1,3,4-三-O-沒食子醯基-6-O-咖啡醯基-β-D-吡喃葡萄糖在製備抗腫瘤藥物中的應用的製作方法

2023-10-25 06:44:27 2

專利名稱：：1,3,4-三-O-沒食子醯基-6-O-咖啡醯基-β-D-吡喃葡萄糖在製備抗腫瘤藥物中的應用的製作方法1，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖在製備抗腫瘤藥物中的應用本發明涉及醫藥領域，具體涉及1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-O咖啡醯基-l3-D-吡喃葡萄糖的新用途。1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(5-D-卩比喃葡萄糖是從蛇菰科(Balanophoraceae)植物日本蛇菰(&/cmo/^ora_/c^om'caMakino)的地上部分的甲醇提取物中分離出來的一種化合物，其化學式如式I所示。該化合物是一種黃色無結晶粉末，在鞣酸酶的作用下可水解為沒食子酸和6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖(Caffeoyl，Coumaroyl，Galloyl，andHex勿droxydiphenoylGlucosesfromBal肌ophorajaponica.Zhi-HongJIANG,YokoHIROSE，et.Chem.Pharm.Bull.49(7)887—892(2001)Chem.)。經文獻檢索未見該化合物藥理活性、用途及藥劑的報導。本發明的目的是提供1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖在製藥中的新用途。實際上，本發明涉及1，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-J3-D-吡喃葡萄糖在製備抗腫瘤藥物中的應用。本發明所述的應用是利用1,3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖抑制腫瘤細胞生長、誘導腫瘤細胞凋亡，來達到抗腫瘤目的的，因此，本發明所述的化合物在製備抗腫瘤藥物中的應用，具體是指所述的吡喃葡萄糖在製備腫瘤細胞生長的抑制劑和腫瘤細胞
技術領域：

背景技術：

發明內容凋亡的誘導劑中的應用。上述應用，其中所述的1，3，4-三-(9-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖加入醫學上可接受的輔料或載體可製成治療腫瘤的各種常用製劑。下面將通過實驗來證明本發明的具有的技術效果。1、1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖對人肺癌細胞株A549增殖的影響1)實驗方法(1)A549細胞培養生長至指數生長期時，即以0.25%胰蛋白酶消化，1000Xg離心3min，細胞沉澱以10%FBS的DMEM培養基調整至6Xl4+/ml，96孔培養板每孔接種190u1，置於37'C、5%(:02及飽和溼度條件下培養24小時。(2)每組設5個復孔，每孔中加入10ul不同濃度的本發明化合物或加入200pM表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作為陽性對照，上述條件下繼續培養48小時。實驗重複3次，根據所加的藥物將實驗分為6組陽性對照組加入EGCG，200pM。本發明實驗組l:加入l，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為3.75pg/ml。本發明實驗組2:加入l，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為7.5ng/ml。本發明實驗組3:加入l，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為15pg/ml。本發明實驗組4:加入l，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為30pg/ml。本發明實驗組5:加入l，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為60pg/ml。(3)細胞培養48小時後，每孔加入10pl的CCK-8(cellcountingkit8)試劑，37°C，5。/。C02及飽和溼度條件下繼續培養1.5小時。用酶標儀測定在波長為450nm處的吸光度值(0D)，650咖作為參考波長，細胞生長抑制率按公式抑制率=(對照孔0D值-實驗孔0D值)/對照孔0D值)乂100%計算。2)實驗結果表2本發明化合物對A549細胞增殖的影響tableseeoriginaldocumentpage5結果如表1所示，1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖能有效抑制HepG2細胞增殖，其抑制率隨劑量加大而遞增。2、1,3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖對HepG2細胞增殖的影響1)實驗方法(1)HepG2細胞培養生長至指數生長期時，即以0.25%胰蛋白酶消化，1000Xg離心3min，細胞沉澱以10%FBS的DMEM培養基調整至6X104+/inl，96孔培養板每孔接種190"1，置於37'C、5%(^02及飽和溼度條件下培養24小時。(2)每組設5個復孔，每孔中加入10yl不同濃度的本發明化合物或加入200nM表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作為陽性對照，上述條件下繼續培養48小時。實驗重複3次，根據所加的藥物將實驗分為6組陽性對照組力口入EGCG，200nM。本發明實驗組h加入l，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為3.75pg/ml。本發明實驗組2:加入l,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為7.5ng/ml。本發明實驗組3:加入l，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為15jig/ml。本發明實驗組4:加入l，3，4-三力-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為3(Hig/ml。本發明實驗組5:加入1，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為60ng/ml。(3)細胞培養48小時後，每孔加入10u1的CCK-8(cellcountingkit8)試劑，37°C,5%C02及飽和溼度條件下繼續培養1.5小時。用酶標儀測定在波長為450nm處的吸光度值(0D)，650ntn作為參考波長，細胞生長抑制率按公式抑制率=(對照孔OD值-實驗孔OD值)/對照孔OD值)X10(^計算。2)實驗結果表1本發明化合物對HepG2細胞增殖的影響tableseeoriginaldocumentpage6結果如表1所示，1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖能有效抑制HepG2細胞增殖，其抑制率隨劑量加大而遞增。3、1，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖對人結腸癌細胞株SW480增殖的影響1)實驗方法(1)SW480細胞培養生長至指數生長期時，即以0.25%胰蛋白酶消化，1000Xg離心3min，細胞沉澱以10%FBS的DMEM培養基調整至6X1(^個/ml，96孔培養板每孔接種190n1，置於37'C、5%<:02及飽和溼度條件下培養24小時。(2)每組設5個復孔，每孔中加入10y1不同濃度的本發明化合物或加入200nM表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作為陽性對照，上述條件下繼續培養48小時。實驗重複3次，根據所加的藥物將實驗分為6組陽性對照組加入EGCG，200pM。本發明實驗組l:加入l，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為3.75pg/ml。本發明實驗組2:加入l，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為7.5ng/ml。本發明實驗組3:加入l,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為15ng/ml。本發明實驗組4:加入l，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為30ng/ml。本發明實驗組5:加入1,3,4-三-0-沒食子醯基-6-(9-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為60ng/ml。(3)細胞培養48小時後，每孔加入lOu1的CCK-8(cellcountingkit8)試劑，37'C，5。/。C02及飽和溼度條件下繼續培養1.5小時。用酶標儀測定在波長為450nm處的吸光度值(0D)，650nm作為參考波長，細胞生長抑制率按公式抑制率=(對照孔0D值-實驗孔0D值)/對照孔0D值)X10(m計算。2)實驗結果表3本發明化合物對SW480細胞增殖的影響tableseeoriginaldocumentpage7結果如表1所示，1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖能有效抑制HepG2細胞增殖，其抑制率隨劑量加大而遞增。4、1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(5-D-吡喃葡萄糖對人大腸癌細胞株LoVo細胞增殖的影響1)實驗方法(1)LoVo細胞培養生長至指數生長期時，即以O.25%胰蛋白酶消化，1000Xg離心3min，細胞沉澱以10%FBS的DMEM培養基調整至6X104個/加1，96孔培養板每孔接種190P1，置於37'C、5%002及飽和溼度條件下培養24小時。(2)每組設5個復孔，每孔中加入10u1不同濃度的本發明化合物或加入200nM表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate，EGCG)作為陽性對照，上述條件下繼續培養48小時。實驗重複3次，根據所加的藥物將實驗分為6組陽性對照組加入EGCG，200nM。本發明實驗組l:加入l，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為3.75pg/ml。本發明實驗組2:加入l，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為7.5pg/ml。本發明實驗組3:加入l,3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為15jig/ml。本發明實驗組4:加入l，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(i-D-妣喃葡萄糖，使其最終濃度為30pg/ml。本發明實驗組5:加入1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為60pg/ml。(3)細胞培養48小時後，每孔加入10ul的CCK-8(cellcountingkit8)試劑，37°C，5%C02及飽和溼度條件下繼續培養1.5小時。用酶標儀測定在波長為450nm處的吸光度值(0D)，650nm作為參考波長，細胞生長抑制率按公式抑制率=(對照孔0D值-實驗孔0D值)/對照孔0D值)X10Cm計算。2)實驗結果；表4本發明化合物對LoVo細胞增殖的影響組別抑制率(％)陽性對照組88.24本發明實驗組117.97本發明實驗組222.53本發明實驗組339.78本發明實驗組469.28本發明實驗組578.64結果如表1所示，1，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖能有效抑制HepG2細胞增殖，其抑制率隨劑量加大而遞增。5、1,3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖對人大腸癌細胞株MGC-803細胞增殖的影響1)實驗方法(1)MGC-803細胞培養生長至指數生長期時，即以0.25%胰蛋白酶消化，1000Xg離心3min，細胞沉澱以10%FBS的DMEM培養基調整至6X104^7ml，96孔培養板每孔接種190Ul，置於37'C、5%(302及飽和溼度條件下培養24小時。(2)每組設5個復孔，每孔中加入10ixl不同濃度的本發明化合物或加入200pM表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)作為陽性對照，上述條件下繼續培養48小時。實驗重複3次，根據所加的藥物將實驗分為6組陽性對照組加入EGCG，200nM。本發明實驗組l:加入l,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-[3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為3.75pg/ml。本發明實驗組2:加入l,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為7.5jig/ml。本發明實驗組3:加入l,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為15pg/ml。本發明實驗組4:加入l，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為30pg/ml。本發明實驗組5:加入1,3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為60pg/ml。(3)細胞培養48小時後，每孔加入10p1的CCK-8(cellcountingkit8)試劑，37'C，5%(:02及飽和溼度條件下繼續培養1.5小時。用酶標儀測定在波長為450nm處的吸光度值(0D)，650nm作為參考波長，細胞生長抑制率按公式抑制率=(對照孔0D值-實驗孔0D值)/對照孔0D值)X100《計算。2)實驗結果表5本發明化合物對MGC-803細胞增殖的影響tableseeoriginaldocumentpage9結果如表1所示，1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡唓葡萄糖能有效抑制HepG2細胞增殖，其抑制率隨劑量加大而遞增。6、1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖對HepG2細胞凋亡的影響1)實驗方法(1)HepG2細胞培養生長至指數生長期時，即以0.25%胰蛋白酶消化，1000Xg離心3min，細胞沉澱以10%FBS的DMEM培養基調整至6X1(^個/ml，6孔培養板每孔接種1.9ml，置於37'C、5%(302及飽和溼度條件下培養24小時。(2)每孔中加入藥物，上述條件下繼續培養48小時。根據所加的藥物將實驗分為以下7組空白對照組不加藥物處理的HepG2細胞。陽性對照組加入200pM表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate，EGCG)。本發明實驗組l:加入l,3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(5-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為3.75^g/ml。本發明實驗組2:終濃度為7.5[ig/ml。本發明實驗組3:終濃度為15ng/ml。本發明實驗組4:終濃度為30ng/ml。本發明實驗組5:終濃度為60pg/ml。(3)細胞培養48小時後收集細胞後，PBS洗2次細胞，1000rpm，4。C離心，10mim(4)將1X106個/ml細胞重懸於緩衝液中。(5)取500ul細胞懸液加入試管中。(6)加入5ulannexinv-FITC，10ul碘化丙啶入試管中。(7)避光，室溫10min。(8)上機檢測。2)實驗結果表61,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖對HepG2細胞凋亡的影響加入1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-(9-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最加入1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖，使其最加入1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖，使其最加入1,3,4-三-0沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖，使其最tableseeoriginaldocumentpage10空白對照組4.1213.61陽性對照組7.612.99本發明實驗組14.7813.9本發明實驗組23.5412.13本發明實驗組35.3210.86本發明實驗組45.4410.95本發明實驗組59.5254.36結果如表2所示，當1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖的最終濃度為60ug/ml時，HepG2細胞得凋亡率高達5(m以上，可見1,3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖能誘導腫瘤細胞凋亡。7、1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖對HepG2細胞周期的影響1)實驗方法(1)收集用1，3,4-三-O沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖處理48小時的HepG2細胞沉澱用PBS洗滌2次，細胞沉澱用70%在-20°0欲冷的乙醇固定，置於4'C冰箱保存24h。(細胞沉澱用lmlPBS吹散，再加3ml無水乙醇)(2)固定後的細胞再次用含W新生牛血清的PBS洗滌2次，棄上清。(3)加入0.4mlPBS和RNaseA至終濃度50ug/ml,37。C水浴孵育lh。(4)加入碘化丙啶至終濃度50ug/ml，搖勻，4。C避光lh。將細胞經100目尼龍網過濾至流式細胞儀測定各處理組細胞DNA含量，計算細胞周期百分比。根據所加的藥物將實驗分為以下7組空白對照組不加藥物處理的HepG2細胞。陽性對照組加入EGCG200uM本發明實驗組l:加入l，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為3.75pg/ml。本發明實驗組2:加入l，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為7.5ng/ml。本發明實驗組3:加入l，3,4-三-0-沒食子醯基-6-(9-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為15pg/ml。本發明實驗組4:加入l,3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-卩比喃葡萄糖，使其最終濃度為30ng/ml。本發明實驗組5:加入l,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(J-D-吡喃葡萄糖，使其最終濃度為60Kig/ml。2)實驗結果表31，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-p-D-吡喃葡萄糖對HepG2細胞周期的影響tableseeoriginaldocumentpage12結果如表3所示，經1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-(3-D-吡喃葡萄糖處理後，HepG2細胞G0Gl期的細胞增加，證明1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-IJ-D-吡喃葡萄糖能阻止細胞的分裂增殖。8、本發明化合物對荷S180小鼠腫瘤大小的影響1)將S180瘤源小鼠於傳代接種後10天在無菌條件下從腹腔抽出瘤液，用無菌生理鹽水調整瘤細胞數至5X106個/ml。2)取21隻小鼠(18-22g/只)，分別接種步驟1所得的瘤液0.2ml於右大腿皮下後被隨機分為以下5組(1)本發明化合物低劑量組給予本發明化合物治療，5.0mg/kg;(2)本發明化合物中劑量組給予本發明化合物治療，10.0mg/kg;(3)本發明化合物高劑量組組給予本發明化合物治療，20.0mg/kg;(4)陽性對照組給予表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)治療，20mg/kg;(5)空白對照組生理鹽水灌胃。接種次日同時灌胃給藥，給藥量0,2ml，每日給藥一次，連續10天，停藥次日稱重，解剖後剝離皮下瘤體，稱瘤重。按下式計算抑瘤率(％)=(對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/對照組平均瘤重X100%。表7本發明化合物對荷S180小鼠腫瘤大小的影響tableseeoriginaldocumentpage12本發明化合物低劑量組5.0mg/kg0.93±0.0927.34本發明化合物中劑量組10.0mg/kg0.74±0.1342.18本發明化合物高劑量組20.0mg/kg0.68±0.1846.88結果如表2所示，本發明化合物對荷S180小鼠腫瘤的抑制作用隨劑量增加而增大，其抑制腫瘤的效果與EGCG相當。具體實施方式應用例蛇菰片劑應用例一製劑處方1，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖20g微晶纖維素48g可溶性澱粉30g滑石粉2g共制1000片，每片含該化合物100mg。製備方法稱取該化合物20g，加可溶性澱粉稀釋成50g，混勻，再稱取微晶纖維素48g，用95%乙醇制軟材，過篩制粒，低溫5(TC乾燥，整粒，加入滑石粉2g，混勻，壓片(每0.1g)，質檢、包裝，即得。用法用量每次2-3片，每日3次。適用人群適用各種腫瘤患者。例二製劑處方1,3,4-三-0-沒食子醯基-6-(9-咖啡醯基-(5-D-吡喃葡萄糖10g微晶纖維素48g可溶性澱粉40g滑石粉2g共制1000片，每片含該化合物100mg。製備方法稱取該化合物IOg，加可溶性澱粉稀釋成50g，混勻，再稱取微晶纖維素48g，用95%乙醇制軟材，過篩制粒，低溫5(TC乾燥，整粒，加入滑石粉2g，混勻，壓片(每0.1g)，質檢、包裝，即得。用法用量每次2-3片，每曰3次。適用人群適用各種腫瘤患者。例三製劑處方1，3,4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖5g微晶纖維素48g可溶性澱粉45g滑石粉2g共制1000片，每片含該化合物100mg。製備方法稱取該化合物5g，加可溶性澱粉稀釋成50g，混勻，再稱取微晶纖維素48g，用95%乙醇制軟材，過篩制粒，低溫50'C乾燥，整粒，加入滑石粉2g，混勻，壓片(每0.1g)，質檢、包裝，即得。用法用量每次2-3片，每曰3次。適用人群適用各種腫瘤患者。權利要求1、1，3，4-三-O-沒食子醯基-6-O-咖啡醯基-β-D-吡喃葡萄糖在製備抗腫瘤藥物中的應用。2、根據權利要求l所述的應用，其特徵在於所述的藥物是腫瘤細胞生長的抑制劑。3、根據權利要求2所述的應用，其特徵在於所述的藥物是腫瘤細胞凋亡的誘導劑。4、權利要求l、2或3所述的抗腫瘤藥物，該藥物由1，3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖和醫學上可接受的輔料或載體組成；其中1,3，4-三-0-沒食子醯基-6-0-咖啡醯基-P-D-吡喃葡萄糖的含量為520%。全文摘要本發明提供了1，3，4-三-O-沒食子醯基-6-O-咖啡醯基-β-D-吡喃葡萄糖在製備抗腫瘤藥物中的應用，具體是指所述的吡喃葡萄糖在製備腫瘤細胞生長的抑制劑和腫瘤細胞凋亡的誘導劑中的應用。本發明還提供了一種抗腫瘤藥物，該藥物含有5～20％的1，3，4-三-O-沒食子醯基-6-O-咖啡醯基-β-D-吡喃葡萄糖。文檔編號A61K31/7028GK101152193SQ20071003059公開日2008年4月2日申請日期2007年9月28日優先權日2007年9月28日發明者劉中秋,琳呂,吳少瑜,吳曙光,姜志宏,張嘉傑,偉徐,文曉芸,王廣發,饒進軍申請人:南方醫科大學