一種枯草芽孢桿菌及其在植物病害防治中的應用的製作方法
2023-10-05 02:17:24
一種枯草芽孢桿菌及其在植物病害防治中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明為一種枯草芽孢桿菌及其在植物病害防治中的應用，涉及微生物篩選【技術領域】，具體提供了一株從蔬菜大棚的土壤中篩選到的枯草芽孢桿菌FX1，保藏編號CCTCC NO：M2014563。所述菌株具有很強的抑菌效果，可廣泛應用於植物病害的防治。所述菌株對黃瓜白粉病的防治效率高達95.5%，對草莓白粉病的防治效率高達94.8%，對葡萄褐斑病的防治效率高達83.2%。除了植物白粉病和褐斑病外，所述枯草芽孢桿菌FX1還對由鐮刀菌和立枯絲核菌引起的植物黃腐病和果腐病均有明顯的拮抗作用，防治效率能達到80%以上，前景廣闊。CCTCC NO:M201456320141112
【專利說明】一種枯草芽孢桿菌及其在植物病害防治中的應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及微生物篩選【技術領域】，具體涉及一種枯草芽孢桿菌及其在植物病害防 治中的應用。
【背景技術】
[0002] 隨著植物種類的不斷增多，植物栽培方式的不斷多樣化，植物病害日趨嚴重，而傳 統的化學防治方法存在著許多弊端，比如：化學農藥的大量使用引起了嚴重的環境汙染，農 產品的農藥殘留也越來越嚴重，病菌抗藥性產生速度也越來越快等一系列對人民生活有害 的影響。在當今倡導低碳經濟、環保節約型社會中，尋求能保護人類生活又可增產的新技術 十分適應當今社會的發展。
[0003] 生物防治是利用一種生物或其產物對付另外一種生物的方法，分為以蟲治蟲、以 菌治蟲、以菌治菌三大類。它利用了生物物種間的相互關係，以一種或一類生物或其產物抑 制另一種或另一類生物。生物防治的方法有很多，微生物防治就是其中一種。微生物防治 主要是利用有益的微生物，通過生物間的競爭作用、抗生作用、寄生作用、溶菌作用及誘導 抗性等，來抑制某些病原物的存活和活動，其優越性在於資源豐富、選擇性強、無殘留、無汙 染、成本低，兼防兼治、增產增收、保持生態平衡，起到長效的作用。
[0004] 用於生物防治的微生物主要包括真菌、細菌、放線菌和酵母菌等很多生物種群，其 中真菌主要包括木黴、毛殼菌、青黴菌、菌根真菌等，細菌主要包括芽孢桿菌、假單胞菌、土 壤放射桿菌等。其中，芽孢菌的抑菌範圍很廣，包括根部病害、枝幹病害、葉華部病害和和收 獲後果品病害，如棉花枯萎病、黃萎病、立枯病等。由於其具有內生芽孢，抗逆性強，營養需 求簡單，繁殖速度快，並在植物根圈易於定殖，所以被廣泛應用於植物病害的生物防治中。 目前應用於生防的芽孢桿菌種類主要有枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、多粘 芽孢桿菌和短小芽孢桿菌等。
[0005] 利用拮抗微生物防治植物病害是當今植物病理學界十分活躍的研究領域之一。實 踐證明，引進對病原菌有拮抗作用的細菌防治植物病害，是一種經濟有效且無副作用的防 治途徑。在植物的生長環境中有豐富的微生物種類，開發有益芽孢桿菌潛力很大，但生防芽 孢桿菌防病效果有時不穩定，不同區域篩選到的芽孢桿菌其防病效果差異很大，所以開發 更多有益的芽孢桿菌是研製生防菌劑的重點之一。
【發明內容】
[0006] 本發明為解決現有技術問題，提供了一種枯草芽孢桿菌及其應用。所述枯草芽孢 桿菌是從蔬菜大棚的土壤中篩選分離到的，具有很強的抑菌效果，能有效防治植物病害。
[0007] 本發明一方面涉及一種枯草芽抱桿菌FXl (Bacillus subtilis FX1)，已於2014年 11月12日保藏於中國武漢武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO: M2014563。
[0008] 本發明一方面涉及一種生防製劑，包含上述枯草芽孢桿菌FX1。
[0009] 本發明還涉及上述生防製劑在植物病害防治中的應用。
[0010] 所述植物病害為黃瓜白粉病、草莓白粉病、葡萄褐斑病、植物黃腐病和果腐病中的 任意一種。
[0011] 所述生防製劑在植物病害防治中的應用，具體方法為將生防製劑稀釋0-700倍， 優選500-700倍。
[0012] 本發明從蔬菜大棚的土壤中篩選到了一株新型枯草芽孢桿菌FX1。所述菌株具有 很強的抑菌效果，可廣泛應用於植物病害的防治。所述菌株對黃瓜白粉病的防治效率高達 95. 5%，對草莓白粉病的防治效率高達94. 8%，對葡萄褐斑病的防治效率高達83. 2%。除 了植物白粉病和褐斑病外，所述枯草芽孢桿菌FXl還對由鐮刀菌和立枯絲核菌引起的植物 黃腐病和果腐病均有明顯的拮抗作用，防治效率能達到80%以上，前景廣闊。
【具體實施方式】
[0013] 下面結合具體實施例進一步闡述本發明。對於實施例中所用到的具體方法或材 料，本領域技術人員可以在本發明技術思路的基礎上，根據已有的技術進行常規的替換選 擇，而不僅限於本發明實施例的具體記載。
[0014] 實施例1菌株篩選與分離
[0015] 1、土樣稀釋液的製備：
[0016] 從海陽北城陽村蔬菜大棚取回土壤，稱取0. 5g 土壤樣品溶於4. 5ml無菌水中製成 1 :10的土壤溶液，然後從中吸取0. 5ml 土壤溶液置於4. 5ml無菌水中，製成1 :100的土壤 溶液，以此方法類推，製備I =IO6-IO7的土壤稀釋溶液。
[0017] 2、菌株分離與純化：
[0018] 取3-4個適宜濃度的稀釋液0. Iml均勻塗布於營養瓊脂培養基上；37°C培養2d後 取出，挑取單個菌落繼續分離純化，直至每個平板上長出的菌落形態顏色一致，即為單一菌 株。
[0019] 採用上述方法， 申請人:共篩選出12株菌，分別命名為FX1、FX2、FX3、……FX12。
[0020] 3、病原菌對峙實驗：
[0021] 在PDA平板中心處接種直徑約為5mm的單絲殼白粉菌（該菌為黃瓜白粉病的主要 病原菌之一，是由發明人苑偉偉於2013年6月篩選自青島市城陽區惜福鎮黃瓜種植大棚 中）菌餅；在PDA平板的四個角上分別接種等量的菌株FX1、FX2、FX3、……FX12,30°C培養 3天後，觀察對峙效果。根據抑制圈的大小進行篩選， 申請人:共得到四株對單絲殼白粉菌具 有較強抑制作用的菌株，分別為FX1、FX4、FX6和FX10。
[0022] 實施例2黃瓜白粉病防治效果驗證實驗
[0023] 1、菌液製備
[0024] 將篩選到的四株菌FX1、FX4、FX6、FX10分別接種於營養肉湯培養基，30°C培養2-3 天，得到活菌含量為l〇 8_l〇9cfu/ml的菌液。
[0025] 2、實驗過程
[0026] 1)實驗組：分別使用相同用量的FX1、FX4、FX6、FX10四株菌噴灑黃瓜葉片；每株菌 設三個處理組，每個處理組為隨機選擇的兩壟黃瓜，共100棵，各處理組之間設置保護行。
[0027] 在黃瓜的生長中期，將上述菌液分別加水稀釋500倍後，均勻噴灑在各處理組的 黃瓜葉片上；每次噴灑間隔7天，連用三次；最後一次噴灑完菌液10天後，檢查各處理組黃 瓜白粉病的發病情況。
[0028] 2)對照組：使用不含菌的營養肉湯培養基噴灑黃瓜葉片，其他操作與實驗組均相 同。
[0029] 3、結果分析
[0030] 病害分級標準：0級無病斑；1級：病斑面積佔葉面積的1/4以下；2級：病斑面積 佔葉面積的1/4-2/4 ;3 :病斑面積佔葉面積的2/4-3/4 ;4級：病斑面積佔葉面積的3/4以 上。
[0031] 病情指數=[Σ (病級值X該級發病葉數V(調查總葉數X最高病級 值）]X100%
[0032] 防治效率的計算公式=[1_(處理的病情指數/對照的病情指數）]X 100%。
[0033] 以SPSS統計軟體對實驗數據進行分析，結果如表1所示：
[0034] 表1黃瓜白粉病防治試驗
[0035]
【權利要求】
1. 一種枯草芽孢桿菌，其特徵在於，保藏編號為CCTCC N0:M2014563。
2. -種生防製劑，其特徵在於，包含權利要求1所述的枯草芽孢桿菌。
3. 權利要求2所述的生防製劑在植物病害防治中的應用。
4. 如權利要求3所述的應用，其特徵在於，所述的植物病害為白粉病、褐斑病、黃腐病 和果腐病中的任意一種。
5. 如權利要求3所述的應用，其特徵在於，所述的應用是將生防製劑稀釋0-700倍。
6. 如權利要求3所述的應用，其特徵在於，所述的應用是將生防製劑稀釋500-700倍。
【文檔編號】A01N63/00GK104403970SQ201410699358
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月27日 優先權日:2014年11月27日
【發明者】苑偉偉, 王鵬, 唐波, 朱彩彩, 甄麗, 劉魯民 申請人:青島蔚藍生物集團有限公司