一種提取昆蟲dna的方法
2023-10-16 22:43:19 5
專利名稱：一種提取昆蟲dna的方法
技術領域：
本發明屬於實驗技術領域，特別涉及DNA提取方法。
背景技術：
昆蟲的DNA是其重要的遺傳物質，提取其DNA並進行研究為生命科學領域重要的研究內容，可用於DNA分類、多態性分析、基因工程等領域，因此提取DNA的數量和質量對於昆蟲方面的研究具有重要意義。近年來發展起來的利用昆蟲DNA進行其分子分類，可以對近緣類群、隱存種、殘缺標本、雌蟲等進行準確鑑定，是對傳統分類的重要補充。傳統的DNA提取技術和方法均需要將標本的全部或部分研磨至沒有明顯的塊狀物質，再利用蛋白酶消化細胞膜，然後利用有機溶劑(氯仿、異戊醇和酚等)去除蛋白質、保留核酸，最後收集基因組DNA。以上方法的主要缺點如下:(1)研磨標本破壞了蟲體，即可能浪費了珍稀標本又會使將來無從查對該標本；(2)在操作的過程中，需要使用氯仿、異戊醇和酚等有機溶劑，這不僅浪費試劑而且會對操作人員造成危害，還將汙染環境；(3)操作粗放，去除蛋白質的過程中損失較多的DNA，對珍惜標本是嚴重的浪費，相對而言傳統方法產率較低。
發明內容
本發明的目的是為了克服上述缺點，從而提供一種具有耗時短、質量高等優點，且因可保證蟲體的完整性，特別適用於小型昆蟲基因組DNA的提取。本發明是一種提取昆蟲DNA的方法，包括以下步驟:
(1)將待提取DNA的昆蟲 用70%乙醇洗滌，清洗昆蟲表面攜帶的雜質，再用雙蒸水洗滌3次，去除70%乙醇殘留；
(2)選取普通的離心管，放入整個昆蟲，裝入昆蟲3倍體積的STE溶液，將昆蟲浸在液面以下；再加入10%STE溶液體積的蛋白酶K，混合均勻；
(3)在56°C水浴中孵育I小時以上，獲得處理過的溶液，溶液中即含有該昆蟲的基因組
DNA。所述的STE 溶液為:0.1 mol/L NaCl ; 10 mmol/L Tris.HCl pH 8.0 ；I mmol/LEDTA pH 8.00本發明與現有技術相比，由以上技術方案可知，工藝簡化，節約時間，減少了氯仿、異戊醇和酚等有機溶劑的使用量；同時減少了有機溶劑對環境的汙染和操作人員的危害；不破壞標本即可以節約珍惜標本。
具體實施例方式一種提取昆蟲DNA的方法，包括以下步驟:
(I)將待提取DNA的昆蟲用70%乙醇洗滌，清洗昆蟲表面攜帶的雜質，再用雙蒸水洗滌3次，去除70%乙醇殘留；(2)選取普通的離心管，放入整個昆蟲，裝入昆蟲3倍體積的STE溶液，將昆蟲浸在液面以下；再加入10%STE溶液體積的蛋白酶K，混合均勻；
(3)在56°C水浴中孵育I小時以上，獲得處理過的溶液，溶液中即含有該昆蟲的基因組
DNA。所述的STE 溶液為:0.1 mol/L NaCl ; 10 mmol/L Tris.HCl pH 8.0 ；I mmol/LEDTA pH 8.00本發明與現有技術相比，由以上技術方案可知，工藝簡化，節約時間，減少了氯仿、異丙醇和乙醇等有機溶劑的使用量；同時減少了有機溶劑對環境的汙染和操作人員的危害；不破壞標本即可以 節約珍惜標本。
權利要求
1.一種提取昆蟲DNA的方法，其特徵在於:它包括以下步驟: (1)將待提取DNA的昆蟲用70%乙醇洗滌，清洗昆蟲表面攜帶的雜質，再用雙蒸水洗滌.3次，去除70%乙醇殘留； (2)選取普通的離心管，放入整個昆蟲，裝入昆蟲3倍體積的STE溶液可將昆蟲浸在液面以下； (3)按照10%的比例加入蛋白酶K，混合均勻； (4)在56°C水浴中孵育I小時以上，收集上述溶液於新的離心管中，_20°C保存備用，溶液中即含有該昆蟲的基因組DNA。
2.如權利要求1所述的提取昆蟲DNA的方法，其特徵在於:所述的STE溶液為:0.1mol/L NaCl ；10 mmol/L Tris.HCl pH 8.0 ；1 mmol/L EDTA pH 8.0。
全文摘要
一種提取昆蟲DNA的方法，該方法適用於小型昆蟲在不破壞蟲體的情況下提取其基因組DNA。包括以下步驟(1)將待提取DNA的昆蟲用70%乙醇洗滌，清洗昆蟲表面攜帶的雜質，再用雙蒸水洗滌3次，去除70%乙醇殘留；(2)將昆蟲放置在離心管中，加入昆蟲3倍體積的STE溶液，使蟲體完全浸在液面以下；(3)按照10%的比例加入蛋白酶K，混合均勻；(4)在56℃水浴中孵育1小時以上，收集上述溶液於新的離心管中，-20℃保存備用。該溶液中即含有昆蟲的基因組DNA。該方法具有保持蟲體完整，節約試劑，節約時間，工藝簡化等特點。
文檔編號C12N15/10GK103243090SQ20131021025
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月31日 優先權日2013年5月31日
發明者侯曉暉, 張雪梅, 呂彬, 韓曉靜 申請人:遵義醫學院