一種高產葡萄糖酸鈉菌株的培育方法
2023-12-03 13:05:21
專利名稱：一種高產葡萄糖酸鈉菌株的培育方法
技術領域：
本發明涉及一種微生物的培育方法。
背景技術：
目前，葡萄糖酸鈉的製備工藝是利用青酶或麴黴，採用通氣攪拌深層發酵
技術，發酵時間48-60小時，轉化率為90%。該方法的缺點是發酵周期比較長，
轉化率不高。
發明內容
本發明的任務在於提供一種高產葡萄糖酸鈉菌株的培育方法，採用此方法 培育出的菌株具有糖酸轉化率高和產酸周期短等優點。 其技術解決方案是
一種高產葡萄糖酸鈉菌株的培育方法，以葡萄糖酸鈉生產中來自於發酵轉 化率為100-120%的大罐中分離得來的菌株為出發菌株，經活化培養基培養後， 取其生長正常、菌絲健壯、孢子豐滿的斜面作為分離純化的對象，經10-109倍 數的稀釋梯度，分別在60。C、 7(TC和80'C的溫度下保溫處理5分鐘，然後進行 菌種平板塗布，於4(TC、 40%的相對溼度下恆溫培養6-10h,待孢子萌芽時經40W 紫外燈30cm距離垂直照射1-3分鐘，迅速以黑色牛皮紙包紮單板移入恆溫培養 箱於4(TC、 40%的相對溼度下恆溫培養3_4天，待長出的菌落中心有黑色孢子長 出時，選取變色透明圈較大的菌落，將其孢子挑到專用孢子生長培養基斜面上， 在35-4(TC、相對溼度40%的條件下，避光恆溫培養5-6天，得到成熟飽滿的斜 面孢子。
將上述培養好的斜面孢子，選取生長旺盛、飽滿的斜面進行搖床篩選在溫度4(TC，轉速200r/min，溼度70_80%的相同條件下，進行初次篩選、復篩選、 二次復篩選、三次復篩選，每次篩選分別淘汰50%-60%，最終選出高轉化率的葡 萄糖酸鈉的菌種。
本發明的有益效果是本發明所述的菌株在高峰期降糖速率達到2.5%/h， 發酵罐生產中轉化率達到117%以上，發酵周期14h以內，提取率95%以上，提 高了初糖濃度，縮短了發酵周期，降低了殘糖，降低了生產成本。
具體實施例方式
為了便於理解本發明，下面結合實施例來更加詳細的描述本發明。然而這 些實施例只是起到說明的作用，本發明並不局限於這些實施例。
實施例h以葡萄糖酸鈉生產中來自於發酵轉化率為100%的大罐中分離得 來的菌株為出發菌株，經活化培養基培養後，取其生長正常、菌絲健壯、孢子 豐滿的斜面作為分離純化的對象，經10-109倍數的稀釋梯度，分別在6(TC、 70°C 和8(TC的溫度下保溫處理5分鐘，然後進行菌種平板塗布，於4(TC、 40%的相 對溼度下恆溫培養6小時，待孢子萌芽時經40W紫外燈30cm距離垂直照射1分 鍾，迅速以黑色牛皮紙包紮單板移入恆溫培養箱於4(TC、 40%的相對溼度下恆溫 培養3天，待長出的菌落中心有黑色孢子長出時，選取變色透明圈較大的菌落， 將其孢子挑到專用孢子生長培養基斜面上，在35°C、相對溼度40%的條件下， 避光恆溫培養5天，得到成熟飽滿的斜面孢子。
將上述培養好的斜面孢子，選取生長旺盛、飽滿的斜面進行搖床篩選在 溫度40'C，轉速200r/min，溼度70%的相同條件下，進行初次篩選、復篩選、 二次復篩選、三次復篩選，每次篩選分別淘汰50%，最終選出高轉化率的葡萄糖 酸鈉的菌種。
經測試，在500L小試自動罐上採用38%的糖濃度，無機鹽MgS04 7H20含量為0. 25%， KH2P04含量為0. 18%， (NH4)2HP04含量為0. 14%， FeS04 7H20 含量 為0.1%， NH4N03含量為0. 1%，尿素含量為0. 1%的發酵培養基中，控制發酵溫度 35°C，溶解氧10%，壓力lMpa， PH值6.0，.葡萄糖酸鈉菌種的發酵周期縮短為 14小時，初糖提高到38%，且殘糖降低為0.4%，產品轉化率達到117%，並且 從根本上改變了以往的隨周期加長，鈉離子濃度加大而降糖變緩的情況，不受 鈉離子濃度的影響，在工藝操作穩定的情況下保持降糖高峰直至結束。
實施例2:以葡萄糖酸鈉生產中來自於發酵轉化率為110%的大罐中分離得 來的菌株為出發菌株，經活化培養基培養後，取其生長正常、菌絲健壯、孢子 豐滿的斜面作為分離純化的對象，經10-109倍數的稀釋梯度，分別在60°C、 70°C 和8(TC的溫度下保溫處理5分鐘，然後進行菌種平板塗布，於4(TC、 40%的相 對溼度下恆溫培養8小時，待孢子萌芽時經40W紫外燈30cm距離垂直照射2分 鍾，迅速以黑色牛皮紙包紮單板移入恆溫培養箱於4(TC、 40%的相對溼度下恆溫 培養4天，待長出的菌落中心有黑色孢子長出時，選取變色透明圈較大的菌落， 將其孢子挑到專用孢子生長培養基斜面上，在38°C、相對溼度40%的條件下， 避光恆溫培養6天，得到成熟飽滿的斜面孢子。
將上述培養好的斜面孢子，選取生長旺盛、飽滿的斜面進行搖床篩選在 溫度4(TC，轉速200r/min，溼度75%的相同條件下，進行初次篩選、復篩選、 二次復篩選、三次復篩選，每次篩選分別淘汰55%，最終選出高轉化率的葡萄糖 酸鈉的菌種。
經測試，在大生產1001113發酵罐上採用38%的糖濃度，無機鹽MgS04 7H20 含量為0. 25%, KH2P04含量為0. 18%， (NH4)2HP04含量為0. 14%, FeS04 7H20含 量為0.1%， NH4N03含量為0. 1%,尿素含量為0. 1%的發酵培養基中，控制發酵溫 度45X:，溶解氧60%，壓力2Mpa， PH值6.3,葡萄糖酸鈉菌種的發酵周期縮短為13小時，初糖提高到39%，且殘糖降低為0.3%，產品轉化率達到116%，並 且改變了以往的隨周期加長，鈉離子濃度加大而降糖變緩的情況，不受鈉離子 濃度的影響，在工藝操作穩定的情況下保持降糖高峰直至結束。
實施例3:以葡萄糖酸鈉生產中來自於發酵轉化率為120%的大罐中分離得 來的菌株為出發菌株，經活化培養基培養後，取其生長正常、菌絲健壯、孢子 豐滿的斜面作為分離純化的對象，經10-109倍數的稀釋梯度，分別在6(TC、 70°C 和8(TC的溫度下保溫處理5分鐘，然後進行菌種平板塗布，於40'C、 40%的相 對溼度下恆溫培養10小時，待孢子萌芽時經40W紫外燈30cm距離垂直照射3 分鐘，迅速以黑色牛皮紙包紮單板移入恆溫培養箱於4(TC、 40%的相對溼度下恆 溫培養5天，待長出的菌落中心有黑色孢子長出時，選取變色透明圈較大的菌 落，將其孢子挑到專用孢子生長培養基斜面上，在40°C、相對溼度40%的條件 下，避光恆溫培養6天，得到成熟飽滿的斜面孢子。
將上述培養好的斜面孢子，選取生長旺盛、飽滿的斜面進行搖床篩選在 溫度40。C，轉速200r/min，溼度80%的相同條件下，進行初次篩選、復篩選、 二次復篩選、三次復篩選，每次篩選分別淘汰60%，最終選出高轉化率的葡萄糖 酸鈉的菌種。
經測試，在大生產1001113發酵罐上採用38%的糖濃度，無機鹽MgS04 7H20 含量為0. 25%, KH2P04含量為0. 18%, (NH4)2HP04含量為0. 14%， FeS04 7H20 含 量為0. 1%， NH4N03含量為0. 1%,尿素含量為0. 1%的發酵培養基中，控制發酵溫 度5(TC，溶解氧90%,壓力3Mpa， PH值6.5,葡萄糖酸鈉菌種的發酵周期縮短 為12. 8小時，初糖提高到38%，且殘糖降低為0.36%，產品轉化率達到117.4%， 並且改變了以往的隨周期加長，鈉離子濃度加大而降糖變緩的情況，不受鈉離 子濃度的影響，在工藝操作穩定的情況下保持降糖高峰直至結束。
權利要求
1、一種高產葡萄糖酸鈉菌株的培育方法，其特徵在於以葡萄糖酸鈉生產中來自於發酵轉化率為100-120％的大罐中分離得來的菌株為出發菌株，經活化培養基培養後，取其生長正常、菌絲健壯、孢子豐滿的斜面作為分離純化的對象，經10-109倍數的稀釋梯度，分別在60℃、70℃和80℃的溫度下保溫處理5分鐘，然後進行菌種平板塗布，於40℃、40％的相對溼度下恆溫培養6-10h，待孢子萌芽時經40W紫外燈30cm距離垂直照射1-3分鐘，迅速以黑色牛皮紙包紮單板移入恆溫培養箱於40℃、40％的相對溼度下恆溫培養3-4天，待長出的菌落中心有黑色孢子長出時，選取變色透明圈較大的菌落，將其孢子挑到專用孢子生長培養基斜面上，在35-40℃、相對溼度40％的條件下，避光恆溫培養5-6天，得到成熟飽滿的斜面孢子；將上述培養好的斜面孢子，選取生長旺盛、飽滿的斜面進行搖床篩選在溫度40℃，轉速200r/min，溼度70-80％的相同條件下，進行初次篩選、復篩選、二次復篩選、三次復篩選，每次篩選分別淘汰50％-60％，最終選出高轉化率的葡萄糖酸鈉菌株。
全文摘要
本發明公開一種高產葡萄糖酸鈉菌株的培育方法，以葡萄糖酸鈉生產中分離得來的菌株為出發菌株，經活化培養基培養後，取其生長正常、菌絲健壯、孢子豐滿的斜面作為分離純化的對象，經保溫處理後進行平板塗布，經恆溫培養和紫外線照射後以牛皮紙包紮再進行恆溫培養，選取變色透明圈較大的菌落培養成成熟飽滿的斜面孢子，經搖床篩選出高轉化率的葡萄糖酸鈉菌株。本發明所述的菌株在高峰期降糖速率達到2.5％/h，發酵罐生產中轉化率達到117％以上，發酵周期14h以內，提取率95％以上，提高了初糖濃度，縮短了發酵周期，降低了殘糖，降低了生產成本。
文檔編號C12Q1/04GK101302477SQ20081001681
公開日2008年11月12日 申請日期2008年6月11日 優先權日2008年6月11日
發明者孫慧彬, 張希銘, 徐建春, 霞 李, 李悅明, 王道會, 薛元剛, 遲慎麗 申請人:青島琅琊臺集團股份有限公司