用於多型人乳頭瘤病毒感染防治的多肽和疫苗的製作方法
2023-10-05 08:19:29
專利名稱：用於多型人乳頭瘤病毒感染防治的多肽和疫苗的製作方法
技術領域：
本發明屬於免疫學領域，具體地涉及用於多型人乳頭瘤病毒(HPV)感染防治的多肽和疫苗，所述的多肽衍生自HPV外殼蛋白1。
背景技術：
人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一類具有嚴格宿主範圍和組織特異性的DNA的病毒，已發現有100多個型。其中HPV16、18、31、33、45、58型是引起消化道、生殖道癌的一個主要因素，特別是宮頸惡性腫瘤；HPV6、11是引起尖銳溼疣等性傳播性疾病的重要致病因素[1-5]。為了有效預防這類病毒的感染和傳播，世界各國都在積極開展HPV疫苗的研製。
HPV疫苗大致可分為治療性疫苗和預防性疫苗兩大類，由於HPV至今不能經組織培養，且含有潛在致癌性DNA，故疫苗不能採用HPV減毒活疫苗或死疫苗。腫瘤細胞內病毒癌蛋白E6和E7屬於組成型表達，因而可以將它們視作免疫治療的基本靶抗原，故治療性的疫苗主要是以HPV早期蛋白E6、E7作為目的蛋白，主要是針對HPV感染後的治療，尤其對已經發生上皮內變異，或上皮內原位癌的治療，如CIN，此類疫苗基本不具有HPV感染的預防作用[6，7]。外殼蛋白L1、L2位於病毒的表面，機體針對L1、L2的免疫，可以有效的保護宿主不受感染，因而預防性疫苗主要是以HPV晚期蛋白L1、L2為目的蛋白，此類疫苗同時對某些型HPV感染所致的疾病具有治療作用[8-13]。L1疫苗的表現形式又有L1全蛋白，融合蛋白，嵌合蛋白及短肽等不同形式。HPV L1具備在單獨表達體系中自行組裝，形成不含病毒DNA病毒樣顆粒(VLP)的能力，在一定程度上，能夠替代天然病毒，誘導產生針對天然病毒的保護性抗體，防止病毒的感染或再感染[11]。
VLP疫苗大致可以分為3類。
最常見的是僅由L1單獨構成的疫苗，其通過誘導中和性抗體來預防生殖道HPV感染。許多型別的VLP在動物實驗均已取得良好的結果。目前，HPV16及其它一些型別的VLP疫苗的臨床試驗已經開始，初步的全身性的免疫結果顯示，能誘導高滴度的中和性抗體，而沒有明顯的副作用[10，12]。但不足之處是以HPV16 L1 VLP作疫苗，生產成本較高，且其對其它型別的HPV無預防或治療作用。Zhang LF等用HPV6 L1 VLP免疫生殖器疣患者也得到了類似的結果，以HPV6 L1VLP免疫對高危型HPV無交叉反應[14]。劉躍華等報導，其表達的HPV6b L1 VLP誘導的抗血清，除能與HPV6b發生反應外，還能與HPV11發生反應。但且其結果未有其他研究者的實驗證實及後繼的相關報導，且其反應僅限於兩個低危HPV型間，未能與高危型HPV反應[15]。
第二類是由L1和L2共同構成的疫苗，儘管其預防性效果好於L1單獨構成的VLP，但其在製備和成本方面具有明顯的劣勢。
第三類是將其它乳頭瘤病毒蛋白的多肽整合入VLP，成為CVLP，L1或L2為融合蛋白。設計這類嵌合VLP目的想通過誘導對病毒非結構性蛋白，如E7的細胞免疫反應，以增強HPV疫苗的治療作用。小鼠實驗的結果顯示，這類疫苗在保持誘導高滴度中和抗體的能力的同時，還產生了抗腫瘤的CTL反應[16-21]。Thompson HS等及Lacey CJ等用E.coli表達的HPV6L2/E7融合蛋白對一些由HPV6和11所致的、反覆發作的生殖器疣進行了治療，取得了一定的效果。但他們的研究具有的不足仍是對高危型HPV無交叉反應[22，23]。
既往的許多研究均證實，相近型別的共同表位較之病毒外殼主要型特異性B-細胞決定簇的免疫原性低，且抗原性也有顯著的不同。Giroglou T等用ELISA和交叉中和實驗，對數種高危HPV16，18，31，33和45型病毒及VLP多克隆免疫血清進行了檢測[8]。進一步證實，儘管家族性L1基因序列變化的程度不同，每一受檢型別VLP所誘導的高滴度抗血清多克隆抗體完全是型特異性的。體外感染活性檢測，VLP抗血清的中和作用只能發生在同型的HPV病毒之間。僅HPV31和HPV45 VLP免疫血清顯示具有低水平的分別對HPV18和HPV33病毒的中和作用。表位阻塞實驗的結果提示，主要型特異性外殼蛋白抗原位點與病毒的中和之間具有密切的關聯。研究結果支持乳頭瘤病毒基因型決定著病毒的獨特血清型的觀點[24-26]。
由於病毒的變異性，製作全價的通用疫苗，困難較多，以表位為基礎的多肽疫苗開始受到人們的重視。為尋找HPV L1的共同表位，以期達到一種疫苗針對多型HPV的目的，許多研究者採用短肽篩選的辦法進行確定。然而，至今未能取得理想的結果。
以HPV16為例，以短肽篩選法前後共有27個不同的胺基酸序列被鑑定為B-細胞表位，覆蓋L1胺基酸殘基序列總長度的63.2％。它們可以誘導產生能夠與HPV16病毒顆粒或與L1發生反應的抗體，或能夠與HPV16病毒顆粒或L1誘導的抗體發生反應[27，28]。但時至今日，真正在HPV16 L1胺基酸序列上得到公認的B-細胞表位是位於aa233-253之間的一段序列。對於這樣的結果，研究者普遍的觀點是L1相對保守的胺基酸序列多為埋於蛋白內的區段，而代表型特異性的變異較大的區段多為為於蛋白表面的區段；能夠發生型間交叉反應的胺基酸序列多為位於蛋白內部的線性表位，而代表型特異性的胺基酸序列多為位於蛋白表面的結構性表位；L1(aa233-253)位於蛋白的表面，但其具有極為明顯的型特異性。
基於多肽的疫苗較之於其它種類的疫苗具有許多優點。首先，沒有減毒活疫苗的危險；其次，保護性的免疫反應可以通過表位進行選擇，或製成各種多價疫苗；第三，潛在性的有害表位，如促進HIV感染的、與宿主蛋白同源的，可以被選擇性的剔除，從而大大降低副反應；第四，肽苗具有安全性好、可大規模基因工程生產和化學合成，易幹純化等優點。如van Driel WJ等以HPV16 E7短肽為疫苗，對經一般治療無效的HPV16陽性子宮頸癌患者進行了I、II期臨床試驗，顯示具有一定的效果，但其對HPV16感染無預防作用[29]。
現有的HPV疫苗的研究成果，最大的不足就是所設計的疫苗不能同時針對多種型別的HPV，尤其是不能同時誘導針對高危型和低危型HPV的免疫反應，或不能同時針對多種型別的HPV感染產生預防或治療作用。迄今為止，由於HPV型特異性強，型間交叉反應少，還沒有一種針對多型的HPV疫苗應用於臨床。
因此，本領域迫切需要開發針對多型HPV的預防性和/或治療性的疫苗，以便有效控制與HPV相關疾病的傳播與發生。
發明內容
本發明的目的就是提供一種能同時誘導針對多種型別，尤其是同時誘導對高危型和低危型均能產生免疫反應的多肽和疫苗，以便用一種疫苗來預防多種型別HPV感染和/或治療部分型別HPV感染性疾病。
在本發明的第一方面，提供了一種多肽，該多肽選自下組(a)具有SEQ ID NO1胺基酸序列的多肽；
(b)將SEQ ID NO1胺基酸序列經過1-3個胺基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有引發針對至少3種HPV型別的免疫應答的由(a)衍生的多肽。
在另一優選例中，所述的短肽的胺基酸序列為SEQ ID NO1、2、3、4、5、6、7、8、或9。
在本發明的第二方面，提供了一種抗體，所述的抗體特異性地與本發明上述的的多肽結合。
在另一優選例中，所述的抗體是單克隆抗體。
在本發明的第三方面，提供了本發明所述多肽的用途，它被用於製備抗至少3種(較佳地至少4種)HPV型別的抗體。
在本發明的第四方面，提供了本發明所述多肽的用途，它被用於製備預防或治療至少3種(較佳地至少4種)HPV型別的藥物組合物。
在另一優選例中，所述的藥物組合物是疫苗組合物。
在本發明的第五方面，提供了一種藥物組合物，它含有本發明所述的多肽(如0.01wt％-99.9wt％)以及藥學上可接受的載體。
在另一優選例中，所述的藥物組合物含有免疫有效量的權利要求1所述的多肽以及任選的藥學上可接受的佐劑。
圖1顯示了兔抗血清(RSs-P30)及鼠抗血清(Msa-P30)對重組HPV6b L1(6b-L1)、HPV16(Caski)及HPV18(Hela)的反應無明顯差異。
圖2顯示了Western印跡結果。1，2道為重組HPV16 L1；3道為Caski培養細胞裂解液，4道為Hela培養細胞裂解液；5，6道為重組HPV6b L1。
圖3顯示了Caski培養細胞，Kawana HPV16 L1單克隆抗體HRP免疫組織化學染色。可見細胞胞漿內染色深，胞核區無反應，呈負染狀態。
圖4顯示了Caski培養細胞，兔抗短肽抗血清HRP免疫組織化學染色。可見細胞胞漿內染色深，呈現出與Kawana HPV16 L1單克隆抗體反應一致的染色特性。
圖5顯示了Hela培養細胞，Kawana HPV16 L1單克隆抗體HRP免疫組織化學染色。可見細胞胞漿內染色深，胞核區無反應，呈負染狀態。
圖6顯示了Hela培養細胞，兔抗短肽抗血清HRP免疫組織化學染色。可見細胞胞漿內染色深，呈現出與Kawana HPV16 L1單克隆抗體反應一致的染色特性。
具體實施例方式
本發明人經過多年廣泛而深入的研究，對多種HPV病毒潛在抗原蛋白的序列分析，在一段可誘導針對多型HPV抗體的多肽基礎上，找到了兼具很強抗原性和廣譜性的胺基酸序列。通過多肽合成，製得該抗原遞呈細胞靶向性的HPV廣譜性多肽，並對多肽進行的免疫研究表明該多肽可同時誘導針對多種型別HPV，尤其是同時誘導對高危型HPV和低危型HPV均能產生免疫反應。因此可用於製備有效的抗多型別HPV的疫苗，實現用一種疫苗預防多種型別HPV感染和/或治療部分型別HPV所致感染性疾病。
如本文所用，「本發明多肽」、「本發明短肽」、「HPV多特異性多肽」、「抗多型別HPV的免疫原性短肽」等可互換使用，指序列如SEQ ID NO1所示的多肽或其保守性衍生多肽，該多肽可引發針對至少3種(較佳地至少4種)HPV型別的免疫應答。優選的本發明多肽是胺基酸序列如表1所示的多肽(SEQ IDNO1-9)。
在一個優選例中，本發明多肽以HPV16 L1 448-477aa區段的蛋白序列為基礎，並且為了針對多種型別的HPV，在465位引入G→A突變，形成SEQ ID NO1所示的多肽。
在本發明中，「保守性衍生多肽」指與SEQ ID NO1的胺基酸序列相比，有至多10個，較佳地至多8個，更佳地至多5個，最佳地至多3個胺基酸差異的多肽。較佳地，所示的差異是用性質相似或相近的胺基酸進行替換。在一優選例中，這些保守性變異多肽最好根據表A進行胺基酸替換而產生。
表A
本發明多肽可用常規方法人工合成，也可用重組方法生產。因此本發明還涉及編碼本發明多肽的核酸序列、含所述核酸序列的表達載體、以及含所述表達載體的宿主細胞。
例如，SEQ ID NO1序列可作為基本結構單元，借連接段肽鏈連接，形成具有多個重複結構的蛋白(或長肽)。
無論是單體還是多體形式的本發明多肽，都可用於製備預防性和/或治療性疫苗，用於各型HPV的感染預防和/或多種低危型HPV感染性疾病的治療。
此外，本發明多肽還與其它具有佐劑效應的蛋白相聯接，形成融合蛋白。該融合蛋白也可用於製備預防性和/或治療性疫苗，用於各型HPV的感染預防和/或多種低危型HPV感染性疾病的治療。
此外，本發明多肽還可與化學合成佐劑或生物佐劑混合後使用，用於各型HPV的感染預防和/或多種低危型HPV感染性疾病的治療。
此外，本發明多肽還可與BSA等分子量的蛋白偶聯，從而形成多肽偶聯物。通常，所述的偶聯物由多肽、交聯劑、和BSA構成，其中所述的交聯劑優選戊二醛(當與本發明多肽的N-端偶聯時)、EDAC(當與本發明多肽的C-端偶聯時)。
本發明多肽或其偶聯物可用於免疫兔、鼠等動物，從而獲得抗本發明多肽的抗體(「本發明抗體」)。本發明抗體包括特異性的多克隆抗體和單克隆抗體，尤其是單克隆抗體。這裡，「特異性」是指抗體能結合於HPV病毒、基因產物或片段。
本發明不僅包括完整的單克隆或多克隆抗體，而且還包括具有免疫活性的抗體片段(如Fab′或(Fab)2片段)、抗體重鏈、抗體輕鏈、嵌合抗體、人源化抗體等。
本發明的抗體可以通過本領域內技術人員已知的各種技術進行製備。例如，純化的本發明多肽或偶聯物，可被施用於動物以誘導多克隆抗體的產生。對於單克隆抗體，可利用雜交瘤技術來製備(見Kohler等人，Nature 256；495，1975；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6511，1976；Kohler等人，Eur.J.Immunol.6292，1976；Hammerling等人，In Monoclonal Antibodies and T Cell Hybridomas，Elsevier，N.Y.，1981)。
本發明的抗體可用檢測樣品中是否存在HPV病毒。
本發明的多肽和偶聯物還可用於製備治療性的藥物組合物或預防性的疫苗組合物。因此，另一方面，本發明還提供了一種組合物(包括藥物組合物如疫苗組合物)，它含有(a)安全有效量的本發明多肽、偶聯物或其組合物；以及(b)藥學上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括(但並不限於)鹽水、緩衝液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、佐劑、及其組合。本發明的組合物可通過常規方法進行製備。此外，載體和配製方法的例子可以參見《Remington藥物科學》(Remington’s Phamaceutical Science)。
以本發明多肽計，其用量例如每天約1微克/千克體重-約5毫克/千克體重。此外，本發明的多肽還可與佐劑或其他治療劑一起使用。
在優選例中，本發明的組合物是疫苗組合物。本發明的疫苗可以是預防性的(即預防感染)或治療性的(即在感染後治療疾病)。
本發明的疫苗組合物包含本發明的針對多型別HPV的免疫性短肽(如SEQID NO1-9，較佳地SEQ ID NO1)和「藥學上可接受的載體」。這些載體包括本身不誘導產生對接受該組合物的個體有害的抗體的任何載體。合適的載體通常是大的、代謝緩慢的大分子，如多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、胺基酸聚合物、胺基酸共聚物、脂質凝集物(如油滴或脂質體)以及無活性的病毒顆粒。這些載體是本領域普通技術人員所熟知的。另外，這些載體可起免疫刺激劑(「佐劑」)作用。另外，抗原或免疫原可以和細菌類毒素(如白喉、破傷風、霍亂、幽門螺桿菌等病原體的類毒素)偶聯。
增強組合物效果的較佳的佐劑包括但不局限於(1)鋁鹽(alum)，如氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁等；(2)水包油型乳劑配方(有或沒有其它特異性的免疫刺激劑，如胞壁醯肽(見下文)或細菌細胞壁成分)，例如，(a)MF59(PCT出版物No.WO 90/14837)，其含有5％鯊烯、0.5％吐溫80和0.5％Span 85(任選地含有不同量的MTP-PE(見下文)，雖然並不需要)，用微量流化器(如110Y型微量流化器(Microfluidics，Newton，MA))製成亞微米級顆粒；(b)SAF，其含有10％鯊烯、0.4％吐溫80、5％普盧蘭尼克(pluronic)嵌段聚合物L121以及thr-MDP(見下文)，微量流化成亞微米級乳劑或渦流振蕩產生粒徑較大的乳劑，和(c)RibiTM佐劑系統(RAS)(Ribi Immunochem，Hamilton，MT)，其含有2％鯊烯、0.2％吐溫80以及取自單磷醯脂A(MPL)、二黴菌酸海藻糖酯(TDM)、和細胞壁骨架(CWS)的一種或多種細菌細胞壁組分，較佳的是MPL+CWS(DetoxTM)；(3)皂素佐劑，例如可採用StimulonTM(Cambridge Bioscience，Worcester，MA)或從其產生的顆粒，如ISCOM(免疫刺激性複合物)；(4)Freund完全佐劑(CFA)和Freund不完全佐劑(IFA)；(5)細胞因子，如白介素(如IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12等)、幹擾素(如γ幹擾素)、巨噬細胞集落刺激因子(M-CFS)、腫瘤壞死因子(TNF)等；(6)細菌ADP-核糖基化毒素(如霍亂毒素CT，百日咳毒素PT或大腸桿菌熱不穩定毒素LT)的脫毒變異體，尤其是LT-K63、LT-R72，CT-S109、PT-K9/G129；參見例如WO93/13302和WO92/19265；以及(7)作為免疫刺激劑來增強組合物效果的其它物質。
包括免疫原性組合物在內的疫苗組合物(如可包括抗原，藥學上可接受的載體以及佐劑)，通常含有稀釋劑，如水，鹽水，甘油，乙醇等。另外，輔助性物質，如潤溼劑或乳化劑、pH緩衝物質等可存在於這類運載體中。
本發明的疫苗組合物包含免疫學有效量的本發明免疫原性多肽以及上述其它所需的組分。「免疫學有效量」指以單劑或連續劑一部分給予個體的量對治療或預防是有效的。該用量根據所治療個體的健康狀況和生理狀況、所治療個體的類別(如非人靈長類等)、個體免疫系統合成抗體的能力、所需的保護程度、疫苗的配製、治療醫師對醫療狀況的評估、及其它的相關因素而定。預計該用量將在相對較寬的範圍內，可通過常規實驗來確定。
通常，可將疫苗組合物或免疫原性組合物製成可注射劑，例如液體溶液或懸液；還可製成在注射前適合配入溶液或懸液、液體賦形劑的固體形式。該製劑還可乳化或包封在脂質體中，在上述藥學上可接受的載體下增強佐劑效果。
常規方法是從腸胃外(皮下或肌內)途徑通過注射給予免疫原性組合物。適合其它給藥方式的其它配方包括口服、或透皮給藥。治療劑量可以是單劑方案或多劑方案。疫苗可以結合其它免疫調節劑一起給予。
本發明的主要優點在於(a)本發明多肽可同時誘導針對多種型別HPV，尤其是同時誘導對高危型HPV和低危型HPV均能產生免疫反應。所誘導的高滴度的抗短肽抗血清能分別與重組HPV6b L1，重組HPV16 L1，HPV16及HPV18病毒發生反應。
(b)本發明多肽不含潛在性的有害表位，從而大大降低副反應，安全性好。
(c)本發明的多肽易於大規模基因工程生產和化學合成，並且純化簡便。
下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。
實施例1特異性肽段抗血清的製備(a)HPV L1短肽的合成在本實施例中，以HPV16 L1 448-477aa區段的蛋白序列為基礎，為了針對多種型別的HPV，在465位引入G→A突變。
設計後的HPV L1短肽長度為30個胺基酸，序列如下N端-EVNLKEKFSADLDQFPLARKFLLQAGLKAK-C端(SEQ ID NO1)。
委託北京賽百盛基因技術有限公司在美國Genemed Synthesis Inc.公司用常規方法合成該HPV L1短肽。
(b)抗血清的製備將如上合成短肽以PBS溶解後，1∶1加Furend.s完全佐劑，乳化後分別以25ug及10ug的劑量免疫日本長耳大白兔及Balb/c小鼠，共3次。於最後一次免疫的第14天，處死動物，取抗短肽的兔抗血清及鼠抗血清。
實施例2短肽免疫抗血清免疫特異性的ELISA檢測HPV16病毒顆粒、重組HPV16 L1 VLP、HPV6b L1 VLP、HPV16病毒顆粒小鼠抗血清、重組HPV16 L1 VLP及HPV6b L1 VLP的兔和小鼠抗血清均獲自中國醫學科學院基礎醫學研究所；HPV16 L1單克隆抗體獲自日本國立傳染病研究所。HRP標記及螢光標記二抗購於北京中山生物技術有限公司(Sigma產品)。Caski細胞及Hela細胞均購自武漢大學中國典型培養物保藏中心(CCTCC)。
分別將HPV16病毒、重組HPV16 L1 VLP、HPV6b L1 VLP、含HPV16病毒的Caski培養細胞及含HPV18的Hela培養細胞裂解液或它們的培養液包被塑料板，以免或小鼠的抗短肽抗血清與之進行反應。
結果如圖1所示。小鼠及兔的短肽免疫抗血清，能使HPV16病毒、重組HPV16L1 VLP及HPV6b L1 VLP包被的塑料板呈現陽性反應；能使含HPV16病毒的Caski培養細胞及含HPV18的Hela培養細胞裂解液或它們的培養液所包被的塑料板呈現陽性反應。
實施例3短肽免疫抗血清免疫特異性的Western印跡檢測分別將Caski細胞、Hela細胞和HPV6b及16 L1重組杆狀病毒轉染後培養72小時的昆蟲細胞進行裂解，裂解液作SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳，轉膜後以兔抗短肽抗血清作一抗。
結果如圖2所示。在蛋白分子量約為56K的區間，均可見有一條陽性反應帶。
實施例4短肽免疫抗血清免疫特異性的培養細胞的免疫組織化學檢測將Caski細胞、Hela細胞以24孔板培養於蓋玻片之上，分別以Kawana HPV16單克隆抗體、HPV16病毒顆粒小鼠抗血清或重組HPV16 L1 VLP小鼠抗血清作為陽性一抗對照，檢測兔抗短肽抗血清對Caski細胞內HPV16及Hela細胞內HPV18的反應性。
結果如圖3-6所示。抗短肽抗血清可使培養Caski細胞的胞質內呈現強陽性反應，可見陽性反應僅出現於胞漿之內，胞質被染成棕黃色，胞核透亮，呈負染狀態。反應特徵與Kawana HPV16單克隆抗體、HPV16病毒顆粒小鼠抗血清或重組HPV16 L1 VLP小鼠抗血清對此細胞的反應完全一致。Hela細胞的反應與Caski細胞相同。
實施例5類似於HPV L1短肽的其他免疫原性多肽按照實施例1的類似方式，合成表1所示的類似於HPV L1短肽的其他免疫原性多肽表1HPV多特異性短肽
按照實施例1相同的方式製備小鼠的抗血清，按實施例2相同方式測試抗血清與HPV6b L1、HPV16 L1、HPV16、HPV18的免疫特異性，結果如下表2所示
表2免疫特異性測試結果
實施例6疫苗組合物按以下配方，通過常規的混合法製備一疫苗組合物10微克短肽(SEQ ID NO1)+1毫克磷酸鋁(AlPO4)。
在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之後，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附權利要求書所限定的範圍。
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序列表110三峽大學120用於多型人乳頭瘤病毒感染防治的多肽和疫苗1300488751609170PatentIn version 3.1210121130212PRT213人工序列220
221misc_feature223抗多型別HPV的免疫原性短肽4001Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro1 5 10 15Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys20 25 30210221130212PRT213人工序列220
221misc_feature223抗多型別HPV的免疫原性短肽4002Glu Val Asp Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro1 5 10 15Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys20 25 30210321130212PRT213人工序列
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221misc_feature223抗多型別HPV的免疫原性短肽4003Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro1 5 10 15Leu Ala Lys Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys20 25 30210421130212PRT213人工序列220
221misc_feature223抗多型別HPV的免疫原性短肽4004Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro1 5 10 15Leu Ala Arg Arg Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys20 25 30210521130212PRT213人工序列220
221misc_feature223抗多型別HPV的免疫原性短肽4005Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Tyr Pro1 5 10 15Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys20 25 30210621132212PRT
213人工序列220
221misc_feature223抗多型別HPV的免疫原性短肽4006Phe Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln1 5 10 15Phe Pro Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys20 25 30210721131212PRT213人工序列220
221misc_feature223抗多型別HPV的免疫原性短肽4007Trp Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe1 5 10 15Pro Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Lys Ala Lys20 25 30210821130212PRT213人工序列220
221misc_feature223抗多型別HPV的免疫原性短肽4008Glu Val Asn Leu Lys Glu Lys Phe Ser Ala Asp Leu Asp Gln Phe Pro1 5 10 15Leu Ala Arg Lys Phe Leu Leu Gln Ala Gly Leu Arg Ala Lys20 25 30210921130
212PRT213人工序列220
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權利要求
1.一種多肽，其特徵在於，該多肽選自下組(a)具有SEQ ID NO1胺基酸序列的多肽(b)將SEQ ID NO1胺基酸序列經過1-3個胺基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且具有引發針對至少3種HPV型別的免疫應答的由(a)衍生的多肽。
2.如權利要求1所述的短肽，其特徵在於，其胺基酸序列為SEQ ID NO1、2、3、4、5、6、7、8、或9。
3.一種抗體，其特徵在於，所述的抗體特異性地與權利要求1所述的多肽結合。
4.如權利要求3所述的抗體，其特徵在於，所述的抗體是單克隆抗體。
5.權利要求1所述的多肽的用途，其特徵在於，用於製備抗至少3種HPV型別的抗體。
6.權利要求1所述的多肽的用途，其特徵在於，用於製備預防或治療至少3種HPV型別的藥物組合物。
7.如權利要求6所述的用途，其特徵在於，所述的藥物組合物是疫苗組合物。
8.一種藥物組合物，其特徵在於，含有權利要求1所述的多肽以及藥學上可接受的載體。
9.如權利要求8所述的藥物組合物，其特徵在於，它含有免疫有效量的權利要求1所述的多肽以及藥學上可接受的佐劑。
全文摘要
本發明提供了一種能同時誘導針對多種型別，尤其是同時誘導對高危型和低危型均能產生免疫反應的多肽，以及含有該多肽的疫苗組合物。本發明的疫苗組合物可預防多種型別HPV感染和/或治療部分型別HPV感染性疾病。
文檔編號A61K38/16GK1796403SQ20041009337
公開日2006年7月5日 申請日期2004年12月22日 優先權日2004年12月22日
發明者肖長義, 萬濤, 黃利鳴, 袁太寧 申請人:三峽大學