例如MELAS症候群、MERRF、萊伯病、韋尼克腦病、雷特症候群、同型高半胱氨酸尿症(homocysteinuria)、血高半胱氨酸過多症(hyperhomocysteinemia)、血脯氨酸過多症、非酮性高甘氨酸血症、羥丁基胺基酸尿症、亞硫酸鹽氧化酶缺乏症、聯合系統病、鉛腦病；肝性腦病、圖雷特症候群；藥癮和賴藥性；停藥，例如戒酒或戒毒；以及抑鬱或焦慮症候群急性神經疾病是任何具有短的和相對嚴重的病程的神經疾病。作為非限制性的例子，可根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的急性神經疾病可以是與中風相關的腦缺血；低氧症；缺氧症；一氧化碳、錳或氰化物中毒；低血糖；圍產期窒息；溺水垂死；神經系統的機械創傷，例如腦或脊髓的創傷；癲癇或其它發作；心臟停搏；或與例如冠狀搭橋手術相關的腦窒息。急性神經疾病區別於慢性神經疾病，後者具有相對長的持續期，例如數月或數年。
本說明書還提供一種通過將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象預防或減輕眼病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，藉以預防或減輕眼病且沒有伴隨的鎮靜作用，其中的選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。在本發明的預防或減輕眼病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法中，所述選擇性激動劑可以具有，但不限於，小於溴莫尼定的α-1A功效，或比溴莫尼定的α-1A/α-2A EC50比大至少30％、2倍或10倍的α-1A/α-2A EC50比。可根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的眼病包括，但不限於，青光眼；黃斑變性；以及視網膜病變例如糖尿病性視網膜病變。作為非限制性的例子，可用於本發明的外周給藥路線包括滴眼液、眼內植入體、口服或局部給藥，例如通過貼片。在另一個實施方案中，將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑向研究對象全身給藥，以預防或減輕眼病，且沒有伴隨的鎮靜作用。
多種眼病可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。所述眼病包括但不限於，糖尿病性視網膜病變；黃斑水腫例如與糖尿病相關的黃斑水腫；視網膜變性疾病例如青光眼、黃斑變性，例如和年齡相關的黃斑變性(ARMD)以及視網膜色素變性；視網膜營養不良；視網膜炎症；視網膜的血管阻塞疾病，例如視網膜靜脈阻塞或視網膜支動脈或主動脈阻塞；早產兒視網膜病變；與血液病，例如鐮狀細胞貧血相關的視網膜病變；高眼壓；眼癢；視網膜脫落後損傷；因玻璃體切除術、視網膜或其它手術引起的損傷或創傷；以及其它視網膜損傷，包括治療損傷，例如因視網膜雷射治療引起的治療損傷，例如對糖尿病性視網膜病變的全視網膜光凝，或視網膜的光動力治療，所述視網膜病變包括例如與年齡相關的黃斑變性。可根據本發明的方法預防或減輕、且沒有伴隨的鎮靜作用的眼病還包括，但不限於，遺傳和獲得性視神經病變，例如主要特徵為中心視力損失的視神經病變，例如Leber遺傳性視神經病變(LHON)、常染色體顯性遺傳視神經萎縮(Kjer病)和其它視神經病變，例如涉及線粒體缺陷、異常發動蛋白(dynamin)相關蛋白或細胞凋亡失常的視神經病變；以及視神經炎，例如與多發性硬化、視網膜靜脈阻塞或光動力或雷射治療相關的視神經炎。參見，例如，Carelli等，Neurochem.Intl.40573-584(2002)；以及Olichon等，J.Biol.Chem.2787743-7746(2003)。可以理解的是，這些和其它眼部異常，特別是感覺神經視網膜的異常，可根據本發明的方法預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。
除了預防或減輕交感神經增強疾病、神經疾病、眼病和慢性痛以外，α-2A/α-1A選擇性激動劑可用於預防或減輕其它疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用。所述疾病可以是，例如，注意力短缺症(ADHD/ADD)，這是一種主要特徵為開始於7歲之前的注意力缺乏、注意力分散和衝動的障礙。症狀可以包括，但不限於，煩躁和局促不安，難於安坐，易於分心，難於等候輪到自己，難於克制脫口說出答案，不能遵從指導，多話，以及其它破壞性行為(disruptive behavior)(Anderson，supra，1994)。此外，ADHD/ADD雖然最初發現於兒童，但在很多個體中持續到成年(參見，例如，Block，Pediatr.Clin.North Am.451053-1083(1998)；以及Pary等，Ann.Clin.Psychiatry14105-111(2002))。本領域技術人員理解，本發明的方法可用於預防或減輕兒童或成人的輕度和重度的ADHD/ADD。可根據本發明的方法預防或減輕的其它疾病包括，但不限於，鼻塞；腹瀉；泌尿疾病例如排尿機能亢進或膀胱過度活躍；充血性心力衰竭；或精神病例如躁狂精神障礙。α-2A/α-1A選擇性激動劑也可用於預防或減輕一種或多種與感覺缺失相關的症狀，或強化記憶和認知過程，且沒有伴隨的鎮靜作用，所述與感覺缺失相關的症狀例如有作嘔、嘔吐、顫抖或驚恐。
可以理解的是，含有有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑的藥用組合物可用於本發明的方法，所述方法用於預防或減輕交感神經增強疾病、神經疾病、眼病或慢性痛，且沒有伴隨的鎮靜作用。這樣的藥用組合物包括α-2A/α-1A選擇性激動劑，並可任選包括一種賦性劑，例如可藥用載體或稀釋劑，所述可藥用載體或稀釋劑可以是向研究對象給藥後基本上沒有長期或永久性有害作用的任何載體或稀釋劑。賦形劑通常與活性α-2A/α-1A選擇性激動劑混合，或用於稀釋或封裝選擇性激動劑。載體可以是充當活性選擇性激動劑的賦形劑或載體的固體、半固體或液體試劑。固體載體的例子包括，但不限於，藥用級的甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、聚亞烷基二醇、滑石、纖維素、葡萄糖、蔗糖以及碳酸鎂。栓劑可以包括例如丙二醇作為載體。可藥用載體和稀釋劑的例子包括，但不限於，水，例如蒸餾水或去離子水；鹽水；葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等。可以理解的是，活性成分可溶於所需載體或稀釋劑中，或作為懸浮劑遞送。
藥用組合物也可任選地包括一種或多種試劑例如，但不限於，乳化劑、潤溼劑、甜味劑或調味劑、張力調節劑(tonicity adjuster)、防腐劑、緩衝劑或抗氧化劑。可用於藥用組合物的張力調節劑包括，但不限於，鹽例如醋酸鈉、氯化鈉、氯化鉀，甘露醇或甘油，以及其它可藥用的張力調節劑。可用於藥用組合物的防腐劑包括，但不限於，苯扎氯銨、氯代丁醇、硫柳汞(thimerosal)、醋酸苯汞以及硝酸苯汞。多種調節pH值的緩衝劑以及方法可用於製備藥用組合物，包括但不限於，醋酸鹽緩衝劑、檸檬酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑以及硼酸鹽緩衝劑。類似地，可用於藥用組合物的抗氧化劑在本領域是公知的，包括例如偏亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、乙醯半胱氨酸、丁基化羥基茴香醚以及丁基化羥基甲苯。可以理解的是，這些和其它在藥物學領域已知的物質可以包括在可用於本發明的方法的藥用組合物中。參見，例如，Remington的Pharmaceutical SciencesMack Publishing Company，Easton，PA第16版1980。此外，含有α-2A/α-1A選擇性激動劑的藥用組合物可任選地在相同或不同的藥物組合物中，通過相同或不同的給藥路線與一種或多種其它治療物質一起給藥。
α-2A/α-1A選擇性激動劑以有效量通過外周給藥到研究對象。所述有效量通常是獲得所需的預防或減輕交感神經增強疾病、神經疾病、眼病或慢性痛的一種或多種症狀所需的最小劑量，例如將交感神經增強疾病、神經疾病、眼病或慢性痛引起的不適降低至可忍受的程度所大致需要的劑量。該劑量通常在0.1-1000mg/天的範圍內，且可以在例如0.1-500mg/天、0.5-500mg/天、0.5-100mg/天、0.5-50mg/天、0.5-20mg/天、0.5-10mg/天、或0.5-5mg/天的範圍內，實際給藥量由醫生考慮相關情況後確定，所述相關情況包括交感神經增強疾病、神經疾病、眼病或慢性痛的嚴重程度和類型；病人的年齡和體重；病人的總體身體狀況；以及藥物製劑和給藥路線。如以下所進一步公開，栓劑或緩釋劑也可用於本發明的方法，包括但不限於，皮膚貼片(dermal patch)、置於皮上或皮下的製劑以及用於肌肉注射的製劑。
眼用組合物可用於本發明的方法中，以預防或減輕眼病，且沒有伴隨的鎮靜作用。眼用組合物包含可眼用載體，所述可眼用載體是任何對所給藥的眼基本上沒有長期或永久有害作用的載體。可眼用載體的例子包括，但不限於，水例如蒸餾水或去離子水；鹽水；以及其它水介質。可用於本發明的眼用組合物可以包括，例如，溶於或懸浮於合適的載體中的α-2A/α-1A選擇性激動劑。
可用於預防或減輕眼病的局部眼用組合物包括，但不限於，滴眼液、眼藥膏、眼凝膠和眼膏。這樣的眼用組合物易於有效地施用和遞送活性激動劑。一個非限制性的、示例的局部眼用組合物的組分如下表1所示。
表1


如果需要，可用於本發明方法中的眼用組合物中可以包括防腐劑。該防腐劑可以是，但不限於，苯扎氯銨、氯代丁醇、硫柳汞、醋酸苯汞以及硝酸苯汞。可用於局部眼用組合物的賦形劑包括，但不限於，聚乙烯醇、聚乙烯吡咯酮(povidone)、羥丙基甲基纖維素、泊洛沙姆(poloxamer)、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素以及純水。
如果需要，根據本發明的方法給藥以預防或減輕眼病、且沒有伴隨的鎮靜作用的眼用組合物中還可以包括張力調節劑。該張力調節劑可以是，但不限於，鹽例如氯化鈉、氯化鉀，甘露醇或甘油，或其它可藥用的或可眼用的張力調節劑。
多種調節pH值的緩衝劑以及方法可用於製備用於本發明的眼用組合物，條件是得到的製劑是可眼用的。這樣的緩衝劑包括，但不限於，醋酸鹽緩衝劑、檸檬酸鹽緩衝劑、磷酸鹽緩衝劑以及硼酸鹽緩衝劑。可以理解的是，根據需要可以使用酸或鹼調節所述組合物的pH值。可用於製備眼用組合物的可眼用的抗氧化劑包括，但不限於，偏亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、乙醯半胱氨酸、丁基化羥基茴香醚以及丁基化羥基甲苯。
本發明的方法通過將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象實施。在本說明書中涉及α-2A/α-1A選擇性激動劑時，所使用的術語「通過外周給藥」或「外周給藥」指的是將α-2A/α-1A選擇性激動劑引入研究對象的中樞神經系統之外。這樣，外周給藥包括除直接向脊柱或腦給藥之外的其它任何給藥路線。
可以通過多種方法將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，所述方法取決於，例如，待預防或減輕的疾病或慢性痛的類型，藥物製劑，以及研究對象的病史、風險因素和症狀。適合於本發明方法的外周給藥路線包括全身給藥和局部給藥。作為非限制性的例子，有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑可以口服；腸道外給藥；通過皮下泵給藥；通過皮膚貼片給藥；通過靜脈注射、關節內注射、皮下注射或肌肉注射給藥；通過局部滴劑、乳膏、凝膠或藥膏給藥；以植入用或注射用緩釋製劑的方式給藥；或通過皮下微泵或其它植入裝置給藥。
本領域技術人員理解，外周給藥可以是局部或全身給藥。局部給藥導致遞送至局部給藥部位及其附近的α-2A/α-1A選擇性激動劑顯著多於遠離給藥部位的區域。全身給藥導致α-2A/α-1A選擇性激動劑的遞送基本上遍及研究對象的至少整個外周系統。
可用於本發明方法的外周給藥路線包括，但不限於，口服、局部給藥、靜脈注射或其它注射，以及植入微泵或其它緩釋裝置或製劑。α-2A/α-1A選擇性激動劑可以非限制性地以以下方式進行外周給藥任何可接受形式的口服，例如片劑、丸劑、膠囊、粉劑、液體、懸浮液、乳液等；氣溶膠；栓劑；靜脈注射、腹膜內注射、肌肉注射、皮下注射或非經腸注射；經皮擴散或電泳；任何可接受形式的局部給藥，例如滴劑、乳膏、凝膠或藥膏；以及通過微泵或其它植入的緩釋裝置或製劑。α-2A/α-1A選擇性激動劑可任選地包裝為單位劑型，以適合於精確劑量的單劑給藥，或包裝為緩釋劑型，以適合於持續控制給藥。
慢性疼痛和其它慢性疾病，例如但不限於慢性神經疾病，可按需採用多種重複或持續給藥方式中的任意一種進行預防或減輕，且沒有伴隨的鎮靜作用。在本發明的用於預防或減輕慢性痛或其它慢性疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法中，用於重複或持續外周給藥的方法包括，但不限於，重複口服或局部給藥，以及通過皮下微泵給藥。作為非限制性的例子，本發明的方法可以通過植入輸注(infusion)微泵而持續靜脈給藥實施，或使用緩釋製劑實施。
可以理解的是，緩釋製劑可用於本發明方法中，以預防或減輕慢性痛或其它慢性疾病，例如但不限於慢性神經變性疾病。還可以理解的是，給藥頻率和持續時間部分地取決於所需的預防作用或減輕程度，以及選擇性激動劑的半衰期，且多種給藥路線可用於遞送緩釋製劑，如上所述。
α-2A/α-1A選擇性激動劑可通過多種方法外周給藥至研究對象，以預防或減輕眼病，所述方法部分地取決於待給予的選擇性激動劑的特徵以及研究對象的病史、風險因素和症狀。在本發明的方法中適合於預防或減輕眼病的外周給藥路線包括全身和局部給藥。在具體的實施方案中，一種含α-2A/α-1A選擇性激動劑的藥用組合物通過局部給藥，或通過局部注射給藥，或由眼內或眼周植入體釋放。
根據本發明的方法可用於預防或減輕眼病的全身和局部給藥路線包括但不限於，口腔管飼(oral gavage)；靜脈注射；腹膜內注射；肌肉注射；皮下注射；經皮擴散以及電泳；局部滴眼液和藥膏；眼周和眼內注射，包括結膜下注射；緩釋裝置例如局部植入緩釋裝置；以及眼內和眼周植入體，包括生物可侵蝕的或基於貯存器(reservoir-based)的植入體。
在一個實施方案中，本發明的預防或減輕眼病的方法通過將含α-2A/α-1A選擇性激動劑的眼用組合物局部給藥到眼睛來實施。α-2A/α-1A選擇性激動劑可以例如以眼用溶液(滴眼液)的形式給藥。在另一個實施方案中，將含α-2A/α-1A選擇性激動劑的眼用組合物直接注射到眼內。在再一個實施方案中，含α-2A/α-1A選擇性激動劑的眼用組合物從眼內或眼周植入體釋放，例如從生物可侵蝕的或基於貯存器的植入體釋放。
如上所述，含α-2A/α-1A選擇性激動劑的眼用組合物可通過眼內或眼周植入體進行局部給藥，所述植入體包括但不限於生物可侵蝕的或基於貯存器的植入體。本說明書中使用的術語「植入體」指的是任何在植入後不從植入部位發生明顯遷移的材料。植入體可以是生物可降解的、非生物可降解的(non-biodegradable)或由生物可降解材料和非生物可降解材料組成；如果需要，非生物可降解植入體可以包括適於再裝的貯存器。可用於本發明的預防或減輕眼病的方法的植入體包括，例如貼片、顆粒、薄片、板、微膠囊等，且可以是能與所選植入部位相容的任何形狀和尺寸，所述植入部位可以是，但不限於，眼睛的後房、前房、脈絡膜上或結膜下。可以理解的是，可用於本發明的植入體通常在一較長時間段內，以有效劑量將植入的藥用組合物釋放到研究對象的眼部。多種適合於眼釋放的眼用植入體和緩釋製劑在本領域是公知的，如例如美國專利No.5,869,079和5,443,505中所述。
以下實施例用於解釋而不是限制本發明。
實施例1具有不同的感覺超敏反應機理的小鼠模型該實施例表明，α-2A和α-2C基因敲除小鼠的交感緊張的增加提高了α-1受體激活對觸覺超敏感性的誘導。
A.硫前列酮-苯腎上腺素引起的觸覺超敏感性的不同機理為了分析交感神經系統對感覺超敏反應的貢獻，開發了具有不同的感覺超敏反應機理的小鼠模型。在對小鼠進行誘導試劑的鞘內注射或腹膜內注射後，通過對畫刷輕觸小鼠脅部時其反應進行評分，測定小鼠的觸覺超敏感性。為了模仿增加的交感緊張，注射一種α-1腎上腺素能受體激動劑—苯腎上腺素。如圖1a和1b所示，苯腎上腺素的鞘內(i.t.)或腹膜內(i.p.)給藥引起觸覺超敏感性，從3ng i.t.和3ng/kg i.p.的劑量起開始觀察到明顯反應。觸覺超敏感性的誘導依賴於α-1受體，這已被α-1受體拮抗劑5-甲基烏拉地爾(5-MU)在腹膜內注射時阻止超敏反應的能力所證實。
還檢測了合成的EP1/EP3受體選擇性前列腺素激動劑—硫前列酮—的活性。如圖1c所示，鞘內注射的硫前列酮劑量的增加引起劑量依賴的觸覺超敏感性；100至200ng的劑量引起明顯的超敏反應。特異性的EP1受體拮抗劑的同時給藥完全阻止了硫前列酮引起的觸覺超敏感性，表明硫前列酮通過EP1受體的激活介導觸覺超敏感性。
在第三個小鼠模型中，通過鞘內注射劑量漸增的NMDA來引起化學敏感，所述NMDA可以激活後突觸背角神經元(dorsal horn neuron)上的NMDA通道(Woolf等，Science2881765-1769(2000))。鞘內NMDA導致劑量依賴的觸覺超敏感性，在劑量為100ng時具有最大效果。如圖1d所示，超敏感性被NMDA拮抗劑二甲金剛胺阻止。
為了確定所述三種刺激物是否通過不同的機理使感覺通道敏化，檢測了一組藥劑預防或減輕觸覺超敏感性的能力。如表2所示，每種受體拮抗劑(5-MU、EP1受體拮抗劑或二甲金剛胺)僅阻止由相應的受體激動劑(分別為苯腎上腺素、硫前列酮或NMDA)所導致的觸覺超敏感性。也檢測了臨床上用於通過降低脊髓敏感性而減輕神經變性疼痛的加巴噴丁阻止觸覺超敏感性的能力。加巴噴丁阻止由硫前列酮和NMDA引起的觸覺超敏感性，而不阻止由苯腎上腺素引起的觸覺超敏感性，進一步表明了不同的刺激物涉及的感覺通道不同。

α-2基因敲除小鼠由Brian Kobilka博士提供(史丹福大學；Link等，Mol.Pharmacol.4848-55(1995)；Altman等，Mol.Pharmacol.56154-161(1999))。α-2基因敲除小鼠具有C57BL/6背景，並由純合基因敲除小鼠繁殖對(breeding pairs)繁殖。年齡和性別匹配的C57BL/6野生型小鼠用作對照。將硫前列酮(Cayman Chemical；AnnArbor，密西根)和NMDA(Sigma；St Louis，MO)溶於二甲亞碸(DMSO)中。將基本上按美國專利No.5,843,942所述合成的EP1受體拮抗劑
以及加巴噴丁(Victor Medical；Irvine，CA)溶於50％DMSO、50％鹽水中。二甲金剛胺(1-氨基-3，5二甲基金剛烷鹽酸鹽)是公知的抗病毒劑金剛胺(1-金剛烷胺鹽酸鹽)的類似物，基本按美國專利No.5,061,703所述合成(另外參見Schneider等，Dtsch Med.Wochenschr.109987(1984))。5-甲基烏拉地爾、溴莫尼定、苯腎上腺素、可樂定和呱乙啶從Sigma獲得，並溶於鹽水中。將哌唑嗪(Sigma)和替扎尼定(Biomol；Plymouth Meeting，PA)溶於蒸餾水中。
按以下所述進行藥物的脊椎注射。對小鼠(20～30g)按Hylden和Wilcox，Eur.J.Pharmacol.67313-316(1980)中所述進行鞘內注射。簡單地說，將安裝於微型注射器上的30規格1/2英寸的無菌針頭插入L5和L6脊骨之間。一隻手通過骨盆帶牢牢握住小鼠，同時另一隻手握住注射器，注射器在脊柱之上成大約20B角。將針頭插入L6棘突一側的組織中，進入棘突和橫突之間的槽中。將針頭的角度減小為約10B，並使針頭緩慢進入到椎骨間，直到感覺到裂開聲，且尾巴出現明顯的蜿蜒運動。將每種化合物以5μl的量緩慢注射到蛛網膜下空間，並且都以多種劑量進行測試。最小有效劑量用於隨後的所有實驗。
通過對小畫刷輕觸小鼠脅腹(正常情況下是不疼的)時其反應進行評分，將對輕觸的敏感性量化。注射後15到50分鐘內，每5分鐘按以下標準對小鼠進行一次評分對表現出強烈的逃跑反應，並尖叫和咬畫刷的小鼠給「2」分；對表現出適度的尖叫並試圖逃跑的小鼠給「1」分；對畫刷的輕觸沒有反應的小鼠給「0」分。將分數相加，得到0到16之間的累積分，如Minami等，Pain57217-223(1994)中所述。體內測試顯著性的統計計算採用雙尾學生t-檢驗(two-tailedStudents t-test)。
B.α-2A和α-2C基因敲除小鼠的交感緊張的增加，提高了小鼠對α-1受體激活引起觸覺超敏感性的敏感性為了確定交感緊張是否能夠影響對感覺超敏反應的易感性，將α-2A和α-2C基因敲除小鼠對觸覺超敏感性的化學誘導的敏感性與野生型小鼠的敏感性進行了比較。當與野生型對照進行對比時，α-2A和α-2C基因敲除小鼠沒有表現出基線(baseline)觸覺超敏感性。首先，在基因敲除小鼠和野生型小鼠中，對引起觸覺超敏感性的苯腎上腺素的濃度進行比較。如圖2所示，在α-2A和α-2C基因敲除小鼠中都存在苯腎上腺素劑量應答的顯著左移。該結果表明，苯腎上腺素引起觸覺超敏感性的能力在α-2基因敲除小鼠系(mouse line)中得到提高，在α-2C基因敲除小鼠中提高得更多。具體地說，與野生型小鼠系中引起觸覺超敏感性的大劑量—30ng/kg苯腎上腺素相比，0.1和0.3ng/kg的苯腎上腺素分別在α-2C和α-2A基因敲除小鼠中引起最大的超敏感性。圖2進一步表明，野生型小鼠中的平緩的兩階段的劑量應答在兩個基因敲除小鼠系中都變為更陡峭的劑量應答。
呱乙啶的全身給藥通過消耗交感末梢的去甲腎上腺素而導致功能交感神經切除(functional sympathectomy)。為了檢驗苯腎上腺素劑量應答曲線的移動是否是由於α-2基因敲除小鼠中交感緊張的增加，通過呱乙啶處理(50mg/kgi.p.)對α-2A基因敲除小鼠進行化學交感神經切除，並在24至30小時後檢測苯腎上腺素引起的敏感性。在呱乙啶處理的α-2A小鼠中，苯腎上腺素引起的增加的敏感性被部分消除，使得劑量應答類似於在野生型小鼠中觀察到的兩階段的劑量響應(見圖2)。這些結果證實，α-2A基因敲除小鼠中交感緊張的增加提高了感覺超敏反應。
呱乙啶交感神經切除基本按以下所述進行。對動物腹膜內注射50mg/kg呱乙啶(Malmberg和Basbaum，Pain76215-222(1998))，24小時後檢測基線觸覺敏感性。對於表現出正常的觸覺敏感性的動物，檢測其對觸覺超敏感性的化學誘導的敏感性。小鼠在6至8天後從交感神經切除中恢復過來，表現為回復到交感神經切除前的應答性。
C.交感神經系統提高硫前列酮引起的觸覺超敏感性為了確定是否基因敲除小鼠對初級傳入的敏化更敏感，將硫前列酮以漸增的濃度鞘內注射到野生型和α-2基因敲除小鼠中。如圖3所示，野生型小鼠和α-2C基因敲除小鼠中硫前列酮的劑量應答相同，但在α-2A基因敲除小鼠中劑量應答左移。具體地說，30ng的劑量在α-2A基因敲除小鼠中具有最大效果，與之相比，在野生型小鼠和α-2C基因敲除小鼠中，100ng是引起部分超敏感性的劑量，而最大劑量是200ng。呱乙啶(50mg/kg i.p.)化學交感神經切除降低了α-2A基因敲除小鼠對硫前列酮的敏感性。如圖3所示，在用呱乙啶處理的α-2A基因敲除小鼠中，硫前列酮引起的觸覺超敏感性的劑量應答向右移動了大約10倍。這些結果表明，交感神經系統提高了硫前列酮敏化。
D.交感神經系統對NMDA引起的觸覺超敏感性沒有貢獻為了確定α-2基因敲除小鼠是否對NMDA引起的背角敏化更敏感，向野生型小鼠和α-2基因敲除小鼠注射各種濃度的NMDA。如圖4所示，α-2A和α-2C基因敲除小鼠不比野生型小鼠對NMDA更敏感。這些結果表明，交感神經系統對NMDA引起的觸覺超敏感性沒有貢獻。
總之，這些結果表明，α-2基因敲除小鼠表現出升高的交感神經活性水平，還表明，這些小鼠表現出對刺激的部位和方式具有特異性的增強的敏化。
實施例2α-2激動劑溴莫尼定和可樂定的活性的比較該實施例表明，α-腎上腺素能激動劑減輕由交感神經系統增強的感覺超敏反應的能力不同。
A.溴莫尼定減輕交感神經增強的觸覺超敏感性，而可樂定不能脊髓給藥的α-2腎上腺素能激動劑通過脊髓α-2A受體減輕神經病變性疼痛。為了確定α-2基因敲除小鼠中提高的交感活性是否改變α-2激動劑的止痛活性，檢測了幾種激動劑的活性。首先在NMDA模型中檢測了α-2激動劑溴莫尼定和可樂定，在所述模型中，敏化不受基因敲除小鼠的基礎交感緊張的影響。NMDA與可樂定或溴莫尼定的共同給藥在野生型和α-2C基因敲除小鼠中(分別見圖5a和圖5c)導致觸覺超敏感性的完全抑制。正如所預期，可樂定和溴莫尼定都不在α-2A基因敲除小鼠中抑制NMDA引起的觸覺超敏感性，這與前述研究所表明的脊髓α-2A腎上腺素能受體亞型介導α-2腎上腺素能激動劑的止痛作用相一致(Lakhlani等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA949950-9955(1997)；Stone等，J.Neurosci.177157-1765(1997)；Hunter等，Br.J.Pharmacol.1221339-1344(1997))。在硫前列酮引起的觸覺超敏感性模型中也觀察到相同模式的溴莫尼定止痛活性，即對交感緊張敏感(見圖5b和圖5d)。相反，用可樂定得到的結果明顯不同可樂定在野生型小鼠中是止痛的，但在α-2A或α-2C基因敲除小鼠中不是(比較圖5b和圖5d)。這些結果表明，α-2全激動劑在交感神經增強疾病中可具有不同的活性，溴莫尼定表現出活性而可樂定無活性。
B.溴莫尼定在減輕硫前列酮引起的超敏感性並且無鎮靜作用，而可樂定或替扎尼定不能鎮靜作用限制了很多藥物、包括α-2激動劑的使用。因此，對α-2激動劑進行了比較，以檢測是否在導致感覺超敏反應減輕的劑量和導致鎮靜作用的劑量之間存在差別。
對於三種α-2激動劑(替扎尼定、可樂定和溴莫尼定)，分別在運動活性和硫前列酮引起的觸覺超敏感性模型中，以不同的劑量比較了其鎮靜作用和阻止觸覺超敏感性的能力。在腹膜內給藥後15至50分鐘內，每5分鐘對每組5至6隻小鼠的觸覺超敏感性進行評分。賦形劑處理的小鼠通常具有大約4分。此外，在腹膜內給藥後5至30分鐘內，每5分鐘對每組5至6隻小鼠的運動活性進行評分。將相對於賦形劑處理的動物的運動活性表示為百分數；鎮靜百分比按100％減去運動活性百分比計算。如圖6所示，所檢測的三種α-腎上腺素能激動劑中，只有溴莫尼定產生了可與鎮靜作用分離的止痛作用。這些結果表明，在沒有伴隨的鎮靜作用的情況下減輕交感神經增強疾病、例如硫前列酮引起的觸覺超敏感性的能力上，溴莫尼定不同於其它α-2全激動劑例如可樂定和替扎尼定。
C.α腎上腺素能全激動劑不同的α-2對α-1功能選擇性在採用穩定表達α-2A、α-2C、α-1A和α-1B受體的細胞系的檢測中，分析了溴莫尼定和可樂定的α-腎上腺素能受體的藥理學特徵(pharmacological profile)。
與前述研究一致，在穩定表達α-2A或α-2C受體的PC12細胞中，對毛喉素誘導cAMP累積的抑制的效能的順序(圖7a、b；表3)為美託咪定≥溴莫尼定＞可樂定＞替扎尼定≥苯腎上腺素(Jasper等，Biochem.Pharmacol.551035-1043(1998)；Pihlavisto等，Eur.J.Pharmacol.385247-253(1999))。溴莫尼定、可樂定和替扎尼定在α-2A受體上的效能大約比在α-2C受體上的效能大10倍。
對上述化合物在穩定表達α-1A和α-1B受體的HEK293細胞中刺激α-1介導的細胞內鈣增加的能力進行了功能檢測(圖7c、d；表3)。在α-1A和α-1B受體上的效能的順序為苯腎上腺素＞可樂定＞替扎尼定＝美託咪定＞溴莫尼定。α-2激動劑可樂定、替扎尼定和美託咪定是部分激動劑，而溴莫尼定在α-1A受體上表現出弱的活性，在α-1B受體上沒有活性。這樣，雖然可樂定和替扎尼定在前面的結合檢測中被表徵為「α-2選擇性」激動劑，但這些化合物在功能檢測中表現出對α-2和α-1受體激活之間的選擇性小於10倍。相反，美託咪定在功能檢測中具有大約300倍的選擇性，而選擇性最高的化合物溴莫尼定表現出相對於α-1受體而言對α-2受體的選擇性大於1000倍(見表3)。這些結果表明，溴莫尼定是高度選擇性的α-2/α-1激動劑，且溴莫尼定的α-2/α-1選擇性與其它全激動劑例如可樂定的選擇性形成對比。
可樂定和溴莫尼定的α-2/α-1選擇性的差別表明，在硫前列酮模型中，可樂定的α-1激動劑活性可以增加α-2C基因敲除小鼠的提高的交感緊張，並掩蔽可樂定的止痛活性。這些結果被α-1拮抗劑哌唑嗪與可樂定的共同給藥能夠恢復可樂定在α-2C基因敲除小鼠中的止痛活性所支持(圖7e)。哌唑嗪自身在野生型或α-2C基因敲除小鼠中沒有止痛活性。
總之，這些結果表明，在α-2C基因敲除小鼠中，可樂定的止痛活性的損失是由於可樂定的α-1激動劑活性，而溴莫尼定不存在該情況；還表明，很多「α-2激動劑」的α-1激動劑活性能限制它們治療與壓力相關的或其它交感神經增強的疾病的能力。
表達腎上腺素能受體的穩定細胞系按如下方法建立。將牛α-1A、倉鼠α-1B、人類α-2A以及人類α-2C受體cDNA平頭亞克隆到反轉錄病毒載體pCL BABE Puro中的NheI-EcoRI位點。通過雙鏈DNA測序對反轉錄病毒構建體(construct)進行驗證。通過用合適的反轉錄病毒載體以及pMD.G(一種水泡性口膜炎病毒包膜蛋白VSV-G的表達載體)共轉染HEK293GP(一種穩定表達Maloney白血病病毒Gag-Pol的HEK293細胞系)，產生高滴度的假型反轉錄病毒顆粒。轉染16小時之後將培養基(DMEM，10％FCS)更換；48小時後收穫高滴度(～1×106pfu/mL)的培養基。將上清液通過0.4μM過濾器過濾。
將人類α-2A和α-2C受體上清液以不同的量加入原初PC12細胞中，然後培養48小時。將轉導細胞群以較低的密度再鋪平板(replate)，並在含100μg/ml嘌呤黴素的培養基中生長。在三天內將未轉導的細胞殺死，在兩個月內生長出單細胞灶。挑取細胞灶並擴增，通過溴莫尼定放射性配體結合檢測受體密度。功能α-2受體活性通過抑制毛喉素誘導的cAMP累積所證實。
將牛α-1A和倉鼠α-1B受體上清液以不同的量加入原初HEK293細胞中，然後培養48小時。將轉導細胞群以較低的密度再鋪平板，並在含0.25μg/ml嘌呤黴素的培養基中生長。三天內明顯有大量細胞死亡，兩周內出現單細胞灶。挑取細胞灶並擴增後，通過測定苯腎上腺素誘導細胞內Ca+2累積，來對擴增後的亞克隆的α-1受體表達進行功能檢測。在哌唑嗪放射性配體結合檢測中測定受體密度。
細胞內Ca+2應答按如下所述在穩定表達牛α-1A或倉鼠α-1B腎上腺素能受體的HEK293細胞中測定。在使用前一天，於含有10％的熱滅活致死胎牛血清、1％的抗生素-抗黴菌素以及0.25ug/ml嘌呤黴素的0.2ml DMEM中，將細胞塗敷至塗布有聚D-賴氨酸的96孔板中，每孔40,000到50,000個細胞。用補充有10mM HEPES、2.0mM CaCl2和2.5mM羧苯磺胺(probenicid)的HBSS洗滌細胞兩次，然後用4μMFluo-4(Molecular Probes；Eugene，Oregon)在37BC培養60分鐘。衝洗板上的細胞外染料兩次，然後將板放入螢光成像板讀取器(FLIPR；Molecular Devices；Sunnyvale，California)中。將配體稀釋於HBSS中，並等分到96孔微板中。將藥物在0.64nM到10,000nM的濃度範圍內檢測。在任意螢光單位(fluorescence unit)中得到Ca+2應答數據。
細胞內cAMP測定按如下所述進行。在補加有10％的馬血清、5％的熱滅活致死胎牛血清、1％的抗生素-抗黴菌素以及100μg/ml嘌呤黴素的100μl DMEM中，將穩定表達人類α-2A或人類α-2C腎上腺素能受體的PC12細胞塗敷至塗布有聚-D-賴氨酸的96孔板中，密度為每孔30,000個細胞。細胞在37BC和5％CO2中生長過夜。在細胞中加入等體積的含I BMX(加至最終濃度為1mM)、毛喉素(加至最終濃度為10μM)以及合適的藥物稀釋液(加至最終濃度為10-5M至10-12M之間)的培養基進行給藥。培養10分鐘後，將培養基吸出，並用200μl溶胞緩衝液(Amersham Biosciences；Piscataway，New Jersey)將細胞溶解。在檢測前，板在-20BC條件下存儲至多24小時。使用Biotrak cAMP酶免疫檢測系統(Amersham Biosciences)，根據製造商的使用手冊測定細胞內cAMP。用板讀取器在450nm處對板進行讀數。
採用KaleidaGraph(Synergy Software；Reading，PA)，通過最小二乘法擬合到等式應答＝最大應答+((最小應答-最大應答)/(1+(配體濃度/EC50))，從而產生體外檢測的劑量應答曲線。通過將化合物的最大效果與標準全激動劑的效果相比，得到功效百分比，所述標準全激動劑對於α-1受體是苯腎上腺素，對於α-2受體是溴莫尼定。

實施例4化合物的製備本實施例描述幾種α-2激動劑的製備。
A.化合物1((+)-(S)-4-[1-(2，3-二甲基-苯基)-乙基]-1，3-二氫-咪唑-2-硫酮)的製備 將按Cordi等，Synth.Comm.261585(1996)所述方法製備的(+)-(S)-4-[1-(2，3-二甲基-苯基)-乙基]-1氫-咪唑(美託咪定；2.00g，10.0mmol)在THF(45mL)和水(40mL)中的混合物用NaHCO3(8.4g，100mmol)和氯代甲硫羰酸苯酯(3.7mL，27.4mmol)處理。在室溫下攪拌4小時後，將混合物用水(30mL)和醚(75mL)稀釋。除去有機層，用醚萃取水層(2×50mL)。有機層經MgSO4乾燥並過濾。將殘留物真空濃縮，用MeOH(54mL)稀釋並與NEt3(6.5mL)在室溫下反應16小時。將溶劑真空脫除並代之以30％ CH2Cl12己烷。再次將溶劑脫除並形成固體。在進一步在30％ CH2Cl12己烷中再懸浮後，將固體收集於過濾器中，用CH2Cl12己烷洗滌並真空乾燥，得到化合物1((+)-(S)-4-[1-(2，3-二甲基-苯基)-乙基]-1，3-二氫-咪唑-2-硫酮)1.23g(53％)。
產物的表徵得到以下結果。旋光度[a]D20+14°(c 1.25，在MeOH中)。1H NMR(300MHz，DMSO)d 11.8(s，1H)，11.6(s，1H)，7.03-7.01(m，2H)，6.95-6.91(m，1H)，6.50(s，1H)，4.15(q，J＝6.9Hz，1H)，2.25(s，3H)，2.20(s，3H)，1.38(d，J＝6.9Hz，3H)。
B.化合物2(5-(1氫-咪唑-4-基甲基)-環己-1-烯基-甲醇)的製備方法 按Ciufolini等，J.Amer.Chem.Soc.1138016(1991)中所述方法製備8-(2-苄氧基-乙基)-1，4-二噁-螺[4.5]癸烷(中間體R1；1.02g，3.70mmol)。將該化合物溶於丙酮(100mL)水(5mL)中，並與TsOH(140mg，0.74mmol)在45EC反應5小時。在標準的水性處理(aqueous work-up)之後，將該物料用SiO2色譜純化，得到無色油狀的4-(2-苄氧基-乙基)-環己酮(97％)。
將-78EC的LDA(33mL，1.5M在Et2O中)的THF(50mL)溶液用4-(2-苄氧基-乙基)-環己酮(9.5g，40.2mmol)處理。將該混合物加熱至0EC並保持30分鐘，然後再次冷卻至-78EC並加入HMPA(7mL)。在該混合物中加入氰甲酸甲酯(4.1mL，85mmol)並攪拌15分鐘，然後進行水驟冷(quench)和水性處理。將產物用10％的EtOAc:Hx通過SiO2色譜純化。分離得到5.8g(49％)5-(2-苄氧基-乙基)-2-氧代-環己烷羧酸甲酯，並在-10EC將其用MeOH中的等當量的NaBH4還原。將醇(上述中間體R2)用30至50％的EtOAc:Hx通過SiO2色譜純化(～90％產率)。
在-20EC將5-(2-苄氧基-乙基)-2-羥基-環己烷羧酸甲酯(中間體R2，0.72g，2.48mmol)在吡啶(10mL)中的溶液用SOCl2(0.73mL，12.4mmol)處理。使該混合物反應15分鐘，然後加熱至55EC並保持16小時。真空脫除溶劑，並將殘留物在0EC用醚稀釋。將溶液用水驟冷，並用1M的HCl、5％的NaOH以及鹽水洗滌。將有機物料用MgSO4乾燥、過濾並除去溶劑。將混合物用苯溶解，並在真空下通過共沸蒸餾除水。將殘留物用苯(15mL)溶解，並加入DBU(0.76mL，5mmol)。該混合物在室溫條件下反應30分鐘。經過水性處理後，用20％的EtOAc:Hx通過SiO2色譜分離得到5-(2-苄氧基-乙基)-環己-1-烯羧酸甲酯(中間體R3)(0.56g(82％))。
將中間體R3溶於THF(100mL)中，並將該混合物加入到DIBAL(70mL，1M在環己烷中)的THF(160mL)溶液中，在-35EC保持35分鐘。將該混合物用Rochelle鹽溶液驟冷，並用醚萃取。乾燥後的殘留物用30％的EtOAc:Hx通過SiO2色譜純化，得到4.6克(80％)[5-(2-苄氧基-乙基)-環己-1-烯基]-甲醇。將該醇(4.0g，18.7mmol)的DMF(60mL)溶液在室溫條件下依次用三乙胺(3mL)和TBSC1(3.0g，22.4mol)處理20分鐘。通過水性處理分離得到殘留物，並用色譜純化，得到[5-(2-苄氧基-乙基)-環己-1-烯基甲氧基]-叔丁基-二甲基-矽烷(中間體R4)3.6g(63％)。
將THF(20mL)中的苄基保護的醇(中間體R4)(2.0g，5.55mmol)冷卻至-70EC，並將NH3冷凝於該燒瓶中(～20mL)。加入Na塊，並將該混合物在-70EC攪拌15分鐘。將混合物加熱至-30EC並保持20分鐘，用NH4Cl驟冷，並萃取分離。將殘留物用25％的EtOAc:Hx通過SiO2色譜純化(99％)。將該醇通過標準的「Swern」方案氧化。將該醇，即2-[3-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧甲基)-環己-3-烯基]-乙醇(1.3g，4.8mmol)在-78EC加入到乙二醯氯(3.55mL，7.1mmol)的CH2Cl2(30mL)和DMSO(0.63mL，8.9mmol)溶液中。40分鐘後加入NEt3(2.51mL)，並將混合物加熱至室溫。在標準水性處理和純化後，分離得到[3-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧甲基)-環己-3-烯基]-乙醛(中間體R5)(～95％)。
以下製備根據的是Horne等，Heterocycles39139(1994)中的方法。將所述乙醛(中間體R5，0.34g，1.3mmol)的EtOH(5mL)溶液用甲苯磺醯基甲基異氰(TosMIC；Aldrich；0.25g；1.3mmol)和NaCN(～15mg，cat)處理，並在室溫條件下攪拌20分鐘。真空脫除溶劑；將殘留物溶解於～7M的於MeOH中的NH3中，並轉移到可再密封管(resealable tube)中，然後在100EC加熱15小時。將混合物濃縮，並用5％的MeOH(sat.w/NH3)CH2Cl2通過SiO2色譜純化。產物於THF和TBAF(1.5eq.)中的溶液經過水性處理之後，在室溫條件下攪拌。粗產物經色譜分離(5-7％NH3/MeOH在CH2Cl2中)並記為化合物2。
化合物2的表徵得到以下結果。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)7.52(s，1H)，6.72(s，1H)，5.54(brs，1H)，3.73(s，2H)，2.46(d，J＝6Hz，2H)，1.5-2.1(m，6H)，1.0-1.55(m，1H)。
實施例5一種α-2/α-1功能選擇性大於溴莫尼定的α-2激動劑的表徵該實施例表明，受體接近功能檢測中的α-2A/α-1A選擇性與體內非鎮靜活性相關。
A.幾種α-2激動劑的α-2/α-1功能選擇性將溴莫尼定、美託咪定、化合物1以及化合物2的α-1A和α-2A腎上腺素能接近受體功能活性進行比較。溴莫尼定從Sigma獲得；美託咪定採用CorDI等，Supra，1996中所述方法製備；化合物1和化合物2按上述實施例4中所述方法合成。為評價α-1A活性，如上所述，對上述化合物刺激HEK293細胞的細胞內鈣增加的能力進行功能測試，所述細胞穩定表達牛α-1A受體。如實施例3中所述，以全激動劑苯腎上腺素為基準確定α-1A相對功效。如表4中所總結，美託咪定和化合物2的α-1A相對功效大於溴莫尼定，而化合物1的α-1A相對功效非常低，而在該檢測中無法測到。


通過檢測穩定表達人類α-2A受體的PC12細胞中毛喉素誘導cAMP累積的抑制，對同樣化合物的接近α-2A功能進行了功能檢測。細胞內cAMP水平採用實施例3中所述Biotrak cAMP酶免疫測定系統進行測定。將α-2A cAMP抑制的EC50表達為對α-1A EC50的比，以給出α-1A/α-2A效能比。如表4所示，化合物2具有比溴莫尼定更高的α-1A/α-2A效能比，表明該化合物相對於α-1A受體對α-2A受體的選擇性比溴莫尼定更高。由於檢測不到化合物1的α-1A活性水平，因而不能確定其效能比。這些結果表明，相對於α-1A受體，化合物1和2對α-2A受體的激活具有高度選擇性。此外，雖然美託咪定的α-2A效能比溴莫尼定高(見上表3)，但美託咪定的α-2A/α-1A選擇性比溴莫尼定低(表4，最後一列)。所檢測的化合物的α-2A/α-1A功能選擇性的順序是化合物2＞溴莫尼定＞美託咪定。如上所述，由於檢測不到化合物1的α-1A活性水平，因而不能確定其α-1A/α-2A EC50比。
B.體內功效和鎮靜效果除上述基於細胞的檢測之外，還對不同劑量的多種α-2激動劑減輕硫前列酮引起的觸覺超敏感的能力以及鎮靜活性進行了檢測。按如上所述檢測硫前列酮引起的觸覺超敏感性並計算平均總敏感分數。檢測運動活性並將其表示為相對於賦形劑處理的動物的百分比；鎮靜百分比按100％減去運動活性百分比計算。
如圖8所示(左上框)，當劑量比使硫前列酮敏感降低50％的劑量100μg/kg大10倍時，溴莫尼定具有60％的鎮靜作用。此外，如圖8所示(右上框)，當劑量比使敏感分數降低50％所需劑量大10倍時，美託咪定具有完全的鎮靜作用。相反，以劑量1μg/kg口服化合物1使敏感分數降低50％(實線，左軸)，而在比1μg/kg的劑量大100倍甚至1000倍的劑量下只有小於30％的鎮靜作用(空心菱形，右軸)(見圖8，左下框)，將化合物1在腹膜內給藥也得到相似的結果。將化合物2在腹膜內給藥，也在劑量為10μg/kg時使敏感分數降低50％(實線，左軸)，且比該劑量大10倍的劑量具有小於30％的鎮靜作用。這樣，具有極低(檢測不到)α-1A相對功效的化合物1在外周給藥時能夠減輕觸覺超敏感性，且沒有伴隨的鎮靜作用。類似地，α-1A/α-2A效能比大於溴莫尼定的化合物2在外周給藥時也能夠減輕觸覺超敏感性，且沒有伴隨的鎮靜作用。
總之，這些結果表明，在基於細胞的體外功能檢測中，α-2激動劑以治療劑量全身給藥或通過其它方式外周給藥後，其α-2A/α-1A腎上腺素能受體功能選擇性與缺乏鎮靜活性有關。這些結果進一步表明，特別有用的α-2激動劑是那些α-2A/α-1A腎上腺素能受體功能選擇性類似於或好於溴莫尼定的選擇性的激動劑。
上述所有期刊文章、參考書以及專利引用，無論是否在括號內，無論之前是否聲明，其全部內容通過引用的方式納入本說明書中。
雖然結合上述實施例對本發明進行了說明，應當理解的是，可以做出多種修改而不背離本發明的主旨。因此，本發明僅由權利要求限制。
權利要求
1.預防或減輕交感神經增強疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法包括將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，以預防或減輕所述交感神經增強疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。
2.權利要求1的方法，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效。
3.權利要求1的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2A EC50比至少比溴莫尼定大30％。
4.權利要求1的方法，其中所述有效藥劑的α-1A/α-2A EC50比至少比溴莫尼定大2倍。
5.權利要求1的方法，其中所述有效藥劑的α-1A/α-2A EC50比至少比溴莫尼定大10倍。
6.權利要求1的方法，其中所述疾病是感覺超敏反應。
7.權利要求6的方法，其中所述疾病是與頭痛相關的感覺超敏反應。
8.權利要求7的方法，其中所述疾病是與偏頭痛相關的感覺超敏反應。
9.權利要求1的方法，其中所述疾病是胃腸疾病。
10.權利要求9的方法，其中所述胃腸疾病是應激性腸道症候群。
11.權利要求9的方法，其中所述胃腸疾病是消化不良。
12.權利要求1的方法，其中所述疾病是皮膚病。
13.權利要求12的方法，其中所述皮膚病是牛皮癬。
14.權利要求1的方法，其中所述疾病是心血管障礙。
15.權利要求14的方法，其中所述疾病是心動過速。
16.權利要求1的方法，其中所述疾病是外周血管收縮障礙。
17.權利要求1的方法，其中所述疾病是恐慌發作。
18.權利要求1的方法，其中所述疾病是代謝障礙。
19.權利要求18的方法，其中所述代謝障礙是II型糖尿病。
20.權利要求18的方法，其中所述代謝障礙是胰島素抗性。
21.權利要求18的方法，其中所述代謝障礙是肥胖症。
22.權利要求1的方法，其中所述疾病是肌肉收縮障礙。
23.權利要求22的方法，其中所述肌肉收縮障礙是骨骼肌收縮障礙。
24.權利要求22的方法，其中所述肌肉收縮障礙是平滑肌收縮障礙。
25.權利要求22的方法，其中所述肌肉收縮障礙是痙攣。
26.權利要求22的方法，其中所述肌肉收縮障礙與緊張型頭痛相關。
27.權利要求1的方法，其中所述疾病是行為失常。
28.權利要求1的方法，其中將所述有效量口服給藥。
29.權利要求1的方法，其中將所述有效量局部給藥。
30.權利要求1的方法，其中將所述有效量通過貼片給藥。
31.預防或減輕慢性痛、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，以預防或減輕所述慢性痛，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。
32.權利要求31的方法，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效。
33.權利要求31的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大30％。
34.權利要求31的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大2倍。
35.權利要求31的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大10倍。
36.權利要求31的方法，其中所述慢性痛是神經病變性疼痛。
37.權利要求36的方法，其中所述神經病變性疼痛與糖尿病性神經病變相關。
38.權利要求36的方法，其中所述神經病變性疼痛與皰疹後神經痛相關。
39.權利要求31的方法，其中所述慢性痛與腫瘤相關。
40.權利要求31的方法，其中所述慢性痛是術後疼痛。
41.權利要求41的方法，其中所述慢性痛是異常性疼痛。
42.權利要求41的方法，其中所述異常性疼痛是纖維肌疼痛。
43.權利要求31的方法，其中所述慢性痛與複雜性局部疼痛症候群(CRPS)相關。
44.權利要求31的方法，其中所述慢性痛是內臟痛。
45.權利要求44的方法，其中所述內臟痛與應激性腸道症候群相關。
46.權利要求44的方法，其中所述內臟痛與痛經相關。
47.權利要求31的方法，其中所述慢性痛與頭痛相關。
48.權利要求47的方法，其中所述頭痛是偏頭痛。
49.權利要求47的方法，其中所述頭痛是非血管性的。
50.權利要求47的方法，其中所述頭痛是叢集性頭痛或日常緊張性頭痛。
51.權利要求31的方法，其中所述慢性痛是肌肉痛。
52.權利要求51的方法，其中所述肌肉痛與背痙攣相關。
53.權利要求31的方法，其中將所述有效量口服給藥。
54.權利要求31的方法，其中將所述有效量局部給藥。
55.權利要求31的方法，其中將所述有效量通過貼片給藥。
56.預防或減輕神經疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，以預防或減輕所述神經疾病，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。
57.權利要求56的方法，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效。
58.權利要求56的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大30％。
59.權利要求56的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大2倍。
60.權利要求56的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大10倍。
61.權利要求56的方法，其中所述神經疾病是急性神經疾病。
62.權利要求61的方法，其中所述急性神經疾病是中風。
63.權利要求61的方法，其中所述急性神經疾病是頭或脊髓損傷。
64.權利要求61的方法，其中所述急性神經疾病是癲癇發作。
65.權利要求56的方法，其中所述神經疾病是慢性神經疾病。
66.權利要求56的方法，其中所述慢性神經疾病是神經變性疾病。
67.權利要求66的方法，其中所述神經變性疾病是阿爾茨海默病。
68.權利要求66的方法，其中所述神經變性疾病是帕金森病。
69.權利要求66的方法，其中所述神經變性疾病是亨廷頓舞蹈病。
70.權利要求66的方法，其中所述神經變性疾病是肌萎縮性側索硬化症或多發性硬化。
71.權利要求66的方法，其中所述神經變性疾病是HIV相關痴呆或HIV相關神經病變。
72.權利要求66的方法，其中所述神經變性疾病是眼病。
73.權利要求72的方法，其中所述眼病是青光眼。
74.權利要求72的方法，其中所述眼病是糖尿病性神經病變。
75.權利要求72的方法，其中所述眼病是與年齡相關的黃斑變性。
76.權利要求65的方法，其中所述慢性神經疾病選自精神分裂症、藥癮、停藥、賴藥性、抑鬱和焦慮。
77.權利要求56的方法，其中將所述有效量口服給藥。
78.權利要求56的方法，其中將所述有效量局部給藥。
79.權利要求56的方法，其中將所述有效量通過貼片給藥。
80.預防或減輕眼病、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法將有效量的α-2A/α-1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，以預防或減輕所述眼病，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比。
81.權利要求80的方法，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效。
82.權利要求80的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大30％。
83.權利要求80的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大2倍。
84.權利要求80的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大10倍。
85.權利要求80的方法，其中所述眼病是青光眼。
86.權利要求80的方法，其中所述眼病是黃斑變性。
87.權利要求80的方法，其中所述眼病是視網膜病變。
88.權利要求87的方法，其中所述視網膜病變是糖尿病性視網膜病變。
89.權利要求80的方法，其中將所述有效量口服給藥。
90.權利要求80的方法，其中將所述有效量局部給藥。
91.權利要求80的方法，其中將所述有效量通過貼片給藥。
92.在外周給藥時預防或減輕交感神經增強疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的α-2A/α-1A選擇性激動劑的篩選方法，所述篩選方法包括確定一種藥劑相對於α-1A受體激活α-2A受體的功能選擇性，其中相對於α-1A受體對激活α-2A受體具有高度選擇性的藥劑是在外周給藥時預防或減輕交感神經增強疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的α-2A/α-1A選擇性激動劑。
93.權利要求92的方法，包括(a)測定所述藥劑對α-2A受體的效能、活性或EC50；以及(b)測定所述藥劑對α-1A受體的效能、活性或EC50，其中具有小於溴莫尼定的α-1A功效或大於溴莫尼定的α-1A/α-2A效能比的藥劑，是預防或減輕交感神經增強疾病、且沒有伴隨的鎮靜作用的α-2A/α-1A選擇性激動劑。
94.權利要求92的方法，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α-1A功效。
95.權利要求92的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大30％。
96.權利要求92的方法，其中所述選擇性激動劑的α-1A/α-2AEC50比至少比溴莫尼定大2倍。
97.權利要求92的方法，其中所述有效藥劑的α-1A/α-2A EC50比至少比溴莫尼定大10倍。
98.權利要求93的方法，其中步驟(a)包括對腺苷酸環化酶活性的抑制的檢測。
99.權利要求98的方法，其中所述腺苷酸環化酶活性的抑制的檢測在穩定表達α-2A的PC12細胞中進行。
100.權利要求99的方法，其中所述PC12細胞穩定表達人類α-2A。
101.權利要求93的方法，其中步驟(b)包括對細胞內鈣的檢測。
102.權利要求101的方法，其中所述細胞內鈣在穩定表達α-1A的HEK293細胞中進行。
103.權利要求102的方法，其中所述HEK293細胞穩定表達牛α-1A。
全文摘要
本發明提供了預防或減輕交感神經增強疾病、神經疾病、眼病和慢性痛、且沒有伴隨的鎮靜作用的方法，所述方法通過將有效量的α－2A/α－1A選擇性激動劑外周給藥至研究對象，從而預防或減輕所述疾病或慢性痛，且沒有伴隨的鎮靜作用，其中所述選擇性激動劑具有小於溴莫尼定的α－1A功效，或大於溴莫尼定的α－1A/α－2A效能比。
文檔編號A61K31/4164GK1878550SQ200480033443
公開日2006年12月13日 申請日期2004年8月19日 優先權日2003年9月12日
發明者D·W·吉爾, J·E·唐奈羅 申請人:阿勒根公司