一種新型抗腫瘤細胞化合物的用途的製作方法

2023-12-09 02:06:21

專利名稱：一種新型抗腫瘤細胞化合物的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及萘醯亞胺類化合物的用途，尤其涉及抗腫瘤細胞化合物Bl化合物用 以耐藥的作用。
背景技術：
化療是治療腫瘤的主要手段之一，腫瘤細胞產生的多藥耐藥已成為當前影響腫瘤 化學治療療效的主要障礙，有關資料統計，90%以上腫瘤患者死因或多或少都與耐藥有關。 近年來，細胞凋亡與多藥耐藥及腫瘤細胞的抗藥性的關係日益受到人們的關注，研究發現 抑制凋亡與耐藥的形成存在一定的關係。細胞凋亡過程受到許多癌基因調控，如P53基因 及Bcl-2家族等。Bcl-2基因為一抑制細胞凋亡的原癌基因，同時也是一種耐藥基因。當 Bcl-2蛋白過度表達時，可引起細胞不死亡或病死率下降的抗凋亡作用，從而對抗藥物的治 療作用，使化療藥物失去效果。即Bcl-2導致耐藥主要是通過抑制腫瘤細胞的凋亡途徑而 完成。促凋亡基因中Bax功能與Bcl-2相反，當Bax增加時自身可形成同源二聚體，致使細 胞凋亡加速，腫瘤細胞對化療藥物敏感性增強。當Bcl-2表達增加，Bax同源二聚體解離， 形成Bcl-2/Bax異源二聚體，抑制了 Bax-Bax同源二聚體的細胞凋亡作用，從而腫瘤細胞對 化療藥物產生耐藥性。臨床上遇到這種情況通常是以更換治療方案為對策(如間斷用藥， 替換用藥，聯合用藥等)，但因為多數患者是多藥耐藥，所以更換方案後往往效果亦不佳，最 終導致化療失敗。因此尋找低毒有效的抗腫瘤細胞耐藥的化合物是提高化療療效的一個重 要方法。萘醯亞胺類化合物Bi，是一種新型的DNA嵌入劑。該化合物已被報導能通過激發 P53基因的信號通路誘導腫瘤細胞周期阻滯及凋亡，達到抗腫瘤的目的。但是，化合物Bl在 抗腫瘤細胞耐藥方面的應用，還未見報導。

發明內容
為了解決上述腫瘤細胞對化療藥物產生耐藥性的問題，本發明的目的是提供了萘 醯亞胺類化合物Bl的一種新用途，即克服Bcl-2高表達引起的多藥耐藥的作用。本發明所採用的化合物Bl是由實驗室化學合成，結構式如下所示 上述化合物Bl用以抗腫瘤細胞耐藥性。進一步，所述耐藥性為Bcl-2高表達的腫瘤細胞所產生的耐藥性。進一步，所述的耐藥腫瘤為良性腫瘤或惡性腫瘤。進一步，所述腫瘤為惡性黑色素瘤，或惡性淋巴瘤，或消化器官的腫瘤，或肺癌， 或乳癌，或睪丸癌，或卵巢癌，或子宮癌，或前列腺癌，或上顎癌，或舌癌，或口腔癌，或咽喉 癌，或甲狀腺癌，或腦部腫瘤，或骨肉瘤，或白血病，或神經系統腫瘤，或膀胱腫瘤，或皮膚 癌，或皮膚附屬器官癌，或皮膚轉移癌。進一步，所述消化器官的腫瘤為胃癌，或腸癌，或肝癌，或膽囊癌，或膽道癌，或胰 腺癌。進一步，該化合物Bl用以製備具有抗腫瘤細胞耐藥性的抗腫瘤藥物。進一步，所述藥物的製劑形式包括液體製劑、顆粒劑、片劑、衝劑、膠丸、膠囊、滴丸 劑或注射劑。且該種萘醯亞胺類化合物Bl低毒，適合於人和哺乳類動物經口和非經口給藥。且該種萘醯亞胺類化合物Bl的劑型無特定的限制，可作為經口給藥的散劑，丸 劑，片劑，膠囊劑等固型製劑，也可作為非經口給藥的外用劑，軟膏，貼敷劑，注射劑。且該種萘醯亞胺類化合物Bl，通常能與不影響藥理學作用的輔助料配合製成經口 和非經口給藥的製劑。且該種萘醯亞胺類化合物Bi，可經水溶劑(如蒸留水)，水溶性製劑(如生理鹽 水)脂溶劑(如胡麻油)等的溶劑用常規法調製。且該種萘醯亞胺類化合物Bi，通常能與藥理學上允許的添加成分(稀釋劑，著色 劑，安定劑，界面活性劑，助溶劑，緩衝劑，矯味劑，香料，保存劑，糖衣劑)相組合，用於經口 和非經口劑型。且該種萘醯亞胺類化合物Bi，在劑型上通常能與藥理學上允許的稀釋成分和成型 成分相組合，用於經口和非經口劑型。且該種萘醯亞胺類化合物Bl經口劑型，是指片劑，丸劑，顆粒劑，散劑和膠囊。非 經口劑是指靜脈注射劑，肌肉注射劑和皮下注射劑，浴劑，直腸，肛門和陰道給藥。本發明所述的萘醯亞胺類化合物Bl抗腫瘤細胞耐藥的作用的有益效果如下(1) 具有臨床應用前景，萘醯亞胺類化合物Bl可殺傷Bcl-2高表達的腫瘤細胞，其藥效不受常 規耐藥機理影響，對HL60/Bcl-2細胞的殺傷能力與HL60細胞基本一致。(2)該化合物具有 較低的毒性，因此具有較好的臨床腫瘤化療、尤其是抗臨床腫瘤多藥耐藥的應用前景。


圖1是萘醯亞胺類化合物Bl對腫瘤細胞形態的影響。
具體實施例方式本發明結合附圖和實施例做進一步的說明。為進一步了解本發明，下面結合具體實施例作進一步說明。實施例1萘醯亞胺類化合物Bl能克服Bcl-2高表達引起的腫瘤細胞耐藥實驗材料
HL60細胞株購自中國科學研究院細胞所。質粒pSFFV-neo，pSFFV-neo Bcl-2購自 美國Addgene公司。真核轉染pSFFV_neo Bcl-2質粒，G418篩選得到HL60的Bcl_2高表 達株。萘醯亞胺類化合物Bl由實驗室合成。噻唑藍(3-(4，5-dimethylthiaZ0l-2-yl)-2， 5-diphenyl tetrazolium bromide, MTT)購自 Sigma 公司。對照組、載體組的處理作下說明對照組細胞加入RPMI 1640培養液實驗方法(1)先將對數生長期細胞2 XlO5ceIVml接種於96孔培養板，每孔0. 1ml，培養6 小時。(2)實驗組加入含濃度範圍在0-5 μ M的藥物的RPMI 1640培養液，對照組則用等 體積的培養液，每組設3個以上的平行孔，置37°C，5% CO2及飽和溼度的培養箱培養48h。(3)培養結束後，吸棄上清，然後每孔加入100 μ 1的含5mg/ml的MTT，37°C繼續培 養4小時。(4)小心吸棄上清，每孔加入100 μ 1的DMSO溶解甲臢，振蕩lOmin，待MTT還原產 物完全溶解，在酶標議上用波長為570nm，參比波長為630nm測定光密度(OD)值，計算細胞 的生長抑制率。
1_ 戀臉 ΗΟΓ)⑶數據處理細胞生長抑制率=^qd Χ 100%實驗結果藥物作用48小時，萘醯亞胺類化合物Bl對HL60/Bcl-2和HL60細胞株的IC50非 常接近，說明該化合物能克服由Bcl-2高表達引起的腫瘤細胞耐藥。表1 萘醯亞胺類化合物 Bl 對 HL60、HL60/vector、HL60/Bcl_2 的 IC50 實施例2萘醯亞胺類化合物Bl誘導腫瘤細胞形態的改變實驗材料Hoechst33258購自上海美季生物技術有限公司。實驗方法(1)對數生長期細胞2 X IO5個/ml接種於24孔板，立刻加藥，對照組加等量體積 的RPMI1640培養液。(2)處理36小時後離心，倒去上層RPMI 1640培養基，用PBS洗2次，離心去上清 (1500rpm,5min)。(3)加固定液(甲醇乙酸=3 1)，4°C固定lOmin。(4) Hoechst 33258 (5 μ 1/ml)染色，5min。(5) 356nm紫外激發，螢光顯微鏡下觀察並照相。實驗結果
HL60細胞及HL60/Bcl_2細胞經0. 3 μ MBl作用48小時後，Hoechst染色，細胞呈 現核染色質濃縮、核碎裂以及出現凋亡小體等典型的細胞凋亡特徵(圖1)。對照組和載體 組細胞均無形態學變化，所發螢光較均勻(圖1)。實施例3萘醯亞胺類化合物Bl誘導HL60及HL60/Bcl_2細胞凋亡實驗材料Annexin V-FITC/PI雙染法細胞凋亡檢測試劑盒購自上海美季生物技術有限公司。實驗方法(1) 1 X IO6個細胞用0. 3 μ MBl處理48小時；(2) IOOOg (約1000-2000rpm)離心5min，棄上清，收集細胞，用PBS輕輕重懸細胞；(3)重懸的細胞，IOOOg離心5min，棄上清，加入195 μ 1 Annexin V-FITC結合液 (IX)輕輕重懸細胞；(4)加入 5 μ 1 Annexin V-FITC，輕輕混勻；(5)室溫(20-25°C )避光孵育lOmin，可以使用鋁箔進行避光；(6) IOOOg離心5min,棄上清，加入190 μ 1 Annexin V-FITC結合液(IX)輕輕重懸 細胞； (7)加入10 μ 1碘化丙啶染色液，輕輕混勻，冰浴避光放置；(8)隨即進行流式細胞儀檢測，Armexin V-FITC為綠色螢光，PI為紅色螢光，激發 波長Ex = 488nm ；發射波長Em = 530nm實驗結果如表2 所示，0. 3gM Bl 分別作用 HL60、HL60/vector 和 HL60/Bcl_2 細胞 48 小時 後，其凋亡率均達到50 %以上。表2萘醯亞胺類化合物Bl處理HL60、HL60/vector、HL60/Bcl_2後的凋亡率 以上實例說明萘醯亞胺類化合物Bl能夠克服Bcl-2高表達引起的多藥耐藥，且 對HL60/Bcl-2細胞的殺傷能力與HL60細胞基本一致。
權利要求
一種新型抗腫瘤細胞化合物的用途，該抗腫瘤細胞化合物B1結構式如下，其特徵在於該化合物B1用以抗腫瘤細胞耐藥性。FSA00000190920800011.tif
2.如權利要求1的新型抗腫瘤細胞化合物的用途，其特徵在於，所述耐藥性為Bcl-2高 表達的腫瘤細胞所產生的耐藥性。
3.如權利要求2的新型抗腫瘤細胞化合物的用途，其特徵在於，所述的耐藥腫瘤為良 性腫瘤或惡性腫瘤。
4.如權利要求3的新型抗腫瘤細胞化合物的用途，其特徵在於，所述腫瘤為惡性黑色 素瘤，或惡性淋巴瘤，或消化器官的腫瘤，或肺癌，或乳癌，或睪丸癌，或卵巢癌，或子宮癌， 或前列腺癌，或上顎癌，或舌癌，或口腔癌，或咽喉癌，或甲狀腺癌，或腦部腫瘤，或骨肉瘤， 或白血病，或神經系統腫瘤，或膀胱腫瘤，或皮膚癌，或皮膚附屬器官癌，或皮膚轉移癌。
5.如權利要求4的新型抗腫瘤細胞化合物的用途，其特徵在於，所述消化器官的腫瘤 為胃癌，或腸癌，或肝癌，或膽囊癌，或膽道癌，或胰腺癌。
6.一種新型抗腫瘤細胞化合物的用途，該抗腫瘤細胞化合物Bl結構式如下，其特徵在 於該化合物Bl用以製備具有抗腫瘤細胞耐藥性的抗腫瘤藥物。
7.如權利要求6的新型抗腫瘤細胞化合物的用途，其特徵在於，所述藥物的製劑形式 包括液體製劑、顆粒劑、片劑、衝劑、膠丸、膠囊、滴丸劑或注射劑。
全文摘要
本發明提供了一種新型抗腫瘤細胞耐藥的化合物(B1)的新用途，即應用此化合物使得Bcl-2高表達的腫瘤細胞的作用不受Bcl-2抗凋亡蛋白高表達的影響，而且該化合物對Bcl-2高表達的腫瘤細胞的殺傷能力與其親本腫瘤細胞基本一致，具有較低毒性，因此具有很好的臨床應用前景。
文檔編號A61P35/00GK101890009SQ20101022702
公開日2010年11月24日 申請日期2010年7月14日 優先權日2010年7月14日
發明者劉建文, 吳愛斌, 姜子敬, 崔大岺, 張煥英, 徐可, 徐玉芳, 林冰, 梁欣, 金惠, 錢旭紅 申請人:華東理工大學