抗凝血酶－iii的生產方法純化方法及含該酶的製劑的製作方法
2023-10-09 18:46:04
專利名稱：抗凝血酶－iii的生產方法純化方法及含該酶的製劑的製作方法
專利說明血酶-III酶萍 婕把 III酶萍裕婕捌鋼寄墾 III痛約痛目血酶-III萍誑血酶-III目枚冉傻摹 血酶-III(撕為AT-III)一2虻鞍椎塹狀血小AT-III為65,00068,000械酶蘋浴AT-III強血酶血浴 猓珹T-III血酶蘋裕葉血罨 X突罨疘X也蘋浴荼AT-III血維酶鵲酶蘋浴 些蘋通詬毓賂為佟 些緣AT-III馴斐Ｔ慣∝鄙⒀ 血(DIC)AT-III枚冉母 猓珹T-III願鼐綴裕馴碩執謝裕使斯潭(JP-A-63-23896玫鎩癑P-A指未蠊氈專搿 遙AT-III一執血械牡剩一萍時要潛詰牟睢 些畲πＲ恢 0液態卻10小時牽荼AT-IIIPH68時榷模56卻6小時喪失80幕(J.Biol.chem(鍩е 2463694(1971))一媯報指14.7w/v拼攏AT-III60液態卻10小時AT-III幕榷(Thrombosis Research(血栓芯)22233(1981)J.Biol.chem.25612140(1981))然0.351.5M(10.2944.12w/v)拼陸AT-III液屑時通叩泳鄄斕紸T-III謀(Vox Sang48325(1985)) 植畲σ蒼底T-III酆系諄頻椎齲裕通俅謂洩潭卮(JP-A-63-23896)水色追(JP-A-1-275600)實姆斜然潭卮砑詞掛灰冊導碌偷幕曰剩遙水色狀染椎目裕前宓白∽gG鵲齲俅謂寫猿去些祝紗嘶曰駛嶠低 一目峁┮窖礎T-IIIAT-III液態斜時榷AT-III幕圓壹AT-III謀(浠 謾酆玫鵲) 猓荒酷供去染鐧癆T-III鵲鵲一同時AT-III幕浴 浠八墊及一AT-IIIAT-III 裕通雍AT-III水液AT-III姆汛鐧剿 些目募目模侔(a)(b)械一 (a)榷錄群AT-III水液群員旨前血酶III緣85擼壹群血酶III謀員95擼 (b)使媒脂硨珹T-III水液沾AT-III 猓ㄒ灰┭達到吮些目暮目模藥錆的捌盇T-III藥峽山艿危約選藥峽山艿濉 圖
圖1潛示越銅擁脂AT-III洗式圖 圖2潛示濃榷越銅擁脂AT-III洗式影圖 圖3潛示媒銅擁脂AT-III前HPLC-GPC圖 圖4潛示Ouchterlony械越銅擁脂拇AT-III前史圖巍 圖5潛示媒銅擁脂+未銅脂AT-III前HPLC-GPC圖 (I)原 AT-III水液(撕蟪３為AT-III水液)影血諄錚–ohn掖玫募(Fr.)II+III液IV約雍蔚血謝血VIII牟錛噸ＧＴ藏毖 通蜆こ痰確玫暮AT-III液也殺詿AT-III小 專US3,842,061(JP-A-48-35017)專US4,340,589(JP-A-54-95715)EP-A-339919(JP-A-1-275600)EP-A-551084洩舜血液血謝AT-III木宕跨，玫一牽血諧去玫牡掖IV-1IVII+III液一通筒寫 猓彩瓜 EP-A-53165(JP-W-57-500768)[鎩癑P-W指未蠊氈專搿盷蜆こ譚[EP-A-90505(JP-A-58-162529)]票AT-III (II)卻 荼卻矸ˋT-III水液說露潞說時誚卻恚度菏鼻壁盒的踩撅。裕5070選約60卻恚蔽 020小時選約10小時液PH為510選6.59.0為選使說幕液械凇AT-III水液AT-III謀為10500位/ml選1200位/ml為選25100位/ml荼1位AT-III指嗟 ml血AT-IIIAT-III幕浴AT-III幕強剎模使銑傻AT-III圓(Test Team AT-III-2-kitDaiichi Pure chemicalsCo.Ltd)舛 址式卻恚谷碅T-III芑員為卻前85擼選95擼AT-III水液械AT-III謀為95擼選99摺 AT-III謀強剎模通效液色(HPLC)使0.3M然-0.05M位液(PH7.0)平G3,000SWXL(TosohCorp.)舛 為鐧街蒼和等堵 卻懟 (III)榷 詒卻榷選選謝巍然啤 詒謝脂謀突蠆槐偷一元(一)元元選210碳原櫻為選26碳原印一元影一元(拾帷⑨、影帷⑨、)元影偷脂(帷 帷⑨、帷 偷脂(帷 (綾 元(於、勸)元腔(綾結、石)元影元腔校選蘋帷⑹、帷㈧冬幔∑會。
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(2)詿色 -脂F.F.(Pharmacia)AF-chelate Toyopearl 650M(TosohCorp.)色濉 (3)AT-III圓舛ㄊ 通銑傻鋟ㄊ筍-2238脅舛⊿2238玫姆應止液歉Test Team AT-III-2-kit(Daiichi Pure Chemicals Co.Ltd)系摹一(20mg)S-2238芙21ml水小血酶液(1.2U/ml)Green Cross Corpoation謀準AT-III液(1U/ml)杉薟-40麓牛使時煤40mM Tris60mM EDTA0.14M NaCl0.2HSA(血椎)2.4U/ml丶PH8.4液呀品110mU/ml一荻50l品100l血酶液停375印牛100l液筒確5櫻然螅1000l應止梅應405nm虜舛ㄒ喝Ｊ姑弊糀T-III液瞥謀準直嘸品AT-III浴 卻每AT-III品AT-III芑[U/ml液(ml)]卻前AT-IIL芑之鵲陌俜始為AT-III圓剩示詒1 (4)AT-III然 通舛科稟280nm(撕為A280)碌燃品械牡玫AT-III猿緣每品謀然(U/A280)示詒1 (5)HPLC 通G3000 SWXL(7.8mm30mmTosoh)裝SystemGold(Beckman)使煤50mM坪0.3M NaClPH7.0液展液寫攏為0.7ml/min280nm陸屑狻 HPLC貿AT-III示詒1穎1也傻玫AT-III謀猿潭(謀邸鄣) (6)Ouchterlony 猿梅通每一品濃280nm約30每(圖4械一)血銅(1)(Hoechst N-血血銅)轉(2)(Hoechst N-血轉)稅椎(3)(HoechstN-血椎)前(4)(Hoechst N-血前椎)私櫚 5)(DAKO A030)甩2虻鞍(6)(DAKO A033)甩1鵲酶(7)(DAKO A012)IgA(8)(DAKO A02621)IgG(9)(DAKO A04231)IgM(10)(Hoechst-IggM血)血酶原(11)(DAKO A325)塗血維原(12)(DAKO A080) 實施1 一Cohn掖旨敕的糏V-110kg狀銼 00水校液屑岜蹬ㄎ w/v嘶30櫻通岜笛岡橙ペ笛岡 嘶玫液PH6.513w/v葉#4,000(平舛 值2,6003,800Nippon Soda Co.Ltd)停某去貿錚 玫液俅30w/v木葉#4,000停幕紗緯傻某鎩 盞某芙約20水校預水平母-脂(pharmacia)希AT-III0.4M然液洗票猿去實祝然2.0M然液通曰洗訓AT-III幀 嘶玫AT-III水液示詒1榷停PH7.8然60卻10小時舜AT-III水液攵⊥鞠 ButylToyopearl 650Tosoh Corp.)喲預使煤3M然頻20mM蘋液(PH7.5)平猓僱灰何掛涸晃 幀然0.5蘋液(PH7.5)透夜曰麼AT-III 舛ㄈ疵枯碅T-III品幕裕約卻前AT-III幕緣牟省傻玫每AT-III品牡省 1 卻AT-III芑卻前AT-III芑之鵲陌俜省 HPLCAT-III 坪然時鄄斕叫鈍和聚很得 疲詰濃驢曬鄄斕餃緞斃a-Cit指疲Sorb指山媧 實施2 使-脂F.F.AT-III 1.5ml-脂F.F.(0.92.3cm)霞同(1.5ml)水濃為10mg/mlCuSO45H2O越轄然2(3ml)水洗癰牛通3暮0.1M坪0.5MNaClPH8.0液平PD-10(pharmacia)馴同液木卻3ml AT-III濃液(A2804.20)紗票希1.5ml/Fr(Fraction)佔洗鴨幀然霞每菥為3(4.5ml)牡PH7.57.06.0暮0.1M坪0.5M NaCl液同式1.5ml/Fr佔洗鴨幀通250mMEDTA2Na去轄然3水洗玫 示圖1圖1示蟛糠值PH8.0銅PH7.5PH7.5時洗選 2示銅洗液GPC-HPLC慕2示詒銅前未緣AT-III為88.0詿洗鴨懈麼斜PH值滷為100也說液PH8選PH7.5時通效爻去AT-III擁祝些PH6.5時也岜 2 系品械AT-III齲88 實施3 濃鵲影 為舛ㄉ灰盒蹬ㄈ滌辦，使0.1M蘋液(PH7.5)通0.1M(PH7.5)屑0.1M NaCl0.5M NaCl票幕液舛ㄈ磁ˋT-III液銅色為也說通PD-10卻濃AT-III液每隻液薌A280值約為5然螅每5ml液同液平1ml銅(0.82cm)稀喜始3ml值墓液剩嗖空忌 ml然螅直酶緣幕液洗櫻洗時洗液佔杉1ml洗式示圖2每洗液AT-III鵲GPC-HPLC舛ㄊ 3 3 系品AT-III拇為81.15 圖2示誆NaCl禿0.1M0.5M NaCl之洗品沒蟹圓臁Ｒ 示攏洗液AT-III拇為100.0耍示液濃鵲謀浠 沒影臁 猓姑礟H7.37.57.70.1M蘋液(0.1MNaCl)舛≒H浠辦；示詿朔圍PH謀浠 沒影臁Ｊ .1M蘋液(0.1MNaClPH7.5)舛 碌色為示詿朔圍詰露缺浠 影臁 實施4 詵糯寫潭鵲確痛實 通PD-10(A2804.05)卻濃AT-III液牒 .1MNaClPH7.50.1M液謝液然蠼液25ml旨5ml銅Toyopearl 650M(1.52.8cm)希同液平狻 嗟壁 .5ml去然螅應品同時玫洗液2暮平飠閡合此慘 32.5ml)為AT-IIIA280值AT-III曰示詒4色前GPC-HPLC圖示圖3 4示玫幕剩A280為80.3AT-III為89.6遙圖3示GPC-HPLC洗液示AT-III牡一澹槽猴、AT-III實住 猓稯uchterlony時未潛詰實(血銅住轉住椎住前椎住櫚白 2住1鵲酶IgAIgGIgM血酶原血維原(圖4) 耍示PH7.5通銅Toyopearl 650M色卓沙去械住酆捅AT-III 4 實施5 銅脂漏銅 知銅色校詠系銅通椎同時微漏漏銅姆校一小未轄脂(霞山轄)一脂印牽漏銅姆效諍0.1MNaClPH7.50.1M蘋液械20ml值卻玫Fr.II+III液濃AT-III液(A2804.96)擁銅系Toyopearl(1.52.8cm5ml)希同液平猓茨賈合 27.5mlA2803.18)械23.5旨擁同平)未詠系Toyopearl 650M(0.82.0cm1ml)希喜未募(25mlA2802.63)每銅牟舛ㄊ沮 5 5示然通銅蟹10,300ppb漏銅紙液通未轄系Toyopearl 650M全漏銅為漏馴15ppb淺詠水平(13ppb) 原蝦未詠洗液GPC-HPLC圖示圖5圖5示Fr.II+III液玫原也鼙銅為AT-III姆未姆濉Ｓ紡次 9.9 實施6 銅未轄Toyopearl玫拇 塹為使色撞效吆遠銅未詠轄屑狻r.II+III液Fr.IV木卻濃AT-III液院0.1M NaClPH7.50.1M蘋液透1600俅味同液透100(透為160,000)使Centyiprep-30(Amicon)濃稀(Fr.IVA2805.23FR.II+III液A280-5.50)通使Centriprep-30透誆幔僱 600透些液每20ml施詿5ml(1.52.8cm)銅系(Toyopearl1ml(0.82.0cm)未轄系Toyopearl希些同幕液平狻Ｏ囪狄菏┢肥比ツ 洗訓募趾喜10m嗟 銅洗蛹稀 穎6示拇鑰杉Fr.II+III夜Fr.IV原暇示玫幕曰剩為90摺遙然為約10U/A280使械藥萍幕取 6 實施7 AT-III藥萍票 實施5頻麼AT-III巍濃通BMM(bemberg MicroporousMembrane)膜(Asahi chemical Industry Co.Ltd.)恕紗票AT-III品50位/ml2w/v露0.52w/v坪0.5w/v然蘋希1N平嘶PH7.27.5通Millipore殖n500位然潿吃幻兌┢ 然細吮站實施員員誆氡就肺鋼變化透慕遠準摹 19961120盞萁氈平8-309281199764盞萁平9-163426些全詿慰
權利要求
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(a)榷攏群血酶-III水液使群員旨前目血酶-III緣85擼壹群目血酶-III謀時為95擼
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全文摘要
從含抗凝血酶－Ⅲ的水溶液中製備抗凝血酶－Ⅲ的方法,其包括下列步驟(a)和(b)中至少一步:(a)在穩定劑存在下加熱含抗凝酶－Ⅲ的水溶液,致使加熱後仍保持加熱前的抗凝血酶－Ⅲ活性的85%或更高,且加熱後的抗凝血酶－Ⅲ單體的比率保持為95%或更高;和(b)用金屬螯合樹脂處理含抗凝血酶－Ⅲ的水溶液,並回收純化的抗凝血酶－Ⅲ。
文檔編號A61K38/36GK1189502SQ9712645
公開日1998年8月5日 申請日期1997年11月20日 優先權日1997年11月20日
發明者井手野祥次, 瓜生勝寬, 上村八尋 申請人:株式會社綠十字