用於預防和治療過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的含軟棗獼猴桃及其相關種的提取物的...的製作方法

2023-10-19 01:06:27 2

專利名稱：用於預防和治療過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的含軟棗獼猴桃及其相關種的提取物的 ...的製作方法
技術領域：
本發明涉及軟棗獼猴桃(Actinidia arguta)及其相關種的提取物和包含該提取物的組合物，該組合物具有預防和治療過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的活性。
背景技術：
本發明涉及一種包含藥草提取物(herb extract)的組合物，其具有抗過敏和抗炎活性，具體地說，涉及一種包含耐寒獼猴桃(hardy kiwifruit)提取物的組合物，該組合物用於預防和治療過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
過敏性疾病，例如過敏性反應、過敏性鼻炎、哮喘、遺傳性過敏皮炎、食物過敏和風疹，在許多國家中給佔人口總數20％的人群帶來痛苦，並且疾病流行的程度在逐漸增加(Wuthrich B.，Int.Arch.Allergy Appl.Immunol.，90，pp3-10，1989)。
免疫球蛋白E(IgE)介導過敏性疾病，同時已證明II型T輔助(Th2)細胞、肥大細胞和嗜曙紅細胞在該過程中扮演重要的角色(Maggi E.，Immunotechnology，3，pp233-244，1998；Pawankar R.，Curr.Opin.Allergy Clin.Immunol.，1，pp3-6，2001；Vercelli D.，Clin.Allergy Immunol.，16，pp179-196，2002)。
如果沒有寄生蟲感染或其它刺激物，正常地，IgE是在人類血清以及幾種試驗動物中均被發現的大量免疫球蛋白同種型(isotype)之一(Maggi E.，Immunotechnology，3，pp233-244，1998；Coffman RL and Carty J.，J.Immunotechnology，136，pp949-954，1986)。根據「Th2假設」，在免疫條件下可促使IgE生成，在該條件下，佔優勢的是由Th2細胞和例如IL-4、IL-5和IL-13的相關細胞因子介導的體液免疫(Maggi E.，Immunotechnology，3，pp233-244，1998)。關於過敏性疾病發展的現有觀點是遺傳和環境因素相互作用，通過在天然T細胞中Stat6介導的信號傳導通道和例如c-Maf、GATA3、NIP45和NFATc的特定轉錄因子的活化作用，導致IL-4的生成，最終導致過敏原特異性T輔助2 CD4+細胞的生成。一旦生成，過敏原活化的Th2細胞分泌IL-4、IL-5和IL-13。IL-4和IL-5通過B細胞誘導IgE和IgG1的生成，還誘導對骨髓中嗜曙紅細胞的產生並補充入發炎組織的刺激作用(Erb K.J.；Immunol.Today，20，pp317-322，1999；Rothenberg ME.，N.Engl.J.Med.，338，pp1592-1600，1998)。IL-13是與IL-4緊密聯繫的細胞因子，其與IL-4受體α鏈結合，不依賴IL-4、IgE或嗜曙紅細胞而誘導過敏表現型(Wills-Karp M.，et al.，Science，282，pp2258-2261，1998；Grunig G.，et al.，Science，282，pp2261-2263，1998)。
循環IgE與IgE受體的兩個異構體(isoform)結合高親和力的IgE受體(FcεRI)出現在肥大細胞和嗜鹼細胞的表面上，低親和力的IgE受體(FcεRII或CD23)出現在淋巴細胞、嗜曙紅細胞、血小板和巨噬細胞的表面。據認為，控制變應性紊亂(allergic disorder)發病機理的最重要的因素是在遇到過敏原及隨之發生的肥大細胞脫粒之後，IgE受體在肥大細胞上的交叉連結。由肥大細胞釋放的分子包括組胺、肝磷脂、蛋白酶和自由基，這些分子調節著各種生物效應，包括血管舒張、腸和/或支氣管平滑肌收縮、粘液分泌和局部蛋白水解。在最初的肥大細胞即時反應之後6～24小時，出現嗜曙紅細胞、嗜鹼細胞和淋巴細胞的流入。該晚期應答能夠導致持續暴露於抗原的慢性組織炎症。
用於治療過敏性疾病的常規藥物包括抗組胺劑、甾體或非甾體抗炎藥和白細胞三烯拮抗劑。這些藥物主要對有症狀的作用有效，而不能夠提供像關於過敏性疾病的基礎治療這樣被需要的治療，例如減輕過度的體液免疫或抑制IgE的生成。通過嵌合抗IgE抗體(CGP-51901)和重組人源化單克隆抗體(rhuMAB-E25)的臨床試驗證明了關於降低血清IgE水平可以改善過敏症狀的假說(Fahy JV et al.，Am.J.Respir.Crit.Care.Med.，155，pp1828-1834，1997)。在美國專利No.6,369,091和美國專利申請No.20020041885中已分別記述了抑制IgE合成和分泌的二醯基苯並咪唑類似物和細菌多糖。
用於過敏症基礎治療的唯一方法是開展免疫療法或脫敏療法。免疫療法是治療方法，其通過長期給予過敏患者劑量逐漸加大的精製過敏原，降低對過敏源的超敏性，改善過敏症狀。在1911年採用免疫療法後，其通過使用抗原特異性IgE抗體，已被用於治療例如過敏性鼻炎、哮喘、蜜蜂中毒等的過敏性疾病。還未清楚的發現降低超敏性的主要機制，但已知的是增加IgG濃度的同時減少IgE的濃度會誘發正常的免疫反應。
軟棗獼猴桃(Actinidia arguta)、木天蓼(A.polygama)和狗棗獼猴桃(A.kolomikta)屬於獼猴桃科，分布於西伯利亞、中國的北部地區、韓國的北部和南部。已報導屬於獼猴桃科的30多個種。其中，中華獼猴桃(A.chinensis)或美味獼猴桃(A.delicious)的果實已被命名為獼猴桃(kiwi)；軟棗獼猴桃及其它同屬的果實可用作中藥的原料，名為「mihudo」，無毒性，用以治療肝病、胃腸疾病和泌尿生殖器結石(Seoul National University Natural ProductsScience，Tradi-Medi Data Base，dongbang media Co.Ltd.1999)。然而，尚沒有關於使用獼猴桃屬的果實治療和預防過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的報導或暗示。
同時，已集中努力研究有效的抗過敏和抗炎的天然產品。
韓國專利申請No.92-11752公開了一種抗炎、抗過敏和抗風溼的藥物，該藥物包含雙黃酮類化合物(biflavonoid)，例如從金銀花(Lonicera japonica.)分離出來的4』-O-甲基金連木黃酮，其顯示不同的過敏或炎症治療活性。韓國專利申請No.100744公開了抗炎、抗過敏和抗風溼藥物，其包含從銀杏葉子中分離出來的幾種雙黃酮類化合物的混合物。已報導包含毛梗豨薟(Siegesbeckia glabrescens)的幾個東方藥處方具有減少IgE的活性(Kim H.Met al.，Phytother.Res.，15，pp572-576，2001)。此外，已發現許多藥草為組胺釋放抑制劑和抗炎藥物的豐富來源。
然而，上述任何文獻均未報導或公開關於耐寒獼猴桃的抗過敏和抗炎作用。
為了在中草藥中開發抗過敏和抗炎藥物，本發明的發明人已集中開展了體內和體外試驗，該試驗是關於耐寒獼猴桃提取物對人血清中Th1/Th2細胞因子和IgE、IgG亞型改變的作用，以及關於該提取物對從小鼠腹膜肥大細胞中釋放組胺的試驗和大鼠足腫脹試驗的作用。
發明的公開本發明提供了一種藥物組合物，其包含作為活性成分的有效量的耐寒獼猴桃提取物，通過減少炎症反應、抑制組胺從肥大細胞中釋放、以及通過提高血清中Th1細胞因子和IgG2a的水平和降低血清中Th2細胞因子和IgE的水平，來治療和預防過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
本發明還提供了上述提取物在製備治療和預防哺乳動物或人類的過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的藥物組合物中的應用。
本發明還提供了一種保健食品或食品添加劑，其包含上述提取物，通過減少炎症反應，抑制組胺從肥大細胞中釋放、以及通過增加血清中Th1細胞因子和IgG2a的水平，和減少血清中Th2細胞因子和IgE的水平，來預防或緩解過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
本發明還提供了一種飼料或飼料添加劑，其包含上述提取物，通過減少炎症反應，抑制組胺從肥大細胞中釋放，以及通過提高血清中Th1細胞因子和IgG2a的水平，和降低血清中Th2細胞因子和IgE的水平，來治療和預防過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
本發明還提供了一種化妝品組合物，其包含上述提取物，通過減少炎症反應，抑制組胺從肥大細胞中釋放，以及通過提高血清中Th1細胞因子和IgG2a的水平，和降低血清中Th2細胞因子和IgE的水平，來治療、預防和改善過敏性皮膚疾病和非過敏性炎性皮膚疾病。
因此，本發明的一個目的在於提供一種藥物組合物，其包含作為活性成分的耐寒獼猴桃的粗提取物(crude exact)或非極性溶劑可溶的提取物(non-polarsoluble extract)，用於治療和預防過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
本發明的一個目的在於提供耐寒獼猴桃的粗提取物或非極性溶劑可溶提取物的一種應用，其可用於製備治療和預防人或哺乳動物的過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的治療藥劑。
本發明的一個目的在於提供一種治療或預防哺乳動物的過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的方法，其包括給予所述哺乳動物治療有效量的耐寒獼猴桃的粗提取物或非極性溶劑可溶的提取物，和藥學上可接受的載體。
本發明的另一個目的在於提供一種保健食品或食品添加劑，其包含上述提取物和飲食學上可接受的添加劑，以預防和改善過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
本發明的還一個目的在於提供一種動物飼料或飼料添加劑，其包含作為治療必要組分的提取物，用於治療、預防和改善過敏性疾病和非過敏性皮膚炎性疾病。
本發明的還一個目的在於提供一種化妝品組合物，其包含上述提取物，用於預防和改善過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
上述過敏性疾病或過敏性皮膚疾病包括過敏性反應、過敏性鼻炎、哮喘、過敏性結膜炎、過敏性皮炎、特異性皮炎、傳染性皮炎、風疹、昆蟲過敏、食物過敏和藥物過敏。
上述非過敏性皮膚炎性疾病包括由例如丘疹、痤瘡等引起的各種皮膚疾患。
上述化妝品組合物，其包含耐寒獼猴桃提取物，具有對皮膚炎症的預防和改善活性。
上述藥物組合物，其用於過敏性疾病的治療和預防，可以被用於提高過敏免疫療法功效的目的。
因此，本發明還提供了一種藥物組合物，其包含作為活性成分的耐寒獼猴桃的粗提取物或非極性溶劑可溶的提取物，用於過敏免疫療法的輔助治療。
同時，本發明還提供了一種藥物組合物，其包含有效量的耐寒獼猴桃的粗提取物或非極性溶劑可溶的提取物，用於治療和預防非過敏性炎性疾病。
上述非過敏性炎性疾病包括各種皮炎、全身性紅斑狼瘡(SLE)、視網膜炎症、胃炎、視網膜病、肝炎、腸炎、胰腺炎、腎炎等等。
上述耐寒獼猴桃可以包括軟棗獼猴桃、狗棗獼猴桃、木天蓼或/和相同屬的植物，可以使用其果實、莖、根。
可以通過使用水、例如甲醇、乙醇等的低級醇、或它們的混合物，獲得上述耐寒獼猴桃的粗提取物，優選的，獲得蒸餾水或70％醇可溶的提取物；可以通過使用非極性溶劑，例如己烷、乙酸乙酯或二氯甲烷溶劑，獲得上述非極性溶劑可溶的提取物。
基於組合物的總重量，本發明的藥物組合物可以包含以重量計，約0.01到50％的上述提取物。
基於組合物的總重量，本發明的保健食品包含以重量計，0.01到80％的上述提取物，優選1到50％。
可以將上述保健食品包含在保健食品、保健飲料等中，而且可以將其用作為粉劑、顆粒劑、片劑、咀嚼片，膠囊，飲料等使用。
可以按照下述優選實施方式從耐寒獼猴桃製備一種本發明的提取物。
以下，詳細描述本發明。
可以按照下述步驟詳細製備本發明的耐寒獼猴桃提取物。
可以按照下述方法製備本發明的耐寒獼猴桃粗提取物；乾燥並粉碎耐寒獼猴桃；將粉碎的耐寒獼猴桃與5到25倍，優選的，大約10倍體積的蒸餾水、例如甲醇、乙醇、丁醇等的低級醇、或它們的混合物相混合，優選的，為水或70％乙醇；將該溶液用溫度範圍為20到100℃的熱水處理，優選的，為60到100℃，周期範圍為1到24小時，通過用熱水、冷水、回流提取或超聲波降解提取的提取方法，連續提取1到5次，優選2到3次；過濾渣滓以獲得上清液，在20到100℃的溫度範圍內用旋轉蒸發儀濃縮，優選為50到70℃；然後用真空冷凍乾燥、熱空氣乾燥或噴霧乾燥進行乾燥以獲得耐寒獼猴桃的乾燥粗提取物粉末，其可溶於水、低級醇、或它們的混合物。
在-20℃貯存上述耐寒獼猴桃的粗提取物，通過溶入蒸餾水中調節至一定濃度，作為樣品來使用。
另外，可以通過下述步驟製備本發明的非極性溶劑可溶的提取物；將通過上述步驟製備的粗提取物混懸於水中，然後與1到100倍，優選1到5倍體積的非極性溶劑，例如乙酸乙酯、氯仿、己烷等混合，收集非極性溶劑可溶層，以獲得本發明的非極性溶劑可溶的提取物。
並且，可以根據本技術領域熟知的方法，例如，在文獻(Harbome J.B.，A guide to modern techniques of plant analysis，3rd Ed.pp6-7，1998)中公開的方法，修改上述步驟，或附加進一步的分部分離(fractionate)或分離(isolate)步驟，以獲得更有效的部分或化合物。
為了研究通過上述步驟製備的耐寒獼猴桃提取物的抗過敏和抗炎活性，開展了體內和體外試驗，例如測定血清中Th1/Th2細胞因子和IgE、IgG亞型的水平的ELISA方法，檢驗本發明提取物作用的從肥大細胞中釋放組胺的抑制試驗和抗炎化驗，然後證實本發明的提取物表現出極好的抗過敏和抗炎效果。
明確的，過敏原特異性IgE的減少和過敏原特異性IgG2a的增加一直為免疫治療領域的主要目的和目前唯一的過敏性疾病的基礎治療，因此，通過上述試驗，證明了如果將耐寒獼猴桃作為過敏免疫療法的輔助手段用於免疫治療，它可以提高治療功效。
根據本發明的另一方面，本發明提供了一種藥物組合物，其包含按照上述製備方法製備的耐寒獼猴桃提取物，該提取物作為活性成分可用於治療和預防過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
本發明的另一方面是提供一種治療和預防方法，其包括對包括人類在內的哺乳動物的過敏性疾病和非過敏性炎性疾病給予一種藥物組合物，其包含通過上述製備方法製備的提取物。
基於該組合物的總重量，用於治療和預防過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的組合物可以包含以重量計，0.01～50％的上述提取物。
另外，按照本技術領域熟知的常用方法，本發明的提取物可以包含常規的載體、輔劑或稀釋劑。
以下，下述製劑方法和賦形劑僅僅是示例性的，絕不是限制本發明。
可以將根據本發明的組合物提供為藥物組合物，其包含藥學上可接受的載體、輔劑或稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藻糖醇、麥芽糖醇、澱粉、阿拉伯膠、藻酸鹽、白明膠、磷酸鈣、矽酸鈣、纖維素、甲基纖維素、聚烯吡酮、水、甲羥基苯甲酸酯(methylhydroxybenzoate)、丙羥基苯甲酸酯(propylhydroxy benzoate)、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。另外，所述製劑可包含填充劑、分散劑、潤滑劑、溼潤劑、調味劑、乳化劑、防腐劑等等。可以通過使用本技術領域熟知的任何方法製備本發明的組合物，以便在將其給予患者後，提供活性成分的速釋、緩釋或延遲釋放。
例如，可以將本發明的組合物溶入油類、丙二醇或其它通常使用的溶劑中以製備注射劑。載體的合適例子包括生理鹽水、聚乙二醇、乙醇、植物油、豆蔻酸異丙酯等等，但並不限於它們。對於透皮給藥，可以將本發明的組合物製備成軟膏劑和乳膏劑的形式。
可以將包含本發明組合物的藥物製劑製備成任何形式，例如口服藥物劑型(粉劑、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、水溶液劑、糖漿劑、酏劑、丸劑、粉末劑、香粉、顆粒劑)，或局部給藥製劑(乳膏劑、軟膏劑、洗劑、凝膠、香膏、片、糊、噴霧液、氣溶膠等等)，或可注射製劑(溶液、懸浮液、乳劑)。
在藥物劑型中，本發明的組合物可以被以它們的藥學上可接受的鹽形式使用，也可以被單獨或以適當的結合方式使用，還可以與其它藥用活性化合物結合使用。
本發明提取物或組合物的合適劑量的改變取決於患者的病情和體重、嚴重程度、藥物劑型、給藥途徑和療程，本領域的技術人員可以選擇該合適的劑量。然而，為了取得令人滿意的效果，通常建議給予的劑量範圍為以重量/天計，10g/kg以內的本發明提取物或化合物，優選的，為1到3g/kg。該劑量可以每天給予一次，也可以分成每天幾次給予。至於組合物，基於組合物的總重量，本發明提取物的量應當為以重量計，0.01到95％之間，優選的，為0.5到80％。
可以通過不同的途徑，將本發明的藥物組合物給予例如哺乳動物(大鼠、小鼠、家畜或人類)的受試動物。所有的給藥方式均是預期的，例如，可以通過口腔、直腸給藥或通過靜脈內、肌內、皮下、皮內、膜內、硬膜外或側腦室注射(intracerebroventricular injection)給藥。
同時，本發明提供了一種用於預防和改善過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的保健食品飲料組合物，其添加以重量計0.01到20％的耐寒獼猴桃、以重量計0.001到5％的胺基酸、以重量計0.001到2％的維生素、以重量計0.001到20％的糖、以重量計0.001到10％的有機酸、適量的甜味劑和調味劑。
上述耐寒獼猴桃的提取物可以被添加在食品和飲料中，用於預防和改善過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
為了開發保健食品，舉例來說，包含上述本發明提取物的可添加食品的例子為各種食品、飲料、口香糖、維生素複合劑、健康改善食品(healthimproving food)等等，可被作為粉末、顆粒、片劑、咀嚼片、膠囊和飲料等來使用。
同時，通過包含在兒童和嬰兒食品，例如改良奶粉、用於生長階段的改良奶粉、用於生長階段的改良食品中，本發明的提取物將能夠預防和改善過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
可以將上述組合物添加到食品、添加劑或飲料中。其中，在食品或飲料中，對於保健食品組合物，上述提取物的量通常可以在食品總重量的約0.1到95w/w％的範圍內，優選食品總重量的1到80w/w％；每100ml保健飲料組合物中，上述組合物的量通常可以在1到30g的範圍內，優選3到10g。
如果本發明的保健飲料組合物包含在所需比例之內的作為必要組分的上述提取物，則其沒有特別限定其它液體組分，其中，其它組分可以為各種除臭劑或天然碳水化合物等，例如常規飲料。前述天然碳水化合物的例子為單糖，例如葡萄糖、果糖等；雙糖，例如麥芽糖、蔗糖等；常規糖(conventionalsugar)，例如糊精、環糊精；以及糖醇，例如木糖醇、赤蘚醇等等。作為除了前述除臭劑以外的其它除臭劑，例如taumatin的天然除臭劑，例如levaudiosideA、甘草甜素等的甜葉菊提取物，例如糖精、天門冬氨醯苯丙氨酸甲酯等的合成除臭劑，可以是很好用的。在每100ml本發明的飲料組合物中，上述天然碳水化合物的量通常在大約1到20克的範圍內，優選5到12g。
除了上述組分外的其它組分是多種營養劑、維生素、礦物質或電解質、合成調味劑、用於乾酪巧克力等的著色劑和改良劑、果膠酸及其鹽、藻酸及其鹽、有機酸、保護性膠質粘合劑、pH調節劑、穩定劑、防腐劑、甘油、酒精、用於碳酸飲料的碳化劑等等。除了上述提及的組分外的其它組分可以是用於製備天然果汁的果汁、果汁飲料和蔬菜飲料，其中可以單獨應用或聯合應用該組分。該組分的比例不是這麼重要的，但是每100w/w％本發明的組合物中，其範圍通常是大約從0到20w/w％。其中包含上述提取物的可添加食品的例子為各種食品、飲料、口香糖、維生素複合劑、健康改善食品等等。
另外，本發明的組合物可以包含一種或一種以上的有機酸，例如檸檬酸、反丁烯二酸、己二酸、乳酸、蘋果酸；磷酸鹽，例如磷酸酯(phosphate)、磷酸鈉、磷酸鉀、磷酸、聚磷酸鹽；天然抗氧劑，例如多酚、兒茶素、α-生育酚、迷迭香提取物、維生素C、綠茶提取物、甘草提取物、殼聚糖、鞣酸、植酸等。
耐寒獼猴桃的上述提取物可以是20到90％的高濃縮液體、粉末或顆粒。
相似的，另外，耐寒獼猴桃的上述提取物可以包含一種或一種以上的乳糖、乾酪素、葡萄糖、右旋糖、蔗糖和山梨醇。
同樣，在本發明中，還提供了一種食品添加劑的應用方法，食品添加劑為例如殺菌劑、香料、調味料、多種營養劑、維生素、礦物質或電介質、合成調味劑、用於乾酪巧克力等的著色劑和改良劑，果膠酸及其鹽、藻酸及其鹽、有機酸、保護性膠質粘合劑、pH調節劑、穩定劑、防腐劑、甘油、酒精、用於碳酸飲料的碳化劑等；或例如作為食品原料的必要組分。
其中，可以通過沉積、噴霧或混合將食品添加劑添加入到食品中。添加劑的比例不是這麼重要的，但是在每100w/w％本組合物中，添加劑的含量通常在約0.01到20w/w％的範圍內。包含上述提取物的可添加食品的例子如上所述。
其中，可以將食品添加劑添加到一種或一種以上的食品中，例如水果、蔬菜、食物脫水食品或例如水果、蔬菜的切片產品(cutting product)；水果汁、蔬菜汁或它們的混合汁；包含酸性飲料的飲料；甜食，例如小甜餅、冰糖、飴糖、口香糖；麵包；冰淇淋、茶、例如酵母乳的發酵牛奶；乳製品、調味品，酒精飲料、罐頭、瓶裝食品(in-bottles)、麵條、加工畜產品、加工海產品、發酵食品、豆類食品、穀類食品、加工肉類、甘草或果皮。
根據本發明的另一個方面，本發明提供了一種飼料或飼料添加劑，其本質上包含通過上述製備方法製備的所述提取物，用於預防和改善過敏性疾病和非過敏性疾病。
基於飼料的總乾重，上述食品添加劑的特徵為以重量計每千克幹飼料中的混合量為5到100g。
此外，本發明提供了一種包含上述飼料添加劑的飼料組合物。
同時，本發明也提供了一種包含有效量的耐寒獼猴桃粗提取物或非極性溶劑可溶提取物的化妝品組合物，用於預防和改善過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
本化妝品組合物提供了包含基於組合物的總重量，以重量計0.01到30％上述提取物的化妝品組合物，優選的，為0.01到5％，用於治療、預防和改善過敏性皮膚疾病和非過敏性皮膚炎性疾病。
其它組分可以是本領域熟知的常規化妝品組合物的成分的混合物。
可以將包含上述組合物的化妝品製劑製備成任何形式，例如護膚品、外用化妝液、乳膏、香精、收縮水、乳液、面膜、膠漿(soup)、洗髮精、染髮水、潔面乳、沐浴液(body washing solution)、洗滌液、護理品、凝膠、芳香製劑、噴霧液，等等。
本發明的化妝品組合物可以包含補充添加劑，其選自水溶性維生素、脂溶性維生素、肽聚合物、多糖聚合物、神經鞘脂類和海草提取物。
優選的水溶性維生素是任何可以與化妝品混合的維生素，然而，優選下列多種維生素，例如維生素B1、B2、B6、吡哆醇、鹽酸吡哆醇、維生素B12、泛酸、煙酸、煙醯胺、葉酸、維生素C、維生素H等；及它們的鹽，例如硫胺素鹽酸鹽、抗壞血酸鈉鹽等或它們的衍生物，例如抗壞血酸-2-膦酸的鈉鹽、抗壞血酸-2-膦酸的鎂鹽。通過常規方法，例如微生物轉化法、從微生物培養物中純化的方法、酶催法或化學合成方法，能夠獲得上述維生素。
優選的脂溶性維生素是任何可以與化妝品混合的維生素，然而，更優選下列包含在本發明實施例中的多種脂溶性維生素，例如維生素A、D2、D3、E(dl-α-生育酚、d-α-生育酚、d-δ-生育酚)及其衍生物，例如棕櫚酸抗壞血酸(palmiticacid ascorbate)、硬脂酸抗壞血酸、二棕櫚酸抗壞血酸、乙酸-dl-α-生育酚、煙酸dl-α-生育酚維生素E、dl-泛醯醇、泛醯乙醚等。通過常規方法例如微生物轉化法、從微生物培養物中純化的方法、酶催法或化學合成法，能夠得到上述維生素。
優選的肽聚合物是任何可以與化妝品混合的肽聚合物，然而，更優選包含在本發明實施例中的肽聚合物，如膠原質、水解膠原質、白明膠、彈性蛋白、水解白明膠、角蛋白等。
優選的多糖聚合物是任何可以與化妝品混合的多糖聚合物，然而，更優選羥乙基纖維素、黃原膠、透明質酸鈉、硫酸軟骨素或它們的鹽(鈉鹽等)等等。例如，從哺乳動物或魚中，可以通過正常的純化得到硫酸軟骨素及其鹽等。
優選的神經鞘脂類是任何可以與化妝品混合的鞘脂類，然而，優選神經醯胺、鞘氨醇(sphingosin)、鞘脂多糖(sphingo-lipopolysaccharide)，等等。從哺乳動物、魚類、甲殼類動物、酵母或植物等中採用常規方法可以得到鞘脂類。
優選的海草提取物是任何可以與化妝品混合的海草提取物，然而，優選褐藻類、紅藻類、綠藻類等的提取物或純化角藻膠、藻酸、及從其分離出的精氨酸(arginic acid)鈉、精氨酸鉀。從海草中採用常規方法可以純化得到藻類提取物。
如果必要，本發明的化妝品組合物可以連同上述必要成分，與同常規化妝品組合物相聯繫的其它成分聯合使用。
優選的上述其它成分可以包括油類成分、溼潤劑、潤滑劑、表面活性劑、有機或無機染料、有機粉末、紫外線吸收劑、防腐劑、抗菌劑、抗氧劑、植物提取物、pH調節劑、醇類、色素、香料、清涼劑、血液循環促進劑、止汗劑、蒸餾水等。
優選的油類成分可以包括酯油、烴油、矽油、氟化油、動物油、植物油等等。
優選的上述酯油可以包括甘油基三-2-乙基己酸，鯨蠟基2-乙基己酸、異丙基肉豆蔻酸、丁基肉豆蔻酸、異丙基棕櫚酸、乙基硬脂酸、辛基棕櫚酸、異鯨蠟基異硬脂酸、丁基硬脂酸、乙基亞油酸、異丙基亞油酸、乙基油酸、異鯨蠟基肉豆蔻酸、異硬脂醯肉豆蔻酸、異硬脂醯棕櫚酸、辛十二基肉豆蔻酸、異鯨蠟基異硬脂酸、二乙基癸二酸(diethyl sebacic acid)、異丙基己二酸、異烷基新戊酸(isoalkyl neopetanoic acid)、甘油基三(癸醯、癸酸)、三甲基丙烷三-2-乙基己酸、三甲基丙烷三異硬脂酸、季戊四醇四-2乙基己酸、鯨蠟基辛酸、癸基月桂酸、己基月桂酸、癸基肉豆蔻酸、肉豆蔻醯肉豆蔻酸、鯨蠟基肉豆蔻酸、硬脂醯硬脂酸、癸基油酸、鯨蠟基亞油酸(cetyl licinoleic acid)、異硬脂醯月桂酸、異三癸基肉豆蔻酸、異鯨蠟基棕櫚酸、辛基硬脂酸、異鯨蠟基硬脂酸、異癸基油酸、辛十二基油酸、辛十二基亞油酸、異丙基異硬脂酸、十六十八混合醇2-乙基己酸(cetostearyl 2-ethyl hexanoic acid)、硬脂醯2-乙基己酸、己基異硬脂酸、乙二醇二辛酸、乙二醇二油酸、丙二醇二癸酸、丙二醇二(癸醯、癸酸)、丙二醇二辛酸、新戊二醇二癸酸、新戊二醇二辛酸、甘油三辛酸、甘油三十一酸、甘油三異棕櫚酸、甘油三異硬脂酸、辛十二烷基新戊酸、異硬脂醯辛酸、辛基異壬酸、己基癸基新癸酸、辛基十二烷基新癸酸、異十六烷基異硬脂酸、異硬脂醯異硬脂酸、辛癸基異硬脂酸、聚甘油石竹酸酯、聚甘油異硬脂酸酯、三異鯨蠟基檸檬酸、三異烷基檸檬酸、三異辛基檸檬酸、月桂基乳酸、十四基乳酸、十六基乳酸、辛癸基乳酸、三乙基乳酸、乙醯基三乙基檸檬酸、乙醯基三丁基檸檬酸、三辛基檸檬酸、雙異硬脂醯馬來酸、雙2-乙己基羥基硬脂酸、2-乙己基琥珀酸、雙異丁基己二酸、雙異丙基癸二酸、二辛基癸二酸、膽甾醇基硬脂酸、膽甾醇基異硬脂酸、膽甾醇羥基硬脂酸、膽甾醇羥基硬脂酸、膽甾醇基油酸、二氫膽甾醇基油酸、硬脂醯異硬脂酸、硬脂醯油酸、鯨蠟基12-硬脂醯羥基硬脂酸、硬脂醯基12-硬脂醯羥基硬脂酸、異硬脂醯基12-硬脂醯羥基硬脂酸。
優選的上述烴油可以包括角鯊烯、液體石蠟、α-烯烴低聚物、石蠟、液體異鏈烷烴、地蠟、石蠟、液體異鏈烷烴、聚丁烯、微晶蠟、凡士林，等等。
優選的矽油可以包括聚甲基矽酮、甲苯基矽酮、甲基環聚矽氧烷、八甲基聚矽氧烷，十甲基聚矽氧烷，十二甲基環矽氧烷，二甲基矽氧烷-甲基十六基氧化矽氧烷共聚物，二甲基矽氧烷-甲基硬脂醯環氧乙烷(dimethyl siloxane-methylstearoxyloxane)共聚物，烷基改性矽油，氨基改性矽油等等。
優選的氟化油可以包括全氟代聚醚(perfluoropolyether)，等等。
優選的動物油或植物油可以包括鱷梨油、杏仁油、橄欖油、芝麻油、米殼油、紅花油、豆油、玉米油、菜油、扁桃苷油、棕櫚仁油、棕櫚油、蓖麻油、向日葵油、果實種子油、棉籽油、棕櫚油、椰子油、小麥胚芽油、稻米胚芽油、牛油果油、月見草油、澳大利亞堅果油(macadamia nut oil)、medo home oil、蛋黃油、羊毛脂、大麻籽油、貂油、奶油、orange roughy oil、霍霍巴油(jojoba oil)、液體羊毛脂、氫化蓖麻油，等等。
優選的保溼劑可以包括水溶性低分子保溼劑，親脂性低分子保溼劑、水溶性聚合物和脂溶性聚合物。
特別是，優選的水溶性低分子保溼劑可以包括2-羥軟木三萜酮、穀氨醯胺、山梨醇、甘露醇、吡咯烷酮-羧酸鈉、丙三醇、丙二醇、1，3-丁二醇、乙二醇、聚乙二醇(聚合指數＞2)、聚丙二醇(聚合指數＞2)、乳酸、乳酸鹽等等。
優選的脂溶性低分子保溼劑可以包括膽固醇、膽甾醇酯等等。
優選的水溶性聚合物可以包括羧乙烯基聚合物、聚天門冬氨酸鹽、黃蓍膠、黃原膠、HMC(羥甲基纖維素)、HEC(羥乙基纖維素)、HPC(羥丙基纖維素)、羧甲基纖維素、水溶性甲殼質、殼聚糖、糊精等等。
優選的脂溶性聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮-二十碳烯共聚物、聚乙烯吡咯烷酮-十六碳烯共聚物、硝化纖維、糊精脂肪酸酯、矽酮聚合物等等。
優選的潤滑劑可以包括長鏈醯基穀氨酸膽甾醇酯、膽甾醇羥基硬脂酸、12-羥基硬脂酸、松香酸、羊毛脂脂肪酸膽甾醇酯等等。
優選的表面活性劑可以包括非離子表面活性劑、陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑、兩性離子表面活性劑(ambivalent surfactant)、等等。
特別是，優選的非離子表面活性劑可以包括自乳化單硬脂酸甘油、丙二醇脂肪酸酯、甘油脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯、脫水山梨醇脂肪酸酯、聚氧乙烯(POE)山梨糖醇酐脂肪酸酯、POE脫水山梨醇脂肪酸酯、POE甘油脂肪酸酯、POE烷基醚、POE脂肪酸酯、POE氫化蓖麻油、POE蓖麻油、POE-POP共聚物、POE-POP烷基醚、聚醚改性矽酮、月桂酸鏈烷醇胺、烷基氧化胺、加氫大豆磷脂等等。
優選的陰離子表面活性劑可以包括脂肪酸皂、α-醯基磺酸鹽、烷基磺酸鹽、烷基烯丙基磺酸(alkyl ally sulfonic acid)、烷基萘磺酸鹽、烷基磺酸鹽、POE烷基醚硫酸鹽、烷基醯胺硫酸鹽、烷基磷酸鹽、POE烷基磷酸鹽、烷基醯胺磷酸鹽、烷醯基烷基牛磺酸鹽(alkyloylalkyl taurine salt)、N-醯基胺基酸鹽、POE烷基醚羧酸鹽、烷磺基琥珀酸鹽、烷磺基乙酸鹽、醯化可水解的膠原肽鹽、全氟代烷基磷酸酯，等等。
優選的陽離子表面活性劑可以包括烷基三甲基氯化銨、硬脂醯三甲基氯化銨、硬脂醯三甲基溴化銨、硬脂醯三甲基氯化銨(stearyltrimethyl ammoniumchloride)、二硬脂醯二甲基氯化銨、硬脂醯二甲苄基氯化銨、二十二烷基三甲基溴化銨(behenyltrimethyl ammonium bromide)、潔爾滅、二乙胺基乙醯胺硬脂酸、二甲胺基丙醯胺硬脂酸、羊毛脂衍生物季銨，等等。
優選的兩性離子表面活性劑可以包括羧基甜菜鹼型、醯胺甜菜鹼(amidebetaine)型、羥基磺基甜菜鹼型、磷酸甜菜鹼(phosphpbetaine)型、氨基羧酸、咪唑啉衍生物型、氨基胺型(amide amine type)，等等。
優選的有機和無機染料可以包括作為無機染料的無機矽酸、無水矽酸、矽酸鎂、滑石、絹雲母、雲母、高嶺土、三氧化二鐵、粘土(clay)、膨潤土(bentonite)、鈦薄膜雲母(titan film mica)、氧化氯鉍、氧化鋯、氧化鎂、氧化鋅、氧化鈦、氧化鋁、硫酸鈣、硫酸鋇、硫酸鎂、碳酸鈣、碳酸鎂、氧化亞鐵，三氧化二鉻、氫氧化鉻、爐甘石、炭黑和它們的複合物；作為有機染料的聚醯胺、聚酯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氨酯、乙烯基樹脂、尿素樹脂、石炭酸樹脂、氟化樹脂、矽樹脂、丙烯基樹脂、三聚氰胺樹脂、環氧樹脂、聚碳酸酯樹脂、二乙烯苯-苯乙烯共聚物、絲粉(silk powder)、纖維素、CI色素黃、CI色素橙，和它們的複合物等等。
優選的有機粉末可以包括金屬皂，例如硬脂酸鈣；烷基金屬膦酸鹽，例如棕櫚酸鈉鋅、月桂酸鋅、月桂酸鈣；醯基胺基酸多價金屬鹽，例如N-月桂醯-β-丙氨酸鈣、N-月桂醯-β-丙氨酸鋅、N-月桂醯-甘氨酸鈣等等；氨基磺酸多價金屬鹽，例如N-月桂醯-氨基乙磺酸鈣、N-棕櫚醯-氨基乙磺酸鈣；N-醯基鹼性胺基酸，例如Nε-月桂醯-L-賴氨酸、Nε-棕櫚醯-賴氨酸、Nα-棕櫚醯-鎢胺酸、Nα-月桂醯精氨酸、硬化羊毛脂脂肪酸醯基精氨酸等等；N-醯基多肽，例如N-月桂醯甘氨醯甘氨酸；α-氨基脂肪酸，例如α-氨基辛酸、α-氨基月桂酸等等；聚乙烯、聚丙烯、尼龍、聚甲基甲基丙烯酸酯、聚苯乙烯、二乙烯基苯-苯乙烯共聚物、四氟乙烯等等。
優選的紫外線吸收劑可以包括對氨基苯甲酸、對氨基苯甲酸乙酯、對氨基苯甲酸戊酯、對氨基苯甲酸辛酯、乙二醇水楊酸酯、水楊酸苯酯、水楊酸辛酯、水楊酸苄酯、水楊酸丁苯酯、水楊酸高夢(homomentyl)酯、苄基肉桂酸、對甲氧基2-乙氧基乙基肉桂酸、對甲氧基辛基肉桂酸、二對甲氧基單-2-乙基己烷甘油基肉桂酸、對甲氧基異丙基肉桂酸、二異丙基-肉桂酸二異丙酯混合物、咪唑丙烯酸、乙基咪唑丙烯酸、羥甲氧基二苯甲酮、羥甲氧基二苯甲酮磺酸及其鹽、二羥基甲氧基二苯甲酮、二羥基甲氧基二苯甲酮二磺酸鈉、二羥基二苯甲酮、四羥基二苯甲酮、4-特丁基-4』-甲氧基連苯醯甲烷、2，4，6-三苯胺-p-(碳羧-2』-乙己基-1』-氧代)-1，3，5-三氮雜苯、2-(2-羥基-5-甲苯基)苯並三唑，等等。
優選的防腐劑可以包括扁柏酚、三氯酸、三氯對羥基聯苯醚、雙氯苯雙胍己烷葡萄糖酸鹽、苯氧乙醇、間苯二酚、異丙基甲酚、甘菊環烴、水楊酸、吡咯硫酮鋅(zinc pirythione)、鹽酸苯甲烷銨(benzalkonium HCl)、光敏劑301、單硝基愈創木酚鈉、十一碳烯酸等等。
優選的抗氧劑可以包括特丁4羥基大茴香醚、沒食子酸丙酯、山梨酸，等等。
優選的pH調節劑可以包括檸檬酸、檸檬酸鈉、蘋果酸、蘋果酸鈉、反丁烯二酸、反丁烯二酸鈉、琥珀酸、琥珀酸鈉、氫氧化鈉、磷酸氫二鈉等等。
優選的醇類可以包括鯨蠟醇等。
此外，在本發明的目的和效果的範圍內不限制可添加入上述組分的其它成分及其量，然而，優選的，在整個組合物中，其它成分的量在0.01至5％的範圍內，更優選的，為0.01到3％。
本發明的化妝品組合物可以被調配為溶液、乳濁液、粘性混合物等等。
可以通過在文獻中公開的常規方法得到(Matsumoto Mithio，Manual for thedevelopment of transdermal applied preparation.Seisi Press，1st Ed.，1985)上述成分，例如水溶性維生素、脂溶性維生素、肽聚合物、多糖聚合物、鞘脂類、海草提取物和可添加的成分，如果必須，可以將它們添加到上述其它成分中。
另外，本發明也提供了一種化妝品添加劑，其包含上述作為必要組分的提取物，用於過敏性疾病和非過敏性疾病的預防或改善。
上述化妝品添加劑可以用於添加到現有的化妝品和洗滌液中，以預防、改善或治療過敏性疾病和非過敏性皮膚疾病。
此外，可以將上述化妝品添加劑用於乳膏、外用化妝液、按摩面膜(messagepack)、沐浴液、膠漿、洗髮精等等。
因此，本發明的提取物沒有毒性和副作用；其可以被安全的使用。
在本發明的組合物、應用和製備之內，可以作各種修改和變更，而不會偏離本發明的精神或範圍，這對於本領域技術人員將是顯而易見的。
在下面的實施例中將更明確的解釋本發明。然而，應該理解的是，這些實施例並不會以任何方式限制本發明。
附圖的簡要說明從下述與附圖相結合的詳細描述中，可以更清楚的理解本發明的上述和其它目的、特徵和其它優點，其中

圖1a為耐寒獼猴桃的提取物和部分的TLC照片；圖1b為[1]亞部分的2D-TLC照片；圖1c為[2]亞部分的2D-TLC照片；圖2a為關於皮膚搔癢症狀的結果，其是在給予具有遺傳性過敏皮炎的Nc/Nga小鼠耐寒獼猴桃提取物後12周進行調查的；圖2b為關於皮膚搔癢症狀的結果，其是在給予具有遺傳性過敏皮炎的Nc/Nga小鼠耐寒獼猴桃提取物後14周進行調查的。
實現本發明的最佳方式下面的實施例和實驗例是為了進一步闡明本發明，而並非限制其範圍。
實施例1耐寒獼猴桃提取物的製備1-1耐寒獼猴桃水提取物的製備分別取100g乾燥耐寒獼猴桃和耐寒獼猴桃(軟棗獼猴桃)的乾燥莖、狗棗獼猴桃和木天蓼的乾燥果實(購於漢城的Kyung-dong市場)，粉碎、與1升蒸餾水混合，在90～95℃回流提取3個小時，共三次，用濾紙過濾提取物，在55～65℃用旋轉蒸發儀(N-1000，Eyela Co.Japan)減壓濃縮，用冷凍乾燥機乾燥，獲得15.6g的乾燥果實提取物、10.4g的乾燥獼猴桃莖(軟棗獼猴桃)提取物、16.2g的乾燥狗棗獼猴桃果實提取物和17.0g的乾燥木天蓼果實提取物。將該乾燥粉末溶於蒸餾水中(100mg/ml)。
1-2耐寒獼猴桃水-醇可溶的提取物的製備除了使用不同比例的水-醇溶劑混合物，例如30％、50％和70％乙醇溶劑作為提取溶劑外，所有步驟均與實施例1-1相同。結果，在溶劑混合物的每個配比下，得到11g～13g的耐寒獼猴桃乾燥粉末，將該乾燥粉末溶於蒸餾水中(100mg/ml)。
實施例2極性溶劑和非極性溶劑可溶的耐寒獼猴桃提取物的製備通過下述步驟分部分離實施例1-1中製備的水提取物。
2-1氯仿可溶部分(fraction)的製備在分液漏鬥中，向5g在實施例2-1中得到的耐寒獼猴桃提取物中加入50ml蒸餾水，再向其中加入50ml氯仿，劇烈搖動，分成氯仿可溶層和水可溶層。
2-2乙酸乙酯可溶的部分的製備將上述在實施例2-1中得到的水可溶層與50ml乙酸乙酯混合，然後分成乙酸乙酯可溶層和水可溶層。
用旋轉蒸發儀濃縮上述氯仿可溶層、乙酸乙酯可溶層和水可溶層，用冷凍乾燥機乾燥，分別得到0.34g氯仿可溶部分的粉末、0.05g乙酸乙酯可溶部分的粉末和4.61g水可溶部分的粉末。
實施例3用矽膠柱色譜法對耐寒獼猴桃提取物的分部分離將2,784mg實施例2-2中的乙酸乙酯可溶部分進一步通過矽膠色譜柱(Daiso gel IR-60-W-4063mm)。展開劑以氯仿∶甲醇∶水([1]90∶11∶1，[2]60∶10∶1，[3]60∶20∶2)溶劑混合物開始，以甲醇[4]結束，洗脫速度為300ml/hr，得到四個亞部分([1]2，381mg，[2]135mg，[3]148mg，[4]98mg)。
上述水提取物、乙酸乙酯可溶部分和四個亞部分均經由TLC(TLC板Merck Co.Ltd.，展開劑氯仿∶甲醇∶水＝9∶5∶1)，其結果見圖1a。如圖1a所示，流道(lane)1是水提取物，流道2是乙酸乙酯可溶部分，流道3是[4]亞部分，流道4是[3]亞部分，流道5是[2]次亞部分，流道6是[1]亞部分。
上述[1]和[2]亞部分經由2D-TLC，使用氯仿∶甲醇∶水(9∶5∶1)溶劑混合物作為第一展開劑，氯仿∶丙酮∶水(3∶8∶0.5)溶劑混合物作為第二展開劑(見圖1b和圖1c)。
實驗實施例1耐寒獼猴桃提取物對U266B1細胞系中IgE生成的抑制作用1-1耐寒獼猴桃提取物對IgE生成的作用為了確認耐寒獼猴桃提取物對IgE生成的抑制作用，使用了U266B1細胞(成淋巴細胞瘤細胞系)。U266B1是人類B細胞的細胞系，其產生IgE。
在37℃，5％CO2環境下，在含RPMI-1640培養基(15％FBS，2mM L-穀氨醯胺，10mM HEPES，1mM丙酮酸鈉，50μg鏈黴素和100U/ml青黴素)的24孔培養板中，培養U266B1細胞(美國典型培養物收藏中心，ATCC，馬納薩斯，VA)。將細胞調整為濃度2×105個細胞/孔，並用脂多糖(LPS，2μg/ml)和100μg/ml在實施例1-1和1-2中製備的耐寒獼猴桃提取物處理。對照用2μM地塞米松或培養基(RPMI-1640)處理。處理後，將細胞培養7天，用ELISA kit(PharMingen；San Diego，CA)測量培養基中IgE的濃度。
如表1所示，耐寒獼猴桃、狗棗獼猴桃和木天蓼的所有水提取物對IgE的生成表現出與地塞米松(對照)同樣的抑制作用。同時，耐寒獼猴桃的70％乙醇提取物在所有三種發明的耐寒獼猴桃醇提取物中表現出最強的活性。耐寒獼猴桃莖提取物表現出與上述那些耐寒獼猴桃提取物相似的作用。
表1


1-2耐寒獼猴桃的乙酸乙酯可溶部分對IgE生成的作用為了比較對U266B1細胞中IgE生成的抑制作用，將在上述實施例2中製備的氯仿可溶部分、乙酸乙酯可溶部分和水可溶部分，經由在上述實驗實施例1-1中公開的相同實驗進行處理。
用氯仿可溶部分、乙酸乙酯可溶部分和水可溶部分處理U266B1細胞系(以30μg/ml)。
如表2所示，乙酸乙酯部分對IgE的生成表現出比地塞米松(對照)更強的抑制作用。
表2

1-3矽膠柱色譜部分對IgE生成的作用將在實施例3製備的矽膠柱色譜部分[1]、[2]、[3]和[4]經由與實驗實施例1-1相同的實驗處理，以比較對U266B1細胞中IgE生成的抑制作用。
用矽膠柱色譜部分[1]、[2]、[3]和[4]處理U266B1細胞系(以10μg/ml)。
作為表3的結果，矽膠柱色譜部分[1]、[2]表現出對IgE生成的抑制活性。
表3


實驗實施例2耐寒獼猴桃提取物在卵清蛋白致敏小鼠模型中的抗過敏作用2-1卵清蛋白致敏小鼠模型的建立卵清蛋白致敏的小鼠模型通常被用作過敏症的動物模型。雌性BALB/c小鼠，6個星期大(漢城大學動物實驗中心)，適應環境7天。在出生後7個星期時，將100μl乳液注射入小鼠的腹腔中，該乳液是將25μg卵清蛋白(雞卵白蛋白，未加工級V，Sigma Co.，Ltd.)與2.25mg氫氧化鋁(ImujectAlum，Pierce Co.，Ltd.)混合，14天後，為了加速模型的形成再次注射該乳液。
然後，將30隻小鼠分成3組，每組分別口服實施例1-1的耐寒獼猴桃水提取物(300μg/小鼠/天)，地塞米松(10μg/小鼠/天)，或飲用水(100μg/小鼠/天)，共11天。在第25天時，處死小鼠，收集血清和脾。
2-2血清中卵清蛋白特異性IgE、IgG1、IgG2a和IgG2b的濃度分析在實施例2-1收集的血清中，應用酶聯免疫(ELISA)試劑盒(PharMingen Co.，Ltd)檢測卵清蛋白特異性IgE、IgG1、IgG2a和IgG2b的血清濃度。
如表4所示，它表明每個卵清蛋白致敏小鼠的抗體相對於正常小鼠抗體的相對濃度。在給予耐寒獼猴桃水提取物的小鼠中，卵清蛋白特異性IgE水平降低到1/3之下，IgG1的水平顯著降低。在給予地塞米松的小鼠中，IgE和IgG1的水平具有相似的降低。
與細胞免疫性聯繫的IgG2a水平，在給予耐寒獼猴桃水提取物的小鼠中提高超過兩倍，然而，在給予地塞米松的小鼠中並沒有增加。
這表明耐寒獼猴桃提取物通過減少誘導過敏症狀的IgE，同時增加與正常免疫相聯繫的IgG2a，可以改善基礎過敏體質。還清楚的是，由於對過敏原特異性IgE的減少和對過敏原特異性IgG2a的增加一直是在免疫治療領域的主要目的，因此，當將耐寒獼猴桃當作過敏免疫治療助劑用於免疫治療中時，它可以提高治療效果。
表4

2-3對脾細胞細胞因子的表達分析為了分析給予耐寒獼猴桃提取物的小鼠脾細胞的細胞因子的表達，按照如下步驟從在實施例2-1中製備的脾臟中製備脾細胞。
在無菌條件下，將每份準備好的脾細胞匯聚和勻質化。
用RPMI-1640培養基洗滌脾細胞，通過尼龍篩(60μm孔徑)過濾以除去大的凝塊，離心(1500rpm，5mins)以分離沉澱的細胞，然後將細胞加入用10％FBS補充的RPMI-1640培養基中。
將按照上述方法製備的脾細胞接種在24孔板上(5×106個細胞/毫升/孔)，用100μg/ml卵清蛋白處理，在37℃，包含5％CO2的空氣中孵育3天。當培養結束後，收集培養溶液，然後用商用ELISA試劑盒檢測與過敏症相關的細胞因子(IL-4、IL-5、IL-12和幹擾素-γ)的濃度。
如表5所示，給予耐寒獼猴桃提取物的小鼠脾細胞中，IL4和IL-5(它們歸結為誘導過敏症的Th2細胞因子)的水平降低，IL-12和幹擾素-γ(它們歸結為抑制過敏症的Th1細胞因子)的水平升高。至於地塞米松處理的小鼠，Th1和Th2細胞因子均減少。
表5


經證實的，耐寒獼猴桃提取物可以通過特異的增加Th1細胞因子以及減少Th2細胞因子來防止和改善過敏性疾病，而地塞米松抑制整個免疫系統。
實驗實施例3人類PBMC中Th1/Th2的下調用聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-hypaque)從具有高基礎IgE血清水平的過敏患者的全血中製備人外圍血單核細胞(PBMCs)，用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI培養基培養。用耐寒獼猴桃提取物(100μg/ml)和植物血細胞凝集素(PHA，5μg/ml)一起處理PBMCs，在5％CO2，37℃培養，PHA是一種通常使用的具有免疫刺激作用的外源凝集素。四十八小時後，用ELISA檢測在細胞培養上清液中IL-5、IL-13、IL-10和幹擾素-γ的水平。
表6表明耐寒獼猴桃提取物顯著降低Th2細胞因子的血清水平IL-5和IL-13的水平分別降低了52％和47％，但是一種Th1細胞因子——幹擾素-γ的血清水平增加了3.2倍。這個結果顯示耐寒獼猴桃提取物可以提高Th1細胞因子的水平，同時降低Th2細胞因子的水平。以前已報導過，Th2細胞因子的下調作用可以有助於IgE的合成和過敏炎症的緩和。
表6

實驗實施例4人血清IgE水平的降低為了檢驗耐寒獼猴桃提取物是否可降低人血清IgE水平，在超過21天的周期中，每日經口給予兩位過敏患者(分別為患有過敏性鼻炎和過敏性皮炎的患者K和E，他們表現出高的IgE基礎血清水平)耐寒獼猴桃提取物(乾重1g)，每兩個星期用ELISA法檢測他們的IgE血清水平。
實驗結果表明兩位患者的IgE血清水平在42天後持續降低了2/3，在實驗期間患者E的皮炎症狀也有所改善(見表7)。
表7

實驗實施例5對從小鼠腹膜肥大細胞中組胺釋放的抑制作用從肥大細胞中組胺的釋放是過敏反應的主要原因之一。因此，通過從肥大細胞中的組胺釋放來檢驗耐寒獼猴桃提取物的作用。
用醚麻醉每隻小鼠，將含0.1％白明膠的20ml Tyrode緩衝液B(NaCl、葡萄糖、NaHCO3、KCl、NaH2PO4)注射入腹膜腔；然後輕柔按摩腹部大約90秒。小心打開腹膜腔，用巴氏德吸液管吸取包含腹膜細胞的液體。然後在室溫下以150×g將腹膜細胞沉積10分鐘，在Tyrode緩衝液B中重新混懸。按照文獻(Yurt et al.，J Exp Med.，1；146(5)，pp1405-19，1977)所述，從小鼠腹膜細胞的主組分中分離出肥大細胞。將懸浮於1ml Tyrode緩衝液B中的腹膜細胞層化在2ml 0.225g/ml的碘葡醯胺(密度1.120g/ml)上，並在室溫下以400×g離心15分鐘。吸取和棄去殘留在緩衝液-碘葡醯胺分界面上的細胞；將沉澱物(pellet)中的細胞洗滌，在1ml含鈣的Tyrode緩衝液A中重新懸浮。將脾細胞接種在每孔中有0.4ml培養基的24孔培養板(2×105個細胞/孔)中。在37℃將細胞整夜孵育，用0.5μg/ml抗脫氧核糖核蛋白24-牛血清白蛋白IgE(anti-DNP24-BSA IgE)致敏。在用IgE致敏細胞後，除去培養基，將細胞用0.5ml哌嗪-N，N-雙(2-乙磺酸)(PIPES)緩衝液洗滌兩次；在37℃，或者用200μl PIPES緩衝液(作為對照)、色甘酸(10-4M)，或者用耐寒獼猴桃提取物(100μg/ml)預培養10分鐘。用作為抗原的20g/ml DNP24-BSA刺激肥大細胞30分鐘，用ELISA(ALerCHEK)檢測釋放入介質的組胺。按照下式1可計算對組胺釋放的抑制作用。
抑制百分數＝100×(A-B)/(A-C)
所生產的LNG在低溫腔室中貯存和該系統通過使用多組分致冷劑體系被冷卻至-80℃和用液氮冷卻至-161℃。該低溫腔室維持在與閃蒸器相同的壓力下直至達到平衡條件為止，這樣能夠產生對於給定的組成範圍而言的蒸汽-液體平衡相位圖。
通過使用簡單的容積校正來測量在閃蒸器和低溫腔室的每一個之內的液面。在藍寶石池內的液面也能夠由肉眼透過該池的透明壁來觀察。
該系統的溫度通過使用在每一個腔室內部的溫度傳感器來監測，其中第三個溫度傳感器用於監測在低溫腔室和閃蒸器周圍的空氣浴。壓力傳感器位於空氣浴的外部，並在低溫腔室和閃蒸器的每一個的入口和出口。多口取樣閥為低溫腔室和閃蒸器的每一個所配備，以便在需要時對樣品進行在線的氣相色譜分析。
該系統通過使用磁力運轉的渦流來攪拌，直至觀察到二氧化碳的固體分離為止。該渦流促使較大密度的二氧化碳固體重力分離到腔室的底部。產生渦流的效果是將容器內的所形成固體帶向該容器的壁，在這裡讓它們向下遷移到容器的底部。該渦流能夠通過攪拌器由機械方式或通過在容器的底部包括旋液分離器來產生。
在第一系列的試驗中，具有如表1中所列出的已知組成的天然氣經由控制閥被引入到藍寶石池中。
表1.原料氣體*的GC分析

*(氣體包括ppm級的硫醇)
為了實驗，將15隻Nc/Nga小鼠(出生後7個星期，雌性)分成3組，適應新環境1周。自出生後8周起，作為治療組，經口給予在實施例1-1中製備的耐寒獼猴桃提取物(300μg/小鼠/天)；作為對照組，經口給予地塞米松(10μg/小鼠/天)或飲用水(100μg/小鼠/天)，給藥周期均為8周。為了比較皮炎症狀的進展，當小鼠長到12和14個星期大時，測定小鼠的搔癢頻率(在20分鐘的觀察期間用於搔癢的時間)。將16個星期大的小鼠處死，用ELISA法檢測血清中IgE、IgG1和IgG2a的水平的量。同時，為了比較Th1/Th2細胞因子的生成，從每隻小鼠中用常規方法製備脾細胞，轉移入24孔板(5×106個細胞/毫升/孔)中，用刀豆素A(ConA，1μg/ml)培養3天，然後用ELISA方法檢測IL-4、IL-5、IL-12和幹擾素-γ的水平。
已證實的，當測定搔癢的頻率時，耐寒獼猴桃提取物像甾體消炎劑地塞米松一樣抑制搔癢症狀(見圖2a出生後12周的結果，圖2b出生後14周的結果)。
表10表明給予耐寒獼猴桃提取物的小鼠的IgE血清水平顯著的降低。
在表11中，在脾細胞中，IL-4和IL-5的生成減少，幹擾素-γ和IL-12的生成明顯增多，該脾細胞是從給予耐寒獼猴桃提取物的小鼠中製備得到。耐寒獼猴桃提取物改善搔癢症狀，降低血清中IgE的濃度，抑制經由脾細胞的Th2細胞因子的生成(與地塞米松相似)，但不象地塞米松，耐寒獼猴桃明顯提高了IL-12和幹擾素-γ的水平，其已被熟知可以有助於過敏性疾病的緩解。
表10

表11

實驗實施例8毒性實驗為了檢定耐寒獼猴桃提取物的毒性，完成了關於小鼠的重複毒性實驗。
將10隻雌性Balb/c小鼠分為2組，以150mg/kg給予小鼠本發明的耐寒獼猴桃提取物(150mg/kg)，共4周，向對照組給予水。觀察4周內的毒性症狀，例如體重的改變、血液分析和組織檢驗。
作為實驗的結果，在給予150mg/kg本發明耐寒獼猴桃的大鼠中，沒有死亡的例子；在體重的增加、飼料的熱量攝取、血液分析和組織檢驗等方面均沒有顯著的異常。根據上述結果，證明耐寒獼猴桃是安全的。
(1)重量和行為觀察沒有觀察到重量或行為的不尋常的改變。
(2)血液學分析在白血球、淋巴細胞、單核細胞、嗜中性白細胞、嗜曙紅細胞、嗜鹼細胞、紅血球、血紅蛋白或血小板的數量方面，沒有觀察到異常的症狀。
(3)血清生化實驗在血清的天冬氨酸轉氨酶(AST)、丙氨酸氨基轉氨酶(ALT)、乳酸脫氫酶(LDH)、膽紅素、肌酸酐、葡萄糖、膽固醇、礦物質、白蛋白、尿素氮(BUN)、脂肪酶或澱粉酶的水平方面，沒有觀察到異常的症狀。
(4)組織學實驗在腎、脾、肝或胸腺的組織中沒有觀察到異常的症狀。
以下，將描述製劑方法和賦形劑的種類，但本發明並不限於此。如下，描述具有代表性的製備實施例。
注射劑的製備實施例1的耐寒獼猴桃水提取物 50mg間位二亞硫酸鈉 3.0mg對羥基苯甲酸甲酯 0.8mg對羥基苯甲酸丙酯 0.1mg注射用蒸餾水 適量注射劑的製備方法如下按照常規方法混合上述組分，並取2毫升，然後採用常規注射劑製備方法將所有組分填充入2毫升安瓿中，消毒。
片劑的製備實施例1的耐寒獼猴桃水提取物 50mg玉米澱粉100mg乳糖100mg硬脂酸鎂2mg通過混合上述組分和壓片來製備片劑。
膠囊劑的製備實施例1的耐寒獼猴桃水提取物 100mg玉米澱粉100mg乳糖100mg滑石粉 2mg硬脂酸鎂適量膠囊劑的製備方法如下混合上述組分並將其填入到按照常規白明膠製備方法得到的白明膠膠囊中。
液體製劑的製備耐寒獼猴桃的70％乙醇提取物 100mg蔗糖 20g果糖 20g檸檬香料 適量蒸餾水 100ml液體製劑的製備方法如下按照常規溶液劑製備方法將上述組分混合，然後填充入100ml棕色瓶中，消毒。
保健食品的製備實施例的1耐寒獼猴桃水提取物 1000mg維生素複合物20g維生素A醋酸鹽 70μg維生素E 1.0mg維生素B10.13mg維生素B20.15mg維生素B60.5mg維生素B120.2μg維生素C 10mg生物素 10μg煙醯胺(Amide nicotinic acid)1.7mg葉酸50μg泛酸鈣 0.5mg無機鹽混合物適量硫酸亞鐵1.75mg氧化鋅 0.82mg碳酸鎂 25.3mg磷酸二氫鉀 15mg磷酸二鈣55mg檸檬酸鉀90mg碳酸鈣 100mg氯化鎂 24.8mg可以在許多方面改變上述維生素和礦物質混合物。這樣的改變不被視為脫離本發明的精神和範圍。
保健飲料的製備實施例1的耐寒獼猴桃水提取物 1000mg檸檬酸 100mg低聚糖 100g
杏濃縮物2g牛磺酸 1g蒸餾水 900ml保健飲料的製備方法如下按照常規的保健飲料製備方法溶解活性組分，混合，在85℃攪拌1小時，過濾，然後將所有組分填充入2000ml的安瓿中，消毒。
潤膚液的製備實施例1的耐寒獼猴桃水提取物 1.00(％)甘油3.00乙醇1.00丙二醇 0.10香料微量蒸餾水 加至100％潤膚液的製備方法如下按照常規化妝液的製備方法溶解活性組分。
外用化妝液的製備方法實施例1的耐寒獼猴桃水提取物3.00(％)L-抗壞血酸-2-磷酸鎂1.00可溶性膠原質(1％溶液) 1.00檸檬酸鈉 0.10檸檬酸 0.051，3-丁二醇3.00蒸餾水 加至100％外用化妝液的製備方法如下按照常規化妝液的製備方法溶解活性組分。
乳膏的製備方法實施例1的耐寒獼猴桃水提取物3.00(％)聚乙烯乙二醇單硬脂酸酯 2.00單硬脂酸甘油酯 1.00鯨蠟醇 4.00角鯊烯 6.00三2-甘油乙基己酸 6.00
鞘糖脂1.001，3-丁二醇 7.00蒸餾水加至100％面膜的製備實施例1的耐寒獼猴桃水提取物 5.00(％)聚乙烯醇 13.00L-抗壞血酸-2-磷酸鎂 1.00月桂醯羥基脯氨酸 1.00可溶性膠原質(1％溶液) 2.001，3-丁二醇 3.00乙醇 5.00蒸餾水加至100％面膜的製備方法如下按照常規面膜的製備方法溶解活性組分。
美容液的製備實施例1的耐寒獼猴桃水提取物2.00(％)羥乙烯基纖維素(2％溶液)12.00黃原膠(2％溶液)2.001，3-丁二醇3.00濃縮甘油 4.00透明質酸鈉 5.00蒸餾水 加至100％美容液的製備方法如下按照常規美容液的製備方法溶解活性組分。
很明顯的，可以在許多方面改變如上所述的本發明。這樣的改變並不被視為脫離本發明的精神和範圍，所有這樣的修改，對本領域的技術人員是顯而易見的，應當將其包括在下述權利要求的範圍之內。
工業應用性如本發明所述，通過本發明的製備方法製備的耐寒獼猴桃提取物提高了血清中Th1細胞因子和IgG2a的水平，降低了血清中Th2細胞因子和IgE的水平，抑制了從肥大細胞中的組胺釋放，還抑制了炎症反應。根據此，可以將耐寒獼猴桃用於藥物組合物，以治療和預防過敏性疾病，例如過敏性反應、過敏性鼻炎、哮喘、遺傳性過敏性皮炎、食物過敏和風疹，和非過敏性炎性疾病。
此外，可以將耐寒獼猴桃提取物用於保健食品，以治療和預防過敏性疾病，例如過敏性反應、過敏性鼻炎、哮喘、遺傳性過敏性皮炎、食物過敏和風疹，和非過敏性炎性疾病。
權利要求
1.一種藥物組合物，其包含耐寒獼猴桃的粗提取物或非極性溶劑可溶的提取物，用於預防和治療過敏性疾病或非過敏性炎性疾病。
2.一種藥物組合物，其包含作為活性成分的耐寒獼猴桃的粗提取物或非極性溶劑可溶的提取物，用於過敏免疫療法的輔助治療。
3.權利要求1或2所述的藥物組合物，其中，所述耐寒獼猴桃選自軟棗獼猴桃、狗棗獼猴桃和木天蓼。
4.權利要求1或2所述的藥物組合物，其中，所述耐寒獼猴桃是它的果實、莖或根的任何一種。
5.權利要求1或2所述的藥物組合物，其中，所述粗提取物在極性溶劑中可溶，所述極性溶劑選自蒸餾水、低級醇類、或它們的混合物。
6.權利要求5所述的藥物組合物，其中，所述粗提取物在蒸餾水或70％乙醇中可溶。
7.權利要求1或2所述的藥物組合物，其中所述非極性溶劑是乙酸乙酯。
8.權利要求1或2所述的藥物組合物，其中，基於組合物的總重量，以重量計，提取物的量在0.01至50％的範圍內。
9.權利要求1所述的藥物組合物，其中，所述過敏性疾病包括過敏性反應、過敏性鼻炎、哮喘、過敏性結膜炎、過敏性皮炎、遺傳性過敏性皮炎、傳染性皮炎、風疹、昆蟲過敏、食物過敏和藥物過敏。
10.根據權利要求1至9之一所述的藥物組合物，其中，所述藥物組合物以片、粉末、膠囊、液體、混懸液、顆粒或糖漿的形式提供。
11.上述提取物在製備治療和預防哺乳動物或人的過敏性疾病和非過敏性炎性疾病的藥物組合物中的應用。
12.一種保健食品，其包含耐寒獼猴桃的粗提取物或非極性溶劑提取物，以及飲食學上可接受的添加劑，用於預防和改善過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
13.權利要求12所述的保健食品，其中，所述耐寒獼猴桃選自軟棗獼猴桃、狗棗獼猴桃和木天蓼。
14.權利要求12所述的保健食品，其中，所述耐寒獼猴桃是果實、莖或根。
15.權利要求12所述的保健食品，其中，所述過敏性疾病包括過敏性反應、過敏性鼻炎、哮喘、過敏性結膜炎、過敏性皮炎、遺傳性過敏性皮炎、傳染性皮炎、風疹、昆蟲過敏、食物過敏和藥物過敏。
16.權利要求12所述的保健食品，其中，所述粗提取物在非極性溶劑中可溶，所述非極性溶劑選自蒸餾水、低級醇類、或它們的混合物。
17.權利要求16所述的保健食品，其中，所述粗提取物在蒸餾水或70％乙醇中可溶。
18.權利要求12所述的保健食品，其中，基於組合物的總重量，以重量計，提取物的量在0.01至80％的範圍內。
19.權利要求12所述的保健食品，其中，所述保健食品以粉末、顆粒、片劑、膠囊或飲料的形式提供。
20.一種食品添加劑，其包含耐寒獼猴桃的粗提取物，用於預防和改善過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
21.權利要求20所述的食品添加劑，其中，所述耐寒獼猴桃的粗提取物還包含選自乳糖酪蛋白、糊精、葡萄糖、蔗糖和山梨醇的至少一種。
22.權利要求20所述的食品添加劑，其中，每100w/w％組合物中，添加劑的比例在大約0到20w/w％的範圍內。
23.根據權利要求20至22之一所述的食品添加劑，其中，將所述食品添加劑用於香料、調味料或食品原料。
24.權利要求23所述的食品添加劑，其中，可以通過沉積、噴霧或混合將所述食品添加劑添加到食品中。
25.權利要求20所述的食品添加劑，其中，所述食品是選自下述至少一種水果、蔬菜、食物脫水食品或例如水果和蔬菜的切片產品；果汁、蔬菜汁或它們的混合汁；包含酸性飲料的飲料；甜食，例如小甜餅、冰糖、飴糖、口香糖；麵包；冰淇淋、茶、例如酵母乳的發酵牛奶；乳製品、調味品、含酒精的飲料、罐頭、瓶裝食品、麵條、加工畜產品、加工海產品、發酵食品、豆類食品、穀類食品、加工肉類、甘草和果皮。
26.一種飼料添加劑，其包含耐寒獼猴桃的粗提取物，用於預防和治療動物的過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
27.權利要求26所述的飼料添加劑，其中，所述粗提取物可溶於極性溶劑，該極性溶劑選自蒸餾水，例如乙醇、甲醇、丁醇的低級醇，或它們的混合物。
28.權利要求26所述的飼料添加劑，其中，所述耐寒獼猴桃選自軟棗獼猴桃、狗棗獼猴桃和木天蓼。
29.權利要求26所述的飼料添加劑，其中，所述飼料添加劑以液體、粉末或顆粒的形式提供。
30.權利要求26所述的飼料添加劑，其中，通過沉積、噴霧或混合將所述飼料添加劑添加到飼料中。
31.一種飼料組合物，其包含權利要求26至30之一所述的飼料添加劑。
32.一種化妝品組合物，其包含耐寒獼猴桃的粗提取物，用於預防、改善和治療過敏性皮膚疾病和非過敏性皮膚炎性疾病。
33.權利要求32所述的化妝品組合物，其中，使用提取溶劑提取所述粗提取物，所述提取溶劑選自蒸餾水、例如乙醇、甲醇、丁醇的低級醇類、或它們的混合物。
34.權利要求32所述的化妝品組合物，其中，所述過敏性疾病包括遺傳性過敏性皮炎、傳染性皮炎、風疹、昆蟲過敏、食物過敏和藥物過敏。
35.權利要求32所述的化妝品組合物，基於組合物的總重量，以重量計，提取物的量在0.01至30％的範圍內。
36.根據權利要求32至35之一所述的化妝品組合物，其中，所述化妝品組合物以護膚品、外用化妝液、乳膏、香精、收縮水、乳液、面膜、膠漿、洗髮精、染髮水、潔面乳、沐浴液、洗滌液或護理品的形式提供。
37.一種化妝品添加劑，其包含耐寒獼猴桃的粗提取物，用於預防、改善和治療過敏性皮膚疾病和非過敏性皮膚炎性疾病。
全文摘要
本發明提供了一種藥物組合物，其包含作為活性成分的有效量的耐寒獼猴桃提取物，通過減少炎症反應，抑制組胺從肥大細胞中的釋放，提高血清中Th1細胞因子和IgG2a的水平，降低血清中Th2細胞因子和IgE的水平，以治療和預防過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。本發明還提供了上述提取物在製備藥物組合物中的應用。本發明還提供了一種保健食品或食品添加劑、一種化妝品組合物、一種飼料或飼料添加劑，其包含上述提取物，通過減少炎症反應，抑制組胺從肥大細胞中的釋放，提高血清中Th1細胞因子和IgG2a的水平，降低血清中Th2細胞因子和IgE的水平，用於預防或緩解過敏性疾病和非過敏性炎性疾病。
文檔編號A23L1/30GK1678333SQ03819990
公開日2005年10月5日 申請日期2003年8月12日 優先權日2002年8月23日
發明者金峰徹, 陳美琳, 樸銀珍, 鄭亨鎮, 申聖燮, 吳鎮桓, 李和峻, 金善榮, 全香 申請人:凡基因裡門