頭花蓼提取物及其製備方法和用途的製作方法

2023-10-29 20:27:57 1

專利名稱：頭花蓼提取物及其製備方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥領域，具體而言，本發明涉及中草藥頭花蓼鮮品或幹品的提取物及其製備方法以及這種提取物作為藥物的用途。
頭花蓼(Polygonum capitatum Buch.-Ham.ex D.Don)是蓼科蓼屬植物，為多年生草本，別名四季紅、石莽草、石辣蓼、水繡球、紅花地丁、滿地紅等。在中國貴州、雲南、廣西、四川、西藏、湖北、湖南和江西等地區均有分布，主要生長在山坡、山谷及富含煤層的沙頁巖地帶。全草具有清熱解毒、散瘀、利尿通淋之功效。據1963年《廣西中藥志》第二冊記載，頭花蓼主要用於治療風溼痛；1977年《中藥大辭典》上冊記載，頭花蓼主要用於治療痢疾、腎炎、膀胱炎和尿路結石等。民間一般將頭花蓼用水煎服，治療效果比較明顯，但是服用不方便。中國專利申請公開說明書CN1054899A中公開了一種泌感靈衝劑、糖漿生產工藝，該方法是將中草藥頭花蓼經煎煮後過濾，減壓濃縮成膏狀，再用乙醇提取2-3次，真空濃縮製成浸膏，再將浸膏分別製成糖漿或衝劑。該生產工藝包括煎煮、濃縮、提取、再濃縮等步驟，工藝複雜，而且，該方法得到的泌感靈衝劑的藥效學效果有待提高。我們貴州威門藥業股份有限公司長期致力於中草藥頭花蓼的開發利用研究，我們將頭花蓼加水煎煮兩次後過濾濃縮製成熱淋清顆粒，該製劑公開在中華人民共和國衛生部藥典委員會1998年編的中華人民共和國衛生部《藥品標準--中藥成方製劑》(第十七冊)中，但是，隨著研究的不斷深入，本發明人發現，1998年編的中華人民共和國衛生部《藥品標準--中藥成方製劑》(第十七冊)中的熱淋清顆粒的製備工藝中，其提取和精製方法上存在缺陷，按照該工藝，將1000克頭花蓼煎煮，不可能得到400克浸膏顆粒。本發明人通過對中草藥頭花蓼進行長期開發研究，並結合藥理學試驗驗證發現，通過改進提取和精製工藝，得到的頭花蓼提取物的藥理活性明顯提高，並發現這種頭花蓼提取物具有新的療效，因此完成了本發明。
因此，本發明的目的是提供了一種頭花蓼鮮品或幹品的提取物；本發明的另一發明目的是提供了一種製備頭花蓼提取物的方法；
本發明的另一發明目的是提供了頭花蓼提取物用於製備抗菌、抗炎、鎮痛、利尿、治療泌尿系統結石、治療腎盂腎炎以及前列腺炎的藥物的用途；本發明的另一發明目的是提供了含有本發明提取物的藥物組合物。
本發明的目的是通過下列方法實現的。
本發明人分別對頭花蓼鮮品或幹品的不同藥用部位進行了研究，對頭花蓼全草、頭花蓼地上部分、葉、種子、莖和根部及它們的組合分別進行了提取和活性研究，本發明人發現，頭花蓼的葉、種子、莖和根部分的生物學活性是有差別的，抗炎活性以葉提取物為最佳；抗菌活性的強弱順序是種子＞葉＞莖＞根。本發明人從這一發現中得到啟示，用頭花蓼的地上部分代替傳統使用的頭花蓼全草進行提取，這樣既保持和提高了提取浸膏的藥學活性，又避免使用頭花蓼的根部。由於頭花蓼是草本植物，不使用其根部，可以避免在採集頭花蓼時將其根部拔起，這樣，頭花蓼可以再生，既保護了植物資源，又保護了土地植被，這對保護資源和環境都有重要意義。
本發明人用水、75％乙醇和95％乙醇和二氧化碳超臨界條件分別對頭花蓼全草、地上部分、葉、種子、莖和根部分別進行了提取和活性研究。
本發明的頭花蓼提取物是通過下列方法得到的實施例1製備頭花蓼地上部分水提取物(編號w-2-1)取頭花蓼地上部分220kg，洗淨，加入7倍量水，加熱煮沸1.5小時，過濾，藥渣中加入6倍量水，煮沸1.0小時，過濾。合併濾液，濃縮至相對密度為1.2(20℃)得到浸膏，噴霧乾燥得到浸膏粉23kg，收率是10.45％。
採用分光光度計法測定w-2-1中的總黃酮含量，將本發明的方法製備得到的w-2-1提取物和輔料均勻混和，制粒，乾燥，即得到新方法製備的熱淋清顆粒。實施例2製備頭花蓼全草水提取物(噴霧乾燥)(編號w-1-2)根據與實施例1相同的方法，用頭花蓼全草代替頭花蓼地上部分進行提取。
取w-1-2浸膏粉按實施例1相同的方法，製得樣品(w-1-12)。
本發明將頭花蓼全草與頭花蓼地上部分實驗數據進行比較。(見表1)
表1頭花蓼全草水提取物與頭花蓼地上部分水提取物實驗數據名稱編號投料量得浸膏粉量收率 沒食子酸總黃酮含量(kg) (kg) (％) 含量(％)(％)頭花蓼 w-1-2300.9534.5 11.461.781.82全草頭花蓼 w-2-1220 23 10.453.994.71地上部分從以上結果看出，以地上部分為原料的浸膏粉中沒食子酸和總黃酮含量含量明顯高於以全草為原料的浸膏粉。實施例3製備頭花蓼全草水提取物(減壓乾燥)(編號w-1-3)根據與實施例2相同的方法，將乾燥方法改為減壓乾燥。實施例4製備頭花蓼根95％乙醇提取物(編號w-1-4)取頭花蓼根10kg，洗淨，置不鏽鋼濃縮罐內，加入7.5倍量的95％乙醇，回流提取1.5小時，過濾。藥渣加入7.5倍量95％乙醇，回流提取1.0小時，過濾。合併兩次濾液，濃縮得浸膏，減壓乾燥得到提取物0.215kg。實施例5製備頭花蓼莖95％乙醇提取物(編號w-1-5)根據與實施例4相同的方法，用頭花蓼莖進行提取。實施例6製備頭花蓼葉95％乙醇提取物(編號w-1-6)根據與實施例4相同的方法，用頭花蓼葉進行提取。實施例7製備頭花蓼種子95％乙醇提取物(編號w-1-7)根據與實施例4相同的方法，用頭花蓼種子進行提取。實施例8製備頭花蓼鮮品95％乙醇提粉(編號w-1-8)
根據與實施例4相同的方法，用頭花蓼鮮品進行提取。實施例9製備頭花蓼鮮品水提粉(編號w-1-9)根據與實施例3相同的方法，用頭花蓼鮮品進行提取。實施例10製備頭花蓼全草75％乙醇提取物(編號W-1-10)取頭花蓼全草10kg，洗淨，置不鏽鋼濃縮罐內，加入7-8倍量75％乙醇，回流提取1.5小時，過濾。藥渣加入5倍量75％乙醇，回流提取1.0小時，過濾。合併兩次濾液，濃縮得浸膏，減壓乾燥得到提取物0.694kg。實施例11製備頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)和頭花蓼全草水煎醇沉沉澱粉(W-1-14b)取頭花蓼全草10.60kg，洗淨，加入350kg水，加熱煮沸1.5小時，轉移上清液，殘渣中加入150kg水，煮沸1.0小時。合併煎煮液，過濾濃縮至相對密度為1.04(24℃)得浸膏16.1kg。加入95％乙醇調至含醇量為60％，靜至24小時，分取溶液。向沉澱加入95％乙醇調至含醇量為60％，靜至24小時，分取溶液，合併兩次溶液，揮去乙醇，80℃減壓乾燥得頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)0.755kg；沉澱於80℃減壓乾燥得頭花蓼全草水煎醇沉沉澱粉(W-1-14b)0.465kg。實施例12製備頭花蓼原藥粉二氧化碳超臨界萃取提取物(編號W-1-15a)取頭花蓼原藥粉10kg，洗淨，投入超臨界萃取釜中，對萃取釜和兩個解析釜加熱，對貯罐進行冷卻，當溫度達到預定的溫度時，打開CO2氣瓶送氣，當壓力達到預定壓力時，開始循環萃取，調節流量，並加入夾帶劑，恆溫恆壓萃取2小時。將得到的液體減壓濃縮得到浸膏0.135kg。實施例13製備頭花蓼藥渣二氧化碳超臨界萃取提取物(編號W-1-15b)取頭花蓼藥渣10kg，洗淨，投入超臨界萃取釜中，對萃取釜和兩個解析釜加熱，對貯罐進行冷卻，當溫度達到預定的溫度時，打開CO2氣瓶送氣，當壓力達到預定壓力時，開始循環萃取，調節流量，並加入夾帶劑，恆溫恆壓萃取2小時。將得到的液體減壓濃縮得到浸膏0.119kg。實施例14製備頭花蓼地上部分70％乙醇提取物(編號W-2-2)取頭花蓼地上部分30kg，洗淨，置不鏽鋼濃縮罐內，加入8-9倍量70％乙醇，回流提取1.5小時，過濾。藥渣加入4-5倍量70％乙醇，回流提取1.0小時，過濾。藥渣再加入4-5倍量70％乙醇，回流提取1.0小時，過濾。合併三次濾液，濃縮得浸膏，減壓乾燥得到提取物3.75kg。表2不同部位、不同提取方法樣品的實驗數據編號 名稱 投料量得浸膏粉收率沒食子 總黃酮(kg) 量(kg) (％)酸含量 含量(％) (％)W-1-2頭花蓼全草水提取物 300.9534.5 11.46 1.78 1.82(噴霧乾燥)W-1-3頭花蓼全草水提取物 300.9532.8 10.90 2.55 1.46(減壓乾燥)W-1-4根95％乙醇提取物100.215 2.151.48 2.25W-1-5莖95％乙醇提取物100.125 1.251.89 1.94W-1-6葉95％乙醇提取物9 0.77.780.70 6.29W-1-7種子95％乙醇提取物 1.8 0.03 1.700.72 5.55W-1-8鮮品95％乙醇提粉220.550 2.502.87 3.78W-1-9鮮品水提粉 210.855 4.072.76 1.92W-1-10 頭花蓼全草的75％乙醇100.694 6.941.48 3.17提取物W-1-12 W-1-2加輔料製成的顆粒 / / / 0.73 1.59W-1-14a 頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉10.60 0.755 7.123.06 2.00W-1-14b 頭花蓼全草水煎醇沉沉澱粉10.60 0.465 4.390.8 0.64W-1-15a 頭花蓼原藥粉二氧化碳超臨界萃100.135 1.35取提取物W-1-15b 頭花蓼藥渣二氧化碳超臨界萃取100.119 1.19提取物W-2-1頭花蓼地上部分水提取物 220 23 10.45 3.99 4.71
W-2-2地上部分的70％乙醇提取物30 3.7512.55.884.57注由於樣品W-1-15a和樣品W-1-15b十分粘稠，前處理很困難，因此沒有測定其沒食子酸含量和總黃酮含量。
中國發明專利公開說明書CN1054899A中製備頭花蓼全草提取物的方法與本文中製備頭花蓼全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)的方法一致。而樣品W-1-2實際是全草水煎醇沉溶液粉(W-1-14a)和全草水煎醇沉沉澱粉(W-1-14b)的加和。經過藥效學實驗證明頭花蓼全草水煎醇沉沉澱粉(W-1-14b)同樣具有良好的活性；而樣品W-1-2則是此三個樣品中活性最強的(見表5)。中國發明專利公開說明書CN1054899A中製備頭花蓼全草提取物的方法操作煩瑣，因經醇沉處理的藥液在保存期間容易產生沉澱或粘壁現象；經醇沉回收乙醇後的藥液往往粘性較大，較難濃縮。醇沉處理生產周期長，成本高。並且損失掉部分活性成分(即CN1054899A方法中扔掉的水煎醇沉沉澱部分W-1-14b)。
我們對頭花蓼全草、地上部分、根、莖、葉、花、種子及地上部分去花(即莖和葉)各部分的水提取物、95％乙醇提取物、CO2超臨界提取物都進行了藥理學試驗，我們發現其中以頭花蓼地上部分的療效最好。並以頭花蓼地上部分為原料，用製藥領域中的常規方法製成了一系列製劑洗劑、栓劑、外用溶液劑、泡騰片、硬膏劑、軟膏劑、糖漿劑、乳劑、散劑、顆粒劑、丸劑、膠囊劑、氣霧劑、注射劑及緩釋、控釋製劑及靶向製劑。
本發明人將上述提取物進行了藥效學研究發現，本發明的頭花蓼提取物具有良好的抗菌、抗炎、鎮痛、利尿、排石、治療腎盂腎炎以及前列腺炎等藥理學活性。試驗一抗炎活性研究實驗方法用小鼠耳部巴豆油炎症模型，根據小鼠耳腫脹生物活性測定法，測定不同藥用部位和不同提取工藝得到的提取物的抗炎活性。實驗採用小鼠靜脈注射給藥，給藥劑量為40mg/kg，在同等劑量下，比較各提取物樣品的抗炎活性大小。以此來對不同藥用部位，不同提取工藝樣品的療效作出評判。
樣品配製方法用5％丙二醇作溶媒，將樣品稱量後，先加入0.5ml丙二醇超聲處理，待樣品粉末分散均勻後，再用生理鹽水稀釋至刻度(10ml)。
實驗結果共進行三批實驗，每批實驗均在同時相同的實驗條件(室溫、溼度)下進行。
實驗結果見表3
表3不同頭花蓼樣品抗炎活性的比較內含總黃 內含沒食劑量 第一次實驗(n＝10) 第二次實驗(n＝10)第三次實驗(n＝11)編號 名稱酮量 子酸量(mg/kg) (mg) (mg) 腫脹度(mg) 腫脹率(％) 腫脹度(mg) 腫脹率(％) 腫脹度(mg) 腫脹率(％)W-1-2全草水提(噴霧)40 0.7280.86413.1±5.0*(30.7)77.8±36.8*10.8±2.5*(33.7)72.2±22.5**11.5±3.4*(33.1)64.0±20.2**全草水提(減壓)40 0.5841.09813.1±4.7*(30.7) 82.6±30.9 11.5±2.5**{29.4} 75.1±20.3**11.3±2.8**(34.3) 64.0±17.0**W-1-3W-1-4根95％醇提40 0.9010.59213.6±4.7*(28.0) 86.1±29.9 12.2±3.2**{25.1} 80.6±19.3**14.4±3.1*(16.3)84.7±24.5*W-1-5莖95％醇提40 0.7760.48014.1±3.5*(25.4) 86.4±26.0 13.9±2.3*(14.7)96.2±16.7*14.5±4.5(15.7) 80.5±24.7*W-1-6葉95％醇提40 2.5170.30513.0±2.6*(31.2) 82.1±22.7*8.4±3.1**(48.5)57.9±20.4**9.8±2.8**(43.0)59.4±17.0**陽性對照 氫化可的松20 --6.7±2.9**(64.6) 45.2±20.7**4.9±2.8**(69.9)36.4±16.4**4.7±1.6**(72.7)29.7±12.1*陽性對照 蘆丁 20 20 -11.4±2.7**(30.1) 74.7±17.1**11.4±2.9**(33.3) 65.4±21.3**陽性對照 沒食子酸 20 -20 15.9±3.4(2.4) 107.0±19.515.3±2.2(11.0) 96.6±18.9模型組 5％丙二醇 18.9±5.3 117.2±43.1 16.3±2.5117.8±24.017.2±2.8104.4±16.6W-1-2全草水提 40 0.7280.86412.6±3.4**81.1±26.5**7.3±2.5**41.7±15.4**7.8±3.4**47.3±22.2**W-1-8鮮品醇提 40 1.5101.31313.0±2.4*(31.2) 86.2±26.3 13.5±3.0*(17.2)85.1±32.2*13.2±3.1*(23.3)77.3±23.8**W-1-9鮮品水提 40 0.7701.2767.4±2.6**(60.8) 45.8±18.0**9.5±3.7**(41.7)57.8±29.4**8.8±2.8**(48.8)55.2±22.8**W-1-15b CO2藥渣 4012.1±3.3**77.2±19.2**7.6±1.6**40.7±9.7**4.1±1.9**25.8±12.6**W-1-15a CO2藥材 4017.9±2.9 108.8±29.4 10.4±3.257.1±21.9 7.1±3.9**43.8±22.7**陽性對照 氫化可的松205.0±2.4**34.8±18.0 2.4±1.3**13.8±7.8**2.2±1.4**13.4±8.6模型組 5％丙二醇 - 20.4±2.8 124.8±21.1 13.4±3.373.7±20.9 12.5±4.182.5±28.9**備註1.氫化可的松、蘆丁、沒食子酸用生理鹽水配製，其餘樣品用5％丙二醇配製。2.除根醇提粉樣品在丙二醇中分散較難而超聲4小時外，其餘樣品均超聲10分鐘處理。3.「*」「**」分別表示與模型組比較P＜0.05、P＜0.01。從三次實驗結果分析得出1.噴霧乾燥與減壓乾燥工藝所生產出的樣品，從抗炎角度(40mg/kg)來看二者無明顯差異。
2.根、莖、葉三醇提樣品以葉醇提粉抗炎作用最佳，表明頭花蓼抗炎活性成分主要在葉子中間，對三個部位醇提樣品的三次試驗結果歸納統計處理見表4。
表4根、莖、葉中黃酮含量與抗炎相關性統計分析樣品編號 名稱 黃酮含量 腫脹抑制率 γ值w-1-4根醇提粉 22.53 28.0w-1-4根醇提粉 22.53 25.1w-1-4根醇提粉 22.53 16.3w-1-5莖醇提粉 19.41 25.4 γ＝0.850w-1-5莖醇提粉 19.41 14.7P＜0.01w-1-5莖醇提粉 19.41 15.7w-1-6葉醇提粉 62.93 31.2w-1-6葉醇提粉 62.93 48.5w-1-6葉醇提粉 62.93 43.0由此可見抗炎活性與上述三個部位的黃酮含量有正相關性關係。
3.鮮品醇提和鮮品水提二者比較，水提成分的抗炎作用明顯優於醇提成分。表明頭花蓼的抗炎作用活性成分主要為水溶性。
4.蘆丁、沒食子酸劑量均達到20mg/kg，遠遠超過上述頭花蓼樣品中的含量。實驗結果僅顯示出蘆丁有抗炎效果，但作用強度未能超過頭花蓼提取成分的數倍，說明頭花蓼中抗炎成分除黃酮外還有其他活性成分存在，而沒食子酸可能不是抗炎成份。
試驗結果說明1.頭花蓼根、莖、葉醇提樣品以葉醇提粉抗炎作用最佳，表明頭花蓼抗炎活性成分主要在葉子中，去掉根部，頭花蓼地上部分的抗炎活性不受影響；2.水提成分的抗炎作用明顯優於醇提成分，表明頭花蓼的抗炎作用活性成分主要為水溶性。試驗二體內外抗菌活性研究體外抗菌實驗方法採用瓊脂二倍稀釋法測定不同藥用部位和不同提取工藝得到的提取物的最低抑菌濃度(MIC)。用多點接種儀將細菌接種於含不同藥物濃度的瓊脂平皿表面，每點含菌量約為105CFU/ml，37℃孵育18小時(淋球菌孵育48小時)觀察結果，以無細菌生長平皿培養基中所含藥物的最低濃度為藥物對該菌的最低抑菌濃度(MIC值)。
體內抗菌保護實驗方法將實驗動物按性別、體重均勻分組，每組10隻小鼠，雌雄各半，給小鼠灌胃不同用藥部位、不同提取工藝的頭花蓼樣品，每日一次，0.5ml/20g鼠重，預先連續灌胃給藥3天，於第3天給藥後各組小鼠腹腔感染受試菌液，每鼠感染菌量為0.5ml(1MLD)，氟哌酸膠囊於感染菌液後即刻及4小時再灌胃給藥一次，同時設感染對照組及藥物對照組(不感染菌)，記錄感染後七天內小鼠存活數，根據感染後七天動物存活數計算其半數有效劑量(ED50)及其95％可信限或計算感染後七天動物存活數與感染對照組比較的t測驗值，判斷與感染對照組比較有無差異。
實驗結果(一)體外抗菌實驗結果見表5。
1.沒食子酸、種子醇提取物(w-1-7)對所試革蘭氏陽性，陰性細菌及白色念珠菌均呈現出一定的抗菌活力，其次是葉醇提取物(w-1-6)、頭花蓼75％乙醇提物(w-1-10)、噴霧乾燥(w-1-2)和減壓乾燥(w-1-3)。
2.11種頭花蓼樣品對所試臨床分離淋球菌具有良好的體外抗菌活性。
3.11種頭花蓼樣品對本次試驗中臨床分離金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的抗菌活力強於鏈球菌。
4.11種頭花蓼樣品對本次試驗中對所試的陰性桿菌的大腸埃希菌、變形桿菌、痢疾桿菌的MIC範圍在1.56～400mg/ml；對肺炎克雷伯桿菌和銅綠假單胞菌的MIC範圍為6.25～＞40mg/ml。
5.11種頭花蓼樣品對白色念珠菌的抗菌活力較弱。
6.頭花蓼噴霧乾燥粉(W-1-2)對皮膚真菌如石膏樣小孢子菌、石膏癬菌，紅色毛癬菌的MIC值為25～100mg/ml；對所試厭氧菌(如脆弱擬桿菌，消化球菌，消化鏈球菌，痤瘡丙酸桿菌和顆粒丙酸桿菌的MIC值在12.5～200mg/ml。)(二)體內抗菌保護實驗結果見表6。
1.不同用藥部位、不同提取工藝的頭花蓼樣品口服給藥，對小鼠金黃色葡萄球菌MSSA43感染具有一定的治療作用.頭花蓼減壓乾燥粉、頭花蓼噴霧乾燥粉、根提醇物、葉提醇物、莖提醇物、鮮品醇提物、鮮品水提物對金黃色葡萄球菌MSSA43感染小鼠的ED50分別為13.62、6.87、16.14、9.14、15.29、13.62、23.47g生藥/kg。
2.不同用藥部位、不同提取工藝的頭花蓼樣品口服給藥，對大腸埃希菌994感染小鼠體內保護作用較差，當給藥濃度為1.2g/ml生藥濃度、0.8g/ml生藥濃度、0.4g/ml生藥濃度，小鼠存活率均大於或等於60％，與感染對照組比較均無顯著性差異(P＞0.05)。
表5不同藥用部位、不同提取、製備工藝的頭花蓼樣品的體外抗菌譜(W-1-(W-1-(W-1- (W-1- (W-1- (W-1- (W-1- (W-1- (W-1-10) (W-1- (W-1-(W-1-陽性對 陽性對 陽性對 陽性對 陽性2)噴 3)減 4)5) 6) 7)8) 9)藥75％乙 12) 14a) 14b) 照沒 照 照 照 對照細菌 霧幹 壓幹 根醇 莖醇葉醇種子 鮮品 鮮品 醇提物 水煮醇 水提 食子 環丙沙 頭孢三 潔爾陰 氟康(菌號) 燥 燥 提取物提取物 提取物 提物 醇提 水提 (mg/m1)沉溶物 醇沉物 酸 星(μ 嗪鈉 (mg/ml 唑(mg/ (mg/m(mg/ml(mg/ml (mg/ml (mg/ml(mg/ml (mg/ml (mg/ml (mg/ml (mg/mg/ml) (μ) (μml) l) ) ) ) ) ) )))1) g/ml) g/ml)痢疾桿菌 100 50 100 50 12.53.12 6.25 2525 200 25 25 12.5 4 ＞128 Nt Nt銅綠假單胞菌994 100 25 5050 62.51.56 1002512.5 200 25 100 12.5 4 ＞128 Nt Nt肺炎克雷伯菌9938 25 50 100 50 12.512.5 1002525 400 50 400 12.5 4 ＞128 Nt Nt肺炎克雷伯菌9939 25 50 100 100 12.512.5 1002550 400 50 400 6.25 4 64 Nt Nt大腸埃希菌99225 25 5025 3.120.39 0.39 12.5 0.78 100 25 3.12 3.12 0.5 128Nt Nt大腸埃希菌9936.25 12.5 501.560.780.05 0.39 3.12 0.1 100 12.5 3.12 3.12 0.5 4 Nt Nt大腸埃希菌ATCC25922 25 50 100 50 6.256.25 6.25 2512.5 200 12.5 200 6.25 0.5 0.03 Nt Nt變形桿菌993 25 50 100 25 3.126.25 3.12 256.25 200 25 50 12.5 16 ＞128 Nt Nt變形桿菌994 25 50 100 25 3.126.25 6.25 256.25 200 25 50 12.5 16 2 Nt Nt滕黃八疊球菌 12.5 12.5 500.390.390.05 0.39 12.5 0.1 100 12.5 1.56 12.5 4 4 Nt Nt金黃色葡萄球菌209P6.25 6.25 250.391.560.05 0.05 1.56 0.1 251.56 0.1 12.5 0.5 4 Nt Nt金黃色葡萄球菌9981 12.5 6.25 500.780.780.05 0.05 1.56 0.1 12.5 12.5 0.05 12.5 4 8 Nt Nt金黃色葡萄球菌9982 12.5 25 500.390.780.05 0.05 1.56 0.1 6.25 1.56 0.05 6.25 4 8 Nt Nt金黃色葡萄球菌9983 12.5 6.25 500.390.780.05 0.05 1.56 0.1 6.25 1.56 0.78 6.25 0.5 8 Nt Nt表葡球菌994 6.25 6.25 500.780.780.05 0.39 3.12 0.78 100 3.12 6.25 12.5 8 8 Nt Nt表葡球菌995 12.5 6.25 5025 0.780.39 3.12 250.78 100 25 3.12 12.5 1 ＞128 Nt Nt表葡球菌9916 6.25 6.25 506.250.780.39 0.39 1.56 1.56 506.25 0.05 6.25 1 4 Nt Nt卡他氏球菌3 400 100 200 400 12.512.5 200400 25 400 400 200 12.5 2 ＞128 Nt NtC群鏈球菌400 100 200 400 12.512.5 200400 25 400 400 200 12.5 0.5 ＞128 Nt NtA型溶血性鏈球菌 400 100 200 400 12.512.5 200400 25 400 400 200 12.5 2 16 Nt Nt淋球菌1 3.12 0.78 2525 1.561.56 0.025 3.12 6.25 12.5 3.1 12.5 1.56 0.780.0015 8 Nt淋球菌2 3.12 0.78 2525 1.561.56 0.025 ＞50 6.25 253.12 6.25 0.78 0.786.25 8 Nt淋球菌3 0.05 0.0125 6.25 0.1 0.003 0.39 1.56 3.12 1.56 3.12 0.78 6.25 0.05 0.015 0.0015 8 Nt淋球菌4 0.2 0.78 500.2 6.251.56 0.20.39 6.25 1.56 ＞10012.5 0.78 0.780.0015 62.5Nt淋球菌5 0.1 0.025500.2 12.53.12 0.20.39 3.12 1.56 ＞1006.25 0.05 0.780.0015 31.5Nt淋球菌6 0.0250.78 6.25 25 6.253.12 1.56 1.56 3.12 12.5 1.56 6.25 0.78 0.396.25 16 Nt淋球菌7 0.0250.78 6.25 0.2 0.031.56 0.025 0.39 6.25 1.56 3.12 6.25 0.05 0.0125 0.0015 16 Nt淋球菌8 0.39 0.78 6.25 0.2 0.031.56 0.13.12 0.1 1.56 0.78 6.25 0.05 0.015 0.0125 8 Nt淋球菌9 0.0250.78 6.25 25 6.253.12 0.78 0.05 1.56 3.12 0.2 6.25 0.05 0.015 0.0015 4 Nt淋球菌10 0.0250.78 500.2 6.253.12 0.21.56 1.56 3.12 25 6.25 0.2 0.786.25 4 Nt淋球菌11 0.1 0.05 6.25 0.2 6.251.56 1.56 12.5 3.12 3.12 0.78 12.5 0.78 0.786.25 1 Nt淋球菌12 0.39 0.78 2525 0.025 1.56 1.56 6.25 6.25 3.12 0.78 6.25 0.78 0.780.39 1 Nt淋球菌13 0.05 0.05 6.25 25 0.003 0.39 0.025 0.39 3.12 1.56 0.78 6.25 0.01 0.015 0.0015 2 Nt
淋球菌14 0.025 0.78 6.25 0.2 0.39 1.56 0.250.39 1.563.12 0.2 6.25 0.01 0.1 0.0125 1Nt淋球菌15 0.025 0.05 6.25 0.2 6.25 1.56 6.560.39 0.2 6.25 0.2 6.25 0.01 0.0125 0.0125 2Nt淋球菌16 0.1 0.78 50 25 6.25 1.56 0.2 12.5 0.783.12 0.78 12.5 1.56 0.786.258Nt淋球菌17 0.1 0.78 6.25 25 0.0251.56 0.2 3.12 0.786.25 0.78 12.5 0.39 0.015 0.0015 1Nt淋球菌18 0.050.78 6.25 0.2 1.56 0.39 1.563.12 1.251.56 0.2 6.25 0.39 0.2 0.125 8Nt淋球菌19 0.390.78 6.25 0.2 1.56 1.56 1.560.39 0.781.56 0.2 6.25 0.78 0.025 0.054Nt淋球菌20 0.050.78 25 0.39 1.56 1.56 1.566.25 1.563.12 0.78 12.5 0.78 0.2 0.3931.25Nt白色念珠菌011 400 200 400200 25 25200 400 50 ＞400 400 400 25 64 128 16 0.03白色念珠菌012 400 200 400200 25 25400 400 50 ＞400 400 400 25 128 ＞128 80.06白色念珠菌013 400 200 400200 50 50200 400 50 400400 400 25 128 ＞128 31.252白色念珠菌014 400 200 400200 50 25200 400 100 400400 400 12.5 ＞128 ＞128 42白色念珠菌015 400 200 400200 25 25200 400 50 400400 400 25 ＞128 ＞128 41白色念珠菌016 200 100 200400 12.5 12.5 200 200 25 ＞400 200 200 25 128 ＞128 31.252白色念珠菌017 200 100 200400 25 12.5 400 400 50 ＞400 400 400 50 ＞128 ＞128 84白色念珠菌018 200 200 400100 6.25 6.25 100 200 100 ＞400 200 200 12.5 128 ＞128 62.5 0.03白色念珠菌019 400 200 400200 12.5 12.5 200 400 25 ＞400 200 100 12.5 ＞128 128 80.5白色念珠菌0110400 200 400200 12.5 12.5 200 400 50 400400 200 12.5 ＞128 ＞128 128 0.5白色念珠菌0111400 200 400200 25 25200 400 25 400400 200 25 64 128 40.25白色念珠菌0112400 100 400200 12.5 25400 400 100 ＞400 400 400 25 ＞128 ＞128 40.125白色念珠菌0113400 200 400200 12.5 12.5 200 400 25 ＞400 400 200 12.5 ＞128 ＞128 62.5 0.125白色念珠菌0114200 200 400200 25 12.5 200 400 25 ＞400 400 400 6.25 ＞128 ＞128 40.5白色念珠菌0115400 100 400200 25 12.5 400 400 50 ＞400 400 400 12.5 128 ＞128 62.5 8白色念珠菌0116400 200 400200 25 12.5 200 400 25 ＞400 400 200 25 ＞128 ＞128 84白色念珠菌0117400 200 400200 12.5 25200 400 50 ＞400 400 400 25 32 128 16 8白色念珠菌0118400 200 400200 12.5 12.5 200 400 25 ＞400 400 400 6.25 64 128 42白色念珠菌0119400 200 400200 25 12.5 200 400 25 ＞400 400 200 12.5 ＞128 ＞128 40.03白色念珠菌0120400 200 400200 25 12.5 200 400 50 ＞400 400 400 25 ＞128 ＞128 80.125注Nt＝not tested(沒有試驗)
表6不同頭花蓼提取物的體內保護實驗結果感染菌株(菌株 藥物 編號 ED50(g/kg) P值號)(感染菌量 95％可信限CFU/ml)金黃色 噴霧乾燥粉 w-1-2 6.87(0-1000) P＜0.05葡萄球菌減壓乾燥粉 w-1-3 13.62(0-1000) P＜0.05MSSA43 根醇提物 w-1-4 16.14(9.11-23.12) P＜0.05(2.5× 莖醇提物 w-1-5 15.29(0-1000) P＜0.05105) 葉醇提物 w-1-6 9.14(0-1000) P＜0.05鮮品醇提 w-1-8 13.62(3.89-19.94) P＜0.05鮮品水提 w-1-9 23.47(17.77-33.07) P＜0.05w-1-2加輔料製成的顆粒w-1-12 ＞30 P＞0.05氟哌酸膠囊 陽性對照 25.96(16.09-35.24)(mg/kg)大腸噴霧乾燥粉 w-1-2 ＞30 P＞0.05埃希菌994(3.0× 減壓乾燥粉 w-1-3 ＞30 P＞0.05105)根醇提物 w-1-4 ＞30 P＞0.05莖醇提物 w-1-5 ＞30 P＞0.05葉醇提物 w-1-6 ＞30 P＞0.05鮮品醇提 w-1-8 ＞30 P＞0.05鮮品水提 w-1-9 ＞30 P＞0.05w-1-2加輔料製成的顆粒w-1-12 ＞30 P＞0.05氟哌酸膠囊 陽性對照 57.97(43.33-78.24)(mg/kg)試驗結果說明1.不同藥用部位的體外抗菌活性強度依次為種子＞葉＞莖＞根。種子和葉的抗菌活性明顯強於莖和根；而種子和葉之間、莖和根之間的抗菌活性並無明顯差異。種子來源和採集都較困難，而根關係到藥材的再生以及資源、環境保護，因此採用葉和莖或者地上部分做藥材較合適。
2.全草、鮮品用95％乙醇提取的樣品的體外抗菌活性明顯強於用水提取的樣品。
3.全草、幹品水提後用減壓乾燥，還是用噴霧乾燥，對樣品的體外抗菌活性無明顯影響。
4.頭花蓼浸膏粉的體外抗菌活性明顯強於樣品(w-1-12)。
5.鮮品醇提物對金黃色葡萄球菌感染的體內療效強於鮮品水提物。
6.頭花蓼噴霧乾燥粉對金黃色葡萄球菌感染的體內療效強於頭花蓼減壓乾燥粉強於熱淋清顆粒。
7.葉95％乙醇提物對金黃色葡萄球菌感染的體內療效強於根95％乙醇提物和莖95％乙醇提物。
8.不同用藥部位、不同提取工藝的頭花蓼樣品口服給藥，對大腸埃希菌994感染小鼠體內保護作用較差。試驗三鎮痛活性研究實驗方法就W-1-2進行了扭體法、熱板法、熱輻射法三種疼痛模型的研究。
實驗結果1.對醋酸誘發的小鼠疼痛有一定的鎮痛作用，量效關係明顯，有效劑量為34.8g/kg。
2.對輻射熱刺激造小鼠疼痛模型有一定鎮痛作用。
實驗結果說明本發明提取物具有一定的鎮痛作用。試驗四利尿活性研究實驗方法就W-1-2進行了導尿管集尿法和代謝籠法兩種利尿試驗。
實驗結果17.4g/kg劑量對麻醉家兔有明顯的利尿作用；8.7g/kg劑量對正常大鼠有明顯的利尿作用。二試驗均未顯出量效關係。
試驗結果說明本發明提取物就有一定的利尿作用。試驗五治療腎盂腎炎的研究實驗方法SD大鼠腎實質內接種大腸埃希氏菌ATCC-25922，製做大鼠腎盂腎炎模型。以口服給藥方式探討了頭花蓼浸膏粉(w-1-2)對腎盂腎炎的療效。
實驗結果頭花蓼浸膏粉6.0g/kg(折合生藥量為52.32g/kg)對腎盂腎炎有較為明顯的療效，與模型對照相比，給藥(i.g.)後3、4、5、6、7天能顯著減少尿液中的白細胞數量及隱血，但對尿液其它生化成份沒有明顯影響。
結果說明本專利申請的樣品對腎盂腎炎有一定的療效。試驗六排石活性研究實驗方法用乙二醇飲水法造成大鼠草酸鈣腎結石模型，造模同時預防給予頭花蓼浸膏粉(w-1-2)13.1、26.2、52.4g原生藥/kg三個劑量，連續7天。
實驗結果頭花蓼浸膏粉26.2g原生藥/kg劑量可顯著性降低動物尿液中草酸、尿酸的含量，以及腎臟中草酸鈣結晶的分布與數量。
結果說明頭花蓼浸膏粉對大鼠草酸鈣腎結石模型具有明顯的保護作用。
權利要求
1.一種頭花蓼提取物，其特徵在於a.由頭花蓼全草的鮮品或幹品用水分兩次煎煮或用醇水混合物分二至三次回流提取，每次1-2小時，合併煎煮液，過濾濃縮至20℃時的相對密度為1.2，噴霧乾燥或減壓乾燥得到；或者b.由頭花蓼全草及其水提藥渣經二氧化碳超臨界萃取得到。
2.根據權利要求1的提取物，其中頭花蓼選用其地上部分。
3.根據權利要求1或2的提取物，其中使用水作為提取劑。
4.根據權利要求1或2的提取物，其中的醇水混合物是75％乙醇水溶液或95％乙醇水溶液。
5.根據權利要求2-4之一的提取物，其特徵在於頭花蓼地上部分是葉、花和莖。
6.根據權利要求2-4之一的提取物，其特徵在於頭花蓼地上部分是葉、種子和莖。
7.根據權利要求2-4之一的提取物，其特徵在於頭花蓼地上部分是葉和莖。
8.根據權利要求2-4之一的提取物，其特徵在於頭花蓼地上部分是葉。
9.根據權利要求2-4之一的提取物，其特徵在於頭花蓼地上部分是莖。
10.根據權利要求2-4之一的提取物，其特徵在於頭花蓼地上部分是花。
11.根據權利要求2-4之一的提取物，其特徵在於頭花蓼地上部分是種子。
12.權利要求1-11之一的提取物用於製備抗菌藥物的用途。
13.根據權利要求12的用途，其中抗菌藥物是抗淋球菌藥物。
14.權利要求1-11之一的提取物用於製備抗炎藥物的用途。
15.權利要求1-11之一的提取物用於製備鎮痛藥物的用途。
16.權利要求1-11之一的提取物用於製備利尿藥物的用途。
17.權利要求1-11之一的提取物用於製備治療泌尿系統結石的藥物的用途。
18.權利要求1-11之一的提取物用於製備治療腎盂腎炎、前列腺炎的藥物的用途。
19.一種藥物組合物，其含有權利要求1-11之一的提取物和可藥用輔料。
20.根據權利要求19的組合物，其可以製成顆粒劑、丸劑、膠囊劑、噴霧劑、注射劑、洗劑、栓劑、滴丸劑、合劑、擦劑、貼劑、膜劑、紙型劑、混懸劑、酊劑、幹糖漿劑、泡騰片、硬膏劑、軟膏劑、糖漿劑、乳劑、散劑、緩釋、控釋製劑及靶向製劑。
全文摘要
本發明涉及頭花蓼鮮品或幹品提取物及其製備方法和用途，本發明還涉及含有該頭花蓼提取物的藥物組合物。本發明用水、75％乙醇和95％乙醇和二氧化碳超臨界萃取方法分別對頭花蓼全草、地上部分、葉、種子、莖和根部分別進行了提取和活性研究，本發明工藝得到的頭花蓼提取物在抗菌、抗炎、鎮痛、利尿、治療腎盂腎炎、前列腺炎和排石等方面具有明顯的效果。
文檔編號A61P31/00GK1481832SQ0212968
公開日2004年3月17日 申請日期2002年9月12日 優先權日2002年9月12日
發明者梁斌, 王子厚, 李孟林, 張麗豔, 莊鎮華, 榮祖元, 張淑華, 葉曉鳴, 鄭安飄, 梁 斌 申請人:貴州威門藥業股份有限公司