一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法
2023-12-03 11:28:11 4
一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法
【專利摘要】本發明公開了一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法。其包括以下步驟：1)將蓯蓉原料粉末加入雙水相體系；2)萃取；3)移取苯乙醇苷富集相，濃縮乾燥，得到蓯蓉苯乙醇苷提取物。本發明從蓯蓉提取苯乙醇苷，方法簡單，提取率高，易放大進行連續性生產操作，能耗低，提取物苯乙醇苷含量高。克服了現有從蓯蓉中提取蓯蓉苯乙醇苷的方法操作繁瑣、費時、提取率低、提取的苯乙醇苷品質不高等缺點。
【專利說明】一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於天然產物有效成分的分離純化領域，具體涉及一種雙水相萃取蓯蓉苯 乙醇苷工藝。
【背景技術】
[0002] 肉蓯蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma又名荒漠肉蓯蓉、蓯蓉或大芸，甜大芸， 寸芸，梭梭大芸等，為列當科（Orobanchaceae)肉灰蓉屬（Cistanche Hoffmg.et Link)多 年生寄生植物。肉蓯蓉屬植物共約有20種，分布於歐亞大陸溫暖的乾燥或半乾旱地區，歷 史考證在我國境內發現8個種和1個變種，經屠鵬飛等人考證調查後，確定我國目前肉蓯 蓉屬植物分為4個種包括管花肉灰蓉（Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight)、荒漠肉灰蓉 (C. deserticola，Y. C· Ma)、鹽生肉灰蓉（C_ salsa(C. A. Mey. )G. Beck)、沙雙蓉（C. sinensis G. Beck)和 1 個變種，其來源於白花鹽灰蓉（C. salsa var. albifora P. F. YU et Z. C. Lou)， 主要分布於我國內蒙古、甘肅、新疆等地。
[0003] 肉蓯蓉史載於《神農本草經》，以其肉質莖入藥，具有多種生物活性，被譽為"沙漠 人參"。在中國和日本，肉灰蓉肉質蓮作為一種補益藥已經經歷了上千年的歷史。目前現代 醫學已發現荒漠肉蓯蓉具有廣闊的藥用功能。已發現的相關藥理生理活性有：激素調節作 用、提高性功能作用、通便作用、肝保護作用、神經保護作用、心肌缺血保護、免疫調節作用、 促進骨形成、增強體力、視力保護，抗氧化作用、抗自由基、抗凋亡、抗衰老作用、抗疲勞、抗 炎、抗腫瘤，抗老年痴呆症，提高記憶力等功效。因此以肉蓯蓉為基礎的藥物開發具有很高 的價值。肉蓯蓉主要化學成分有：苯乙醇苷類、苯甲醇苷類、環烯醚萜類、單萜類、木脂素和 苯丙醇類、生物鹼類、胺基酸、糖類、留醇和揮髮油類成分。其中苯乙醇苷類被認為是肉蓯蓉 中主要的活性成分。苯乙醇苷類成分（Phenylethanoid Glycosides，PhGs)通常是以葡萄 糖為母核的含有酯鍵及氧苷鍵的天然糖苷，廣泛存在於雙子葉植物中。由於PhGs的紫外吸 收能力很強，故其適用於高相液相法以及紫外分光光度法進行分析，並且由於多數化合物 糖上都連有咖啡醯基或阿魏醯基，國內外學者又稱其為苯丙素類化合物。目前荒漠肉蓯蓉 共分離得到22個苯乙醇苷類成分，包括一個單糖苷，十四個雙糖苷和七個三糖苷。苯乙醇 苷成分具有抗氧化、清除自由基、抗病毒、抗菌、抗腫瘤、強心、DNA損傷修復、抗輻射等功能。 該成分中多種物質也具有其他用途，如作為應激性機能障礙改善劑，用於化妝品以防止各 種類型的脫髮，治療慢性便秘，消除子宮肌瘤等疾病。
[0004] 雙水相萃取技術是於六十年代首先由瑞典的P.A.Albertsson等提出的，近三十 年得到廣泛重視，己涉及酶、核酸、生長激素、病毒等各種活性有效成分的分離及提純。其具 有活性損失小、分離步驟少、操作條件溫和且不存有機溶劑殘留的問題等優點，因而在天然 產物中有效成分的提取方面具有應用前景。
[0005] 混合兩種水溶性不同的化合物的水溶液時，當化合物濃度達到一定值，體系會自 然地分成互不相溶的兩相。這一現象早在1896年就由Beijerinck觀察到：當明膠與瓊脂 或明膠與可溶性澱粉的水溶液混合時,得到一個渾濁不透明的溶液，它隨之分成兩個液相， 這就是雙水相體系。雙水相體系的形成主要是由於化合物之間的不相溶性，造成相互無法 滲透，不能形成均一相，從而具有分離傾向，在一定條件下即可分為二相。一般認為只要兩 化合物水溶液的憎水程度有所差異，混合時就可發生相分離，且憎水程度相差越大，相分離 傾向也就越大。
[0006] 儘管採用雙水相萃取技術從天然產物中提取有效成分的文獻報導不是很多，但己 有的實例已充分表明了其良好的應用前景。東北林業大學符韻林，張東陽等（2013年）建立 了一種雙水相系統從鴿子豆根中分離富集染料木黃酮和芹黃素的方法。防化研究所畢鵬禹 等（2013年）建立了一種高效環境又好的從黃芩中分離富集黃芩苷的雙水相浮選方法。雙 水相系統分離技術，所形成的兩相大部分是水，兩相界面張力很小，為有效成分的溶解和萃 取提供了適宜的環境；相際間的質量傳遞快，所需操作時間較短。操作方便，條件溫和。所 用的聚合物如聚乙二醇等對活性有效成分有穩定作用。易於工程放大和連續操作，可以用 於規模化生產製備，能夠完成較大處理量的操作。
[0007] 從中藥中提取天然成分的首要條件是被提取物能夠快速、高效地進入提取介質， 由於中藥有效成分多為胞內產物，提取過程中一般需要破壞原料細胞壁。超聲波對各種成 分提取的強化作用主要源於其空化作用，空化中微小氣泡的爆裂產生的極大壓力使被破碎 物細胞壁及整個生物體的破裂在瞬間完成，縮短了破碎時間，同時超聲波產生的振動作用 加強了胞內物質的釋放、擴散及溶解，顯著提高提取效率。因此超聲輔助天然產物提取也是 未來發展的重要技術。
[0008] 就目前的肉蓯蓉苯乙醇苷提取方法來看，多集中採用傳統溶劑提取，同時微波輔 助、超聲輔助等方法。這些方法各有優缺點，傳統溶劑提取能耗高、耗時長、效率較低，微波 提取技術效果比傳統的方法好，但由於微波採用的熱效應提取原理，有效成分損失大，不利 於肉灰蓉功效成分的綜合利用，並且工業化放大有困難。而超聲輔助提取的效率明顯優於 微波輔助，因此超聲輔助提取應是天然產物提取的發展方向。並且考慮到後續分離的成本， 應該在提取階段就選擇分離效果好，純度高，有效成分損失少的分離方法與工藝。而在這 方面近年出現的雙水相提取方法則有較明顯優勢的，經過研究認為雙水相結合超聲波法在 中藥材活性成分提取分離中會有更深的應用和研究前景。基於以上各種原因，本發明提供 了一種超聲輔助雙水相萃取肉蓯蓉苯乙醇苷的方法，克服了以上方法高能耗，高損失，低效 率，低質量的缺點，為肉蓯蓉苯乙醇苷的生產提供了綠色，低成本，高質量的生產途徑。
【發明內容】
[0009] 本發明的目的在於提供一種雙水相萃蓯蓉苯乙醇苷的方法，克服目前蓯蓉苯乙醇 苷生產過程中的不足和缺點。
[0010] 為達此目的，本發明採用以下技術方案：
[0011] 一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法，其包括以下步驟：
[0012] 1)將蓯蓉原料粉末加入雙水相體系；
[0013] 2)萃取；
[0014] 3)移取苯乙醇苷富集相，濃縮乾燥，得到蓯蓉苯乙醇苷提取物。
[0015] 所述苯乙醇苷富集相為雙水相體系中含有乙醇或PEG的相。
[0016]所述蓯蓉原料粉末的粉碎度為10-80目，優選20-40目，更優選30目。
[0017]所述蓯蓉原料為肉蓯蓉、管花肉蓯蓉、鹽生肉蓯蓉、沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉中的一種 或至少兩種的混合物。
[0018]所述雙水相體系為選自乙醇/硫酸銨、乙醇/磷酸氫二鉀、乙醇/檸檬酸鈉或PEG/ 硫酸銨體系中的一種。所述乙醇/硫酸銨、乙醇/磷酸氫二鉀、乙醇/檸檬酸鈉或PEG/硫 酸銨，指所述雙水相體系中兩種水相的兩種溶質。
[0019]優選地，所述雙水相體系為無水乙醇/硫酸銨體系，其中基於所述雙水相體系，乙 醇質量分數為15% -40%，優選18% -30%，更優選20% ;基於所述雙水相體系，硫酸銨質 量分數為14% -40 %,優選18% -30 %,更優選23 %。
[0020] 所述蓯蓉原料粉末與所述雙水相體系按重量計比值為1 :5_1 :50,例如1 :15,優選 1 :20-1 :40,例如 1 :35,更優選 1 :30。
[0021] 所述萃取採用攪拌震蕩和/或超聲輔助的提取方法。
[0022] 所述超聲輔助提取的時間為10-90分鐘，例如80,優選30-60分鐘，例如50,更優 選40分鐘；所述超聲輔助提取功率100-3000W，例如2500W，優選200-2000W，例如1000W，更 優選800W ;所述超聲輔助提取頻率l〇-l〇〇kHz，例如20kHz，優選30-80kHz，例如48kHz,更 優選40kHz ;提取溫度20-80°C，例如25°C，優選30-7(TC，例如5(TC,更優選4(TC。
[0023]所述苯乙醇苷富集相的濃縮乾燥採用選自真空濃縮乾燥、噴霧乾燥、鼓風乾燥和 冷凍乾燥中的一種；
[0024] 優選地，所述濃縮千燥採用噴霧乾燥，其進風溫度為160-230°C,例如210°C,優選 170-200°C，例如 180°C，更優選 175°C。
[0025] 移取苯乙醇苷富集相之後，剩餘的雙水相體系進行回收，所述回收包括回收無機 鹽，所述回收無機鹽的方法為結晶法。所述回收雙水相體系包括回收有機物，所述中回收有 機物的方法包括減壓蒸餾法。
[0026] 本發明的雙水相萃取肉蓯蓉苯乙醇苷的方法，具有以下有益效果：
[0027] 採用雙水相萃取技術，提取快速回收率高，效率高；
[0028] 採用雙水相萃取技術，易於放大生產，成本低，汙染少；
[0029] 採用採用雙水相萃取技術，產品質量高品質好，苯乙醇苷含量較傳統溶劑萃取法 高3倍；
[0030] 提取完畢後的雙水相體系回收利用，使用效率高，條件溫和易控制。
[0031] 本發明所述的雙水相萃取肉蓯蓉苯乙醇苷的方法，具有溫和的生產條件、技術易 放大，生產快速、溶劑易回收利用，綠色環保無汙染，苯乙醇苷品質高等優點。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0032] 圖1為松果菊苷對照品紫外吸收光譜圖。
[0033] 圖2為總苯乙醇苷提取物紫外吸收光譜圖。
[0034] 圖3為松果菊苷對照品高效液相色譜圖。
[0035] 圖4為總苯乙醇苷高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0036] 下面結合附圖並通過【具體實施方式】來進一步說明本發明的技術方案。
[0037] 實施例1
[0038] 1)將肉蓯蓉粉碎至20目，密封保存。
[0039] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 I5 %，磷酸氫二鉀分數為30%，將稱取5g肉蓯蓉藥材粉末加入到雙水相體系"'中，料液比 1/20。 '、 '
[0040] 3)攪拌下提取80min，其中提取溫度為45°C。
[0041] 4)取本乙醉苷雖集相，對其進行減壓蒸饋，減壓蒸饋的溫度為4〇?c，回收憐酸氣 二鉀，最後在40°C下真空乾燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 68g。 '
[0042] 實施例2
[0043] 1)將管花肉蓯蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0044] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 40%，磷酸氫二鉀分數為14%,將稱取5g管花肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比 1/5。 ""
[0045] 3)攪拌下提取80min，其中提取溫度為45°C。
[0046] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為5〇t；，回收磷酸氫 二鉀，最後在50?下真空乾燥，得到管花蓯蓉苯乙醇苷提取物i.wg。 '
[0047] 實施例3
[0048] 1)將肉灰蓉粉碎至80目，密封保存。
[0049] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 23%，磷酸氫二鉀分數為22%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加 入到雙水相體系中，料液比1/4〇。' [0050] 3)超聲波的輔助下提取80min，其中提取溫度為2(TC。
[0051] 4)取本乙醇苷雖集相，對其進行減壓蒸饋，減壓蒸飽的溫度為6〇。〇，回收磷酸氫 二鉀，最後在60Γ下真空乾燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 99g。 '
[0052] 實施例4
[0053] 1)將管花肉蓯蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0054] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 2S%，磷酸氫二鉀分數為20%，將稱取5g管花肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比 1/40。
[0055] 3)超聲波的輔助下提取lOmin，其中提取溫度為8(rc，
[0056] 4)取本乙醇苷雖集相，對其進行減壓蒸饋，減壓蒸餾的溫度為4(rc，回收磷酸氫 二鉀，最後在進行噴務乾燥，進風溫度160°C，得到管花雙蓉苯乙醇苷提取物1. 5如。
[0057] 實施例5 °
[0058] 1)將肉蓯蓉粉碎，過60目篩後密封保存。
[0059] 2)在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為18%,硫酸銨分數為 3〇%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比丨/30。
[0060] 3)超屍波取80min，其中提取溫度為6〇。〇,超聲波功率為3〇〇〇w，超聲波頻率 30kHz〇
[0061] 4)取苯乙醇苷雖集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為S(rc，回收硫酸銨， 最後在70°C下真空乾燥，得到肉灰蓉苯乙醇管提取物〇. 76g。
[0062] 實施例6
[0063] 1)將肉蓯蓉粉碎至30目，密封保存。
[0064] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 I5%，硫酸銨分數為40%，將稱取叱肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。
[0065] 3)超屍波的輔助下取40min，其中提取溫度為4CTC,超聲波功率為loo#，超聲波 頻率 80kHz。 '
[0066] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4(rc回收硫酸銨， 最後在進行噴霧千燥，進風溫度2〇〇°c，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物0. 74g。' '
[0067] 實施例7 ?
[0068] 1)將肉灰蓉粉碎，過5〇目篩後密封保存。
[0069] 2)在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為22%，硫酸按分數為 23%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比丨/%。 '
[0070] 3)攪拌震蕩提取8〇min，其中提取溫度為7(TC。
[0071] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為8(rc回收硫酸錢， 最後在7〇°C下真空乾燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物0.76g。 ' '
[0072] 實施例8
[0073] 1)將肉蓯蓉粉碎，過8〇目篩後密封保存。
[0074] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 I5%，硫酸銨分數為30%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^5〇。
[0075] 3)攬摔晨蕩提取4〇min，其中提取溫度為25°C，超聲波功率為2〇〇評超聲波頻率 50kHz〇
[0076] 4)取本乙醇苷雖集相，對其進行減壓黑饋，減壓蒸飽的溫度為4〇。0，回收硫酸錢， 最後在進行噴霧千燥，進風溫度160?，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.74g。' M '
[0077] 實施例9
[0078] 1)將肉灰蓉粉碎，過7〇目篩後密封保存。
[0079] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 40%，硫酸銨分數為14%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^3〇。
[0080] 3)超聲波的輔助下提取4〇min，其中提取溫度為5(TC，超聲波功率為8〇〇ff，超聲波 頻率80kHz。
[0081] 4)取苯乙醇苷雖集相，對其進行減壓蒸溜，減壓蒸饋的溫度為4〇。〇，回收硫酸按， 最後在6CTC下真空千燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.89g。 ' '
[0082] 實施例1〇
[0083] 1)將肉蓯蓉粉碎，過80目篩後密封保存。
[0084] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 18%，磷酸氫二鉀分數為30%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。
[0085] 3)超聲波的輔助下提取4〇min，其中提取溫度為25°C，超聲波功率為3〇〇w，超聲波 頻率40kHz。
[0086] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4(TC，回收磷酸氫 二鉀，最後在進行噴霧乾燥，進風溫度21〇 C，得到肉灰蓉苯乙醇昔提取物〇. 8知。
[0087] 實施例11
[0088] 1)將管花蓯蓉粉碎，過45目篩後密封保存。
[0089] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 30%，硫酸銨分數為18%，將稱取如肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比〇3〇 _〇] 3)超聲波的輔助下提取4〇min，其中提取溫度為 5(TC，超聲波功率為8〇〇ff，超聲波 頻率 80kHz。 '
[0091] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4〇trc 硫酸 銨，最後在70°C下真空乾燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物i.sgg。 '
[0092] 實施例I2
[0093] 1)將肉蓯蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0094] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 24%，硫酸銨分數為20%，將稱取如肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇 _5] 3)超聲波的輔助下提取40min，其中提取溫度為6(rC，超聲波功率為 1〇〇ff，超聲波 頻率 80kHz。 '
[0096] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸飽，減壓蒸餾的溫度為8〇υ，回收硫酸按， 最後在70°C下真空乾燥,得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 79g。 '
[0097] 實施例13
[0098] 1)將肉蓯蓉粉碎至35目，密封保存。
[00"] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 15%，硫酸銨分數為26%，將稱取5g肉灰蓉粉末加入到雙水相體系中,料液比 [0100] 3)超聲波的輔助下提取SOmin，其中提取溫度為 6(rC，超聲波功率為3〇〇〇ff，超聲 波頻率10kHz。 '
[0101] 4)取本乙醇苷雖集相，對其進行減壓蒸溜，減壓蒸饋的溫度為6〇。〇,回收硫酸銨， 最後在65°C下真空乾燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 68g。 '
[0102] 實施例14
[0103] 1)將肉蓯蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0104] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 24%，硫酸銨分數為20%，將稱取如肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。
[0105] 3)超聲波的輔助下提取5〇min,其中提取溫度為6(TC，超聲波功率為 5〇〇w，超聲波 頻率 40kHz。 '
[0106] 4)取本乙醇苷g集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸饋的溫度為8〇。〇，回收硫酸銨， 最後在2〇0°C下噴霧，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.93g。 ' '
[0107] 實施例15
[0108] 1)將管花蓯蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0109] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 I5%，硫酸銨分數為26%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。 3)超聲波的輔助下提取8〇min，其中提取溫度為5(TC,超聲波功率為 2〇〇〇w，超聲 波頻率40kHz。 '
[0111] 4)取本乙醇苷g集相，對其進行減壓蒸饋，減壓蒸餾的溫度為6〇。〇，回收硫酸按， 最後在65°C下真空乾燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物2. 〇8g。
[0112] 實施例16
[0113] 1)將荒?吳肉灰蓉、管花肉灰蓉、鹽生肉灰蓉、沙灰蓉和白花鹽灰蓉混合粉碎。
[0114] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 20%，硫酸銨分數為24%，將稱取如肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比U3〇。
[0115] 3)超聲波的輔助下提取40min，其中提取溫度為4(TC，超聲波功率為300W，超聲波 頻率50kHz，
[0116] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸飽，減壓蒸饋的溫度為4〇。〇，最後在 6〇。〇 下真空乾燥,得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 76g。
[0117] 實施例17
[0118] 1)將管花肉蓯蓉、鹽生肉蓯蓉、沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉混合粉碎。
[0119] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 18%，硫酸銨分數為49%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇。
[0120] 3)超聲波的輔助下提取25min，其中提取溫度為 2(rc，超聲波功率為2_，超聲波 頻率 30kHz。 '
[0121] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為7(rc，結晶法回收 硫酸銨，最後在80°C下真空乾燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.59g。
[0122] 實施例18
[0123] 1)將鹽生肉蓯蓉粉碎。
[0124] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 2〇%，硫酸銨分數為24%，將稱取5g鹽生肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中,料液比1/4〇。
[0125] 3)超聲波的輔助下提取40min，其中提取溫度為40°C，超聲波功率為3〇〇\γ超聲波 頻率 50kHz。 '
[0126] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4〇?,最後在 6〇Γ 下真空千燥，得到鹽生肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.76g。 ' °
[0127] 實施例19 t〇12幻1)將沙蓯蓉粉碎。
[0129] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 I5%，硫酸銨分數為30%，將稱取5g沙蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比^4〇
[0130] 3)超聲波的輔助下提取25min，其中提取溫度為2(TC，超聲波功率為7〇〇w超聲波 頻率 lOOklfe。 '
[0131] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為7(rc結晶法回收 硫酸銨，最後在8(TC下真空乾燥，得到沙蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 75g。 ^Π0Η
[0132]實施例20
[0133] 1)將白花灰蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0134] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 40%，硫酸銨分數為14%，將稱取5g白花蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/3〇。
[01、35] 3)超屍波的輔助下提取6〇min，其中提取溫度為6〇。〇，超聲波功率為8〇〇w超聲波 頻率 3〇kHz。 '
[0136] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4(TC,最後在23(TC 噴霧乾燥，得到白花蓯蓉肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 94g。
[0137] 實施例21
[0138] 1)將鹽生肉蓯蓉、沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉混合粉碎，過40目篩後密封保存。
[0139] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 26%，檸檬酸鈉分數為23%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比丨/仙。 [0140] 3)超聲波的輔助下提取50min，其中提取溫度為40°C，超聲波功率為500W，超聲波 頻率70kHz。
[0141] 4)取苯乙醇苷富集相，結晶法回收硫酸銨，對其進行噴霧乾燥，得到肉灰蓉苯乙醇 苷提取物0. 78g。
[0142] 實施例22
[0143] 1)將沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉混合粉碎，密封保存。
[0144] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，pEG質量分數為 15%，硫酸銨分數為35%，將稱取5g肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比 1/3〇。
[0145] 3)超聲波的輔助下提取3〇min，其中提取溫度為50°C,超聲波功率為500W,超聲波 頻率50kHz。
[0146] 4)取苯乙醇苷富集相，結晶法回收硫酸銨，對其進行噴霧乾燥，得到肉灰蓉苯乙醇 苷提取物0.9lg。
[0147] 實施例23
[0148] 1)將管花肉蓯蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0149] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，peg質量分數為 24%，硫酸銨分數為23%，將稱取5g管花肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/4〇。 [0150] 3)超聲波的輔助下提取25-8〇min，其中提取溫度為60°C,超聲波功率為800W，超 聲波頻率10kHz。
[0151] 4)取苯乙醇苷富集相，結晶法回收硫酸銨，對其進行噴霧乾燥，得到管花肉灰蓉苯 乙醇苷提取物〇.77g。
[0152] 實施例24
[0153] 1)將鹽生肉蓯蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0154] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，peg質量分數為 15 %，硫酸銨分數為35 %，將稱取5g鹽生肉灰蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比丨/如。
[0155] 3)超聲波的輔助下提取90min，其中提取溫度為5〇Γ，超聲波功率為5〇〇w，超聲波 頻率50kHz。
[0156] 4)取苯乙醇苷富集相，結晶法回收硫酸銨，對其進行噴霧乾燥，得到鹽生肉蓯蓉苯 乙醇苷提取物0. 86g。
[0157] 實施例25
[0158] 1)將管花肉蓯蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0159] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 20%，硫酸銨分數為23%，將稱取5g管花肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/4〇。 [0160] 3)超聲波的輔助下提取25_8〇min，其中提取溫度為 4(rc，超聲波功率為4〇〇w，超 聲波頻率40kHz。
[0161] 4)取苯乙醇苷富集相，結晶法回收硫酸銨，對其進行噴霧千燥，得到管花肉蓯蓉苯 乙醇苷提取物〇· 77g。
[0162] 實施例26
[0163] 1)將鹽生肉蓯蓉粉碎，過40目篩後密封保存。
[0164] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，PEG質量分數為 30 %，硫酸銨分數為18 %，將稱取5g鹽生肉蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/40。
[0165] 3)超聲波的輔助下提取50min，其中提取溫度為50Γ，超聲波功率為500W，超聲波 頻率50kHz。
[0166] 4)取苯乙醇苷富集相，結晶法回收硫酸銨，對其進行噴霧千燥，得到鹽生肉蓯蓉苯 乙醇苷提取物〇.86g。
[0167] 實施例27
[0168] 1)將沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉混合粉碎，過80目篩後密封保存。
[0169] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 24%，硫酸銨分數為23%，將稱取如沙蓯蓉粉末加入到雙水相體系中，料液比1/4〇。
[0170] 3)超聲波的輔助下提取5〇min，其中提取溫度為70°c，超聲波功率為300W,超聲波 頻率40kHz。
[0171] 4)取苯乙醇苷富集相，結晶法回收硫酸銨，對其進行噴霧乾燥，進風溫度17〇,得 到沙蓯蓉苯乙醇苷提取物0. 74g。
[0172] 實施例28
[0173] 1)將白花鹽蓯蓉粉碎，過10目篩後密封保存。
[0174] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，pEG質量分數為 I5%，硫酸銨分數為35%，將稱取5g白花鹽雙蓉粉末加 入到雙水相體系中，料液比jy4〇。
[0175] 3)超聲波的輔助下提取50min,其中提取溫度為4(TC,超聲波功率為500W，超聲波 頻率 50kHz。 '
[0176] 4)取苯乙醇苷富集相，結晶法回收硫酸銨，對其進行噴霧乾燥，得到白花±卜雙蓉苯 乙醇苷提取物0. 83g。 μ
[0177] 實施例29
[0178] 1)將肉蓯蓉藥材粉碎。
[0179] 2)雙水相體系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 2〇%，硫酸銨分數為24%，將稱取5g肉蓯蓉藥材粉末加入到雙水相體系中，料液比1/3〇。 [0180] 3)攪拌震蕩下提取40min，其中提取溫度為 4(rc。 。
[0181] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為4〇υ 下真空乾燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 76g。 ' ^
[0182] 實施例30
[0183] 1)將肉蓯蓉藥材粉碎至10目。
[0_ ^)雙水難系的建立，在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量 I5%，％識銨分數為49%，將獅(5g肉棘雜粉末加人難水相體
[嶋]3)超聲波的輔助下提取，其中提取溫度為紙，超聲波功率為=,1超聲波 --------- 1U/10 貝 頻率30kHz。
[0? 4)取苯乙_富_，賴賄減壓難,減壓蒸_溫度為紙 硫酸銨，最後在進風溫度175C噴霧乾燥，得到肉灰蓉苯乙醇營提取物0 ―口曰
[0187] 實施例31 。
[0188] 1)將肉蓯蓉藥材粉碎。 _9] 2)、雙水娜系的建立，在該雙水獅系巾，基於雙水轉系，乙醇 2〇%，硫瞧分數為24%，將龍5g 1--:鑛機末加人到雙水相體系巾、
[0190] 3)攪拌震蕩下提取30min，其中提取溫度為3(rc。 付欲CQ i/明。 _1] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸飽，減壓蒸饋的溫度為啊 溫度170°C噴霧乾燥，得到肉蓯蓉苯乙醇苷提取物〇.76g。
[0192] 實施例32
[0193] 1)將肉蓯蓉藥材粉碎。
[0194] 2)雙水相體系的建立'在該雙水相體系中，基於雙水相體系，乙醇質量分數為 22%，硫酸銨分數為22%，將稱取Sg肉蓯蓉藥材粉末加入到雙水相體系中，料液比1/4〇。
[0195] 3)超聲波的輔助下提取25min，其中提取溫度為 7(TC,超聲波功率為2〇〇w，超聲波 頻率 30kHz。 '
[0196] 4)取苯乙醇苷富集相，對其進行減壓蒸餾，減壓蒸餾的溫度為5〇t;，結晶法回收 硫酸銨，最後在60°C下真空乾燥，得到蓯蓉苯乙醇苷提取物〇. 59g。
[0197]實施例33按照實施例卜32任意之一方法製備的苯乙醇苷在改善記憶或神經保護 產品中的應用
[0198]按照銀杏葉提取物：枸杞子提取物：苯乙醇苷=2 :5 :4配比，將三種物質混合，滅 菌，壓片，製備成改善記憶蓯蓉片。 、
[0199] 實施例34
[0200]採用高效液相法測定由本發明所述方法製得的蓯蓉苯乙醇苷提取物中主要成分 松果菊苷，紫外分光光度法測定總苯乙醇苷（採用松果菊苷為標品）。所得的全波長掃描和 高效液相色譜圖見附圖。
[0201]圖1為松果菊苷對照品紫外吸收光譜圖，最大吸收波長為（332nm)。
[0202]圖2為總苯乙醇苷提取物紫外吸收光譜圖，最大吸收波長為（332nm)，證實所得的 蓯蓉苯乙醇苷提取物中的主要成分為松果菊苷。
[0203] 圖3為松果菊苷對照品高效液相色譜圖，保留時間為16. 2η?η。
[0204] 圖4為總苯乙醇苷高效液相色譜圖，保留時間為16. 2min，證實所得的蓯蓉苯乙醇 苷提取物中的主要成分為松果菊苷。
[0205] 本發明所述的雙水相萃取肉蓯蓉苯乙醇苷的方法，具有溫和的生產條件、技術易 放大，生產快速、溶劑易回收利用，綠色環保無汙染，苯乙醇苷品質高等優點。
[0206] 申請人:聲明，本發明通過上述實施例來說明本發明的詳細方法，但本發明並不局 限於上述詳細方法，即不意味著本發明必須依賴上述詳細方法才能實施。所屬【技術領域】的 技術人員應該明了，對本發明的任何改進，對本發明產品各原料的等效替換及輔助成分的 添加、具體方式的選擇等，均落在本發明的保護範圍和公開範圍之內。
【權利要求】
1. 一種雙水相萃取蓯蓉苯乙醇苷的方法，其包括以下步驟： 1) 將蓯蓉原料粉末加入雙水相體系； 2) 萃取； 3) 移取苯乙醇苷富集相，濃縮乾燥，得到蓯蓉苯乙醇苷提取物。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述蓯蓉原料粉末的粉碎度為10-80目， 優選20-40目，更優選30目。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述蓯蓉原料為肉蓯蓉、管花肉蓯蓉、鹽 生肉蓯蓉、沙蓯蓉和白花鹽蓯蓉中的一種或至少兩種的混合物。
4. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述雙水相體系為選自乙醇/硫酸銨、乙 醇/磷酸氫二鉀、乙醇/檸檬酸鈉或PEG/硫酸銨體系中的一種； 優選地，所述雙水相體系為乙醇/硫酸銨體系，其中，基於所述雙水相體系，乙醇質量 分數為I5% -40%，優選18% -30%，更優選20% ;基於所述雙水相體系，硫酸銨質量分數 為 14% -40%，優選 18% -30%，更優選 23%。
5·根據權利要求1-4任意一項所述的方法，其特徵在於，所述灰蓉原料粉末與所述雙 水相體系按重量計比值為1 :5-1 :50,優選1 :20-1 :40,更優選1 :30。
6.根據權利要求1-4任意一項所述的方法，其特徵在於，所述萃取採用攪拌震蕩和/或 超聲輔助的提取方法； 優選地，所述超聲輔助提取的時間為10-90分鐘，優選30-60分鐘，更優選40分鐘； 所述超聲輔助提取功率100-3000W，優選200-2000W，更優選8〇〇W ;所述超聲輔助提取頻率 10- 100kHz，優選 30-80kHz，更優選 40kHz ;提取溫度 20-8(TC,優選 30-7(TC，更優選 4(TC。
7·根據權利要求1-6任意一項所述的方法，其特徵在於，所述苯乙醇苷富集相的濃縮 千燥採用選自真空濃縮乾燥、噴霧乾燥、鼓風乾燥和冷凍乾燥中的一種； 優選地，所述濃縮乾燥採用噴霧乾燥，其進風溫度為160-23(TC,優選170-20(TC，更優 選 175。。。
8. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，移取苯乙醇苷富集相之後，剩餘的雙水相 體系進行回收，所述回收包括回收無機鹽，所述回收無機鹽的方法為結晶法。
9. 根據權利要求8所述的方法，其特徵在於，所述回收雙水相體系包括回收有機物，所 述中回收有機物的方法包括減壓蒸餾法。
10. 根據權利要求1-7任意一項所述方法製備的苯乙醇苷在改善記憶或神經保護產品 中的應用。
【文檔編號】A61P39/06GK104189100SQ201410279513
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年6月18日 優先權日:2014年6月18日
【發明者】趙兵, 董貝濤, 趙慶生, 袁曉凡 申請人:中國科學院過程工程研究所