一種用於癌症輔助治療藥物組合物、其製劑及質量控制方法
2023-10-09 06:29:29 1
專利名稱：一種用於癌症輔助治療藥物組合物、其製劑及質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種用於癌症輔助治療藥物組合物、其製劑及質量控制方法，特別涉及一種以中草藥為原料的癌症輔助治療藥物組合物、其製劑及質量控制方法。
背景技術：
黃芪來源豆科植物蒙古黃芪A.membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus Bge.Hsiao乾燥根，為傳統的補氣藥，具有補氣固表，利尿排膿，斂瘡生肌的功效。傳統用於提高人體免疫力等功效，同時也被用來補氣，比如疲勞，缺乏精力等症狀。黃芪的化學成分研究報導很多，從中分離出多糖、皂苷、黃酮、胺基酸、微量元素等。近代藥理研究證明，黃芪多糖(polysaccharides)和黃芪皂苷(total Astragloside)為其中的主要成分。其中，黃芪多糖(Astragaluspolysaccharids，APS)具有促進免疫功能、提高巨噬細胞活性、抑制EAS、雙向調節血糖等作用。黨參為桔梗科植物黨參Codonopsis pilosula(Franch.)Nannf.的乾燥根，具有補中益氣，健脾生津的功效。黨參含有多糖、皂苷、揮髮油等。
以黨參和黃芪為原料製備的參芪扶正注射液是目前臨床應用較廣的中藥製劑，它由等量的黨參和黃芪組方而成，臨床上對氣虛型的晚期腫瘤患者有良好的療效，具有扶正固本、益氣補虛的功效，能幫助癌症患者順利完成放療、化療，減少化療藥物的毒副作用，保護機體的造血功能，能使患者血象升高，改善免疫功能及消化道症狀等，提高患者的生存質量，並可治療心、腦血管等疾病。
中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特徵性的某類或數類成分的色譜或光譜的圖譜。在現階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確的情況下，中藥指紋圖譜對於有效控制中藥材或中成藥的質量具有重要的意義。日本漢方藥主要生產企業在20世紀80年代就已經在企業內部採用高效液相指紋圖譜控制質量。德國、法國在對銀杏葉提取物聯合開發的過程中，發現銀杏葉提取物的醫療作用是提取物所得物質群的整體作用結果，而對這樣一個整體的質量控制，亦採用高效液相指紋圖譜方法。美國FDA最近幾年制定的植物草藥指南中已經明確把指紋圖譜作為混合物質群的質量控制方法(FDA.Guidance of IndustryBotanical Drug(Draft).2000August)。隨著研究的深入，人們發現，作為中醫理論的實踐產物，中藥，尤其是複方中藥，其中所含的任一成分都不能代表其整體療效。人們逐漸認識到，現行的參照西藥(合成藥)質量控制模式的質量標準不能恰當地反映中藥內在的質量。從發展趨勢看，從現行的質量控制模式向一種綜合的、宏觀的、可量化的鑑別與主要有效成分含量測定結合已是發展的趨勢。
中藥質量評價的現行標準是利用光譜或色譜手段鑑別和測定某一種或幾種有效成分、活性成分或指標成分，以及藥典規定的常規檢查項目。如中國藥典2000年版[一部]共收載602種藥材及成藥品種。其中有992個薄層色譜鑑別，308個品種有含量測定〔容量法、光譜法、液相色譜法、氣相色譜法及薄層色譜掃描法〕，大多數品種有一般的檢查項目。顯然.這些質量標準的設置是模仿了化學藥品的模式。其它國家如英國、印度、美國草藥典、日本藥局方中的漢藥及德國Commission E編輯的德國草藥專論等也採用了基本相同的內容。對於化學藥品而言，其藥效成分為結構清晰的單一化合物，構效關係明確，其含量和純度直接表達其有效及安全性。然而，中醫用藥的特點是複方配伍，任何單一的有效或活性成分的含量高低均不能表達其整體的療效。例如，黃芪所含的黃芪甲苷(aastraga losideIV)是當前被選擇為質量標準的鑑別和含量測定的最為常見的目標，但並沒有依據證明黃芪甲苷與黃芪的功能主治的明確聯繫。同樣，黃連、黃柏、三棵針均含小梁鹼，一般都以它作為檢測的目標，但是三者的功能主治卻截然不同。複方製劑的情況就更加複雜。中醫這種不是一對一的非線性的理論和實踐說明中藥質量應該採用某種宏觀的綜合的質量評價手段。
參芪扶正注射液是由黨參、黃芪為主要原料製成的，其治療效果已經得到臨床的驗證，而是否能夠保證藥物的質量是決定其療效的基礎。如果用一、二種活性成分來說明其內在質量，具有一定的片面性，更不用說無藥效的指標成分了。要控制其功效，只針對其一、二個化學成分進行表徵和控制是不夠的，必須對它的物質群整體予以控制。所以，除了「微觀分析」外，還應該用某種「宏觀分析」方法，從整體上有效地表徵中藥質量。指紋圖譜作為中草藥及其提取物質量控制方法，目前已經成為國際共識。現在，對參芪扶正注射液中活性成分的測定方法較多，但如何能夠從更宏觀的角度對其進行質量控制的宏觀質量控制方法尚未見報導。
發明內容
本發明的目的是提供一種用於癌症輔助治療藥物組合物、其製劑及質量控制方法。
本發明的用於癌症輔助治療的藥物組合物，以黨參和黃芪為原料製成，其特徵在於所述的組合物的高效液相指紋圖譜中至少有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有3個，分別為
1號峰，平均保留時間RT為12.807min，RSD為0％，峰面積為1158.519，RSD為4.5％；3號峰，平均保留時間RT為28.032min，RSD為0％，峰面積為1555.306，RSD為2.46％；5號峰，平均保留時間RT為43.481min，RSD為0％，峰面積為2578.959，RSD為1.52％。
本發明的藥物組合物，優選的是，組合物的指紋圖譜中至少有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有5個，分別為1號峰，平均保留時間RT為12.807min，RSD為0％，峰面積為1158.519，RSD為4.5％；2號峰，平均保留時間RT為19.439min，RSD為0％，峰面積為358.374，RSD為1.08％；3號峰，平均保留時間RT為28.032min，RSD為0％，峰面積為1555.306，RSD為2.46％；5號峰，平均保留時間RT為43.481min，RSD為0％，峰面積為2578.959，RSD為1.52％；6號峰，平均保留時間RT為48.72min，RSD為0％，峰面積為538.678，RSD為5.42％。
本發明的藥物組合物，更優選的是，指紋圖譜中至少有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積2％的吸收峰有6個，分別為1號峰，平均保留時間RT為12.807min，RSD為0％，峰面積為1158.519，RSD為4.5％；2號峰，平均保留時間RT為19.439min，RSD為0％，峰面積為358.374，RSD為1.08％；3號峰，平均保留時間RT為28.032min，RSD為0％，峰面積為1555.306，RSD為2.46％；4號峰，平均保留時間RT為31.238min，RSD為0％，峰面積為145.988，RSD為0.13％；5號峰，平均保留時間RT為43.481min，RSD為0％，峰面積為2578.959，RSD為1.52％；6號峰，平均保留時間RT為48.72min，RSD為0％，峰面積為538.678，RSD為5.42％。
本發明的藥物組合物可以根據需要，加入或者不加藥學上可接受的載體，製成任何形式的藥物製劑，如片劑、膠囊、散劑、丸劑、口服液、注射液、輸液劑或者凍乾粉針製劑等，優選注射液、輸液劑或者凍乾粉針製劑。
本發明的藥物的組合物或者製劑的指紋圖譜的檢測是採用如下方法進行的照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VI D)，結合指紋圖譜的要求進行測定。
色譜條件和系統適用性試驗Diamonsil C18柱(迪馬公司)，粒度5μm，體積250×4.6mm；流動相乙腈-水線性梯度洗脫(見下表)；柱溫30℃；流速1ml/min；檢測波長為270nm；記錄時間55分鐘。理論板數按最大峰計算應不低於3000。
線性梯度洗脫流動相配比變化程序
供試品溶液的製備取本品1瓶，加水5ml使溶解，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，濾液作為供試品溶液。
測定法精密吸取供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定。
供試品指紋圖譜與對照用指紋圖譜比較，並經計算機模擬相似度計算軟體「中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統」(中國藥典會出版，版本2004A或B)計算，相似度應為0.90～1.00之間。
本發明的藥物組合物及其製劑的可採用包括如下步驟的方法製備(1)取等量的黨參和黃芪飲片，加低元醇回流提取，得提取液和藥渣，提取液經弱極性大孔吸附樹脂柱純化，收集洗脫液並濃縮乾燥得黨參、黃芪總皂苷提取物；(2)步驟(1)得到的藥渣去除溶劑後，經水提、50-80％的低元醇沉澱，沉澱加水溶解後再用30-40％的低元醇沉澱，取上清，用三氯乙酸法去除蛋白，進一步用70-90％的低元醇沉澱，得粗多糖，用水溶解後，採用截流分子量為3000的膜進行超濾，濃縮液進一步用70-90％的低元醇沉澱，取沉澱，乾燥粉碎得黨參、黃芪總多糖提取物。
(3)合併步驟(1)和步驟(2)的黨參、黃芪總皂苷提取物和黨參、黃芪總多糖提取物，加入適當的藥學上可接受的載體，製成凍乾粉針製劑。
此處的低元醇的概念同前，優選乙醇。
所述的步驟(1)所用弱極性大孔樹脂可以是任何常規的或者已知的弱極性大孔樹脂，例如常用的D101型大孔吸附樹脂、AB-8型大孔吸附樹脂、ZTC-1型大孔吸附樹脂和DidaionHP20型大孔吸附樹脂等，優選AB-8型大孔吸附樹脂和D101型大孔吸附樹脂，更優選D101型大孔吸附樹脂，採用樹脂的純化過程可以按照本領域常規或者已知的方法進行。
本發明提供的製備方法，優選的是包括以下步驟(1)取黨參和黃芪飲片，加用6-10倍量的60-80％乙醇，回流提取1-3次，每次1.5-3小時，得提取液和藥渣，提取液經D101型大孔吸附樹脂柱純化，收集洗脫液並濃縮乾燥得黨參、黃芪總皂苷提取物；(2)步驟(1)得到的藥渣去除溶劑後，加6-10倍量的水，於60-100℃，浸提1-3次，每次1.5-3小時，60-80％的乙醇沉澱，沉澱加水溶解後再用30-40％的乙醇沉澱，取上清，去除蛋白，進一步用70-90％的乙醇沉澱，得粗多糖，用水溶解後超濾，濃縮液進一步用70-90％的乙醇沉澱，取沉澱，乾燥粉碎得黨參、黃芪總多糖提取物。
(3)合併步驟(1)和步驟(2)的黨參、黃芪總皂苷提取物和黨參、黃芪總多糖提取物，加入適當的藥學上可接受的載體，製成凍乾粉針製劑。
本發明還提供了所述的藥物組合物及其製劑的質量控制方法，包括下述步驟(a)對照指紋圖譜的建立取所述的藥物組合物或者製劑對照樣品，加水溶解，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，濾液作為對照品溶液；(b)對照指紋圖譜的測定吸取上述對照樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到對照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；流動相為乙腈-水線性梯度洗脫，檢測波長為250-280nm；(c)待測產品指紋圖譜的測定取待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(d)將所述待測產品指紋圖譜與所述對照指紋圖譜進行比較，識別二者所具有的共同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
所述(a)步驟中優選的色譜條件是流動相的流速0.5～1.5ml/min，檢測波長265～275nm，柱溫20～40℃。
優選的黨參藥材指紋圖譜的建立採用如下方法(a)對照指紋圖譜的建立取所述的藥物組合物或者製劑對照樣品，加水溶解，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，濾液作為對照品溶液；(b)對照指紋圖譜的測定吸取上述對照樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到對照指紋圖譜，色譜條件Diamonsil C18柱(迪馬公司)，粒度5μm，體積250×4.6mm；流動相乙腈-水線性梯度洗脫(見下表)；柱溫30℃；流速1ml/min；檢測波長為270nm；記錄時間55分鐘。理論板數按最大峰計算應不低於3000。
線性梯度洗脫流動相配比變化程序
(c)待測產品指紋圖譜的測定取待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(d)將所述待測產品指紋圖譜與所述對照指紋圖譜進行比較，識別二者所具有的共同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的黨參藥材的對照指紋圖譜中有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有3個，分別為1號峰，平均保留時間RT為12.807min，RSD為0％，峰面積為1158.519，RSD為4.5％；3號峰，平均保留時間RT為28.032min，RSD為0％，峰面積為1555.306，RSD為2.46％；5號峰，平均保留時間RT為43.481min，RSD為0％，峰面積為2578.959，RSD為1.52％。
在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的黨參藥材的對照指紋圖譜中有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有5個，分別為1號峰，平均保留時間RT為12.807min，RSD為0％，峰面積為1158.519，RSD為4.5％；2號峰，平均保留時間RT為19.439min，RSD為0％，峰面積為358.374，RSD為1.08％；3號峰，平均保留時間RT為28.032min，RSD為0％，峰面積為1555.306，RSD為2.46％；5號峰，平均保留時間RT為43.481min，RSD為0％，峰面積為2578.959，RSD為1.52％；6號峰，平均保留時間RT為48.72min，RSD為0％，峰面積為538.678，RSD為5.42％。
在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的黨參藥材的對照指紋圖譜中有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積2％的吸收峰有6個，分別為1號峰，平均保留時間RT為12.807min，RSD為0％，峰面積為1158.519，RSD為4.5％；2號峰，平均保留時間RT為19.439min，RSD為0％，峰面積為358.374，RSD為1.08％；
3號峰，平均保留時間RT為28.032min，RSD為0％，峰面積為1555.306，RSD為2.46％；4號峰，平均保留時間RT為31.238min，RSD為0％，峰面積為145.988，RSD為0.13％；5號峰，平均保留時間RT為43.481min，RSD為0％，峰面積為2578.959，RSD為1.52％；6號峰，平均保留時間RT為48.72min，RSD為0％，峰面積為538.678，RSD為5.42％。
本發明採用如下方法控制藥物組合物和製劑的質量，取待測組合物或者製劑，採用與對照樣品的製備方法、色譜條件、測定方法完全相同的方法進行測定，獲取指紋圖譜，將組合物或者製劑待測產品指紋圖譜與對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有3個或3個以上相同的吸收峰時，便認為待測產品是合格產品。
優選地，黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有4個或4個以上相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
較為優選地，黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有5個或5個以上相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
最為優選地，被測的黨參藥材產品指紋圖譜與對照黨參藥材指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有6個相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
本發明把藥物組合物或者製劑中的各種成分指紋圖形作為一個整體看待，注重各個構成指紋特徵峰的前後順序和相互關係，注重整體面貌特徵，避免了因只測定一、二個化學成分而判定其整體質量的片面性，為完整、準確評價其質量提供了新的對照標準。
本發明具有方法簡便、穩定、精密度高、重現性好、易於掌握的特點。
穩定性試驗(S1～S5分別表示同一批次的樣品5份)
精密度試驗(S1～S5分別表示同一批次的樣品5份)
重現性試驗(S1～S5分別表示同一批次的樣品5份)
對於本領域技術人員而言，根據本發明所公開的技術內容，本領域技術人員將很清楚本發明的其它實施方案，本發明實施例僅作為示例。在不違反本發明主旨及範圍的情況下，可對本發明進行各種改變和改進。例如，使用不同的檢測儀器所獲得的測定結果可能有所不同，但只要使用本發明所述的質量控制方法，均在本發明保護範圍之內。
實施例1的藥物製劑的指紋圖譜。
具體實施例方式
下面列舉實施例進一步詳細說明本發明，該實施例僅用於說明本發明，對本發明並不構成限制。
實施例1藥物組合物及製劑的製備(1)取黨參、黃芪飲片各5000g，加6倍量70％乙醇，回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液(藥渣揮去溶劑後備用)，減壓回收乙醇並濃縮至相對密度為1.15～1.25(60℃)的稠膏，加4倍量水使溶解，靜置，離心，取上清液加於已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱上，先用2倍量的蒸餾水洗滌樹脂柱，再用80％乙醇的洗脫皂苷類成分，收集4倍於樹脂柱體積的80％的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇並濃縮至稠膏，濃縮物在60℃下乾燥得黨參、黃芪總皂苷提取物。
(2)上述揮去溶劑後的藥渣，加10倍量水，於60℃浸提2次，每次1.5小時，合併水提液，濃縮至1∶1(每毫升含原生藥材1克)，加入乙醇，使醇濃度達到70％，靜置24h，傾出上清液，沉澱離心，將離心所得沉澱加適量水(水∶原生藥為1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇濃度達到35％，靜置24h，離心，取上清液，回收盡乙醇，加適量水調整體積至相對密度為1.00~1.05，以1∶1等體積加入5％三氯乙酸溶液，靜置4小時，離心，取上清液，加乙醇至含醇量達80％，靜置過夜，濾過，得粗多糖，加適量水(水∶原生藥材為1∶1)溶解，用截留分子量3000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對密度為1.20~1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達80％，靜置過夜，濾過，取沉澱，用無水乙醇洗滌，真空乾燥，粉碎，得總多糖提取物。
(3)取重量比為1∶3的黨參、黃芪總皂苷及總多糖提取物，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％注射用甘露醇、0.5％聚維酮K30，並用10％氫氧化鈉溶液調pH值為6.5～7.5，補加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔濾膜濾過，灌裝7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷凍乾燥，壓蓋，封口，即得。
指紋圖譜檢測〖指紋圖譜〗照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VI D)，結合指紋圖譜的要求進行測定。
色譜條件和系統適用性試驗Diamonsil C18柱(迪馬公司)，粒度5μm，體積250×4.6mm；流動相乙腈-水線性梯度洗脫(見下表)；柱溫30℃；流速1ml/min；檢測波長為270nm；記錄時間55分鐘。理論板數按最大峰計算應不低於3000。
線性梯度洗脫流動相配比變化程序
供試品溶液的製備取本實施例製備的產品1瓶，加水5ml使溶解，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，濾液作為供試品溶液。
測定法精密吸取供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定。
供試品指紋圖譜(見附圖)與對照用指紋圖譜比較，並經計算機模擬相似度計算軟體「中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統」(中國藥典會出版，版本2004A或B)計算，相似度為0.99。
實施例2按照實施例1的方法製備本發明的藥物製劑，只是第(1)步中取黨參3500g，黃芪6500g，所用的大孔吸附樹脂是AB-8型大孔吸附樹脂，第(2)步提取所用的低元醇是正丁醇，沉澱所用的低元醇是異丙醇。
供試品指紋圖譜與對照用指紋圖譜比較(按實施例1的方法)，並經計算機模擬相似度計算軟體「中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統」(中國藥典會出版，版本2004A或B)計算，相似度為0.98。
實施例3(1)取黨參、黃芪飲片各5000g，加10倍量60％乙醇，回流提取1次，3小時，提取液(藥渣揮去溶劑後備用)減壓回收乙醇並濃縮至相對密度為1.15～1.25(60℃)的稠膏，加3倍量水使溶解，靜置，離心，取上清液加於已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱上，先用10倍量的蒸餾水洗滌樹脂柱，再用80％乙醇的洗脫皂苷類成分，收集3倍於樹脂柱體積的80％的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇並濃縮至稠膏，濃縮物在50℃下乾燥得黨參、黃芪總皂苷提取物。
(2)上述揮去溶劑後的藥渣，加6倍量水，於100℃浸提2次，每次3小時，合併水提液，濃縮至1∶1(每毫升含原生藥材1克)，加入乙醇，使醇濃度達到60％，靜置24h，傾出上清液，沉澱離心，將離心所得沉澱加適量水(水∶原生藥為1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇濃度達到35％，靜置24h，離心，取上清液，回收盡乙醇，加適量水調整體積至相對密度為1.00～1.05，以1∶1等體積加入5％三氯乙酸溶液，靜置4小時，離心，取上清液，加乙醇至含醇量達80％，靜置過夜，濾過，得粗多糖，加適量水(水∶原生藥材為1∶1)溶解，用截留分子量3000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對密度為1.20~1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達90％，靜置過夜，濾過，取沉澱，用無水乙醇洗滌，真空乾燥，粉碎，得總多糖提取物。
(3)取重量比為1∶0.1的黨參、黃芪總皂苷及總多糖提取物，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％注射用甘露醇、0.5％Tween-80，並用10％氫氧化鈉溶液調pH值為6.5～7.5，補加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔濾膜濾過，灌裝7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，壓蓋，封口，即得。
供試品指紋圖譜與對照用指紋圖譜比較(按實施例1的方法)，並經計算機模擬相似度計算軟體「中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統」(中國藥典會出版，版本2004A或B)計算，相似度為0.99。
實施例4(1)取黨參、黃芪飲片各5000g，加8倍量60％乙醇，回流提取2次，每次2小時，提取液(藥渣揮去溶劑後備用)減壓回收乙醇並濃縮至相對密度為1.15～1.25(60℃)的稠膏，加5倍量水使溶解，靜置，離心，取上清液加於已處理好的D101型大孔吸附樹脂柱上，先用5倍量的蒸餾水洗滌樹脂柱，再用80％乙醇的洗脫皂苷類成分，收集2倍於樹脂柱體積的80％的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇並濃縮至稠膏，濃縮物在60℃下乾燥得黨參、黃芪總皂苷提取物。
(2)上述揮去溶劑後的藥渣，加8倍量水，於80℃浸提3次，每次2小時，合併水提液，濃縮至1∶1(每毫升含原生藥材1克)，加入乙醇，使醇濃度達到80％，靜置24h，傾出上清液，沉澱離心，將離心所得沉澱加適量水(水∶原生藥為1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇濃度達到40％，靜置24h，離心，取上清液，回收盡乙醇，加適量水調整體積至相對密度為1.00～1.05，以1∶1等體積加入5％三氯乙酸溶液，靜置4小時，離心，取上清液，加乙醇至含醇量達70％，靜置過夜，濾過，得粗多糖，加適量水(水∶原生藥材為1∶1)溶解，用截留分子量6000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對密度為1.20~1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達70％，靜置過夜，濾過，取沉澱，用無水乙醇洗滌，真空乾燥，粉碎，得總多糖提取物。
(3)取重量比為1∶8的黨參、黃芪總皂苷及總多糖提取物，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％葡萄糖，並用10％氫氧化鈉溶液調pH值為6.5～7.5，補加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔濾膜濾過，灌裝7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，壓蓋，封口，即得。
供試品指紋圖譜與對照用指紋圖譜比較(按實施例1的方法)，並經計算機模擬相似度計算軟體「中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統」(中國藥典會出版，版本2004A或B)計算，相似度為0.97。
實施例5(1)取黨參、黃芪飲片各5000g，加9倍量60％乙醇，回流提取2次，每次1.5小時，提取液(藥渣揮去溶劑後備用)減壓回收乙醇並濃縮至相對密度為1.15～1.25(60℃)的稠膏，加5倍量水使溶解，靜置，離心，取上清液加於已處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱上，先用5倍量的蒸餾水洗滌樹脂柱，再用80％乙醇的洗脫皂苷類成分，收集3倍於樹脂柱體積的70％的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇並濃縮至稠膏，濃縮物在60℃下乾燥得黨參、黃芪總皂苷提取物。
(2)上述揮去溶劑後的藥渣，加8倍量水，於70℃浸提3次，每次3小時，合併水提液，濃縮至1∶1(每毫升含原生藥材1克)，加入乙醇，使醇濃度達到70％，靜置24h，傾出上清液，沉澱離心，將離心所得沉澱加適量水(水∶原生藥為1∶1)溶解，再加入乙醇，使醇濃度達到350％，靜置24h，離心，取上清液，回收盡乙醇，加適量水調整體積至相對密度為1.00~1.05，以1∶1等體積加入5％三氯乙酸溶液，靜置4小時，離心，取上清液，加乙醇至含醇量達70％，靜置過夜，濾過，得粗多糖，加適量水(水∶原生藥材為1∶1)溶解，用截留分子量6000超濾膜超濾，取濃縮液，減壓濃縮至相對密度為1.20~1.30(60℃)，加乙醇至含醇量達70％，靜置過夜，濾過，取沉澱，用無水乙醇洗滌，真空乾燥，粉碎，得總多糖提取物。
(3)取重量比為1∶4的黨參、黃芪總皂苷及總多糖提取物，加2000ml注射用水使溶解，加入9.5％葡萄糖，並用10％氫氧化鈉溶液調pH值為6.5～7.5，補加注射用水至2500ml，用0.22μm微孔濾膜濾過，灌裝7ml西林瓶中，每瓶2.5ml，冷凍乾燥，壓蓋，封口，即得。
供試品指紋圖譜與對照用指紋圖譜比較(按實施例1的方法)，並經計算機模擬相似度計算軟體「中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統」(中國藥典會出版，版本2004A或B)計算，相似度為0.96。
實施例6抗腫瘤增效試驗對環磷醯胺抗Lewis肺癌作用的增效試驗於無菌條件下摘取荷Lewis肺癌小鼠的瘤塊，除去壞死組織，用玻璃勻漿器勻漿，按1∶4倍用無菌生理鹽水稀釋，然後無菌條件下每隻小鼠(C57BL/6種)右前肢腋窩皮下注射0.2ml，24h後稱動物體重並分組。第一組為荷瘤對照組，給等容積生理鹽水；第二組為化療藥物組，給環磷醯胺注射劑30mg/kg；第三、四、五組為本發明的藥物製劑+化療藥物組，同時給本發明的藥物製劑(按實施例1的方法製備)3g生藥/kg、6g生藥/kg、12g生藥/kg和環磷醯胺注射劑30mg/kg。接種腫瘤後第二天開始腹腔注射給藥，0.2ml/10g，每天1次，連續10天；接種腫瘤後第二天和第六天分別腹腔注射環磷醯胺注射劑。第10天給藥後24h稱動物體重，處死小鼠，剝離瘤塊並稱重，抑瘤率計算同上。試驗結果見表1。
表1 本發明的藥物製劑對環磷醯胺抗Lewis肺癌作用的影響(x±s)
與荷瘤對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與環磷醯胺組比較，*P＜0.05，**P＜0.01由表12可見，本實驗所用劑量的環磷醯胺能減輕Lewis肺癌小鼠的瘤重，與荷瘤對照組比較有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)。本發明的藥物製劑與環磷醯胺聯合應用，抗小鼠Lewi s肺癌的作用增強，大、中、小劑量組抑瘤率依次為69.77％、44.65％和36.74％，與單獨應用環磷醯胺(抑瘤率為35.81)比較，大劑量組有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，說明本發明的藥物製劑能增強環磷醯胺抗小鼠Lewis肺癌作用。
對放療抗H22肝癌作用的增效試驗於無菌條件下抽取荷H22肝癌8天的小鼠腹水，按1∶4倍用無菌生理鹽水稀釋，然後無菌條件下每隻小鼠(ICR種)腹腔注射0.2ml，24h後稱動物體重並分組。第一組為為荷瘤對照組，給等容積生理鹽水；第二組為放療組，給小劑量X線照射；第三組為參芪扶正注射液組，給參芪扶正注射液6g生藥/kg；第四、五、六組為本發明的藥物製劑和小劑量X線照射，同時給本發明的藥物製劑(按實施例一的方法製備)3g生藥/kg、6g生藥/kg、12g生藥/kg和小劑量X線照射。接種腫瘤後第二天開始開始腹腔注射給藥，0.2ml/10g，每天1次，連續10天；接種腫瘤後第五天給一次性小劑量X線照射(全身照射劑量為12.5mGy/min，總劑量為75mGy)。第10天給藥後24h稱動物體重，處死小鼠，剝離瘤塊並稱重，抑瘤率計算同上。試驗結果見表13。
表2 本發明的藥物製劑對放療抗H22肝癌作用的影響(x±s)
與荷瘤對照組比較，##P＜0.01；與放療組比較，**P＜0.01由表13可見，本實驗所用劑量的放療能減輕H22肝癌小鼠的瘤重，與荷瘤對照組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。本發明的藥物製劑與放療聯合應用，抗小鼠H22肝癌的作用增強，大、中、小劑量組抑瘤率依次為56.38％、47.87％和25.00％，與單獨應用放療組(抑瘤率為24.47)比較，有顯著性差異(P＜0.01)，，說明本發明的藥物製劑能增強放療抗小鼠H22肝癌作用。參芪扶正注射液與放療聯合應用，抗小鼠H22肝癌的作用輕度增強，抑瘤率為36.28％，但與單獨應用放療組比較無顯著性差異(P＞0.05)；與同劑量本發明的藥物製劑比較，有顯著性差異(P＜0.01)，說明本發明的藥物製劑增強放療抗小鼠H22肝癌作用強於參芪扶正注射液。
權利要求
1.一種用於癌症輔助治療的藥物組合物，以黨參和黃芪為原料製成，其特徵在於所述的組合物的高效液相指紋圖譜中至少有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有3個，分別為1號峰，平均保留時間RT為12.807min，RSD為0％，峰面積為1158.519，RSD為4.5％；3號峰，平均保留時間RT為28.032min，RSD為0％，峰面積為1555.306，RSD為2.46％；5號峰，平均保留時間RT為43.481min，RSD為0％，峰面積為2578.959，RSD為1.52％。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特徵在於所述的組合物的指紋圖譜中至少有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有5個，分別為1號峰，平均保留時間RT為12.807min，RSD為0％，峰面積為1158.519，RSD為4.5％；2號峰，平均保留時間RT為19.439min，RSD為0％，峰面積為358.374，RSD為1.08％；3號峰，平均保留時間RT為28.032min，RSD為0％，峰面積為1555.306，RSD為2.46％；5號峰，平均保留時間RT為43.481min，RSD為0％，峰面積為2578.959，RSD為1.52％；6號峰，平均保留時間RT為48.72min，RSD為0％，峰面積為538.678，RSD為5.42％。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特徵在於所述的組合物的指紋圖譜中至少有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積2％的吸收峰有6個，分別為1號峰，平均保留時間RT為12.807min，RSD為0％，峰面積為1158.519，RSD為4.5％；2號峰，平均保留時間RT為19.439min，RSD為0％，峰面積為358.374，RSD為1.08％；3號峰，平均保留時間RT為28.032min，RSD為0％，峰面積為1555.306，RSD為2.46％；4號峰，平均保留時間R為31.238min，RSD為0％，峰面積為145.988，RSD為0.13％；5號峰，平均保留時間RT為43.481min，RSD為0％，峰面積為2578.959，RSD為1.52％；6號峰，平均保留時間RT為48.72min，RSD為0％，峰面積為538.678，RSD為5.42％。
4.含權利要求1、2或3的藥物組合物的製劑，該製劑是注射液、輸液劑或者凍乾粉針製劑。
5.權利要求4的藥物組合物的質量控制方法，包括下述步驟(a)對照指紋圖譜的建立取權利要求4的藥物製劑對照樣品，加水溶解，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，濾液作為對照品溶液；(b)對照指紋圖譜的測定吸取上述對照樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到對照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；流動相為乙腈-水線性梯度洗脫，檢測波長為250-280nm；(c)待測產品指紋圖譜的測定取待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(d)將所述待測產品指紋圖譜與所述對照指紋圖譜進行比較，識別二者所具有的共同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
6.如權利要求5所述的質量控制方法，其特徵在於所述(a)步驟中流動相的流速0.5～1.5ml/min，檢測波長265～275nm，柱溫20～40℃。
7.如權利要求6的質量控制方法，其特徵在於，所述待測產品指紋圖譜與所述對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有3個或3個以上相同的吸收峰時，認為所述待測產品的質量合格。
8.如權利要求7所述的質量控制方法，其特徵在於，所述待測產品指紋圖譜與所述對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有4個或4個以上相同的吸收峰時，認為所述待測產品的質量合格。
9.如權利要求8所述的質量控制方法，其特徵在於，所述待測產品指紋圖譜與所述對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有5個或5個以上相同的吸收峰時，認為所述待測產品的質量合格。
10.如權利要求9所述的質量控制方法，其特徵在於，所述待測產品指紋圖譜與所述對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有6個相同的吸收峰時，認為所述待測產品的質量合格。
全文摘要
本發明提供了一種用於癌症輔助治療藥物組合物、其製劑及質量控制方法。本發明的用於癌症輔助治療的藥物組合物，以黨參和黃芪為原料製成，其特徵在於所述的組合物的高效液相指紋圖譜中至少有6個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有3個。
文檔編號G01N30/02GK101088520SQ200610014329
公開日2007年12月19日 申請日期2006年6月13日 優先權日2006年6月13日
發明者葉正良, 鄭永鋒, 夏忠庭, 李學敏 申請人:天津天士力之驕藥業有限公司