治療或預防毛髮脫落或促進毛髮生長的方法

2023-10-05 08:44:14

專利名稱：治療或預防毛髮脫落或促進毛髮生長的方法
技術領域：
本申請涉及治療和預防哺乳動物脫髮或毛髮稀少以及促進哺乳動物毛髮生長的領域，例如在患有脫髮或有脫髮傾向的人中，以及促進哺乳動物毛髮生長，例如在患有脫髮或有脫髮傾向的人中。
背景技術：
毛髮及毛髮的生長 毛髮是我們身體形象不可或缺的，對我們的自尊心和自信心有深刻的影響。非人類的哺乳動物物種的毛髮通常被稱為「軟毛」。除非另有特殊說明，或者語境中另有要求，這裡使用的術語「hair」(毛髮)應包括「軟毛」。除非語境另有要求，該術語「hair」(毛髮)還應包括哺乳動物身體任何部位的毛髮，包括眉、眼瞼邊緣、腋窩以及鼻孔內。因此，毛髮可以包括頭髮、眉毛、睫毛或其它體毛。每一根毛髮包括兩種結構毛幹和毛囊。毛幹主要組成成分是角蛋白。毛幹包括三層角蛋白，然而內層，即毛髓，可能不存在。中層，即皮質，組成了毛幹的大部分。外層，即表皮，由毛鱗片以重疊的結構緊緊包裹而成。色素細胞遍布於皮質和毛髓中，使毛髮呈現特徵性的顏色。毛囊包含好幾層。在毛囊基部有一個凸起，稱為乳突，它含有毛細血管或微小血管，為細胞提供營養。毛髮有生命的部分，即乳突周圍的區域，稱為延髓，是毛細血管唯一給養的部分。延髓中的細胞每23-27個小時分裂一次，比身體其它細胞都快。毛囊由內根鞘和外根鞘包裹。這兩層根鞘保護著毛幹並使生長中的毛幹成型。內根鞘連接著毛幹，終止於產生皮脂的皮脂腺的開口下方，有時終止於頂泌腺的開口下方。外根鞘完全連接著皮脂腺。立毛肌附著在皮脂腺下方外根鞘周圍的纖維層上。當這塊肌肉收縮時，毛髮便豎立起來。人類的皮膚含有兩種類型的毛髮毫毛和終毛。毫毛短且纖細，像桃子的絨毛一樣的體毛。它是一種非常柔軟、通常為灰白色的短毛，在人類兩性身體的大部分區域生長。毫毛的長度一般短於2釐米，並且生長毫毛的毛囊不與皮脂腺連接。在較少終毛覆蓋的婦女和兒童身上最容易發現毫毛。在青少年和存在男性型禿髮的男性中也可以發現毫毛。終毛或者說男性型的毛髮是發育後的毛髮，通常比毫毛更長、更粗糙、更粗以及更黑。由於終毛具有更長的毛髮生長初期的優勢，所以它的生長階段也比毫毛的更加明顯。終毛具有相應的皮脂腺。在青春期，一些毫毛可以發育成終毛。在其它情況下，例如男性型禿髮，終毛可以恢復到毫毛狀態。毛髮的生長中有三個連續的階段毛髮生長中期、毛髮生長終期以及毛髮生長初期。毛髮生長初期是毛髮活躍生長時期，毛髮根部的細胞在這個時期快速分裂。毛髮生長初期的毛髮深深地紮根於皮下脂肪，不容易拔出來。當一根新的毛髮形成時，它推動杵狀毛至毛囊上方，最後推出去。在這個時期，毛髮每28天生長約I釐米。頭髮的活躍生長時期為2-6年。人類研究對象中難以使頭髮的生長超過一定長度的人可能具有一個縮短的毛髮生長初期，而那些能夠使頭髮快速生長得更長的人可能具有一個更長的毛髮生長初期。在人類中，與頭髮相比，手臂、腿、睫毛以及眉上的毛髮通常具有短的毛髮生長初期。毛髮生長中期是一個過渡時期，在人類中大約持續2-3個星期，此時生長停止，由此形成「杵狀」毛。毛髮生長終期是一個靜止期，在頭髮中持續100天左右，在其它體毛中持續的時間比在頭髮中長得多。在毛髮生長終期，毛囊生長停止，杵狀毛形成。與毛髮生長初期相比，毛髮生長終期的毛髮處於淺表處，可以很容易地拔出來。毛髮生長終期的毛髮含有一個可見的、固體狀的、堅硬的、乾燥的以及發白的物質。毛髮生長終期的毛髮脫落是正常的，每天有多達75根的頭髮從人的頭皮上脫落。脫落的毛髮通常被取代，因為每天有大約相同數量的毛囊進入毛髮生長初期。正常的頭皮在任何時候都有大約80%-90%的毛囊處於毛髮生長初期，大約1%-3%的毛囊處於毛髮生長中期，即退化中，以及大約5%-10%的毛囊處於毛髮生長終期。毛髮脫落和/或毛髮生長減少的情況 毛髮脫落或毛髮變少包含各種導致替換脫落頭髮的能力減弱，或導致脫落加劇而不伴隨後續的毛髮再生的情況，例如，弱的毛髮生長、細的毛髮生長，短的毛髮生長、稀少的毛髮生長、脫髮或者毛髮褪色。例如，毛髮周期可能暫時或持久地變得不受控制，加速毛髮脫落。在這裡用到的術語「alopecia」(脫髮)指的是毛髮脫落，除非另有特殊說明或語境
另有需要。脫髮有多方面的誘因。遺傳的男性型脫髮是最常見的脫髮形式其表現是頭髮數量減少，或甚至禿髮，影響高達70%的男性。急劇的脫髮可能與化學療法、壓力、嚴重的營養不良、缺鐵、內分泌紊亂、愛滋病或強烈的輻射有關。簇狀脫髮似乎由自身免疫(細胞調節機制)引起，其特徵是在身體一個或多個地方形成大小不同的「斑」。禿頭屬於一種簇狀脫髮擴展至整個頭皮的形式，而全禿屬於簇狀脫髮擴展至整個身體的形式。從機理上看，在所有的脫髮形式中，毛髮脫落直接與能力減弱相關，毛囊進入毛髮生長初期減慢或不能進入毛髮生長初期，或不能使毛囊維持在毛髮生長初期，因此毛幹的形成減少、減慢或者完全停止。毛髮可能在生長初期階段還沒達到充分生長時便進入毛髮生長中期階段，因此形成持久的毛髮短且稀的狀態(即毛髮變少)。化學治療藥物、放射性治療藥物及其它的醫藥產品可能引起毛囊的細胞壞死和細胞凋亡等副作用，同時也阻止了毛囊進入毛髮生長初期。例如，烷基化藥物，如替莫唑胺、白消安、異環磷醯胺、鹽酸美法侖、亞硝基脲氮芥、環己亞硝脲或環磷醯胺；抗代謝藥物，如5_氟尿嘧啶、卡倍他濱、吉西他濱、氟脲苷、地西臺賓、巰基嘌呤、培美曲塞二鈉、甲氨蝶呤或氮烯唑胺；天然產物，如長春新鹼、長春鹼、酒石酸長春瑞濱、特素、多西他奇、伊沙匹隆、道諾黴素、表柔比星、亞德裡亞黴素、去甲氧基柔紅黴素、米託蒽醌、絲裂黴素、放線菌素D、依立替康、託泊替康、依託泊苷、替尼泊苷、磷酸依託泊苷或博來黴素硫酸鹽；生物製劑，如非格司亭、乙二醇化非格司亭、貝伐單抗、沙莫司亭或帕尼單抗；激素或激素相關藥物，如醋酸甲地孕酮、氟羚甲基睪丸素、亮脯利特、醋酸奧曲肽、枸櫞酸它莫西芬或氟甲睪酮；其它治療藥物，如索拉非尼、埃羅替尼、奧沙利鉬、右丙亞胺、阿那格雷、異維甲酸、貝沙羅汀、伏立諾他、亞德裡亞黴素，環磷醯胺、紫杉酚、甲基四氫葉酸、奧沙利鉬以及上述已知的引起暫時或持久脫髮的藥物的組合。由上述任何因素所導致的脫髮成為許多患者自尊心低和焦慮的原因。對於那些接受化療或放射性治療的癌症患者，在治療引起的如噁心、皮疹等其它不良副作用的同時，脫髮又增加了不適。許多脫髮患者，包括接受化療的患者，選擇使用假髮、頭髮片、圍巾、帽子或頭巾來蓋住他們光禿或頭髮稀少的部位。脫髮患者經常遇到尷尬並且害怕被別人嘲笑，因為他們看起來與別人不一樣。為了遮住缺少的眼睫毛和/或眉毛，一些患者可能戴上超大號的墨鏡。在一些研究對象中，脫髮可能導致抑鬱。脫髮的動物模型人類有好幾個實用的脫髮模型，在用於脫髮治療方法及其它的生發治療方法的效果測試中得到了普遍認可。例如，短尾獼猴具有遺傳性的禿頂特徵，與人類男性型脫髮的許多方面相似，因此 被用來進行毛囊周期變化速率的形態測定評估，包括周期進展速率(靜止期到再生期，以及再生期至毛髮生長初期末期)及毛囊大小的整體變化。這些靈長目動物也是化合物功效很好的預測器，例如，它們已被用來檢測米諾地爾對男性型脫髮的治療效果。局部的米諾地爾治療的中斷導致禿髮的復發，微形態測定分析表明靜止期毛囊的比例上升。在隨後的米諾地爾處理過程中，這種治療的中斷似乎對頭髮再生沒有影響。這樣的治療對頭髮再生的作用與第一次治療期相似。連續4年的局部米諾地爾治療不會給這些動物帶來整體或局部的副作用。參見文獻例如 Brigham et al. , Clin. Dermatol. 6, 177-187, 1998; Sundberg etal.，Exp. Mol. Pathol. 67，118-130 (1999)的全文，其內容包含於此。總體上，對小鼠模型的研究結果支持了簇狀脫髮是一種自身免疫病的觀點，已經發現幾個具有自發和誘導的簇狀脫髮的齧齒目動物模型。例如，鄧迪實驗禿毛大鼠(DEBR)是第一個被發現的出現自發性簇狀脫髮的齧齒目動物模型，並被用來驗證候選的簇狀脫髮敏感基因位點(Michie et al. , Br J Dermatol.，125，94-100，1991,通過參照包含於此)。特徵最全、最容易獲得的簇狀脫毛模型是C3H/HeJ小鼠模型(Sundberg et al.，J InvestDermatol.，102, 847-56，1994，通過參考，內容包含於此)。老齡的C3H/HeJ小鼠(雌性年齡為3-5個月或更老，雄性年齡大於6個月)出現人類簇狀脫髮的組織病理學及免疫組織化學的特徵。脫髮在年齡十分大的動物背面廣泛出現或呈圓形區域。組織學上，這種無疤脫髮的變化僅出現在毛髮生長初期的毛囊，這些毛囊被主要由細胞毒素或細胞生長抑制物(CD8+)組成的單核細胞及輔助(CD4+) T細胞所圍繞，這與毛囊和毛幹的營養不良有密切聯繫。譜系追蹤受感染的C3H/HeJ小鼠表明，這種無疤脫髮可能是一種可遺傳的複雜的多基因疾病，主要出現在比較年輕的雌性中。患有簇狀脫髮的C3H/HeJ小鼠能被用來研究現有治療方法的效果，研究既定簇狀脫髮的新的治療形式的有效性和安全藥歷，以及評估脫髮過程中各種因素的影響，達到預防這種疾病發病的目的。文獻Paus et al. ,Am. J. Pathol. 144，719-734(1994)也描述了一種急劇脫髮的齧齒目動物模型，通過引用其全部內容包含於此。在此模型中，通過對C57BL/6小鼠進行一次環磷醯胺的腹腔注射來誘導脫髮。在脫髮的C57BL/6小鼠中，毛囊在毛髮生長初期同步。脫毛後第9天，所有的毛囊處於成熟毛髮生長初期VI，小鼠的皮膚具有灰色至黑色的毛幹特徵。組織學上、宏觀上及機能上，誘導脫髮的毛髮生長初期VI的毛囊與自發產生的毛髮生長初期的毛囊沒有區別。脫毛後大約第16天，毛囊開始退化，此時脫毛後的動物毛乾沒有脫落，皮膚顏色由黑色變成粉紅色，表明毛髮生長中期的誘發和黑素生成的終止。毛髮生長中期的毛囊發育在宏觀上表現為皮膚顏色由黑色變成亮灰色，頸部首先產生大波紋，然後是身體兩側和尾部區域。在脫毛後第20天，所有的毛囊再次進入毛髮生長終期，其特徵為皮膚顏色由灰色變為粉色。在脫毛後第9天給C57BL/6小鼠施加環磷醯胺，動物表現出快速的可重複的劑量依賴型的急劇脫髮的明顯跡象，包括軟毛的脫落及毛髮生長初期的提前終止。提前終止以褪色為特徵，導致第12-14天的皮膚呈灰色。因此，在環磷醯胺處理3-5天後，頸部的毛囊通常處於毛髮生長中期。在第12-14天時，動物背部的毛幹也容易揉搓掉。到第15天，背面60%可能禿掉。環磷醯胺引起的顏色變化和脫髮反映了在毛髮生長初期VI的毛囊中，毛髮生長初期和毛髮生長中期的營養不良形式的誘發。在環磷醯胺處理的動物中，毛囊發展至毛髮生長終期也很迅速，粉紅色的皮膚可以證明這一點，並且由於毛囊破壞，軟毛也迅速脫落。隨著環磷醯胺的處理，毛髮生長終期也被縮短，正常的毛髮生長終期毛囊進入下一個毛髮周期，因此動物在第16-20天時開始長新毛幹，即處理後大約7-10天內。由於營養不良的毛髮生長初期毛囊還來不及產生新的正常著色的毛幹，因此這些新的毛幹通常是褪色的。然後，著色的毛幹才產生。
毛髮脫落和/或毛髮生長減少的狀況的治療方法現有的治療脫髮的方法包括局部的米諾地爾及其衍生物的治療，例如美國專利號 4，139，619 和 4，596，812，以及歐洲專利號 EP-0353123、EP-0356271、EP-0408442、EP-0522964、EP-0420707、EP-0459890和EP-0519819、安體舒通、醋酸環丙氯地孕酮、氟他胺、菲那司提、孕酮或雌激素。抗雄激素藥物如非那司提和米諾地爾，是已知的治療男性型脫髮的藥物。這些治療方法中沒有一個是普遍適用的。例如，上述方法不能抑制化療藥物治療過程中的毛髮脫落。另一方面，這些化合物可能引起不良的副作用。例如，米諾地爾是一種有效的血管舒張藥。為了達到治療效果，患者可能還需要頻繁地用藥。例如，米諾地爾只有非常短暫的效果，因為局部米諾地爾治療中斷後通常會導致禿髮的復發，並且微形態測定分析表明靜止期毛囊的比例上升。米諾地爾的使用推薦量為以2%的濃度每天服用兩次。儘管如此，與米諾地爾相比，非那司提在口服方法上有一個改進，它被認為是目前最好的治療方法，大約35%或更多的禿髮男性用藥者對藥物沒有出現反應或反應較小。非那司提對一些用藥者也可能引起顯著的副反應，因為許多用藥者在使用該藥後表現出陰莖勃起失調、陽痿、性慾低下或乳房發育症。在遭受這些副反應的男性中，停止使用非那司提後副反應可能不會消失。多種前列腺素類似物也已公開用於治療男性型脫髮，例如曲伏前列素、voprostol，這些藥物可能也需要頻繁用藥，例如至少每天服用大約一個劑量的曲伏前列素已有記述，例如美國專利公布20100190853。前列腺素類似物也是已知的用於治療化療引起的脫髮的藥物，例如美國專利公布20110002286。前列腺素類似物可能具有多種不利影響，例如肌肉收縮引起的炎症、鈣的轉運、激素調節及細胞生長控制。肝素結合細胞因子家族蛋白肝素結合細胞因子(MK)是一種生長/分化因子，它是在視黃酸誘導的胚胎腫瘤細胞(EC)分化過程中首先發現的一種瞬時表達的基因產物。目前已知MK產生廣泛的不利和有利的生物效應。MK在人類癌症細胞中(包括食道癌、甲狀腺癌、膀胱癌、結腸直腸癌、胃癌、胰腺癌、胸癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、成神經細胞瘤、成神經細胞瘤、成膠質細胞瘤、子宮癌、卵巢癌以及腎母細胞瘤)表達量提高，被認為具有促進癌症細胞存活和轉移及促進血管生成的作用。MK還能夠促進諸如巨噬細胞和嗜中性粒細胞等炎症細胞的轉移，從而引發炎症。在子宮內膜異位時，MK還能促進培養的子宮內膜間質細胞的增殖。因此，MK抑制劑，例如抗體、適配體或靶向MK蛋白的RNAi或RNA，已經公開用於治療廣泛的炎症疾病，如關節炎、自身免疫病、風溼性關節炎、骨關節炎、多發性硬化、手術後粘連、大腸炎、牛皮癬、狼瘡、氣喘、嗜中性粒細胞功能異常以及子宮內膜異位。MK有利的生物效應也眾所周知，其中MK還可以在血管損壞及缺血性腎炎發病後促進新生內膜的形成，以及減少風溼病患者手術後粘連。因此，MK蛋白已經公開用於治療腦缺血、心臟缺血、血管重建手術後的再狹窄、心臟冠狀動脈血管阻塞疾病、大腦血管阻塞疾病、腎臟血管阻塞疾病、周圍性血管阻塞疾病以及動脈硬化。多效生長因子(PTN或ΗΒ-GAM)是一種胺基酸序列與MK有近50% —致性的肝素結合細胞因子家族蛋白。MK和PTN蛋白都包含較高含量的半胱氨酸和鹼性胺基酸殘基。在MK和PTN蛋白中，10個半胱氨酸殘基都很保守，並且兩種蛋白在結構上都可以被分為氮端結構域和碳端結構域。核磁共振分析表明，這兩個蛋白分子具有非常相似的三維結構。每 個結構域由三個β片層組成，片層之間通過柔韌的連接區域連接。K79，R81及Κ102被認為是這兩個蛋白中保守的胺基酸殘基，對於結合硫酸軟骨素和肝素十分重要。MK和PTN在三維結構上有相同之處，其中，這些鹼性胺基酸出現在接近蛋白質表面的部位。因此，PTN以前已經顯示出與MK具有相同的醫療指徵。需要說明的是，如果本文中參考了任何在先公開的文本，這樣的參考不等同於承認該公開文本成為澳大利亞或其它地方的常識或背景技術的一部分。

發明內容
在本發明的準備工作中，發明人試圖開發蛋白類試劑，例如用於對患者局部給藥，促進容易脫髮或毛髮脫落的患者的毛髮生長或生發。儘管真皮通常對外用藥物具有屏蔽作用，但發明人還是試圖研發出一種有效的局部蛋白類配方，使其能夠方便地塗抹在皮膚上並發揮功效。發明人開發出一種毛髮脫落的動物模型，基本上由老齡的患有毛髮脫落的小鼠組成，例如用禿毛區域或脫毛位點的形式。發明人發現在動物模型的這些禿毛區域或脫毛位點局部塗抹肝素結合細胞因子或多效生長因子可以誘導毛髮生長或毛髮生長重新開始。研究發現，在這個動物模型中，肝素結合細胞因子或多效生長因子的局部配方比注射藥物配方在促進毛髮生長上具有更好的效果。這裡提供的數據還表明，與米諾地爾相比，肝素結合細胞因子和多效生長因子不能明顯地促進經過剃毛使毛囊同步於毛髮生長初期的健康動物的毛髮生長，也沒有表現出臨床脫毛的症狀。由此表明肝素結合細胞因子和多效生長因子與米諾地爾相比，以一種更加獨特的機制發揮作用，該機制不包含引起皮疹的血管擴張作用。因此，由肝素結合細胞因子家族蛋白促使的毛髮再生起因於肝素結合細胞因子對毛囊的抗細胞凋亡效應，從而延長它們的毛髮生長初期階段，或者使正常的終期毛囊重新進入下一次毛髮周期。在本發明的進一步工作中，申請人使用公認的化療誘導脫毛(CIA)的動物模型，如Paus et al.，Am.J. Pathol. 144,719-734(1994)所述(其內容全部包含於此)。申請人進行了一次隨機組合的實驗，在這個實驗中，所有的動物被剃毛並上蠟，其中五組動物前7天每天施加一種肝素結合細胞因子蛋白的局部配方，後19天腹腔注射環磷醯胺；另外兩組動物前19天每天被給予一種肝素結合細胞因子蛋白的局部配方，然後再腹腔注射環磷醯胺。對照小鼠接受的是鹽水安慰劑處理。這裡的數據表明，肝素結合細胞因子家族蛋白如MK和/或PTN在化療前或化療前後的局部給藥能夠顯著地降低毛髮脫落的嚴重性，即在使用化療藥物後的所有時間點促進毛髮生長。化療後用肝素結合細胞因子家族蛋白處理還可以使處於生長初期的毛囊保持一個更高的比例，因為經過肝素結合細胞因子家族蛋白處理的具有黑色或深灰色毛皮的動物數量比接受安慰劑處理的多。由此表明該蛋白對初期毛囊的抗細胞凋亡效應。這些有利的效應可以在緊接化療後的毛囊還沒有恢復的時期以及化療終止後毛囊恢復末期檢測到。這裡的數據還表明肝素結合細胞因子家族蛋白，如MK和/或)PTN，在化療後的局部給藥，至少改善了毛囊的恢復，因為實驗組與安慰劑處理組相比脫髮的發生率降低了。因此，化療後每天局部使用肝素結合細胞因子蛋白處理的動物與對照組相比還減少了總的毛髮脫落，毛髮脫落減少的效果在化療前和化療後處理的動物中差不多。化療前或化療後接受肝素結合細胞因子處理的動物在毛囊恢復期還表現出更高的毛髮生長速率，表明肝素結合細胞因子對毛囊具有抗細胞凋亡的效應，由此延長了它們的毛髮 生長初期階段，或者說經過處理後正常的終期毛囊重新進入了下一個毛髮周期。需要說明的是，這裡所述的以老齡的小鼠為模型的方法適用於測試其它人類脫髮的動物模型，包括具有男性型脫髮特徵的短尾獼猴21-23模型和/或正如本文所述的毛髮特別稀少的無毛(hr/hr)模型。因此，本文提供的數據為含有肝素結合細胞因子家族蛋白的成分在促進毛髮生長和/或減少毛髮脫落和/或減輕毛髮變少和/或預防毛髮脫落和/或預防毛髮變少和/或延遲毛髮脫落和/或延遲毛髮變少等方面的使用提供了依據，例如在老齡化的研究對象及患有脫髮(如男性型脫髮或急劇脫髮)的研究對象中。通常，本發明中治療和/或預防脫髮的有效成分被製成局部用藥，但注射藥物的製備也可以採用，例如通常用於注射的引起急劇脫髮的一種細胞毒素或細胞生長抑制劑的同時使用，如一種化療藥物。相應地，本發明的一個實施例提供了一個配方，例如一種有效預防毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長的局部配方，含有一定量的一種肝素結合細胞因子家族蛋白，如肝素結合細胞因子、多效生長因子或它們的一種變體或同源蛋白，及一種局部載體，賦形劑或潤滑劑。局部配方表示該配方能夠外敷於哺乳動物皮膚或敷於真皮。例如，該配方有助於對易脫髮或有脫髮危險的雄性進行給藥，例如對男性型脫髮患者或有發展為男性型禿頂的危險的雄性給藥。在另一個實施例中，本發明的配方有助於對患有脫髮相關疾病或症狀(例如脫髮，特別是急劇脫髮或男性型脫髮)的研究對象的真皮或皮膚給藥。在一個實施例中，該局部配方含有一定量的肝素結合細胞因子家族蛋白及局部載體，賦形劑或潤滑劑，有效治療和預防毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。該配方用於對易脫髮或有脫髮危險的研究對象的真皮或皮膚給藥，或者用於對脫髮對象的真皮或皮膚給藥會更好。我們將體會到局部配方適用於脫髮的治療和預防，如脫髮中的一種急劇形式或男性型脫髮。例如，該配方可以用於治療或預防接受細胞毒素或細胞生長抑制劑治療或處方中已經含有細胞毒素或細胞生長抑制劑療法的對象出現的脫髮。肝素結合細胞因子家族蛋白可以是肝素結合細胞因子、多效生長因子、肝素結合細胞因子類似蛋白或截短的肝素結合細胞因子蛋白。因此，本發明提供了改良的局部配方，包含有效治療劑量的肝素結合細胞因子家族蛋白，例如含有有效劑量的肝素結合細胞因子蛋白或多效生長因子蛋白或它的生物活性變體，促進毛髮生長。本發明中的局部配方對預防或治療脫髮特別有效，包括男性型脫髮、急劇脫髮、簇狀脫髮、禿頂及全身性脫髮。本發明中的局部配方更適合於治療男性型脫髮。本發明中的局部配方甚至更適合於治療接受細胞毒素或細胞生長抑制劑等引起脫髮的化合物治療後導致急劇脫髮的對象，尤其是化療藥物、放射性治療藥物或抗病毒化合物，如感染了 HIV-I病毒的對象所使用的藥物。本發明中局部配方還能更好地預防將要接受細胞毒素和細胞生長抑制劑等引起脫髮的化合物治療的對象會出現的急劇脫髮，尤其是化療藥物、放射性治療藥物或抗病毒化合物，如感染了 HIV-I病毒的對象所使用的藥物。需要說明的是，本發明的局部配方有利於促進毛髮生長，適合男性型脫髮或男性型禿頂的對象，或有發展成男性型脫髮或男性型禿頂傾向的對象，和/或將要接受細胞毒素和細胞生長抑制劑等引起脫髮的化合物治療的對象或接受這種治療的對象。
還需要說明的是，本發明中局部配方適用於各種類型的治療藥物或載體，它們可以結合或相繼使用或同時使用或伴隨使用。例如，含有一種肝素結合細胞因子蛋白的局部配方還可以包含第二種治療相同症狀的化合物，和/或與第二種化合物同時使用。在這種情況下，肝素結合細胞因子家族蛋白的功效得到了第二種化合物作用的補充。例如，肝素結合細胞因子家族蛋白與雌二醇和/或氧雄龍和/或米諾地爾和/或非那司提或抑制睪酮轉變為二氫睪酮的藥物同時使用。或者，本發明的局部配方還可以與細胞毒素或細胞生長抑制劑等引起脫髮的化合物同時使用，例如，在對象接受化療或放射性治療或感染HIV-I病毒或AIDS進行治療的情況下。在這些情況下，肝素結合細胞因子家族蛋白的作用中和了細胞毒素或細胞生長抑制劑的脫髮效應。本發明的另一個實施例提供了肝素結合細胞因子家族蛋白在藥物生產中的應用，例如，一種用於預防和/或治療脫髮或有脫髮傾向的對象頭髮脫落的局部藥物。該藥物可以用於群體中易脫髮或患有脫髮的部分個體，如產生男性型禿頂或有發展成男性型禿頂的危險的對象。例如，個體可能沒有明顯的脫髮特徵，但患有一種使其有脫髮傾向的遺傳症狀，或可能即將接受一種細胞毒素或細胞生長抑制劑或抗病毒化合物等引起脫髮的治療方法的對象。在另一個實施例中，局部藥物有利於對毛髮脫落疾病或相關症狀(如禿髮)的對象進行真皮或皮膚給藥。例如，先前存在脫髮或即將接受細胞毒素或細胞生長抑制劑或抗病毒化合物等引起脫髮的治療方法的對象，無論在肝素結合細胞因子家族蛋白治療開始之前有或沒有發展出明顯脫髮特徵。在製備治療或預防接受化療的對象出現的急劇脫髮的藥物中，肝素結合細胞因子家族蛋白特別有用，並且這種藥物可以製成局部或注射用藥配方，但局部配方為首選。「局部配方」表示將活性藥物，即肝素結合細胞因子家族蛋白，如肝素結合細胞因子、多效生長因子或它們的變體或同源蛋白，與一種局部載體，賦形劑或潤滑劑，一起製成配方，用於塗抹在哺乳動物的皮膚上。在一個優選的實施例中，肝素結合細胞因子家族蛋白用於製備治療或預防人類或其它哺乳動物對象脫髮的藥物，例如，脫髮中的急劇形式或男性型脫髮。對象可以是人類或哺乳動物中接受細胞毒素或細胞生長抑制劑治療或處方中已經含有細胞毒素或細胞生長抑制劑療法的對象。該藥物可以作為一種局部敷用的配方。肝素結合細胞因子家族蛋白可以是肝素結合細胞因子、多效生長因子、肝素結合細胞因子類似蛋白或截短的肝素結合細胞因子蛋白。本發明的另一個實施例提供了一種治療和預防毛髮脫落的方法，上述方法包含對有需要的對象使用一種配方，例如，含有一定量的肝素結合細胞因子家族蛋白(例如肝素結合細胞因子、多效生長因子或它們的變體或同源蛋白)和局部載體(賦形劑或潤滑劑)的局部配方，有效預防對象毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。對象通常會是一種哺乳動物，例如人。例如，本發明的方法有助於治療易脫髮或有脫髮危險(如男性型禿頂)的雄性對象。這種對象可能沒有明顯的脫髮特徵，但患有使其具有脫髮傾向的遺傳症狀，或該對象可能即將接受或正在接受細胞毒素或細胞生長抑制劑或抗病毒化合物等引起脫髮的治療方法。在另一個實施例中，本發明的方法有助於治療具有毛髮脫落疾病或相關症狀(如禿髮)的對象。這種對象可能先前存在脫髮或正在接受一種細胞毒素或細胞生長抑制劑或抗病毒化合物等引起脫髮的治療方法，其中，已出現脫髮特徵。對接受化療或處方中含有化學療法的對象的治療和預防清楚地包含在本發明的方法中。 本發明的另一個實施例提供了一種促進或增強毛髮生長或生發的方法，例如在細胞毒素或細胞生長抑制劑或抗病毒化合物等引起脫髮的治療期間或治療後，上述方法包含對有需要的對象使用一種配方，例如，含有一定量的一種肝素結合細胞因子家族蛋白(如肝素結合細胞因子、多效生長因子或它們的一種變體或同源蛋白)和局部載體(賦形劑或潤滑劑)的局部配方，有效預防對象毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。在另一個實施例中，本發明提供了一種治療或預防毛髮脫落的方法，上述方法包含對有需要的對象，例如，脫髮對象(如脫髮的急劇形式或男性型脫髮)或容易發展為上述脫髮的對象，使用含有一定量的肝素結合細胞因子家族蛋白和載體，賦形劑或潤滑劑，有效預防個體毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。優選地，該配方是一種局部配方，上述方法包含在對象毛髮已經脫落的皮膚感染區或毛髮可能脫落的皮膚區域使用該局部配方。在能夠減少對象毛髮脫落和/或影響毛髮生長的條件下，該配方可以用於脫髮一段時間的對象。或者，在能夠預防或減少對象毛囊細胞凋亡的條件下，該配方還可以用於脫髮一段時間的對象。或者，在能夠延長對象毛囊生長初期階段的條件下，該配方還可以用於脫髮一段時間的對象。或者，在能夠促進或增強對象正常的終期毛囊進入下一個毛髮周期的條件下，該配方還可以用於脫髮一段時間的對象。本發明的方法特別適用於接受細胞毒素或細胞生長抑制劑治療或處方中已經含有細胞毒素或細胞生長抑制劑療法的對象。在一個優選的實施例中，肝素結合細胞因子家族蛋白可以是肝素結合細胞因子、多效生長因子、肝素結合細胞因子類似蛋白或截短的肝素結合細胞因子蛋白。在另一個實施例中，本發明提供了一種促進或增強毛髮脫落對象的毛髮生長或生發的方法，上述方法包含對有需要的對象使用含有一定量的肝素結合細胞因子家族蛋白及局部載體，賦形劑或潤滑劑，有效預防個體毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。肝素結合細胞因子家族蛋白最好是肝素結合細胞因子或多效生長因子。在另一個實施例中，本發明提供了一種使接受化療或處方中已含有化學療法的對象毛髮脫落減少的方法，上述方法包括在一段時間內及能夠預防或減少化療引起的毛髮脫落的條件下對對象施加含有一定量的肝素結合細胞因子家族蛋白和載體(賦形劑或潤滑齊IJ)的局部配方。優選地，該方法包含將配方局部用於經過化療的或在化療開始前處方中已經含有化學療法的對象。在一個實施例中，該方法包括將配方局部用於化療開始之前處方中已經含有化學療法或化療開始之後的對象。正如文中所舉實施例，肝素結合細胞因子家族蛋白可以是肝素結合細胞因子。本發明的另一個實施例提供了一種毛髮脫落的動物模型，基本上由患有毛髮脫落的老齡小鼠組成，例如，以禿髮區域或脫髮位點的形式。本發明明確擴展至利用這種動物模型篩選新穎的治療和預防組分，用於預防毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。其中上述篩選包含將被測化合物用於動物身上並測定毛髮生長和/或減少毛髮脫落，其中，與沒有被測化合物相比，在被測化合物存在時動物出現的毛髮脫落減少和/或增強毛髮生長和/或促進生發等症狀表明被測化合物能預防毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。在該篩選方法的一個實施例中，將被測化合物的活性與種肝素結合細胞因子家族蛋白的活性進行比較，一種活性與肝素結合細胞因子家族蛋白相當或更強的被測化合物將被鑑定和/或篩選和/或採用本發明中的方法按照本文中任何實施例製成配方。
在另一個實施例中，本發明提供了一種鑑定或篩選預防毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長的化合物的方法，其中上述方法包括用被測化合物作用於小鼠。上述小鼠的年齡大於一年且患有毛髮脫落，其體內的一種肝素結合細胞因子蛋白編碼基因的一個等位基因及該基因的另一個功能等位基因被敲除，然後測定小鼠身上的毛髮生長和/或減少的毛髮脫落，其中，與沒有被測化合物相比，在被測化合物存在時小鼠出現的毛髮脫落減少和/或增強的毛髮生長和/或毛髮開始生長表明該測試化合物能預防毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。注釋本說明書包含PatentIn Version 3. 6軟體處理過的核酸和胺基酸序列信息，在本文權利要求書後面提供。在序列表中，每一個核酸序列都經過數字指示器〈210〉及隨後的序列標識符(例如，〈210>1、〈210>2、〈210>3等)鑑定。序列的長度和類型(DNA、蛋白質(PRT)等)以及每一條核酸序列的生物來源分別在數字指示器域〈211>、〈212>和〈213〉提供的信息中指明。說明書中提到的核酸序列以序列標識符給出的「SEQ ID NO:」(序列身份編號)表示(例如SEQ ID NO: I指序列表中命名為1的序列)。這裡所用到的術語「derived from」(來源於)應該被理解為一個確定的整體可以從一個確定的來源獲得，即使不必直接從那個來源獲得。說明書自始至終，除非文中另有要求，單詞「comprise」(包含)或其變體如「comprises」(包含)或「comprising」(包含),應被理解為包含一個規定的步驟或組分或整體或步驟群或多種組分或多個整體而不排除任何其它的步驟或組分或整體或組分群或多個整體。術語「hair」(毛髮)表示包含人類在內的哺乳動物身體上的任何毛髮或軟毛，包括例如頭髮、眉毛、睫毛、髭、鬍鬚、胸毛、背毛、臂毛、腿毛、陰毛、鼻毛或耳毛。正如本文所用到的，術語「treat」(治療)或「treating」(治療)或「treatment」(治療)應被理解為包含一種對先前存在的症狀進行治療的方法，或預防的或預防性的方法，其目的是預防、改善、減少或減慢(減輕)毛髮變少、毛髮脫落或禿髮。由此得出，毛髮生長或治療毛髮變少，是指正常化變少的毛髮，例如脫髮，和/或增加毛髮的長度和粗度。需要治療的哺乳動物可能已經產生這種症狀或容易產生這種症狀，或可能是預防這種症狀。這種治療方法更好地包含了一種抗毛囊細胞凋亡的效應，因此延長了它們的毛髮生長初期階段，或使正常的毛髮生長終期的毛囊重新進入下一個毛髮周期。「Preventing」 (阻止)、「prevention」 (阻止)、「preventative」 (預防性的)或「prophylactic」(預防的)指的是阻止發生，或阻礙、保護，或保護對象不出現症狀、疾病、失調或表型，包括異常或徵兆。需要預防的哺乳動物可能容易產生這種症狀。術語「ameliorate」(改進)或「amelioration」(改進)指的是症狀、疾病、失調或表型的減少、降低或消除，包括異常或徵兆。術語「therapeutically effective amount」(有效治療劑量)指能夠使哺乳動物的毛髮變少、毛髮脫落或禿髮減少到有效治療和預防的程度所需的肝素結合細胞因子家族蛋白的量。有效治療劑量可以通過經驗及一種關於治療毛髮減少、毛髮脫落或禿髮的常規方法來確定。
本說明書自始至終，除非另有特殊說明或文中另有要求，所提及的單一步驟、物質組分、步驟群或物質組分群應被理解為包括單一的或多元的(即一個和多個)那些步驟、物質組分、步驟群或物質組分群。除非另有特殊說明，本文所述的每個實施例對每一個其它的實施例已作必要修正。除非文中另有要求，本文每一個定義或說明用語應被理解為對本發明的每一個實施例已作必要修正。那些對此技術熟悉的人將體會到本文所述發明除了適用於那些特別描述的情況外，還適用於各種變化形式或變型。要說明的是本發明包括所有這樣的變化形式或變型。本發明還包括說明書中個別或全部的相關的或指明的步驟、特徵、組分和化合物，以及上述步驟或特徵中任意兩個或多個的任意組合和全部組合。


圖I提供的照片顯示的是每周三次在I. 5歲脫髮的Black 6MK基因雜合敲除(+/_)小鼠不同的脫髮區域施加局部配方15天後促進軟毛生長的效果，該配方包含溶於40%甘油的肝素結合細胞因子(I μ g/ml)或溶於40%甘油的10 μ I多效生長因子(lyg/ml)。圖片中每一排圓環表示同一排的每個小鼠身上MK (靠近頸部區域的圓環)和PTN (靠近尾巴的圓環)作用的斑塊位置。圖A顯示治療開始當天的小鼠。圖B-L分別顯示治療開始後第I天，第4天，第6天，第8天，第11天，第13天，第15天，第18天，第20天，第22天及第25天的小鼠。數據顯示，在這個動物模型中，經過MK或PTN局部配方治療後的小鼠表現出明顯的軟毛再生，並且使用MK處理的小鼠的軟毛再生速度比使用PTN處理的小鼠快。15天後治療停止(圖H)，MK有一個持續至第25天的有利效應。軟毛再生並非完全局限於處理區域，因為動物在經過處理後整個背部區域表現出改善的軟毛狀況。圖2提供的照片顯示的是在I. 5歲的老年Black 6 MK基因純合敲除(-/-)小鼠的不同脫髮區域注射(即皮下注射)治療配方15天後，再使用圖I的

中所述的局部配方治療10天後的效果。該注射配方包含MK (I μ g/ml)或50μ I的PTN (I μ g/ml)。圖片中每一排圓環表示同一排的每個小鼠身上皮下注射及MK (靠近頸部區域的圓環)和PTN(靠近尾巴的圓環)作用的位置。圖A顯示治療開始當天的小鼠。圖B-L分別顯示治療開始後第I天，第4天，第6天，第8天，第11天，第13天，第15天，第18天，第20天，第22天及第25天的小鼠。圖H顯示了每周三次局部治療開始當天的小鼠。數據表明皮下注射MK或PTN的小鼠15天後沒有表現出明顯的軟毛再生現象。然而，在這個動物模型中，局部治療10天，MK或PTN的使用促進了軟毛再生(圖L)。皮毛再生並非完全局限於處理區域，因為動物在經過處理後整個背部區域表現出改善的皮毛狀況。圖3提供的照片顯示的是每周5次在I. 5歲Black 6MK基因雜合敲除(+/_)小鼠的脫髮區域外敷溶於10%甘油的100 μ I MK (2 μ g/ml)後促進皮毛生長的效果。圖A顯示治療開始當天的小鼠。圖B-F分別顯示治療開始後第7天、第14天、第21天、第28天以及第35天的小鼠。數據顯示了在35天測試周期中軟毛持續再生，大約21-28天(圖C和D)後明顯出現顯著的軟毛再生。圖4提供的照片顯示的是每周5次在I. 5歲的Black 6MK基因雜合敲除(+/_)小鼠的脫髮區域外敷溶於10%甘油的100 μ I PTN (2 μ g/ml)後的促進皮毛生長的效果。圖A顯示治療開始當天的小鼠。圖B-F分別顯示治療開始後第7天、第14天、第21天、第28 天以及第35天的小鼠。數據顯示了在35天的測試周期中軟毛持續再生，大約21-28天(圖C和D)後明顯出現顯著的軟毛再生。圖5提供的照片顯示的是在老年Black 6MK基因雜合敲除(+/-)小鼠的脫髮區域外敷100 μ I的米諾地爾(RiUP ,Taisho Pharmaceutical Co. , Ltd.)後促進軟毛生長的效果，作為圖3和圖4實驗的陽性對照。圖A顯示治療開始當天的小鼠。圖B-F分別顯示治療開始後第7天、第14天、第21天、第28天以及第35天的小鼠。數據顯示了用米諾地爾處理後的效果不如觀察到的MK或PTN處理的效果好，因為米諾地爾處理的很多皮膚區域在35天後不能重新長出軟毛。圖6提供的照片顯示的是在9周大的雄性C3H/HeJ小鼠剃毛區域外敷100 μ 110%(ν/ν)的甘油/磷酸鹽緩衝液(PBS)後的軟毛再生，作為圖8和圖9實驗的陰性對照。圖A顯示治療開始當天的小鼠。圖B-D分別顯示治療開始後第7天、第14天和第21天的小鼠。數據顯示出緩慢的軟毛再生，只有到第21天左右才明顯觀察到。圖7提供的照片顯示的是在9周大的雄性C3H/HeJ小鼠剃毛區域外敷100 μ I米諾地爾(例如，l%w/v Ri U P , Taisho Pharmaceutical Co.，Ltd.)後的軟毛再生,作為圖 8和圖9實驗的陽性對照。圖A顯示治療開始當天的小鼠。圖B-D分別顯示治療開始後第7天、第14天和第21天的小鼠。數據顯示出緩慢的軟毛再生，只有在第21天左右才明顯觀察到，與米諾地爾在治療皮疹時的血管擴張效應一致。圖8提供的照片顯示的是在9周大的雄性C3H/HeJ小鼠剃毛區域外敷100 μ I的溶於10%甘油/PBS的MK (2 μ g/ml)後的軟毛再生。圖A顯示治療開始當天的小鼠。圖B-D分別顯示治療開始後第7天、第14天和第21天的小鼠。數據顯示出緩慢的軟毛再生，只有在第21天左右才明顯觀察到，表明在沒有出現脫髮症狀、僅同步於毛髮生長初期的動物中，MK與米諾地爾相比具有一種不同的作用模式。圖9提供的照片顯示的是在9周大的雄性C3H/HeJ小鼠剃毛區域外敷100 μ I的溶於10%甘油/PBS的PTN (2 μ g/ml)後的軟毛再生。圖A顯示治療開始當天的小鼠。圖B-D分別顯示治療開始後第7天、第14天和第21天的小鼠。數據顯示出緩慢的軟毛再生，只有在第21天左右才明顯觀察到，表明在沒有出現脫髮症狀、僅同步於毛髮生長初期的動物中，MK與米諾地爾相比具有一種不同的作用模式。圖10提供的圖示顯示的是，在第I天通過剃毛和上蠟使其同步於毛髮生長初期，在第9天皮下注射150mg/kg的環磷醯胺(CYP)後由環磷醯胺誘導脫髮一段時間的鼠科動物模型中脫髮發生的百分率。脫髮發生的百分率決定於指定測量日敷過藥的皮膚斑塊中表現出軟毛脫落的皮膚面積的百分比。圓圈表示每天接受鹽溶液安慰劑的動物中出現的脫髮，即除了 CYP外，沒有肝素結合細胞因子蛋白。實心正方形(MK 2-29)表示自第2天至第29天每天局部接受5yg肝素結合細胞因子蛋白的動物在實驗結束時出現脫髮的百分比。實心三角形(MK-10-29)表示自第10天至第29天每隻動物每天接受5 μ g肝素結合細胞因子蛋白的動物在實驗結束時出現脫髮的百分比。數據表明在CYP處理之前和/或緊接著CYP處理之後施加肝素結合細胞因子蛋白減少了 CYP誘導的軟毛脫落，並且肝素結合細胞因子蛋白提高了由CYP處理中斷後的軟毛生長所決定的毛囊恢復比率。在這些情況下，接受安慰劑處理的對照組和接受肝素結合細胞因子蛋白處理的實驗組動物之間最大的區別在第 12至14天檢測到。圖11提供了圖10中第13天出現的脫髮百分率數據的圖示。脫髮發生的百分率決定於指定測量日敷過藥的皮膚斑塊中表現出軟毛脫落的皮膚面積的百分比。白條(PBS)顯示每天接受鹽溶液安慰劑的動物中有42%脫髮，即除了 CYP外，沒有肝素結合細胞因子蛋白。陰影條(MK 2-29)表示自第2天至第29天每天局部接受5yg肝素結合細胞因子蛋白的動物在實驗結束時只有20%脫髮。條紋條(MK-10-29)表示自第10天至第29天每隻動物每天接受5yg肝素結合細胞因子蛋白的動物在實驗結束時只有26%脫髮。數據表明在CYP處理之前和/或緊接著CYP處理之後肝素結合細胞因子蛋白減少了 CYP誘導的軟毛脫落，並且肝素結合細胞因子蛋白提高了由CYP處理中斷後的軟毛生長所決定的毛囊恢復比率。圖12提供的是15隻小鼠背部皮膚的圖示，每隻小鼠用磷酸鹽緩衝液安慰劑處理，即不含有肝素結合細胞因子蛋白，每天將安慰劑作為一種局部配方使用(5隻小鼠一組，標為PBS)，或在接受一次環磷醯胺(CYP)腹腔注射之前和/或之後每天將5 μ g肝素結合細胞因子蛋白作為一種局部配方使用(5隻小鼠一組，標為MK 2-29)，或在接受一次150mg/kg環磷醯胺(CYP)腹腔注射後每天局部施加5μ g肝素結合細胞因子蛋白(5隻小鼠一組，標為MK 10-29)。觀察動物出現的軟毛再生/脫髮的跡象及皮膚的色素沉著。數據表明用PBS處理的小鼠表現出廣泛的軟毛脫落及灰色或粉色的皮膚顏色，尤其是在它們的頸部，與大部分毛囊處於毛髮生長中期(灰色)或毛髮生長終期(粉紅色)相一致。與PBS處理的小鼠相比，在CYP處理之前和之後用肝素結合細胞因子蛋白處理的小鼠(MK2-29)表現出減少的軟毛脫落面積，並且皮膚顏色呈均一的黑色或深灰色，與大部分毛囊處於毛髮生長初期(黑色)及較小比例的毛囊處於毛髮生長中期相一致。在這個實驗組中幾乎沒有明顯的粉紅色皮膚，表明處於毛髮生長終期的毛囊所佔比例有一個很大程度的減小。類似的，與PBS處理的小鼠相比，只在CYP處理後用肝素結合細胞因子蛋白處理的小鼠(MK10-29)表現出減少的軟毛脫落面積，並且宏觀上與化療之前或之後接受肝素結合細胞因子蛋白的動物相似。只在化療後接受肝素結合細胞因子蛋白的小鼠的皮膚顏色呈均一的深灰色，與大部分毛囊處於毛髮生長初期或毛髮生長中期一致。
序列表簡要說明SEQ ID NO: I提供了人類肝素結合細胞因子的胺基酸序列(訪問標識符gi|4505135 andref|NP_002382. I)。SEQ ID NO: 2提供了人類多效生長因子的胺基酸序列(訪問標識符gi | 4506281_andref|NP_002816. I)。SEQ ID N0:3提供了一種人類肝素結合細胞因子類似蛋白的胺基酸序列，與TO2004/052928 的 SEQ ID N0:4 相一致。SEQ ID NO:4提供了人類肝素結合細胞因子mRNA的核苷酸序列(訪問標識符gi 1182650 andgb|M69148. I)。發明的詳細說明 肝素結合細胞因子家族蛋白肝素結合細胞因子是一種分子質量為13-kDa的蛋白，是在肺癌細胞分化早期發現的由視黃酸誘導產生的一個基因產物。多效生長因子是在新生大鼠大腦中發現的能夠增強神經突起延伸的肝素結合蛋白。這裡所用到的「肝素結合細胞因子家族蛋白」是一種與肝素結合細胞因子或它的一個功能區域具有相似胺基酸序列的蛋白並表現出與肝素結合細胞因子相同或相似的功能。肝素結合細胞因子家族蛋白包括肝素結合細胞因子家族蛋白的功能性變體。即使一種與肝素結合細胞因子具有較低同一性的蛋白也可能是一種肝素結合細胞因子家族蛋白，如果這種蛋白具有與肝素結合細胞因子相同或相似的功能。這種肝素結合細胞因子家族蛋白的一個例子可以是肝素結合細胞因子(例如SEQ ID N0:1)、肝素結合細胞因子類似蛋白(例如SEQ ID NO:3 (W0 2004/052928))，截短的肝素結合細胞因子蛋白或多效生長因子(例如SEQ ID N0:2)。肝素結合細胞因子家族蛋白可以是一種肝素結合細胞因子家族蛋白的功能性變體，包括肝素結合細胞因子、肝素結合細胞因子類似蛋白、截短的肝素結合細胞因子蛋白或多效生長因子等蛋白的一種功能性變體。功能性變體與未修飾的蛋白相比可以替代、刪除或增加一至多個胺基酸。一種肝素結合細胞因子家族蛋白的功能性變體將表現出肝素結合細胞因子的一種功能。在一個實施例中，肝素結合細胞因子家族蛋白是肝素結合細胞因子。在另一個實施例中，肝素結合細胞因子家族蛋白是多效生長因子。肝素結合細胞因子的功能可以是一種增強細胞增殖、抑制細胞凋亡、結合肝素、增強細胞遷移或誘導細胞分化的功能。在一個實施例中，MK的功能是抑制細胞凋亡。這裡所用到的「功能性變體」和「變體」包括具有肝素結合細胞因子的一種功能的天然蛋白質變體或人工修飾的蛋白質變體。例如這裡所用到的「modified」(修飾)或「modification」(修飾)包括一個胺基酸殘基的替代、增加和/或刪除。肝素結合細胞因子家族蛋白可以在長度或功能區域上與肝素結合細胞因子家族蛋白(例如，SEQ ID NO中1-3中任意一個)的一個片段(最好是一個連續的片段)具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 的胺基酸序列同一性。肝素結合細胞因子家族蛋白可以含有I個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個或10個修飾，或者甚至15個、20個、25個、30個、35個、40個、45個或50個修飾，例如，在選取的維持或增強肝素結合細胞因子功能的位置。因此，特別聲明的肝素結合細胞因子家族蛋白序列在個別替代、刪除和/或增加一個胺基酸不會強烈削弱其功能的條件下可以不同。肝素結合細胞因子家族蛋白或它們的功能性變體在不給它們的功能帶來強烈不利影響的條件下也可以連接其它的肽或多肽或進一步連接化學基團，例如糖基、脂類、磷酸鹽、乙醯基團或類似物。因此，肝素結合細胞因子家族蛋白可以是一種融合結構。例如，肝素結合細胞因子家族蛋白可以與含有一個技術識別蛋白轉移結構域的一個肽基融合，從而有利於肝素結合細胞因子家族蛋白進入毛囊細胞。除了天然產生的胺基酸，非天然胺基酸或修飾的胺基酸也會考慮，並屬於本發明的範圍內。實際上，這裡所用到的「胺基酸」指的是天然胺基酸、非天然胺基酸、胺基酸類似物及它們的D或L立體異構體。
天然胺基酸包括丙氨酸(A)、精氨酸(R)、天冬醯胺(N)、天冬氨酸(D)、半胱氨酸(C)、穀氨醯胺(Q)、穀氨酸(E)、甘氨酸(G)、組氨酸(H)、異亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、賴氨酸(K)、甲硫氨酸(M)、苯丙氨酸(F)、脯氨酸(P)、絲氨酸(S)、蘇氨酸(T)、色氨酸(W)、酪氨酸(Y)、纈氨酸(V)、羥脯氨酸(O和/或Hyp)、異二酪氨酸(IDT)以及異二酪氨酸二聚體(di-IDT)。羥脯氨酸、異二酪氨酸以及異二酪氨酸二聚體在翻譯後形成。在一些實施例中，使用天然胺基酸，尤其是這20個基因編碼的胺基酸。替代可以是保守胺基酸的替代，替代的胺基酸與涉及的序列中相應的胺基酸具有相似的結構或化學性質。或者，替代也可以是非保守胺基酸的替代。舉個例子，保守的胺基酸替代包括脂肪族胺基酸或疏水胺基酸(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸)的互相替代；含羥基的胺基酸(例如，絲氨酸和蘇氨酸)的互相替代；酸性胺基酸(例如，穀氨酸或天冬氨酸)的互相替代；含醯胺的胺基酸(例如，天冬醯胺和穀氨醯胺)的互相替代；芳香族胺基酸(例如，苯丙氨酸和酪氨酸)的互相替代；基本胺基酸(例如，賴氨酸、精氨酸和組氨酸)的互相替代；以及小胺基酸(例如，丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲硫氨酸和甘氨酸)的互相替代。功能性變體可以通過肝素結合細胞因子家族蛋白在胺基酸側鏈、胺基酸手性和(或)肽骨架的水平上進行化學修飾獲得。這些變化是為了使蛋白質具有相似或改良的治療特性。技術人員將獲知可以提高功效、延長活性、有利於純化和/或延長半衰期的修飾。肝素結合細胞因子家族蛋白的功能性變體可以通過改變蛋白質序列，然後分析改變後的蛋白質是否具有與肝素結合細胞因子家族蛋白相似的功能而得到鑑定，例如增強細胞增殖、抑制細胞凋亡、結合肝素、促進細胞遷移或誘導細胞分化。肝素結合細胞因子家族蛋白可以通過技術人員熟知的重組DNA突變技術化學合成。例如，肝素結合細胞因子家族蛋白可以按照實施例JP-A-H09-95454中公開的方法製成。配方肝素結合細胞因子家族蛋白可以用來製成任何形式的配方，用於藥物、準藥或化妝品領域，更適合於局部用藥。例如，組分可以是一種毛髮生長劑、毛髮或頭皮美容品(例如，香波、護髮素、頭皮洗液、頭皮霜、頭髮滋養品，等等)、護膚品(例如，洗液、乳霜、面霜、潔面乳、乳液、面膜、洗面液、肥皂，等等)、身體護膚品(例如，身體乳霜、沐浴露、肥皂、液體洗液、沐浴添加物，等等)、紫外線保護劑(例如，遮陽物、防曬霜、曬黑油，等等)或化妝品(例如，眼線膏、眉筆、乳霜、乳液，等等)。肝素結合細胞因子家族蛋白可以方便地製成注射用配方，例如，通過靜脈注射一種或多種化療藥物。賦形劑通常以配藥的形式包含在內，例如，提高溶解度和/或生物黏著。合適的賦形劑包含溶劑、助溶劑、乳化劑、增塑劑、表面活性劑、增稠劑、PH調節劑、潤滑劑、抗氧化劑、螯合劑、潤溼劑和吸水劑。配方還可以包含一種或多種添加劑，例如，染料、彩色色素、發光劑、除臭劑及掩臭劑。稀釋液或填充物增加了固體劑型的體積，因此藥片的壓縮或藥珠和藥粒的形成確定了實際大小。合適的稀釋液包括但不局限於二水磷酸氫二鈣、硫酸鈣、乳糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素、微晶纖維素、瓷土、氯化鈉、幹澱粉、水解澱粉、預膠凝澱粉、二氫化矽、氧化鈦、矽酸鋁鎂和糖粉。配方還可以包含一種或多種分散劑，例如，磷酸鹽緩衝液(PBS)、鹽溶液、葡萄 糖、月桂基磺酸鈉(SLS)，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)以及羥丙基甲基纖維素(HPMC)0配方還可以包括一種或多種粘合劑，給一種固體劑型配方提供粘附力，從而使一種藥片、藥珠或藥粒在劑型形成之後保持完整。合適的粘合劑原料包括但不局限於澱粉、預凝膠澱粉、凝膠、糖(包括蔗糖、葡萄糖、右旋糖、乳糖和山梨醇)、聚乙二醇、蠟質、天然的和合成的樹膠(如阿拉伯樹膠、黃芪膠、海藻酸鈉、纖維素(包括羥丙基甲基纖維素(「HPMC」)、微晶纖維素(「MCC」)、羥丙基纖維素、乙基纖維素)以及矽酸鎂鋁)，及合成的聚合物如丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸氨烷基酯共聚物、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。配方還可以包括一種或多種有利於固體劑量單位(例如一種藥片)生產和服用的潤滑劑。合適的潤滑劑包括但不局限於硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸、山嵛酸甘油、聚乙二醇、滑石和礦物油。配方還可以包含一種或多種有利於劑型在服用後分解的分解質，通常包括但不局限於澱粉、羥基乙酸澱粉鈉、羥甲基澱粉鈉、羥甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、預凝膠澱粉、粘土、纖維素、藻蛋白鹼、樹膠或交錯連接的聚合物，例如交錯連接的PVP。配方還可以包含一種或多種穩定劑和/或防腐劑(例如，E216、E218和水合三氯叔丁醇)，防止或減緩藥物的分解反應，例如，通過氧化或細菌作用。配方還可以包含以一種或多種表面活性劑。表面活性劑可以是陰離子的、陽離子的、兩性的或非離子的表面活性劑。合適的陰離子表面活性劑包括但不局限於那些含有羧酸鹽、磺酸鹽和硫酸根離子的物質。陰離子表面活性劑的例子包括鈉、鉀、銨的長鏈烷基磺酸鹽以及燒基芳基橫酸鹽，例如十~■燒基苯橫酸納；燒基玻拍酸雙酷橫酸納，例如十~■燒基苯磺酸鈉；烷基琥珀酸雙酯磺酸鈉，例如2-乙基亞硫酸基雙酯磺酸鈉；以及烷基磺酸鹽，例如月桂基磺酸鈉。陽離子表面活性劑包括但不局限於季銨化合物，例如殺藻胺、苄索氯銨、西曲溴銨、硬脂雙甲苯甲基氯化銨、聚氧乙烯及椰子胺。非離子表面活性劑的例子包括乙二醇單硬酯酸酯、丙二醇豆蘧酸鹽、甘油基單硬酯酸酯、甘油基硬酯酸酯、聚甘油-4-油酸酯、醯化山梨聚糖、醯化蔗糖、聚乙二醇-150月桂酸酯、聚乙二醇-00單月桂酸酯、聚氧乙烯單月桂酸酯、聚山梨醇酯、聚氧乙烯辛基苯基醚、聚乙二醇-1000鯨蠟基醚、聚氧乙烯十三烷基醚、聚丙二醇丁基醚、硬脂醯單異丙醇胺以及聚氧乙烯氫化牛脂胺。兩性表面活性劑的例子包括N-十二烷基-β -丙醯胺鈉，N-月桂醯-β -亞氨基二丙酸鈉、肉豆蘧醯兩性基乙酸鈉、月桂醯甜菜鹼及月桂醯磺基甜菜鹼。如有需要，固體配方,例如,藥片、藥珠、藥粒或微藥粒,也可以含有一定量的無毒輔料，例如一種潤溼劑或乳化劑、染料或PH緩衝劑。藥方可以是單位劑量的形式，每個單位劑量包含預定量的活性藥物，即肝素結合細胞因子家族蛋白或它的一種衍生物或同源蛋白。根據配方是否用於預防或治療目的、用藥方法、按所選方法用藥後化合物的半衰期以及年齡、體重和治療期間病人的身體狀況(例如，酗酒問題的嚴重性)，活性藥物的濃度可以不同。例如，一個單位劑量可以包含大約
Iμ g-io μ g、0. Olmg-IOOOmg或0. lmg_250mg的肝素結合細胞因子家族蛋白或它的一種衍生物或同源蛋白。在另一個實施例中，肝素結合細胞因子家族蛋白或它的一種衍生物或同源蛋白可以製成活性藥物濃度為藥物成分總重量的至少1% (w/w)左右或至少5% (w/w)左右或至少10% (w/w)左右或25% (w/w)左右。為了準備藥方，將一種或多種肝素結合細胞因子家族蛋白與一種藥劑學上可接受的載體或賦形劑混合起來，例如，與一種藥劑學上可接受的載體、賦形劑或以凍乾粉、漿狀、水溶液或懸浮液等形式存在的穩定劑混合(參考，例如Hardman，et al. (2001)Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, NewYork,N.Y. ;Gennaro(2000)Remington : The Science and Practice of Pharmacy,Lippincottj Williams,and Wilkins, New York,N. Y. ;Avis, et al. (eds.) (1993)Pharmaceutical Dosage Forms:Parenteral Medications,Marcel Dekkerj NY ；Liebermanj et al. (eds.) (1990)Pharmaceutical Dosage Forms : Tablets, MarcelDekker，NY ;Lieberman，et al. (eds.) (1990)Pharmaceutical Dosage Forms:DisperseSystems, Marcel DekkerjNY ；Weiner and Kotkoskie (2000)Excipient Toxicity andSafety, Marcel Dekker, Inc.，New York, N. Y.)。在用於治療脫髮的配方中，根據各方面的參數，例如，治療中哺乳動物的年齡、性別和身體狀況，肝素結合細胞因子家族蛋白的量可能不同。例如，肝素結合細胞因子家族蛋白可以製成終濃度為0. 001比藥物總重量的50%、10%、5%或l%(w/w)。在液體配方中，肝素結合細胞因子家族蛋白的濃度可以是，例如，0. 0001 μ g/ml至2mg/ml、0. 001 μ g/ml至lmg/ml、0. 01 μ g/ml 至 500 μ g/ml、0. I μ g/ml 至 100 μ g/ml、0. I μ g/ml 至 50 μ g/ml、0. I μ g/ml至 10 μ g/ml 或 I μ g/ml 至 2 μ g/ml。含有肝素結合細胞因子家族蛋白和藥劑學上接受的載體或稀釋液的配方還可以含有一種或多種附加治療藥物，該藥物可以治療相同的症狀並適合於肝素結合細胞因子家族蛋白的用藥方法。例如，一種肝素細胞因子家族蛋白可以製成與雌激素和/或氧雄龍和/或米諾地爾一起局部使用的配方。附加藥物在配方中的使用濃度通常與它已知的處方量一致。熟練的技工將體會到這樣的組分可以加強病人的治療效果，並且可能不僅僅是加強效果。
、
藥物複合物的配方根據所選的用藥方法不同(例如，溶液、乳劑、膠囊)而不同。對於溶液或乳劑，合適的載體包括，例如水溶液或酒精/水溶液、乳劑或懸浮液(包括鹽溶液和緩衝液)。注射賦形劑可以包括氯化鈉溶液、林格式葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格或固定油。注射賦形劑可以包括多種添加物、防腐劑、或流體(營養物或電解質補充物及類似物)Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, Mack PublishingCo.，Pa.，1985)。為了便於吸收，可以使藥劑溶解並裝於一種合適的分散器中(例如，噴瓶、噴霧器或加壓噴霧器)。藥方可以根據適合的用藥方法改變。例如通過口服的(包括口腔的或舌下的)、局部的(包括口腔的、舌下的或經皮膚給藥的)、或注射的(包括皮下的、肌肉的、靜脈的或皮內的)方法。這種配方可以用藥學領域的任何方法製備，例如通過將活性成分和載體、稀釋液或賦形劑聯合在一起。例如，將肝素結合細胞因子家族蛋白製成局部配方。局部組分包括通過直接作用於接受治療的皮膚表面外敷肝素結合細胞因子家族蛋白的那些藥物形式。為此，傳統藥物類型包括軟膏、塗抹油、乳霜、洗髮齊 、乳液、泥膏齊 、凝膠齊 、噴霧齊 、氣溶膠和它們的類似物，根據需要治療的身體部分可以進行部分塗抹或浸潰敷料。術語「軟膏」包含具有油質 的、水溶性的和乳狀液類型的基礎成分的配方(包括乳霜在內)，例如，凡士林、羊毛脂、聚乙二醇以及它們的混合物。為了局部用於眼瞼或眉，活性成分肝素結合細胞因子家族蛋白可以通過加入藥理學上可接受的緩衝液和鹽而製成具有生理可接受的容積滲克分子濃度的乙醇水溶液、乳霜、軟膏或油。視藥劑師而定，這樣的配方可以包含或不包含防腐劑(如殺藻胺)、氯已定、氯丁醇、對羥基苯甲酸和苯汞基鹽(例如硝酸鹽、氯化物、醋酸鹽和硼酸鹽)，或抗氧化劑，以及添加物(例如乙二胺四乙酸、山梨醇、硼酸等作為添加物)。此外，尤其是水溶液可以包含粘性增強劑，例如多糖(如甲基纖維素、粘多糖(如透明質酸、軟骨素或多元醇(如聚乙烯醇)))。許多緩釋凝膠和基質也可用於可溶的和不可溶的眼用嵌入劑，例如，基於形成原位凝膠的物質。根據使用的實際配方和肝素結合細胞因子家族蛋白，可以採用不同的藥量和不同的服藥方法。為了局部用於皮膚和頭皮，肝素結合細胞因子家族蛋白可以用軟膏、乳霜、塗抹油或藥膏作為活性物質的載體很方便地製成配方。此外，取決於藥劑師和用途性質，這些配方可以含有或不含有防腐劑。這樣的防腐劑包含上面提到的那些化合物，以及甲基、丙烷基或丁基對羥基苯甲酸、甜菜鹼、氯已定、殺藻胺，以及類似物。許多用於緩釋的基質也可以使用。在另一個實施例中，含有一種或多種肝素結合細胞因子家族蛋白的配方適於注射用藥，例如，皮下注射或靜脈注射。這種配方包括水性和非水性無菌注射溶液，可以包含抗氧化劑以及緩衝液、抑菌劑和使配方等壓於受者血壓的溶質；以及可以含有懸浮劑和增稠劑的水性的和非水性無菌注射溶液。這些配方可以裝在單劑量或多劑量的容器中，例如密封的一次用量的針劑安瓿和小瓶，也可以儲存在一個凍幹(使其凍幹)的條件下，只需在臨用前加入無菌的液體載體進行注射，例如水。臨時用的注射溶液和懸浮液可以用無菌藥粉、藥粒和藥片製備。在一個實施例中，一種或多種肝素結合細胞因子家族蛋白可以製成一種用於注射的靜脈注射脂質乳劑或一種表面活性劑膠團或聚合膠團(參考，例如，Jones et al. , Eur J. Pharmaceutics Biopharmaceutics 48，101—111，1999;TorchilinJ. Clin, release 73,137-172,2001)。
製備持續釋放的注射配方，例如通過將一種或多種肝素結合細胞因子家族蛋白裝入多孔的含有一種藥物和一種基質物質的微粒中而製成，這種微粒具有大約Iym至150 μ m的體積平均直徑，例如，大約5 μ m至25 μ m之間的直徑。在一個例子中，多孔微粒具有一個約體積5%至90%之間的平均多孔性。在另一個例子中，多孔微粒還包含一種或多種表面活性劑，例如一種磷脂。這種微粒可以分散在一種藥劑學上接受的水性的或非水性的賦形劑中用於注射。適合這種配方的基質物質包含一種生物相容的合成多聚物、一種脂質、一種疏水分子或它們的一種組合。例如，合成多聚物可以包含，例如從一組含聚羥基酸(如聚乳酸、聚羥基乙酸及聚乳酸-羥基乙酸)的化合物中挑選的一種多聚物、聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-乙交酯、聚酐類、多正酯類、聚醯胺、聚碳酸酯、聚亞烴基(例如聚乙烯和聚丙烯)、聚亞烴基二醇(例如聚乙二醇)、聚亞烴基氧化物(例如聚環氧乙烷)、聚亞烴基對苯二酸鹽(例如聚對苯二甲酸乙二酯)、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚乙烯酯、聚乙烯滷化物(例如聚氯乙烯)、聚乙烯吡咯烷酮、聚矽氧烷、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚苯乙烯、聚亞安酯以及它們的共聚物、衍生的纖維素(例如烷基纖維、羥烷基纖維、纖維素醚類、纖維素脂類、硝化纖維、甲基纖維素、乙基纖維素、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羥基丁基甲基纖維素、醋酸纖維素、丙酸纖維素、乙酸丁酸纖維素、乙酸鄰苯二甲酸纖維素、羧乙基纖維素、三乙酸纖維素、硫酸鈉纖維素(這裡提到的都是「合成纖維素」)、聚合物或丙烯酸、甲基丙烯酸或它們 的共聚物或衍生物(包括酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚甲基丙烯酸異丁酯、聚甲基丙烯酸己酯、聚甲基丙烯酸異癸酯、聚甲基丙烯酸月桂酯、聚甲基丙烯酸苯酯、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸異丙酯、聚丙烯酸異丁酯及聚丙烯酸硬脂酯)(這裡提到的都為「聚丙烯酸」)、聚丁酸、聚戊酸、以及聚丙交酯-己內酯、共聚物、它們的衍生物和混合物。在一個推薦的實施例中，合成多聚物包含一種聚乳酸、聚羥基乙酸、聚乳酸-羥基乙酸或聚丙交酯-乙交酯。在另一個實施例中，藥方改成了口服配方，例如膠囊、軟凝膠或藥片；粉末或顆粒、溶液或在水性或非水性液體中的懸浮物、可食用的泡沫或起泡物、或水包油乳狀液或油包水乳狀液。一種口服配方可以包含一種晶內相，其中含有有效劑量的肝素結合細胞因子家族蛋白和至少一種糖醇和一種水性粘合劑。該藥方可以不含有乳糖。適合這種配方的糖醇可以從甘露醇、麥芽糖醇、山梨醇、乳糖醇、赤藻糖醇和木糖醇中選擇。糖醇最好在大約15%-90%濃度範圍內。一種較好的水性粘合劑可以從羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、聚乙烯吡咯烷酮、澱粉、凝膠及類似物中選擇。粘合劑的重量最好在大約1%-15%的範圍內。晶內相還可以包含一種或多種稀釋液，例如，從微晶纖維素、粉末狀纖維素、二鹼式磷酸鈣、硫酸鈣、葡萄糖結合劑、糊精、藻酸鹽和葡萄糖賦形劑中選擇。這種稀釋液的重量也在大約15%-90%的範圍內。這種晶內相還可以包含一種或多種分解質，例如，從一種低取代羥基丙基纖維素、羧甲基纖維素、羧甲基纖維素鈣、羧甲基纖維素鈉、羥基乙酸澱粉鈉、交聚維酮、交聯羧甲基纖維素鈉、澱粉、晶體纖維素、羥丙基澱粉以及部分預凝膠澱粉中選擇一種分解質。分解質的重量通常在5%-20%的範圍內。這種配方還可以包含一種或多種潤滑劑，例如，從滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸、氫化植物油、甘油山嵛酸酯、聚乙二醇及它的衍生物、十二烷基硫酸鈉及硬脂醯醇富馬酸鈉中選擇一種潤滑劑。潤滑劑的重量通常在O. 5%-5%的範圍內。將這種配方製成一種藥片、膠囊或軟凝膠，例如，通過將肝素結合細胞因子家族蛋白和至少一種糖醇混合，形成一種幹的混合物，再用一種水性粘合劑對幹的混合物進行溼法造粒，獲得一種晶內相，然後進一步將晶內相製成配方的工序。藥片或膠囊通常製成一個適量的單位劑量，例如，O. OOlmg-lOOOmg。或者，一種液體或半固體的口服藥方，例如，可以將一種或多種肝素結合細胞因子家族蛋白製成硬膠囊或軟膠囊。該配方可以含有一種第一載體成分和可選的第二載體成分，包括一種或多種大粒凝膠月桂酸甘油酯、大粒凝膠辛醯己醯甘油酯、大粒凝膠硬脂醯甘油酯、大粒凝膠亞油酸甘油酯、大粒凝膠油酸甘油酯、聚亞烷基二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、脂肪醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸、聚乙氧基脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、脂肪酯、月旨肪酸甘油酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚氧丙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇甘油酯、聚丙三醇甘油酸酯、山梨糖醇酯、聚乙氧基山梨醇酐酯、聚乙氧基膽固醇、聚乙 氧基蓖麻油、聚乙氧基固醇、卵磷脂、甘油、山梨酸、山梨醇或聚乙氧基植物油。該配方還可以包含一種乳化劑/增溶劑，含有一種或多種烷基硫酸鹽、季胺類化合物、脂肪酸鹽、磺基琥珀酸鹽、牛磺酸類、胺基酸、聚乙二醇月桂醯甘油酯、聚乙二醇癸醯己醯甘油酯、聚乙二醇硬脂醯甘油酯、聚乙二醇亞油醯甘油酯、聚乙二醇油醯甘油酯、、聚亞烷基二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸、聚乙氧基脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇甘油酯、聚丙三醇甘油酸酯、山梨糖醇酯、聚乙氧基山梨糖醇酯、聚乙氧基膽固醇、聚乙氧基蓖麻油、聚乙氧基固醇、卵磷脂、或聚乙氧基植物油。該配方還可以包含一種抗結晶/增溶的成分，如果含有這種成分，通常是一種或多種烷基硫酸鹽、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇月桂醯甘油酯、聚乙二醇癸醯己醯甘油酯、聚乙二醇硬脂醯甘油酯、聚乙二醇亞油醯甘油酯、聚乙二醇油醯甘油酯、聚亞烷基二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物、脂肪醇、脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸、聚乙氧基脂肪酸酯、丙二醇脂肪酸酯、脂肪酯、脂肪酸甘油酯、聚氧乙烯甘油脂肪酸酯、聚乙二醇甘油酯、聚丙三醇脂肪酸酯、山梨糖醇酯、聚乙氧基山梨糖醇酯、聚乙氧基膽固醇、聚乙氧基蓖麻油、聚乙氧基固醇、卵磷脂、或聚乙氧基植物油。肝素結合細胞因子家族蛋白可以和疏水多聚物一起製成配方，最好是一種生物粘附多聚物，並且隨意封裝於或分散於整個微粒或納米粒中。這種生物粘附多聚物可以通過將配方粘附於胃腸道壁而延長藥物在胃腸的停留。合適的生物粘附多聚物包括聚乳酸、聚苯乙烯、聚(二羧基甲基丙烷-癸二酸酐)(20:80)(聚CCP:SA)、藻酸鹽(新製備的);以及聚(反丁烯二酸酐-癸二酸酐)(20:80)(聚FA :SA)，A型(含有蘇丹紅染料)和B型(未染色的)。其它的高粘性多聚物包括P (FAiSA) (50 :50)和非水溶的聚丙烯酸酯和聚丙烯醯胺。較好的生物粘附多聚物通常是足夠疏水而不溶於水的，但含有一個足夠量的暴露表面的羧基基團促進粘附，例如非水溶性的聚丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸酯；羥基酸的多聚物，例如聚交酯和聚乙醇酸交酯；聚酐類；多正酯類；含有這些多聚物的混合物；以及含有單體和多聚物的共聚物。較好的生物多聚物是生物可蝕性高分子，分子質量在1000-15000kDa更好，最好在2000-5000Da。聚酐類特別合適，例如，聚己二酸酐(「p (AA)」)、聚反丁烯二酸酐、聚癸二酸酐、聚馬來酸酐、聚蘋果酸酐、聚鄰苯二酸酐、聚異鄰苯二酸酐、聚天冬氨酸酐、聚對苯二酸酐、聚鄰苯二酸酐、聚羧基苯氧基丙烷酸酐及其與其它聚酐類以不同摩爾比形成的共聚物。也可以用疏水多聚物和生物粘附疏水多聚物的混合物。合適的疏水多聚物包括，例如，羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥甲基纖維素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮及聚乙二醇。其它的黏膜粘附劑多聚物，包括二羥苯丙氨酸-馬來酸酸酐共聚物、異鄰苯二甲酸酐多聚物、二羥苯丙氨酸-異丁烯酸多聚物、二羥苯丙氨酸-纖維素多聚物以及二羥苯丙氨酸-丙烯酸多聚物。或者，用於口服的肝素結合細胞因子家族蛋白可以裝入或呈分子狀態分散在一種多聚物中，減小顆粒大小並提高溶解性。多聚物可以包含聚酯，例如聚乳酸(P (LA))、聚辛內酯、聚交酯-乙交酯(P (LGA))、聚羥基丁酸、聚蘋果酸；聚酐類，例如，聚己二酸酐(P(ΑΑ))、聚反丁烯二酸-癸二酸酸酐(P (FA :SA))、聚癸二酸酸酐(P (SA));纖維素多聚體如乙基纖維素、醋酸纖維素、鄰苯二酸乙酸纖維素，等等；丙烯酸及甲基丙烯酸多聚物如丙烯酸樹脂RS100、RL100、E100P0、L100-55、L100、SlOO (由美國羅姆分類)或技術人員熟知的通常用於包裝和製藥的其它多聚物。合適的還有疏水多聚物如聚醯亞胺。能夠提供一定的親水性質的混合物或共聚物有利於改善原料的潤溼能力。例如，大約5%-20%的單體可以是親水的單體。親水多聚物如羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素(CMC)通常用於改善原料的潤溼能力。
口服配方可以是「即釋」配方，例如，在體外60分鐘內釋放至少85% (wt/wt)的肝素結合細胞因子家族蛋白。或者，配方可以是一種「控釋」配方，它比即釋配方釋放藥物更緩慢，即它在體外需要60分鐘以上的時間釋放至少85% (wt/wt)的藥物。為了延長釋放的時間，可以提高活性藥物與多聚物的比例。相信提高的藥物相對濃度具有增加多聚物基質中有效化合物域大小的作用，從而減慢藥物的溶解。在一種多聚物基質含有確定類型的疏水多聚物的情況下，多聚物將作為一種黏膜粘附劑發揮作用，延長活性化合物在胃腸道中的保留時間。提高的藥物溶解速度與多聚物基質的黏膜粘附劑性質的結合提高了活性成分的攝入並減少了該化合物在服用和斷藥狀態下的差別。這裡所述的成分還可以包含通常用於化妝品的組分，例如，潤滑油、去垢劑、紫外線吸收材料、醇類、螯合劑、PH調節劑、防腐劑、增稠劑、色素、香水以及皮膚營養補充物。確切地說，該組分可以包含用於皮膚化妝品的活性成分，例如氧化鋅微粒、三氧化鈦、紫外線吸收材料(如Parsol MCX及Parsol 1789)、維他命(如抗壞血酸)、保溼劑(如透明質酸鈉、凡士林、甘油和尿素)、荷爾蒙劑、皮膚增光劑(如曲酸、熊果苷、胎盤素和嚕忻喏)、留醇類藥物、產品的抑制劑或一種類似花生四烯酸代謝物和組胺(例如，吲哚美辛和布洛芬)這類的化學介質、抗炎藥物(如受體拮抗劑)、抗雄激素藥物、皮脂分泌抑制劑(如維A酸、蜂王漿提取物以及蜂王漿酸)、外部血管擴張器(如煙酸維生素E、前列地爾、鹽酸異克舒令及鹽酸苄唑啉)、具有外部血管擴張活性的二氧化碳、活血劑(例如米諾地爾、卡普氯胺、辣椒酊、維生素E變體、銀杏萃取物及日本當藥萃取物)、細胞興奮劑(如十五酸甘油酯和菸鹼酸醯胺)、抗菌劑(如日扁柏素、L-薄荷醇和異丙基甲基苯酚)、甘草酸和它的變體或鹽類、神經醯胺和神經醯胺類似物。藥的劑量單位和使用頻率肝素結合細胞因子家族蛋白或藥物的使用劑量和頻率可以隨情況而適當改變。一般而言，肝素結合細胞因子家族蛋白或含有肝素結合細胞因子家族蛋白的藥物可以在任何頻率下使用。通常在一段持續時間裡將肝素結合細胞因子家族蛋白局部地反覆塗抹於需要治療的身體部分，例如眼瞼、眉、皮膚或頭皮。較好的給藥方案通常包括定期地(例如每天一次、每周一次、每周兩次或每周三次)用藥治療至少一個月，至少三個月會更好，最好是至少六個月。例如，肝素結合細胞因子家族蛋白或藥物可以每周使用I次、2次、3次、4次、5次、6次或7次，相應的每天使用一次肝素結合細胞因子家族蛋白或藥物塗抹。每天，肝素結合細胞因子家族蛋白或藥物可以按每天敷用I次、2次、3次、4次或5次的方法使用。在一個實施例中，哺乳動物每天敷用肝素結合細胞因子家族蛋白或藥物一次，每周3-5 次。通常情況下，含有肝素結合細胞因子家族蛋白的局部配方可以按O. OOl-IOOOyg/cm2/ 天、O. 005-500 μ g/cm2/ 天、O. 01—100 μ g/cm2/ 天、O. 05-50 μ g/cm2/ 天或 0· 1-10 μ g/cm2/天的量敷用。通常，根據肝素結合細胞因子家族蛋白和配方的情況，局部敷於頭皮的劑量為每天大約O. Ing-IOOmg,每天大約Ing-IOmg會更好,最好是每天大約10ng-lmg。通常情況下，用於治療眼瞼的肝素結合細胞因子家族蛋白的每日用量可以是每個眼瞼大約
O.1ng-100ng。肝素結合細胞因子家族蛋白可以作為活性成分單獨使用，也可以和其它的活性成分一起使用。類似的，藥物除了含有肝素結合細胞因子家族蛋白外還可以包含其它活性成 分。除了肝素結合細胞因子家族蛋白，這樣的活性成分可以是但不局限於細胞興奮劑、活血劑、抗雄性激素藥物、皮脂分泌抑制劑、免疫抑制劑、抗組胺藥、抗菌劑、病灶興奮劑、潤滑齊U、消炎劑或低分子抗細胞凋亡劑。確切的說，所述的其它活性成分可以是泛酸或它的變體、胎盤素、光敏劑、人參萃取物、生物素、一硝基愈創木酚、卡普氯胺或它的水合物、維他命E或它的變體、日本當藥萃取物、辣椒酊、西法安生、煙酸或它的變體、雌二醇、乙炔雌二醇、蘭迪奇酸、米諾地爾或它的類似物/變體、5 α -還原酶抑制劑、12-十四烷醯佛波醇-13-乙酸酯、草藥(例如，黃精屬根莖、鉤藤屬、水飛薊屬、指甲花及甘草屬)、雌二醇苯甲酸酯、苯海拉明、間苯二酚、日扁柏素、I-薄荷醇、水楊酸、寥屬根萃取物、竹節參根莖萃取物、泛醯醇、二硫化硒、鹽酸吡哆醇、二吡啶硫酮鋅、吡啶硫酮鋅、硫磺、吡羅克酮乙醇胺、吡啶硫酮鋅、硫磺、硬脂醯甘草次酸、甘草酸鉀、尿囊素、二烴基一元胺變體、白蘇子萃取物、茯苓菌核萃取物、甘草次酸、硝酸咪康唑、苯甲酸、水楊酸鈉、植物留醇、葡萄酒酵母抽提物、6-[2-[ (5-漠基-2卩比唳)氛基]乙烯]-1-乙基一 2 一甲基卩比唳盒鵬化物(takanal)、乙塊雌二醇、異丙基甲基苯酚、西法安生生物素、D-泛醯醇、芍藥屬萃取物、椴樹屬萃取物、槐樹萃取物、苦參萃取物、姜(生薑)根萃取物、6-苄胺嘌呤、十五酸甘油酯、t-黃烷酮、甜八仙花屬葉片萃取物、腺苷及泛醯乙醚。在一個實施例中，含有肝素結合細胞因子家族蛋白的配方和用於治療相同症狀的附加治療物(例如，雌二醇和/或氧雄龍和/或米諾地爾和/或非那司提或一種阻礙睪酮轉變成二氫睪酮的藥物)相繼或同時用藥。這種附加的治療藥物是按照這種藥物的標準治療方法同時使用的。熟練的技工將體會到這樣的組分可以加強病人的治療效果，並且可能不僅僅是加強效果。或者，除此之外，含有一種肝素結合細胞因子家族蛋白的配方和可引起毛髮脫落的細胞毒素或細胞生長抑制劑相繼或同時使用，例如，在一個患者正接受化療或放射性治療或治療HIV-I感染或AIDS的情況下。在這樣的情況下，肝素結合細胞因子家族蛋白的效應中和了細胞毒素或細胞生長抑制劑引起的毛髮脫落效應。細胞毒素或細胞生長抑制劑通常按照該藥物的標準治療方法使用。方便的是，肝素結合細胞因子家族蛋白和細胞毒素或細胞生長抑制劑是按照相同的方法用藥的，例如通過注射。
使用對象本發明的成分適合於醫治人類和其它哺乳動物，包括治療寵物(如狗和貓)以及家畜(如馬)、動物園的動物(如貓科動物、犬科動物、牛科動物、有蹄類動物和靈長目動物)或實驗動物(如齧齒目動物、兔類動物和靈長目動物)。這種組分特別適合於治療任何一種患有任何形式的脫髮的哺乳動物，尤其是人類、靈長目動物、狗、貓或馬。接受治療的對象可能忍受著毛髮稀少、毛髮脫落或禿髮的折磨，或者可能不受毛髮稀少、毛髮脫落或禿髮的折磨(即不患有可檢測到的疾病)，但有發展為毛髮稀少、毛髮脫落或禿髮的傾向。肝素結合細胞因子家族蛋白或含有肝素結合細胞因子家族蛋白的藥物，可以用於治療由細胞毒素或細胞生長抑制劑引起的毛髮稀少、毛髮脫落或禿髮。細胞毒素或細胞生長抑制劑可以是內生的，例如對壓力做出反應時產生的，或者可以是外生的，例如化療治療癌症過程中使用的。
本發明特別適合於治療和預防正接受這裡所述的細胞毒素或細胞生長抑制劑治療或處方中已經包含這種治療的患者所出現的脫髮。正如本文所舉的實施例，治療對象可以在接受細胞毒素或細胞生長抑制劑治療開始之前，或這種治療開始之前或之後。本發明還允許肝素結合細胞因子家族蛋白的治療開始於細胞毒素或細胞生長抑制劑治療開始之後。例如，患者可以在化療(例如，亞德裡亞黴素、環磷醯胺及特素，或5-氟尿嘧啶、甲醯四氫葉酸及奧沙利鉬)開始之前塗抹本文所述的成分，在每個眼瞼皮膚和睫毛交界處的邊緣塗一條細實線以及作為乳霜塗抹在頭皮上，每天一次，治療幾周(例如，兩周或三周)。患者可以在化療期間及化療結束後持續塗抹該成分。患者一般不會經歷通常與化療相關的全部毛髮脫落，並且，當化療結束後可以更快地恢復。化療結束後幾周，患者可以停止使用這種成分。如果在這個時期毛髮脫落，可以重新開始治療。接下來將參照實施例對本發明進行詳細說明，但並不局限於實施例中的說明。實施例I用於生產重組肝素結合細胞因子家族蛋白的方法。將含有人類MK開放閱讀框(核苷酸位置1-432 ；SEQ ID NO 4)的cDNA片段插入酵母表達載體pPIC9 (Invitrogen)中。將重組質粒轉入酵母(Pichia pastoris GS115 ；Research Corporation Technologies)中，然後用組氨酸和G418篩選陽性克隆。採用下列柱層析法按照下面的步驟純化酵母分泌至培養基中的人類MK蛋白I. SP Steamlines (Pharmacia (法瑪西亞公司);用20mM pH 5· 5的醋酸鹽緩衝液吸附和清洗，用20mM pH3. 5含有NaCl的醋酸鹽緩衝液洗脫)；2. Sulfated Cellulofine (纖維素硫酸酯)(日本 Seikagaku Kogyo 公司；用 IOmMPH 7. 2的磷酸鹽緩衝液吸附，然後用含有O. 7M NaCl的緩衝液清洗，最後用含有2. OM NaCl的緩衝液洗脫);3. Superdex 75pg (Pharmacia (法瑪西亞公司)；用鹽溶液進行凝膠過濾)；4. Poly Sulfoethyl A (多聚磺基乙基 A) (Poly LC 公司；用含有 O. 6M NaCl 的20mM緩衝液吸附，然後用含有O. 88MNaCl的緩衝液清洗，最後用含有2MNaCl的緩衝液洗脫)；以及
5. Superdex 75pg (法瑪西亞公司；用鹽溶液進行凝膠過濾)。用鹽溶液對肝素結合細胞因子進行透析。以MK促進初期神經元細胞存活的活性指標檢測純化後的MK蛋白的活性。實施例2外敷肝素結合細胞因子(MK)和多效生長因子(PTN)的毛髮生長效應。準備好濃度為I μ g/ml的溶於40%甘油/磷酸緩衝液(PBS)( ν/ν)中的MK或ΡΤΝ。每周三次將10 μ I的MK或PTN溶液直接塗抹於老年Black 6小鼠的脫髮區域(I. 5歲，MK雜合敲除(+/-))。用藥後對MK和PTN是否分別具有毛髮生長效應觀察了 25天。圖I顯示了觀察結果。正如對圖I及其簡要說明的清楚理解，MK或PTN的使用促進了老年小鼠脫髮區域的毛髮生長。在這個實驗中，MK和PTN的使用在第15天停止，因為MK和PTN的毛髮生長效應在第15天就已經得到證實。從第15天至第25天，即使MK和PTN停止使用，毛髮的數量也在增加(圖I)。由此表明MK和PTN的毛髮生長效應在停藥後可以持續一段時間。 實施例3皮下注射MK和PTN的毛髮生長效應。準備好溶於PBS的I μ g/ml的MK或PTN。對老年Black 6小鼠(I. 5歲，MK純合敲除(-/_))皮下注射50 μ I的MK或PTN溶液。在這些情況下，皮下注射MK和PTN對這種動物模型在第15天沒有表現出毛髮生長效應(圖2)。在第15天將皮下注射換成與實施例2 一樣的MK或PTN外敷後，在第25天觀察到MK或PTN的毛髮生長效應(圖2)。實施例4靜脈注射MK的毛髮生長效應。準備好溶於PBS的I μ g/ml的MK。對老年Black 6小鼠(I. 5歲，MK純合敲除(-/-))靜脈注射100 μ I的MK溶液。在這些條件下，靜脈注射MK對這種動物模型沒有表現出毛髮生長效應(數據沒有顯示)。實施例5外敷MK和PTN的毛髮生長效應。準備好溶於10%甘油/PBS (ν/ν)的2 μ g/ml的MK或PTN。每周5次將100 μ I的MK或PTN溶液直接塗抹於老年Black 6小鼠的脫髮區域(I. 5歲，MK雜合敲除(+/-))。敷藥開始後對MK和PTN是否分別具有毛髮生長效應觀察了 35天。圖3和圖4顯示了觀察結果。用米諾地爾(例如，l%w/v ；RiUPS, Taisho Pharmaceutical Co. , Ltd.)作為陽性對照(圖 5)。正如對圖3和圖4及其簡要說明的清楚理解，在這些情況下，在老年小鼠的脫髮區域外敷MK和PTN都表現出毛髮生長效應。實施例6外敷MK和PTN的毛髮生長效應與米諾地爾的效應不同。準備好溶於10% 甘油 /PBS(v/v)的 2 μ g/ml 的 MK 或 PTN。將 100 μ I 的 MK 或 PTN溶液直接塗抹於C3H/HeJ小鼠(雄性，9周大)的剃毛區域。10%甘油/PBS (ν/ν)和米諾地爾(如.,l%w/v; RiUP , Taisho Pharmaceutical Co. , Ltd.)分別作為陰性和陽性對照(圖6和圖7)。敷藥開始後對MK和PTN是否分別表現出在毛髮生長初期促進毛髮生長觀察了21天。圖8和圖9顯示了觀察結果。塗抹米諾地爾(RiUP )後表現出促進毛髮生長(圖7)。相比之下，MK和PTN沒有表現出這樣的促進作用(圖8和圖9)。現有的數據表明，在僅同步於毛髮生長初期而並不表現出脫髮特徵的動物中，MK與米諾地爾具有一種不同的作用模式。實施例7外敷MK在急劇脫髮中的效應動物倫理學所有的程序經過澳大利亞墨爾本市皇家墨爾本理工大學(RMIT)動物實驗和倫理委員會批准(AEEC項目號1042)。動物
在本研究中總共用了 35隻小鼠。無菌雌性C57B1/6J小鼠從澳大利亞西澳洲坎寧谷動物資源中心獲得。動物被安置在RDDT動物設備(201. 01)中具有合格的清潔的常規的動物住所條件的一個單獨的房間中，保持目標值為22±2° C的溫度以及30-70%的相對溼度，12小時的光照黑暗周期。給動物餵養經過放射性照射滅菌的大鼠和小鼠的鼠食(澳大利亞西澳洲格倫福裡斯特特製飼料)，對其適應性餵養城鎮水。每周至少兩次補充新鮮水。定期測試飼料、墊草和水，鑑定出可能影響研究結果的任何汙染物。動物們被隨機分成實驗組，在每個籠子中群居2-3天後接受至少兩天隔離期的調查。通過在動物肩胛骨之間皮下注射微晶片發射機應答器來識別小鼠。對每個籠子中的小鼠的次級鑑別可以在尾巴上做持久的標記。如果去毛的小鼠皮膚被籠中夥伴過度理毛，這些小鼠在治療開始之前將被單獨安置。當治療開始時，小鼠有5周至7周大，其重量在不高於平均體重20%的範圍內不
坐寸ο急劇脫髮的誘導按照Paus et al. , Am. J. Pathol. 144，719-734 (1994)所述步驟誘導急劇脫髮，即通過對C57BL/6小鼠進行一次環磷醯胺的腹腔注射來誘導。研究中包括35隻雌性C57B1/6小鼠，將其分為7個實驗組，每組5隻，如下表所示
環磷醯胺肝素結合細胞因子處理動物
實驗組 -
mg/kg 研究天數P g/mL 研究天數數量
1O9O2-295
2509O2-2953509102-295
45091010-295
51509O2-295
61509102-295
715091010-295採用以下治療方案研究第I天通過腹腔注射克他命(50mg/kg)、甲苯噻嗪(5mg/kg)和乙醯丙嗪(0.8mg/kg)的混合物麻醉小鼠。通過電動剪刀剃去小鼠背部大約2x 4cm受試面積的毛髮。用溫水將皮膚衝洗乾淨並拍幹。剩下的軟毛用商品化的毛髮脫落劑蠟條除去。研究第2-9天通過對受試區域的皮膚塗抹O. 5ml溶液的方法，對實驗組1、2、3、
5、6的小鼠使用終濃度為每天每隻小鼠5μ g的肝素結合細胞因子或對照用磷酸鹽緩衝液(PBS)0通過對受試區域的皮膚塗抹O. 5ml溶液的方法，對實驗組4和7使用對照用磷酸緩衝鹽溶液(PBS)。研究第9天對所有的實驗組通過腹腔注射10mL/kg劑量的賦形劑(水)或環磷醯胺進行處理。研究第10-29天通過對受試區域的皮膚塗抹O. 5ml溶液的方法，對實驗組4和7的小鼠施加終濃度為每天每隻小鼠5μ g的肝素結合細胞因子。通過對受試區域的皮膚塗抹O. 5ml溶液的方法，對實驗組1、2、3、5和6的小鼠施加終濃度為每天每隻小鼠5 μ g的肝 素結合細胞因子或對照用磷酸鹽緩衝液(PBS)。實驗組1、2、3、5和6中在第2-9天接受對照溶液的小鼠在第10-29天仍然接受對照溶液。實驗組1、2、3、5和6中在第2_9天接受肝素結合細胞因子的小鼠在第10-29天仍然接受肝素結合細胞因子。研究第30天將小鼠暴露在二氧化碳濃度升高的環境中處死。收集目標區域皮膚的一部分，將其保存在10%中性福馬林緩衝液中，用於宏觀和微觀檢查。從研究第I天至第29天每天監視小鼠毒性臨床症狀。這些觀察將包括對以下任何變化的評估皮膚和軟毛(粗糙、立毛、缺乏梳理、毛髮脫落)；眼睛和黏膜 出物、混濁度、眼睛周圍的傷)；呼吸的、循環的、自主或中樞神經系統功能；體運動活力和行為方式(檢查反常姿勢、步態及任何反常的活動)；任何震顫、抽搐、分泌唾液、腹瀉、無精打採、過度的睡眠或昏迷。皮膚/軟毛觀察從研究第9-29天起，小鼠每天表現出脫髮症狀(軟毛脫落)及皮膚色素沉著的變化。軟毛脫落的程度由脫髮(軟毛脫落)的目標區域的百分率決定，而皮膚色素沉著用黑色、灰色或粉紅色記錄。實驗組出現脫髮和皮膚色素沉著變化的發生率由運行於Windows環境下的GraphPad Prism 5. O軟體(GraphPad軟體,美國加利福尼亞聖迭哥)通過對對照組和測試組的單向方差分析決定。軟毛脫落/再生的程度也通過每周兩次的照片存檔。為了便於攝影過程，用克他命(50mg/kg)、甲苯噻嗪(5mg/kg)、乙醯丙嗪(O. 8mg/kg)麻醉劑使小鼠鎮靜。末期測量收集每個動物目標區域的皮膚樣品，將其保存在10%中性福馬林緩衝液中，用於組織病理學評估。圖11中的數據表明在環磷醯胺處理之前和(或)緊接著環磷醯胺處理之後肝素結合細胞因子蛋白減少了環磷醯胺誘導的軟毛脫落，並且肝素結合細胞因子蛋白提高了由環磷醯胺處理中斷後的皮毛生長所決定的毛囊恢復比率。圖12中的數據表明用PBS處理的小鼠表現出廣泛的軟毛脫落及灰色或粉色的皮膚顏色，尤其是在它們的頸部，與大部分毛囊處於毛髮生長中期(灰色)或毛髮生長終期(粉紅色)相一致。與PBS處理的小鼠相比，在CYP處理之前和之後用肝素結合細胞因子蛋白處理的小鼠(MK2-29)表現出減少的軟毛脫落面積，並且皮膚顏色呈均一的黑色或深灰色，與大部分毛囊處於毛髮生長初期(黑色)及較小比例的毛囊處於毛髮生長中期相一致。在這個實驗組中幾乎沒有明顯的粉紅色皮膚，表明處於毛髮生長終期的毛囊所佔比例有一個很大程度的減小。類似的，與PBS處理的小鼠相t匕，僅在緊接著CYP處理後用肝素結合細胞因子蛋白處理的小鼠(MK10-29)表現出減少的 軟毛脫落面積，並且宏觀上與化療之前或之後接受肝素結合細胞因子蛋白的動物相似。僅在化療後接受肝素結合細胞因子蛋白的小鼠的皮膚顏色呈均一的深灰色，與大部分毛囊處於毛髮生長初期或中期相一致。
權利要求
1.含有一定量的肝素結合細胞因子家族蛋白及局部載體的局部配方，所述局部載體為賦形劑或潤滑劑，所述局部配方能有效治療或預防毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。
2.權利要求I中的局部配方，其中所述配方用於對易脫髮或有脫髮危險的對象的真皮或皮膚給藥。
3.權利要求I中的局部配方，其中所述配方用於對毛髮脫落對象的真皮或皮膚給藥。
4.根據權利要求I中的局部配方，所述局部配方用於治療或預防脫髮。
5.根據權利要求4中的局部配方，所述脫髮是一種急劇形式的脫髮。
6.根據權利要求4中的局部配方，所述配方用於治療或預防接受細胞毒素或細胞生長抑制劑治療或處方中已經含有一種細胞毒素或細胞生長抑制劑療法的對象的脫髮。
7.根據權利要求4中的局部配方，所述脫髮是男性型脫髮。
8.根據權利要求1-7中任一所述的局部配方，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是肝素結合細胞因子、多效生長因子、肝素結合細胞因子類似蛋白或截短的肝素結合細胞因子蛋白。
9.根據權利要求1-7中任一所述的局部配方，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是多效生長因子。
10.根據權利要求1-7中任一所述的局部配方，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是肝素結合細胞因子。
11.肝素結合細胞因子家族蛋白在製備治療或預防人類或其它哺乳動物受試者脫髮的藥物的應用。
12.根據權利要求11中的應用，所述藥物是一種局部敷用的配方。
13.根據權利要求11或12中的應用，所述脫髮是一種急劇形式的脫髮。
14.根據權利要求13中的應用，所述急劇脫髮通過細胞毒素或細胞生長抑制劑的處理來誘導。
15.根據權利要求11中的應用，所述人類或哺乳動物受試者是接受細胞毒素或細胞生長抑制劑治療或處方中已經含有細胞毒素或細胞生長抑制劑療法的受試者。
16.根據權利要求11-15中任一所述的應用，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是肝素結合細胞因子、多效生長因子、肝素結合細胞因子類似蛋白或截短的肝素結合細胞因子蛋白。
17.根據權利要求11-15中任一所述的應用，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是多效生長因子。
18.根據權利要求11-15中任一所述的應用，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是肝素結合細胞因子。
19.一種治療或預防毛髮脫落的方法，所述方法包括對有需要的受試者使用含有一定量的肝素結合細胞因子家族蛋白和局部載體的局部配方，所述局部載體為賦形劑或潤滑齊U，所述局部配方能有效預防受試者毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長。
20.根據權利要求19中的方法，所述配方是一種局部配方，所述方法包括在對象毛髮已經脫落的皮膚感染區域或毛髮可能脫落的皮膚區域使用該局部配方。
21.根據權利要求19中的方法，所述方法包括在能夠減少其毛髮脫落和/或引起毛髮生長的條件下對脫髮一段時間的對象使用該配方。
22.根據權利要求19中的方法，所述方法包括在能夠預防或減少其毛囊細胞凋亡的條件下對脫髮一段時間的對象使用該配方。
23.根據權利要求19中的方法，所述方法包括在能夠延長其毛囊毛髮生長初期階段的條件下對脫髮一段時間的對象使用該配方。
24.根據權利要求19中的方法，所述方法包括在能夠促進或推進其正常的毛髮生長終期毛囊進入下一個毛髮周期的條件下對脫髮一段時間的對象使用該配方。
25.根據權利要求19中的方法，所述方法包括對脫髮對象使用該配方。
26.根據權利要求13中的方法，所述方法包括對易發展成脫髮的受試者使用該配方。
27.根據權利要求25或26中的方法，所述脫髮是脫髮的一種急劇形式。
28.根據權利要求27中的方法，所述方法包括對接受細胞毒素或細胞生長抑制劑治療或處方中已經含有細胞毒素或細胞生長抑制劑的對象使用該配方。
29.根據權利要求25或26中的方法，所述脫髮是男性型脫髮。
30.根據權利要求19-29中任一所述的方法，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是肝素結合細胞因子、多效生長因子、肝素結合細胞因子類似蛋白或截短的肝素結合細胞因子蛋白。
31.根據權利要求19-29中任一所述的方法，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是多效生長因子。
32.根據權利要求19-29中任何任一所述的方法，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是肝素結合細胞因子。
33.一種促進或增強毛髮脫落對象的毛髮生長或生發的方法，所述方法包括對對象使用能有效預防個體毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長的含有一定量的肝素結合細胞因子家族蛋白和局部載體的局部配方，局部載體為賦形劑或潤滑劑。
34.根據權利要求33中的方法，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是肝素結合細胞因子或多效生長因子。
35.一種使接受化療或處方中已經含有化學療法的對象毛髮脫落減少的方法，所述方法包括在能夠預防或減少化療引起的毛髮脫落的條件下，對對象使用含有一定量的肝素結合細胞因子家族蛋白和載體的配方一段時間，所述載體為賦形劑或潤滑劑。
36.根據權利要求35中的方法，所述方法包括對經過化學療法治療的對象局部使用所述配方。
37.根據權利要求35中的方法，所述方法包括對化療開始之前處方中已經含有化學療法的對象局部地使用所述配方。
38.根據權利要求35中的方法，所述方法包括對化療開始之前處方中已經含有化學療法及化療開始之後的對象局部地使用所述配方。
39.根據權利要求35-38中任一所述的方法，所述肝素結合細胞因子家族蛋白是肝素結合細胞因子。
40.一種鑑定或篩選預防毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生長的化合物的方法，其中所述方法包括對小鼠使用被測化合物；所述小鼠年齡大於一年且患有毛髮脫落，並且其體內編碼一種肝素結合細胞因子蛋白的基因的等位基因及該基因的另一個功能等位基因被敲除；然後測定小鼠身上的毛髮生長和/或減少的毛髮脫落，其中，與沒有該測試化合物相比，在測試化合物存在時小鼠身上的毛髮脫落減少和/或毛髮生長增加和/或毛髮開始生長表明該被測化合物能預防毛髮脫落和/或促進毛髮生長和/或增強毛髮生 長。
全文摘要
本發明涉及肝素結合細胞因子家族蛋白在促進哺乳動物毛髮生長，或在製備促進哺乳動物毛髮生長，尤其是治療或預防不同形式脫髮的藥物中的應用。
文檔編號A61K38/18GK102791284SQ201180011114
公開日2012年11月21日 申請日期2011年2月23日 優先權日2010年2月24日
發明者佐久間貞利, 瑪麗亞·哈拉斯, 達倫·瓊斯 申請人:艾德宛金國際私人有限公司