蛋白酶體抑制劑及其使用方法
2024-01-22 13:24:15
專利名稱：蛋白酶體抑制劑及其使用方法
技術領域：
本發明涉及有效用作蛋白酶體抑制劑和調節凋亡的硼酸和硼酸酯化合物。
背景技術：
蛋白酶體，(也稱作多催化蛋白酶(MCP)，多催化蛋白酶，多催化蛋白酶複合物，多催化內肽酶複合物，20S，26S，或ingensin)是存在於所有真核細胞的細胞質和核內的大的多蛋白複合物。它是高度保守的細胞結構，負責大多數細胞蛋白ATP-依賴的蛋白水解(Tanaka，Biochem Biophy.Res.Commun.，1998，247，537)。26S蛋白酶體由20S核心催化複合物組成，其在各末端被19S調控亞基加帽。古細菌20S蛋白酶體含有兩種不同類型亞基α和β的14個拷貝，形成由四個堆疊的環組成的圓柱狀結構。頂部和底部環各含有7個α亞基，而內部環含有7個β亞基。更複雜的真核20S蛋白酶體包括大約15個不同的20-30kDa亞基，並且特徵為與肽底物有關的三個主要活性。例如，蛋白酶體顯示胰蛋白酶的，胰凝乳蛋白酶的，和肽基穀氨醯基肽水解活性(Rivett，Biochem.J.，1993，291，1和Orlowski，Biochemisty，1990，29，10289)。此外，蛋白酶體具有獨特的活性位點機制，被認為利用蘇氨酸殘基作為催化性的親核試劑(Seemuller，等，Science，1995，268，579)。
26S蛋白酶體能夠降解通過添加泛素分子而被標記的蛋白。通常，泛素利用ATP和E1(泛素活化)和E2(泛素結合)酶而以多步驟方法與賴氨酸的ε-氨基連接。多泛素化的底物蛋白被26S蛋白酶體識別並降解。通常從複合物釋放多泛素鏈而泛素被再循環(Goldberg等，Nature，1992，357，375)。
許多調控蛋白是泛素依賴的蛋白水解的底物。許多這些蛋白起著生理性以及病理性細胞過程的調控因子的作用。蛋白酶體活性的改變已經與很多病理學包括神經退性性變疾病例如Parkinson氏病，阿爾茨海默氏病以及阻塞/局部缺血重新灌流損傷，和中樞神經系統老化相關。
泛素蛋白酶體途徑也在腫瘤生長中起重要作用。蛋白例如細胞周期蛋白，CDK2抑制劑，和腫瘤抑制劑受調控的降解據信對於細胞周期進行和有絲分裂是重要的。已知的蛋白酶體底物是腫瘤抑制物p53，其與數個細胞過程有關(參見，如，Ko，L.J.Genes Dev.，1996，10，1054)。腫瘤抑制劑p53已經顯示在數個造血細胞系中誘導凋亡(Oren，M.，Semin.Cancer Biol.，1994，5，221)。p53的誘導導致細胞生長停止在細胞周期的G1期以及由凋亡引起的細胞死亡。腫瘤抑制劑p53降解已知通過泛素蛋白酶體途徑進行，並且通過抑制蛋白酶體而幹擾p53降解是誘導凋亡的可能模式。
蛋白酶體也是通過降解轉錄因子NF-κB的抑制蛋白IκB而使該轉錄因子活化所需要的(Palombella等，Cell，1994，78，773)。NF-κB通過轉錄凋亡抑制劑而在維持細胞存活中起作用。阻斷NF-κB活性已經顯示使細胞更易於凋亡。
已經報導了蛋白酶體蛋白水解活性的數個抑制劑。參見，例如，Kisselev等，Chemistry Biology，2001，8，739。Lactacystin是特異性抑制蛋白酶體複合物的蛋白水解活性的鏈黴菌代謝物(Fenteany等，Science，1995，268，726)。該分子能夠抑制數個細胞類型的增殖(Fenteany等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1994，91，3358)。已經顯示lactacystin通過其β內酯部分不可逆地結合到位於蛋白酶體β亞基氨基末端的蘇氨酸殘基。
肽醛已經被報導抑制與蛋白酶體有關的胰凝乳蛋白酶樣活性(Vinitsky等，Biochemistry，1992，31，9421；Tsubuki等，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1993，196，1195；和Rock等，Cell，1994，78，761)。已經報導了體外IC50值為10-100nM的二肽醛抑制劑(Iqbal，M.等，J.Med.Chem.1995，38，2276)。也已經報導一系列來自α-酮羰基和硼酸酯衍生的二肽的同樣有效的體外抑制劑(Iqbal等，Bioorg.Med.Chem.Lett.1996，6，287，U.S.專利5,614,649；5,830,870；5,990,083；6,096,778；6,310,057；U.S.專利申請公開2001/0012854，和WO99/30707)。
以前已經報導N-末端肽基硼酸酯和酸化合物(U.S.專利4,499,082和4,537,773；WO91/13904；Kettner等，J.Biol.Chem.，1984，259，15106)。這些化合物被報導為某些蛋白水解酶的抑制劑。N-末端三肽硼酸酯和酸化合物已經顯示抑制癌症細胞的生長(U.S.專利5,106,948)。大量種類的N-末端三肽硼酸酯和酸化合物及其類似物已經顯示抑制腎素(U.S.專利5,169,841)。
已經報導了蛋白酶體肽酶活性的不同抑制劑。參見，如Dick等，Biochemistry，1991，30，2725；Goldberg等，Nature，1992，357，375；Goldberg，Eur.J.Biochem.，1992，203，9；Orlowski，Biochemistry，1990，29，10289；Rivett等，Archs.Biochem.Biophys.，1989，218，1；Rivett等，J.Biol.Chem.，1989，264，12215；Tanaka等，New Biol.，1992，4，1；Murakami等，Proc.Natl.Acad Sci.USA，1986，83，7588；Li等，Biochemistry，1991，30，9709；Goldberg，Eur.J.Biochem.，1992，203，9；和Aoyagi等，蛋白酶和生物調控(Proteases and BiologicalControl)，冷泉港實驗室出版社(1975)，pp.429-454。
Stein等，U.S.專利申請序列號08/212,909，1994年3月15日提交，報導有效用於降低動物中肌肉質量損失率和細胞內蛋白分解率的肽醛。該化合物據稱還降低動物中p53蛋白的降解率。Palombella等，WO95/25533，報導通過將動物細胞與蛋白酶體功能或泛素結合的肽醛抑制劑接觸，使用肽醛來降低動物NF-κB的細胞含量和活性。Goldberg和Rock，WO94/17816，報導使用蛋白酶體抑制劑來抑制MHC-I抗原遞呈。Stein等，U.S.專利5,693,617報導作為蛋白酶體抑制劑的肽醛有效降低動物蛋白的降解率。Lum等，U.S.專利5,834,487報導了26S和20S蛋白酶體被茚酮衍生物的抑制和使用茚酮衍生物抑制細胞增殖的方法。Wang等，U.S.專利6,075,150報導α-酮醯胺化合物有效治療由哺乳動物20S蛋白酶體介導的失調。France等，WO00/64863，報導使用2，4-二氨基-3-羥基羧酸衍生物作為蛋白酶體抑制劑。Yamaguchi等，EP1166781報導羧酸衍生物作為蛋白酶體抑制劑。Ditzel等，EP0995757報導蛋白酶體的二價抑制劑。Garcia-Echeverria等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，2001，11，1317報導非共價抑制20S蛋白酶體的胰凝乳蛋白酶樣活性的2-氨基苄基抑制素衍生物。
一些另外的蛋白酶體抑制劑可以包括硼部分。例如，Drexler等，WO00/64467，報導在活化的內皮細胞或具有高表達水平c-myc的白血病細胞中，通過使用含有蛋白酶體抑制劑的四肽硼酸酯選擇性誘導凋亡的方法。Furet等，WO02/096933報導2-[[N-(2-氨基-3-(雜芳基或芳基)丙醯)氨醯]氨基]-烷基硼酸和酯用於治療溫血動物的增殖性疾病。U.S.專利6,083,903；6,297,217；5,780,454；6,066,730；6,297,217；6,548,668；U.S.專利申請公開2002/0173488；和WO96/13266報導硼酸酯和硼酸化合物以及用於降低蛋白降解率的方法。U.S.專利6,465,433和WO01/02424也報導了使用某種硼酸和硼酸酯抑制病毒複製的方法。Plamondon等，U.S.專利申請公開2002/0188100報導硼酸和新的硼酸酐和硼酸酯化合物的藥學可接受的組合物。Gardner等，Biochem.J.，2000，346，447顯示一系列的二肽基和三肽基硼酸是20S和26S蛋白酶體的抑制劑。
其他含硼肽基和相關化合物報導於U.S.專利5,250,720；5,242,904；5,187,157；5,159,060；5,106,948；4,963,655；4,499,082；和WO89/09225，WO/98/17679，WO98/22496，WO00/66557，WO02/059130，WO03/15706，WO96/12499，WO95/20603，WO95/09838，WO94/25051，WO94/25049，WO94/04653，WO02/08187，EP632026，和EP354522。
如上述參考文獻所示，對於能調控蛋白酶體活性的藥學有著很大的需求。例如能夠抑制蛋白酶體活性的分子可以通過幹擾細胞周期蛋白或腫瘤抑制劑的有序降解而中止或延緩癌症進展。因此，對新的和/或改進的蛋白酶體抑制劑有著持續的需求。
發明概述本發明涉及有效用作蛋白酶體抑制劑並調控凋亡的新的硼酸和硼酸酯化合物。本發明還包括抑制與某些失調相關的多催化蛋白酶(「MCP」)，包括治療肌肉萎縮失調(wasting diorder)的方法。
在一個實施方案中提供通式(I)的化合物 其中組成部分以及優選的組成部分在下文中定義。
在另一個實施方案中本發明提供含有通式(I)的化合物和藥學可接受的載體的藥學組合物。
在另一個實施方案中本發明提供抑制蛋白酶體活性的方法，包括將通式(I)的化合物與所述蛋白酶體接觸。
在另一個實施方案中本發明提供治療癌症的方法，包括對具有或傾向於具有所述癌症的哺乳動物給藥治療有效量的通式(I)的化合物。
在另一個實施方案中本發明提供治療癌症的方法，包括對具有或傾向於具有所述癌症的哺乳動物給藥治療有效量的通式(I)的化合物，其中所述癌症選自皮膚癌，前列腺癌，結腸直腸癌，胰腺癌，腎癌，卵巢癌，乳腺癌，肝癌，舌癌，肺癌，和平滑肌組織癌。
在另一個實施方案中本發明提供治療癌症的方法，包括對具有或傾向於具有所述癌症的哺乳動物給藥治療有效量的通式(I)的化合物，其中所述癌症選自白血病，淋巴瘤，非-Hodgkin淋巴瘤，骨髓瘤，和多發性骨髓瘤。
在另一個實施方案中本發明提供治療癌症的方法，包括對具有或傾向於具有所述癌症的哺乳動物給藥治療有效量的通式(I)的化合物，並結合一種或多種抗腫瘤或抗癌劑和/或放射療法。
在另一個實施方案中本發明提供一種抑制轉錄因子NF-κB活性的方法，包括將轉錄因子NF-κB的抑制劑IκB與通式(I)的化合物接觸。
在另一個實施方案中本發明提供用於治療的通式(I)的化合物。
在另一個實施方案中本發明提供通式(I)的化合物在生產治療癌症的藥學中的應用。
該化合物的這些和其他的特徵將隨繼續公開的內容而以擴展的形式闡述。
發明實施方案的描述本發明提供能抑制蛋白酶體活性和可用於治療與蛋白酶體活性有關的疾病或失調的化合物等。本發明的化合物包括通式(I)的化合物或其藥學可接受的鹽，立體異構或互變異構形式 其中R1是C1-C4烷基；Y是H，CN，NO2，或胍基保護基團；Z是-CN，-C(＝O)OR5，苯二甲醯亞氨基，-NHSO2R6，或-NR3R4；R3是H或C1-C4烷基；R4選自芳基-SO2-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，和烷基-NHC(＝O)-；其中芳基或芳烷基任選被一個或多個甲基或甲氧基取代；R5是H，C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，其中R5任選被一個或多個滷素，C1-C4烷基，芳基，或雜芳基取代；R6是C1-C8烷基，C2-C8鏈烯基，C2-C8炔基，其中R6任選被一個或多個滷素，C1-C4烷基，芳基，或雜芳基取代；Q選自B(OR9)2，蒎烷二醇硼酸酯，頗哪醇硼酸酯，1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，1，2-二異丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，1，2-二環己基乙二醇硼酸酯，雙環己基-1，1』-二醇硼酸酯，和1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯；R9是H，C1-C4烷基，環烷基，環烷基烷基，芳基，或芳烷基；m是2，3，或4；以及
n是3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，或14。
在一些實施方案中R1是乙基，丙基，或丁基。
在一些實施方案中R1是2-丙基。
在一些實施方案中Q是蒎烷二醇硼酸酯。
在一些實施方案中Q是雙環己基-1，1』-二醇硼酸酯。
在一些實施方案中Q是B(OH)2。
在一些實施方案中Z是苯二甲醯亞氨基，NHR4，或CN。
在一些實施方案中n是8，9，10，或11。
在一些實施方案中m是3。
在一些實施方案中n是8，9，10，或11；以及m是3。
在一些實施方案中本發明提供通式(I)的化合物，或其藥學可接受的鹽，立體異構或互變異構形式， 其中
R1是2-丙基；Y是-NO2；Z是-CN，-C(＝O)OR5，苯二甲醯亞氨基，-NHSO2R6，或-NHR4；R4選自芳基-SO2-，烷基-SO2-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，和烷基-NHC(＝O)-；其中所述芳基或芳烷基任選被一個或多個甲基或甲氧基取代；R5是H或C1-C6烷基，其中所述烷基任選被一個或多個滷素，芳基，或雜芳基取代；R6是C1-C6烷基，其中所述烷基任選被一個或多個滷素，芳基，或雜芳基取代；Q選自B(OR9)2，蒎烷二醇硼酸酯，頗哪醇硼酸酯，1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，1，2-二異丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，1，2-二環己基乙二醇硼酸酯，雙環己基-1，1』-二醇硼酸酯，和1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯；R9是H或C1-C4烷基；m是3；以及n是4，5，6，7，8，9，10或11。
在一些實施方案中本發明提供通式(I-s)的化合物或其藥學可接受的鹽，立體異構或互變異構形式
其中R1是C1-C4烷基；Y是CN或NO2；Z是-CN，-C(＝O)OR5，苯二甲醯亞氨基，-NHSO2R6，或-NR3R4；R3是H或C1-C4烷基；R4選自芳基-SO2-，烷基-SO2-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，和烷基-NHC(＝O)-；其中所述芳基或芳烷基任選被一個或多個甲基或甲氧基取代；R5是H，C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，其中R5任選被一個或多個滷素，C1-C4烷基，芳基，或雜芳基取代；R6是C1-C8烷基，C2-C8鏈烯基，C2-C8炔基，其中R6任選被一個或多個滷素，C1-C4烷基，芳基，或雜芳基取代；Q選自B(OR9)2，蒎烷二醇硼酸酯，1，2-二環己基乙二醇硼酸酯，和雙環己基-1，1』-二醇硼酸酯；R9是H或C1-C4烷基；m是2，3，或4；以及n是3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，或14。
在一些實施方案中本發明提供通式(I-s)的化合物或其藥學可接受的鹽形式
在另一些實施方案中本發明提供選自以下實施例的通式(I-s)的化合物或其藥學可接受的鹽或游離鹼形式實施例10，實施例11，實施例12，實施例13，實施例14，實施例15，實施例16，實施例17，實施例18，實施例19，實施例20，實施例21，實施例22，實施例23，和實施例24。
應當理解，為了清楚起見，在分開的實施方案中描述本發明的某些特徵，這些特徵也可以組合在單一實施方案中提供。相反，為簡潔起見而在單一實施方案中描述的本發明的不同特徵也可以分開提供或以任何合適的亞組合形式提供。
這裡使用的「硼酸」指含有B(OH)2部分的化合物。在一些實施方案中，硼酸化合物可以通過硼部分的脫水而形成寡聚酐。例如，Snyder等，J.Am.Chem.Soc.，1958，80，3611報導寡聚芳基硼酸。因此，除非另有說明，「硼酸」，或含有B(OH)2部分的化學通式旨在包括游離硼酸，寡聚酐，包括但不限於二聚體，三聚體，四聚體及其混合物。
這裡使用的，「硼酸酐」或「硼酐」指將兩個或多個通式(I)的硼酸化合物分子組合，從硼酸部分失去一個或多個水分子而形成的化合物。當接觸水時，硼酸酐化合物可以被水化釋放游離硼酸化合物。在一些實施方案中，硼酸酐結構可以包含兩個，三個，四個或更多硼酸單元並可以具有環狀或線性構型。在一些實施方案中，硼酸酐化合物基本以單個寡聚體形式存在；然而硼酸酐還包括不同的寡聚硼酸酐以及游離硼酸的混合物。
本發明硼酸酐非限制性的例子包括通式(II)和(III)的化合物，其中G是通式(IV)的部分，而t是0到10或1，2，3，或4。
在一些實施方案中，硼酸酐化合物中至少大約80％的硼酸以單個寡聚酐形式存在。在另外的實施方案中，硼酸酐化合物中至少大約85，大約90，大約95，或大約99％的硼酸以單個寡聚酐形式存在。在一些實施方案中，硼酸酐化合物基本由單個寡聚硼酸酐組成。在另外的實施方案中，硼酸酐化合物由單個寡聚硼酸酐組成。在另外的實施方案中，硼酸酐化合物包含通式(III)的環硼氧烷(boroxine)，其中t是1。
硼酸酐化合物可以通過將對應的硼酸化合物暴露於脫水條件，包括例如，結晶，凍幹，加溫和/或暴露於乾燥劑而製備。一些合適的結晶溶劑包括乙酸乙酯，二氯甲烷，己烷，醚，苯，乙腈，乙醇及其混合物。
這裡使用的，「硼酯」或「硼酸酯」指硼酸化合物的酯衍生物。
這裡使用的，「環硼酸酯」用於表示通式-B(OR)(OR)的穩定的環狀硼部分，其中兩個R取代基合起來含有2到20碳原子，並任選含有N，S，或O的雜原子。環硼酸酯是本領域公知的。環硼酸酯的例子包括但不限於，蒎烷二醇硼酸酯，頗哪醇硼酸酯，1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，1，2-二異丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，1，2-二環己基乙二醇硼酸酯，雙環己基-1，1′-二醇，二乙醇胺硼酸酯，和1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯。
這裡使用的，術語「烷基」或「亞烷基」用於表示直鏈或支鏈的飽和烴基。烷基的例子包括甲基(Me)，乙基(Et)，丙基(如，n-丙基和異丙基)，丁基(如，n-丁基，異丁基，s-丁基，t-丁基)，戊基(如，n-戊基，異戊基，新戊基)等。烷基可以包括從大約1到大約20，從2到大約20，從1到大約10，從1到大約8，從1到大約6，從1到大約4，或從1到大約3個碳原子。
這裡使用的，「鏈烯基」指具有一個或多個碳碳雙鍵的烷基。鏈烯基的例子包括乙烯基，丙烯基，丁烯基，戊烯基，己烯基，丁間二烯基，戊間二烯基，己間二烯基等。
這裡使用的，「炔基」指具有一個或多個碳碳三鍵的烷基。炔基的例子包括乙炔基，丙炔基，丁炔基，戊炔基等。
這裡使用的，「滷烷基」指具有一個或多個滷素取代的烷基。滷烷基的例子包括CF3，C2F5，CHF2，CCl3，CHCl2，C2Cl5等。所有的氫原子被滷原子取代的烷基可以稱為「全滷烷基」。全滷烷基的例子包括CF3和C2F5。
這裡使用的，「碳環基」是飽和的(即不含有雙鍵或三鍵)或不飽和的(即，含有一個或多個雙鍵或三鍵)的環烴部分。碳環基可以是單環或多環的。碳環基的例子包括環丙基，環丁基，環戊基，環己基，環庚基，環戊烯基，1，3-環戊間二烯基，環己烯基，降冰片基(norbornyl)，降蒎基(norpinyl)，降蒈基(norcarnyl)，金剛烷基，苯基等。碳環基可以是芳族(如，「芳基」)或非芳族的(如，「環烷基」)。在一些實施方案中，碳環基可以具有從3到大約20，3到大約10，或3到大約7個碳原子。
這裡使用的，「芳基」指芳族碳環基，包括單環或多環芳烴例如苯基，萘基，蒽基，菲基等。在一些實施方案中，芳基具有從6到大約18個碳原子。
這裡使用的，「環烷基」指非芳族碳環基，包括環化的烷基，烯基，和炔基。環烷基可以包括雙環或多環系統。環烷基的例子包括環丙基，環丁基，環戊基，環己基，環庚基，環戊烯基，環己烯基，環己間二烯基，環庚三烯基，降冰片基，降蒎基，降蒈基，金剛烷基等。環烷基的定義還包括具有稠合到(即與其共享鍵的)環烷基環的一個或多個芳環的部分，例如，環戊烷的苯並衍生物(茚滿基)，環己烷的苯並衍生物(四氫萘基)等。
這裡使用的，「雜碳環基」可以是飽和的或不飽和的碳環基，其中碳環基的一個或多個成環碳原子被雜原子例如O，S，或N取代。雜碳環基可以是芳族的(如，「雜芳基」)或非芳族的(如「雜環烷基」)。雜碳環基對應於氫化或部分氫化的雜芳基。雜碳環基除了至少一個雜原子外可以包括從大約1到大約20，大約2到大約10，或大約2到大約7個碳原子，並可以通過碳原子或雜原子而連接。此外，雜碳環基可被取代或未取代。雜碳環基的例子包括嗎啉基，硫代嗎啉基，哌嗪基，四氫呋喃基，四氫噻吩基，2，3-二氫苯並呋喃基，1，3-苯並間二氧雜環戊烯，苯並-1，4-二噁烷，哌啶基，吡咯烷基，異噁唑烷基，異噻唑烷基，吡唑烷基，噁唑烷基，噻唑烷基，咪唑烷基等。
這裡使用的，「雜芳基」是芳族雜碳環基並包括具有至少一個雜原子環成員例如硫，氧或氮的單環和多環芳烴。雜芳基包括而不限於，吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，噠嗪基，三嗪基，呋喃基，喹啉基，異喹啉基，噻吩基，咪唑基，噻唑基，吲哚基，吡咯基，噁唑基，苯並呋喃基，苯並噻吩基，苯並噻唑基，異噁唑基，吡唑基，三唑基，四唑基吲哚基，1，2，4-噻二唑基，異噻唑基，苯並噻吩基，嘌呤基，咔唑基，苯並咪唑基等。在一些實施方案中，雜芳基可以具有從1到大約20個碳原子，在另外的實施方案中雜芳基具有從大約3到大約20個碳原子。在一些實施方案中，雜芳基具有1到大約4，1到大約3，或1到2個雜原子。
這裡使用的，「雜環烷基」指非芳族雜碳環基，包括環化的烷基，鏈烯基，和炔基，其中一個或多個成環碳原子被雜原子例如O，N，或S原子取代。還包括在雜環烷基的定義中的是具有一個或多個稠合(即共享鍵)到非芳族雜環的芳環的部分，例如鄰苯二甲醯亞胺基，萘二甲醯亞氨基均苯四酸二醯亞胺基，phthalanyl，和飽和的雜環的苯並衍生物例如吲哚烯基(indolene)和異吲哚烯基。
這裡使用的，「滷」或「滷素」包括氟，氯，溴和碘。
這裡使用的，「烷氧基」指-O-烷基基團。烷氧基的例子包括甲氧基，乙氧基，丙氧基(如，n-丙氧基和異丙氧基)，t-丁氧基等。
這裡使用的，「硫代烷氧基」指其中O原子被S原子取代的烷氧基。
這裡使用的，「芳氧基」指-O-芳基。芳氧基的例子是苯氧基。
這裡使用的，「芳烷基」指被芳基取代的烷基部分。芳烷基的例子包括苄基和萘甲基。在一些實施方案中，芳烷基具有從7到11個碳原子。
這裡使用的，「氨基」指NH2。「烷基氨基」指被烷基取代的氨基，而「二烷基氨基」指被兩個烷基取代的氨基。相反，「氨基烷基」指被氨基取代的烷基。
這裡使用的，「環烷基烷基」指被環烷基取代的烷基。
這裡使用的，「保護基團」指可以選擇性附加官能團例如羥基，氨基，和羧基並從其除去的化學官能團。保護基團通常被引入到化學化合物中以產生對該化合物所暴露的化學反應條件為惰性的官能團。多種保護基團中的任意一種可以用於本發明。氨基部分的保護基團稱為「氨基保護基團」，而胍基部分的保護基團稱作「胍基保護基團」。氨基和胍基保護基團可以具有通式芳基-SO2-，烷基-SO2-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，烷基-NHC(＝O)-等，其中所述烷基，芳基和芳烷基可以被取代或未取代。氨基和胍基保護基團的例子可以包括t-丁基氧羰基(BOC)，芴基甲氧基羰基(Fmoc)，苄氧基羰基(Cbz)，和苯二甲醯亞氨基。其他的保護基團包括如下部分 其他代表性的保護基團可以在T.W.Green和P.G.M.Wuts，有機合成中的保護基團(Protective Groups in Organic Synthesis)，第3版，Wiley Sons，Inc.，New York(1999)，其在此以全文引為參考。
這裡使用的，「取代的」表示化學基團中的至少一個氫原子被非氫部分取代。取代基的例子包括F，Cl，Br，I，C1-C6烷基，C1-C6鏈烯基，C1-C6，炔基，滷烷基，NRERF，N3，NO2，CN，CNO，CNS，C(＝O)ORE，RECO，REC(＝O)O，RECONRE，RERFNCO，脲基，ORE，SRE，SO2-烷基，SO2-芳基，和SO2-NRERF，其中RE和RF分別獨立是H或C1-C6烷基。或者，RE和RF可以與其上連接的氮組合形成5到7員雜環，例如吡咯烷基，哌啶基，嗎啉基，哌嗪基，和N-甲基哌嗪基。當此處的化學基團是「取代的」時，其可以具有多達全部化合價取代，只要得到的化合物是穩定的化合物或穩定的結構；例如，甲基可以被1，2，或3個取代基取代，亞甲基可以被1或2個取代基取代，苯基可以被1，2，3，4，或5個取代基取代等。
這裡使用的「穩定的化合物」或「穩定的結構」指足夠穩定能夠經歷從反應混合物中分離至有用程度的純度，並優選能夠配製成有效藥劑的化合物。本發明只涉及穩定的化合物。
此處描述的化合物可以是非對稱的(如，具有一個或多個立構中心)。所有的立體異構體，除非另有說明，包括例如對映異構體和非對映異構體。包含非對稱取代的碳原子的本發明的化合物可以以光學活性或外消旋形式分離。如何從光學活性起始材料製備光學活性形式的方法是本領域公知的，例如通過拆分外消旋混合物或立體選擇性合成。
本發明的化合物還包括互變異構形式，例如酮-烯醇互變異構體。互變異構形式可以處於平衡或通過合適的取代而立體鎖定於一種形式。
本發明的化合物還可以包括中間化合物或最終化合物中原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序數但質量數不同的那些原子。例如氫的同位素包括氚和氘。
「藥學可接受的」此處用於指化合物，材料，組合物和/或劑量形式，其在可靠的醫療判斷的範圍內適合用於與人類和動物的組織接觸而沒有過量毒性，刺激，過敏反應或其他問題和併發症，與合適的優點/風險比相稱。
本發明還包括此處所述化合物藥學可接受的鹽。這裡使用的「藥學可接受的鹽」指公開的化合物的衍生物，其中母體化合物通過轉化現有的酸或鹼部分而改性為其鹽形式。藥學可接受的鹽的例子包括但不限於，鹼性殘基例如胺的無機或有機酸的鹽；酸性殘基例如羧酸的鹼或有機鹽等。本發明藥學可接受的鹽包括例如從無毒的無機或有機酸形成的母體化合物的常規無毒鹽或季銨鹽。例如，這樣的常規無毒鹽包括從無機酸例如鹽酸，氫溴酸，硫酸，氨基磺酸，磷酸，硝酸等衍生的鹽；和從有機酸例如乙酸，丙酸，丁二酸，乙醇酸，硬脂酸，乳酸，蘋果酸，酒石酸，檸檬酸，抗壞血酸，雙羥萘酸(pamoic)，馬來酸，羥基馬來酸，苯乙酸，穀氨酸，苯甲酸，水楊酸，對氨基苯磺酸，2-乙酸基苯甲酸，富馬酸，甲苯磺酸，甲磺酸，甲基二磺酸，草酸，羥乙磺酸等製備的鹽。本發明藥學可接受的鹽可以從含有鹼性或酸性部分的母體化合物通過常規的化學方法合成。通常，這樣的鹽可以通過將這些化合物的游離酸或鹼形式與化學計量量的合適鹼或酸的水或有機溶劑，或上述兩者的混合物反應而製備。通常，非水介質如醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或乙腈是優選的。合適的鹽的列表可以在Remington藥學科學，第17版，Mack出版公司，Easton，Pa.，1985，p.1418中找到，其公開的內容在此引為參考。
合成本發明的化合物，包括其鹽和溶劑化物，可以使用已知的有機合成技術製備並根據眾多可能的任一合成途徑合成。
製備本發明的化合物的反應可以在合適的溶劑中進行，所述溶劑可以由有機合成領域的技術人員容易地選擇。合適的溶劑在反應進行的溫度，即從溶劑凝固點溫度到溶劑沸點溫度的範圍內基本不與起始材料(反應物)，中間產物，或產物反應。給定的反應可以在一種溶劑或一種以上溶劑的混合物中進行。根據具體的反應步驟，可以選擇對具體反應步驟合適的溶劑。
本發明的化合物的製備包括對不同化學基團的保護和去保護。保護和去保護的需求，和選擇合適的保護基團可以由本領域技術人員容易地決定。保護基團的化學性質可以在，例如，T.W.Green和P.G.M.Wuts，有機合成中的保護基團，第3版，WileySons，Inc.，NewYork(1999)中找到，其在此以全文引為參考。
本發明的化合物可以通過順序偶聯3個片段組分(F1，F2，和F3)而製備。
F1片段本發明的化合物的合成包括具有通式(A)所示結構的含硼片段(F1)。
F1的硼酸酯部分包括例如，二醇酯，例如通式(A)的環連接氧原子所示。
通式(A)中對硼原子的α位碳原子而言的立體化學可以使用非對稱的硼酸酯基在製備F1時進行控制。例如，硼酸的蒎烷二醇酯可以利於立體化學純或基本立體化學純的F1片段的製備。作為例子，F1片段的製備方法如下將通式(B)的化合物(顯示獲自(+)-蒎烷二醇的蒎烷二醇硼酸酯)與強鹼(如二異丙基氨基化鋰或二環己基氨基化鋰)在過量二氯甲烷或二溴甲烷存在下反應，隨後添加Lewis酸(如，ZnCl2，ZnBr2，或FeCl3)以產生在對硼為α位碳處具有新引入的立構中心的通式(C)的化合物(其中L是滷素)。
通式(B)的化合物還可以根據兩步方法製備，包括三烷氧基硼烷，優選三異丙氧基硼烷，與(1S，2S，3R，5S)-(+)蒎烷二醇反應產生單烷氧基[(1S，2S，3R，5S)-(+)蒎烷二醇]硼烷中間產物，其中三烷氧基硼烷中的兩個烷氧基已經被(1S，2S，3R，5S)-(+)蒎烷二醇取代。混合的蒎烷二醇烷氧基硼烷，在與合適的有機金屬衍生物例如Grignard試劑R1CH2MgBr或烷基鋰R1CH2Li反應後產生收率和純度高的化合物(B)。從三異丙氧基硼烷開始產生中間產物混合的蒎烷二醇異丙氧基硼烷(F)和通式(B)的化合物的方法顯示於下面的流程中。
通式(C)的化合物又可以與氨基鹼金屬(如，雙(三甲基甲矽烷基)氨基化鋰，雙(三甲基甲矽烷基)氨基化鈉，和雙(三甲基甲矽烷基)氨基化鉀)或其他有效轉化新形成的立構中心的親核試劑(例如通過SN2型機制)反應並引入氨基(NR2)取代滷素基團(如，氯)，形成通式(D)的化合物(其中R可以是，如烷基，Si(烷基)3，芳基，或芳烷基)。
通式(D)的化合物可以另外與能夠將NR2基團轉化為NH2，或其鹽的試劑反應，以形成基本能夠與另外的片段通過胺偶聯的F1片段。將NR2基團轉化為NH2的合適的試劑可以是質子酸，例如HCl，例如當R是甲矽烷基(如，三甲基甲矽烷基)時。
F2片段本發明的化合物的中間部分可以由片段F2表示，該片段通過用於形成F2-F1中間產物的肽鍵而連接到片段F1。通過肽鍵或醯胺鍵偶聯化合物的方法是本領域公知的，並描述於例如肽分析，合成，生物學(The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology)，第1卷，Gross等編，Academic出版社，1979。F2片段的例子以通式(E)(Pg是氨基保護基團，Y和m在此處定義)提供。另外，使用Boc或其他的氨基保護基團保護胺基酸的氨基是本領域公知的。
通式(E)的化合物是可商購或通過本領域技術人員已知的常規方法製備的胺基酸或胺基酸衍生物。
F3片段另一個片段(F3)可以通過形成肽鍵而連接到F2-F1中間產物的F2片段。通過肽鍵或醯胺鍵偶聯化合物的方法是本領域公知的，並描述於例如肽分析，合成，生物學(The PeptidesAnalysis，Synthesis，Biology)，第1卷，Gross等編，Academic出版社，1979。F2片段的例子提供於通式(F)(R2是H，Z和n此處定義)。
其他偶聯方法也是本領域已知的並且也是合適的。F3片段可以商購得到或用本領域技術人員已知的方法製備。
根據任何本領域已知的合適的方法監測反應。例如，可以通過光譜方法，例如核磁共振光譜(如，1H或13C)紅外光譜，分光光度測定(如，UV-可見)，或質譜，或通過色譜例如高壓液相色譜(HPLC)或薄層層析而監測產物形成。
本發明的化合物可以根據本領域描述的製備氨基硼酸，其酯和相關化合物的方法製備，例如U.S.專利4,537,773和5,614,649，其各自在此以全文引為參考。
包含硼酸酯，例如蒎烷二醇酯的本發明的化合物可以被任何合適的方法水解以製備對應的硼酸(-B(OH)2)衍生物。水解條件包括將硼酸酯與過量酸，例如質子酸如HCl反應。
相反，硼酸可以通過將酸化合物(-B(OH)2)與醇例如二醇接觸充足的時間以產生對應的酯而被酯化。酯化條件可以是酸或鹼催化的。
本發明將通過具體實施例更詳細地描述。下面的實施例被提供用於示例的目的，而不是用於以任何方式限制本發明。本領域技術人員將容易地認識到可以改變或調整多種非關鍵的參數以產生基本相同的結果。
實施例實施例1(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺鹽酸鹽的合成步驟12-(2-甲基丙基)-(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borole (+)-蒎烷二醇(23.9g，0.140mol)和2-甲基丙基硼酸(15g，0.147mol)的二乙基醚(300ml)的混合物在室溫攪拌24小時。混合物對無水硫酸鈉乾燥並通過柱層析純化(矽膠230-400目)，用己烷∶乙酸乙酯90∶10混合物洗脫。獲得清澈油狀產物(32.6g，收率94％)。
1H NMR(DMSO-d6)4.28(1H，dd，J＝8.8Hz，2.0)；2.30(1H，m)；2.18(1H，m)；1.96(1H，t，J＝5.3)；1.86(1H，m)；1.78(1H，set，J＝6.8)；1.68(1H，m)；1.30(3H，s)；1.25(3H，s)；1.01(1H，d)；0.9(6H，d，J＝6.6)；0.81(3H，s)；0.69(2H，m).
步驟22-[(1S)-1-氯-3-甲基丁基]-(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borole 通過在-50℃向二異丙基胺(35.7ml，0.254mol)的無水四氫呋喃(60ml)溶液添加10.0M丁基鋰的己烷溶液(25.4ml，0.254mol)，並使溫度上升到-30℃而製備二異丙基氨基化鋰溶液。通過導管將溶液轉移到步驟1的2-(2-甲基丙基)-(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borole(50g，0.212mol)和CH2Cl2(50ml，0.848mol)的無水四氫呋喃(700ml)的溶液中，同時保持溫度低於-70℃。然後在30分鐘內添加1.0M乾燥氯化鋅的二乙基醚(339ml，0.339mol)溶液同時保持內部溫度低於-70℃。反應混合物-78℃攪拌3小時，然後加溫到室溫。通過旋轉蒸發除去溶劑後，在石油醚(1000ml)和10％氯化銨水溶液(800ml)之間分配殘餘物。進一步用石油醚(300ml)提取水相。組合的有機相對無水硫酸鈉乾燥並濃縮。獲得含有大約9％mol/mol起始物質(1H-NMR)的褐色油狀產物(59.0g，收率98％)，並且無須進一步純化而用於後續步驟。
1H NMR(DMSO-d6)4.33(1H，dd，J＝1.5Hz，8.6)；2.58(1H，m)；2.29(1H，m)；2.18(1H，m)；1.95(1H，t，J＝5.9)；1.85(1H，m)；1.9-1.55(3H，m)；1.31(3H，s)；1.24(3H，s)；1.17(1H，m)；1.01(1H，d，J＝10.6)；0.85(3H，d，J＝6.6)，0.83(3H，d，J＝6.6)；0.80(3H，s)；0.08(18H，s).
步驟3N，N-雙(三甲基甲矽烷基)-(1R)-1-(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺 向步驟2的粗製2-[(1S)-1-氯-3-甲基丁基]-(3As，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borole(59.0g，純度91％，0.189mol)的四氫呋喃(580ml)溶液中30分鐘內添加1.0M雙(三甲基甲矽烷基)氨基化鋰的四氫呋喃(189ml，0.189mol)溶液，同時保持冷卻在-78℃。反應混合物緩慢升溫到室溫過夜。通過旋轉蒸發除去溶劑，用無水己烷(800ml)吸收殘餘物。得到的懸液在室溫攪拌2小時，然後通過塞裡餅(celite cake)過濾而除去固體，用無水己烷(3×100ml)洗滌該餅。濾出物被濃縮以實際上可觀的收率產生棕色油狀的純度合用的產物(79g)。該產物無需進一步純化步驟而用於下一步。
1H NMR(DMSO-d6)4.33(1H，dd，J＝1.5Hz，8.6)；2.58(1H，m)；2.29(1H，m)；2.18(1H，m)；1.95(1H，t，J＝5.9)；1.85(1H，m)；1.9-1.55(3H，m)；1.31(3H，s)；1.24(3H，s)；1.17(1H，m)；1.01(1H，d，J＝10.6)；0.85(3H，d，J＝6.6)，0.83(3H，d，J＝6.6)；0.80(3H，s)；0.08(18H，s)。
步驟4(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺鹽酸鹽 向步驟3的粗N，N-雙(三甲基甲矽烷基)-(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺(79g，0.193mol)的二噁烷(100ml)和二乙基醚(200ml)的混合物的溶液中添加4N鹽酸的二噁烷(193ml，0.772mol)溶液，同時冷卻在0℃。然後在室溫攪拌該混合物4小時並濃縮。用無水己烷(500ml)吸收殘餘物並添加2M鹽酸的二乙基醚(48ml，0.096mol)溶液。混合物在0℃攪拌1小時，然後濃縮。用無水己烷(500ml)吸收殘餘物，得到的懸液在室溫攪拌過夜。過濾收集固體並真空乾燥得到38.1g產物(收率66％)。從母液再次獲得產物(4.13g，收率7％)。
1H NMR(DMSO-d6)7.85(3H，br)；4.45(1H，dd，J＝9.2Hz)；2.78(1H，m)；2.34(1H，m)；2.21(1H，m)；2.01(1H，t，J＝5.3)；1.89(1H，m)；1.82-1.65(2H，m)；1.49(1H，m)；1.38(3H，s)；1.27(3H，s)；1.12(1H，d，J＝1.12)；0.87(6H，d，J＝6.6)；0.83(3H，s)。
實施例2N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯
方法AHOAt/HATU向BocNH(NO2)ArgOH(15.7g，49.3mmol)的無水DMF(100ml)溶液中添加HATU(O-(7-氮雜苯並三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基uronium六氟磷酸鹽；18.7g，49.3mmol)和HOAt(1-羥基-7-氮雜苯並三唑；6.71g，49.3mmol)。混合物被冷卻到0℃並添加N-甲基嗎啉(13.6ml，0.123mol)。10分鐘後，添加實施例1的(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺鹽酸鹽(12.4g，41.1mmol)。除去冷卻浴並將混合物在室溫攪拌4.5小時。混合物用乙酸乙酯(800ml)稀釋，用2％檸檬酸溶液(2×150ml)，2％NaHCO3溶液(2×150ml)和2％NaCl溶液(2×150ml)洗滌。進一步用乙酸乙酯(150ml)抽提水相。組合的有機相對硫酸鈉乾燥並濃縮。得到的油狀殘餘物重溶解於乙酸乙酯(500ml)並用冷水(200ml)洗滌該溶液。進一步用乙酸乙酯(150ml)抽提水相。組合的有機相對硫酸鈉乾燥並濃縮。殘餘物溶解於二乙基醚(100ml)並且將溶液在攪動下緩慢添加到己烷(600ml)中。過濾收集白色固體(43.4g)並經柱層析純化，開始用50∶50己烷∶乙酸乙酯混合物然後用乙酸乙酯洗脫。濃縮含有產物的級分，殘餘物溶解在二乙基醚(100ml)中並且在攪拌下將得到的溶液緩慢添加到己烷(600ml)中。過濾收集白色固體(15.2g，收率66％)。
方法BIBCF向BocNH(NO2)ArgOH(5.82g，18.2mmol)的無水二氯甲烷(100ml)懸液中添加N-甲基嗎啉(2.0ml，18.2mmol)。混合物被冷卻到-15℃，然後加入異丁基氯甲酸酯(2.37ml，18.2mmol)。混合物在-15℃攪拌10分鐘然後加入實施例1獲得的(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基胺鹽酸鹽(5.0g，16.6mmol)，隨後立即加入N-甲基嗎啉(2.0ml，18.2mmol)。反應混合物在-15℃攪拌1.5小時，然後加溫到室溫並在乙酸乙酯(150ml)，水(150ml)和0.1N鹽酸(10ml)之間分配。用NaHCO3的飽和溶液洗滌有機相，對無水硫酸鈉乾燥並濃縮。通過從乙酸乙酯中結晶純化油狀殘餘物提供3批純度適合的產物(5.03g，收率54％)。
1H NMR(DMSO-d6)8.80(1H，br)；8.50(1H，br)，7.87(2H，br)；7.01(1H，d，J＝7.9)，4.07(1H，dd，J＝7.9)；4.0(1H，m)；3.12(2H，m)；2.55(1H，m)；2.2(1H，m)；2.01(1H，m)；1.83(1H，t，J＝5.1)；1.78(1H，m)；1.74-1.44(7H，m)；1.38(9H，s)；1.33(1H，d，J＝10.3)；1.24(5H，s)；1.22(3H，s)；0.84(6H，d，J＝6.6)；0.81(3H，s)實施例3N-[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]-(2S)-2-氨基-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]戊醯胺鹽酸鹽 方法A將4N鹽酸的二噁烷(15ml)溶液添加到實施例2的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(4.04g，7.06mmol)的二噁烷(40ml)和二乙基醚(7ml)混合物的溶液中，同時保持冷卻在0℃。反應混合物被加溫到室溫，並繼續攪拌4小時。通過旋轉蒸發除去溶劑，殘餘物用二乙基醚(50ml)處理，混合物在室溫攪拌3天。過濾收集得到的固體，產生3.18g純產物(收率90％)。
方法B實施例2的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(3g，5.3mmol)被溶解於Et2O(40mL)並在0℃、氮氛下滴加大約10％HCl的Et2O(20mL)溶液。反應混合物被加溫到室溫並再攪拌5小時。
傾出溶劑，用Et2O(20mL)洗滌過兩次的殘餘物被真空乾燥產生白色粉末狀的標題化合物(2.43g，收率91％)。
1H NMR(DMSO-d6)8.56(2H，br)；8.22(3H，br)；7.97(2H，br)；4.28(1H，dd，J＝8.6Hz，2.01)；3.77(1H，m)；3.04(1H，m)；2.28(1H，m)；2.11(2H，m)，1.92(1H，t，J＝5.5)；1.83(1H，m)；1.79-1.59(4H，m)；1.59-1.37(3H，m)；1.31(4H，s)；1.24(3H，s)；1.19(1H，d，J＝10.4)；0.88(3H，d，J＝6.0)；0.86(3H，d，J＝6.0)；0.81(3H，s)。
實施例4[(1R)-1-[[(2S)-2-氨基-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸鹽酸鹽 實施例2的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(3.1g，5.48mmol)在0℃、氮氛下被小心溶解於20mL 37％HCl；所得混合物被加溫到室溫並攪拌過夜。用Et2O洗滌反應混合物直至完全除去蒎烷二醇；濃縮水溶液至乾燥並真空乾燥產生1.82克(4.93mmol，收率90％)標題化合物，無須進一步純化即可使用。
1H-NMR(DMSO+D2O+TFA)3.78(m，1H)；3.19(m，2H)；3.09(m，1H)；1.71(m，2H)；1.70-1.48(m，3H)；1.49-1.23(m，2H)；0.89(d，J＝5.8Hz，3H)；0.88(d，J＝5.8Hz，3H)。
實施例510-(1，3-二氧-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-癸酸 步驟12-十一碳-10-烯基-1，3-二氧-1，3-二氫異吲哚向10-十一碳烯-1-醇(4.23g，24.8mmol)，苯鄰二甲醯亞胺(3.65g，24.8mmol)和三苯基膦(6.51g，24.8mmol)的無水四氫呋喃(30ml)混合物中，緩慢添加DEAD(3.9ml，24.8mmol)的無水四氫呋喃(10ml)溶液，同時保持溫度低於8-10℃。兩小時後再添加DEAD(1.0ml，6.37mmol)和三苯基膦(1.3g，4.96mmol)，混合物在室溫攪拌過夜。濃縮反應混合物並用二乙基醚(50ml)研碎殘餘物。過濾除去固體並用二乙基醚(2×50ml)洗滌。濃縮組合的濾出物並用己烷(50ml)在40℃研碎殘餘物。過濾除去所得固體並用己烷(2×50ml)洗滌。濃縮組合的濾出物並通過柱層析純化用10∶2己烷∶乙酸乙酯混合物洗脫。獲得低熔點白色固體產物(4.9g，收率66％)。
M.p.25-30℃。1H NMR(DMSO-d6)7.83(4H，m)；5.76(1H，m)；4.96(1H，dq，J＝17.2，1.6Hz)；4.90(1H，ddt，J＝10.2，2.2，1.1)；3.54(2H，t，J＝7.1)，1.97(2H，q，J＝6.7)；1.56(2H，m)；1.35-1.15(14H，m)。
步驟210-(1，3-二氧-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-癸酸。
步驟1的2-十一碳-10-烯基-1，3-二氧-1，3-二氫異吲哚(2g，6.68mmol)和Aliquat336(0.2g)的己烷(20ml)和乙酸(6ml)混合物的溶液被滴加到高錳酸鉀(2.76g，20mmol)的水(28ml)溶液中，同時保持冷卻在0℃。反應混合物在室溫攪拌7小時，然後添加亞硫酸氫鈉水溶液直至紫色消失。然後用乙酸乙酯抽提混合物，將有機相對硫酸鈉乾燥並濃縮。殘餘物通過矽膠柱層析純化用2∶1己烷∶乙酸乙酯混合物洗脫。獲得白色固體產物(1.29g，收率61％)。M.p.58-60℃。
1H NMR(DMSO-d6)11.95(1H，br)；7.85(4H，m)；3.55(2H，t，J＝7.2Hz)；2.17(2H，t，J＝7.2Hz)；1.7-1.4(4H，m)；1.22(10H，m)。
實施例66-(乙基磺醯氨基)己酸乙磺醯氯(3.9ml，41.1mmol)的二噁烷(10ml)溶液被添加到6-氨基己酸(2g，15.2mmol)的1N NaOH(56ml)和二噁烷(10ml)溶液中，同時在0-5℃攪拌。通過添加25％氫氧化鈉溶液將反應混合物的pH調整為8-9。混合物被加溫到室溫並攪拌30分鐘。再添加25％NaOH溶液以調整pH至大約11。在3.5h後添加1N鹽酸(15ml)和乙酸乙酯(60ml)。將有機相對硫酸鈉乾燥並濃縮。殘餘物用二乙基醚(5ml)和己烷(15ml)的混合物研碎。過濾收集固體並乾燥產生1.3g標題化合物(收率40％)。
1H NMR(DMSO-d6)11.9(1H，s)；6.97(1H，t，J＝5.7Hz)；2.97(2H，q，J＝7.1)；2.88(2H，q，J＝6.6)；2.2(2H，t，J＝7.3)；1.47(4H，m)；1.29(2H，m)；1.18(3H，t，J＝7.3)。
實施例78-(乙基磺醯氨基)辛酸乙磺醯氯(1.5ml，15.7mmol)的二噁烷(5ml)溶液被添加到8-氨基辛酸(1g，6.28mmol)的1N NaOH(22ml)和二噁烷(5ml)溶液中，同時在0-5℃攪拌。混合物被加溫到室溫並攪拌3.5分鐘。在該階段中，每隔1小時通過添加25％氫氧化鈉溶液將混合物的pH調整為7-8。該反應混合物用二乙基醚(30ml)洗滌。通過添加1N鹽酸將pH調整為1-2並用乙酸乙酯(70ml)抽提混合物。將有機相對硫酸鈉乾燥並濃縮。殘餘物用二乙基醚的混合物研碎。過濾收集固體並真空乾燥產生600mg標題化合物(收率38％)。
1H NMR(DMSO-d6)11.9(1H，s)；6.96(1H，t，J＝6Hz)；2.96(2H，q，J＝7.1)；2.88(2H，q，J＝6.6)；2.2(2H，t，J＝7.3)；1.45(4H，m)；1.26(6H，m)；1.18(3H，t，J＝7.3)。
實施例10N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-10-(1，3-二氧-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-癸醯胺 IBCF方法偶聯向根據實施例5製備的10-(1，3-二氧-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-癸酸(353mg，1.11mmol)的無水二氯甲烷(10ml)溶液中添加N-甲基嗎啉(122μl，1.11mmol)。混合物被冷卻到-15℃，然後緩慢加入異丁基氯甲酸酯(144μl，1.11mmol)。15分鐘後加入實施例3的N-[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]-(2S)-2-氨基-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]戊醯胺鹽酸鹽(508mg，1.01mmol)並再加入N-甲基嗎啉(122μl，1.11mmol)。在-15-10℃攪拌反應混合物4小時，然後濃縮到小體積並在乙酸乙酯(20ml)和水(10ml)之間分配。進一步用乙酸乙酯(10ml)抽提水相。組合的有機相對硫酸鈉乾燥並濃縮。用乙酸乙酯(3ml)吸收殘餘物並將溶液滴加到己烷(120ml)中，同時室溫下攪拌。傾出液體而收集固體並真空乾燥(730mg，94％)。
1H NMR(DMSO-d6)8.81(1H，d，J＝2.7Hz)；8.52(1H，br)；7.98(1H，d，J＝8.05)；7.88(2H，br)；7.85(4H，m)；4.34(1H，m)；4.06(1H，dd，J＝7.1)；3.56(2H，t，J＝7.14)；3.14(2H，m)；2.55(1H，m)；2.19(1H，m)；2.10(2H，t，J＝7.14)；2.0(1H，m)；1.82(1H，t，J＝5.7)；1.78(1H，m)；1.73-1.35(10H，m)；1.31(1H，d，J＝9.9)；1.24(19H，m)；0.84(9H，m)；0.79(3H，s)。
實施例11N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-12-[(1，1-二甲基乙氧基)羰基氨基]十二醯胺 手性根據上述實施例10的方法，從12-叔-丁氧基羰基氨基-十二酸和實施例3的產物使用合適的試劑和反應條件製備標題化合物。分析數據1H NMR(DMSO-d6)8.81(1H，d，J＝2.4)；8.52(1H，br)；7.98(1H，d，J＝8.05)；7.85(2H，v.br)；6.73(1H，t，J＝5.3)；4.33(1H，m)；4.07(1H，d，J＝8.4)；3.14(2H，m)；2.88(2H，q，J＝6.6)；2.56(1H，m)；2.19(1H，m)；2.10(2H，t，J＝7.1)；2.01(1H，m)；1.83(1H，t，J＝5.7)；1.78(1H，m)；1.73-1.41(8H，m)；1.36(9H，s)；1.33-1.15(25H，m)；0.84(6H，d，J＝6.5)；0.80(3H，s)。
實施例12N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]4-(甲氧基羰基)庚醯胺
手性根據上述實施例10的方法，從辛二酸單甲基酯和實施例3的產物使用合適的試劑和反應條件製備標題化合物。分析數據1H-NMR(DMSO-d6)8.80(1H，br s)；8.51(1H，br)；7.98(1H，d，J＝8.0Hz)；8.3-7.5(2H，br)；4.32(1H，m)；4.06(1H，br d，J＝8.4)；3.12(2H，m)；2.55(1H，m)；2.26(2H，t，J＝7.3)；2.18(1H，m)；2.09(2H，t，J＝7.1)；2.01(1H，m)；1.85-1.2(19H，m)；1.23(3H，s)；1.21(3H，s)；0.83(6H，d，J＝6.6)；0.79(3H，s)。
實施例13N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基-11-氰基十一醯胺 手性PS-碳二亞胺(N-環己基碳二亞胺-N′-丙氧基甲基聚苯乙烯，769mg，1mmol，載荷1.31mmol/g)和HOAt(1-羥基-7-氮雜苯並三唑，115mg，0.85mmol)被添加到11-氰基十一酸(115mg，0.54mmol)的二氯甲烷(DCM)(9mL)溶液中。攪拌10分鐘後添加實施例3的N-[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]-(2S)-2-氨基-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]戊醯胺鹽酸鹽(251mg，0.50mmol)和DIPEA(0.128ml，0.75mmol)。懸液在室溫搖動過夜然後濾去PS碳二亞胺並用DCM洗滌數次(4×6mL)。將有機相通過用飽和NaHCO3預處理的用於液液抽提的VARIANCHEM ELUT柱體，最後用DCM(15mL)洗滌。蒸發溶劑，將粗反應物用常相ISOLUTE SPE-SI柱(DCM9，MeOH1)純化以產生200mg所需的化合物(收率61％)。NMR(CDCl3)7.53(s，br，2H)；7.36(d，br，J＝4.7Hz，1H)；6.88(d，J＝8.2Hz，1H)；4.46(m，1H)；4.15(dd，J＝8.5，1.9Hz，1H)；3.19(m，2H)；2.93(m，1H)；2.23(t，J＝7.2Hz，2H)；2.21(m，1H)；2.09(t，J＝7.5，2H)；2.04(m，1H)；1.88(t，J＝5.4Hz，1H)；1.77(m，1H)；1.69(m，1H)；1.64-1.43(m，9H)；1.40-1.26(m，4H)；1.26(s，3H)；1.24-1.12(m，16H)；0.80(d，J＝6.6，3H)；0.79(d，J＝6.6，3H)；0.73(s，3H)。LC-MS 659.7，MH+ESI POS；AQA；噴霧器4kV/撇乳器20V/探針250℃。
實施例14N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-9-氰基壬醯胺 手性根據上述實施例13的方法，從9-氰基壬酸和實施例3的產物使用合適的試劑和反應條件製備標題化合物。分析數據MSMH+632.5實施例15N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基-6-(乙醯氨基)己醯胺 手性根據上述實施例13的方法，從6-乙醯氨基-己酸和實施例3的產物使用合適的試劑和反應條件製備標題化合物。分析數據MS[MH]+622.3實施例16N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-12-(1，3-二氧-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-十二醯胺 手性根據上述實施例13的方法，從11-(1，3-二氧-1，3-二氫-異吲哚-2-基)-十一酸和實施例3的產物使用合適的試劑和反應條件製備標題化合物。分析數據MS[MH]+794.42實施例17N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-6-(乙磺醯氨基)己醯胺 向實施例6的6-(乙基磺醯氨基)己酸(90mg，0.40mmol，1.2當量)的無水DMF(10ml)溶液中，添加TBTU((N，N，N』，N』-四甲基-O-(苯並三唑-1-基)uronium四氟硼酸鹽；130mg，0.40mmol，1.2當量)。混合物用冰浴冷卻到0-5℃並添加NMM(0.12ml，1.08mmol，2.7當量)。數分鐘後，添加實施例3的N-[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]-(2S)-2-氨基-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]-氨基]戊醯胺鹽酸鹽(170mg，0.33mmol，1當量)。混合物在室溫攪拌2小時，注入水(150ml)中並用乙酸乙酯(2×50ml)抽提。用檸檬酸2％(20ml)，碳酸氫鈉2％(20ml)，和NaCl2％(20ml)溶液洗滌有機相，對無水硫酸鈉乾燥，並減壓蒸發。通過柱層析純化殘餘物(矽膠，洗脫劑乙酸乙酯)產生30mg無定形固體(收率13％)。
分析數據1H-NMR(DMSO-d6)8.83(1H，d，J＝2.7Hz)；8.51(1H，br)；8.00(1H，d，J＝8.0Hz)；8.3-7.5(2H，br)；6.94(1H，t，J＝5.8)4.32(1H，m)；4.06(1H，dd，J＝1.8，8.6)；3.13(2H，m)；2.95(2H，q，J＝7.3)；2.87(2H，q，J＝6.7)；2.55(1H，m)；2.19(1H，m)；2.10(2H，t，J＝7.5)；2.00(1H，m)；1.85-1.1(17H，m)；1.24(3H，s)；1.21(3H，s)；1.16(3H，t，J＝7.5)；0.83(6H，d，J＝6.6)；0.79(3H，s)。
實施例18N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-6-苯磺醯氨基己醯胺 根據上述實施例17的方法，從8-苯磺醯氨基-己酸和實施例3的產物使用合適的試劑和反應條件製備標題化合物。分析數據1H-NMR(DMSO-d6)8.83(1H，d，J＝2.8Hz)；8.51(1H，br)；7.97(1H，d，J＝7.8Hz)；8.2-7.6(2H，br)；7.77(2H，m)；7.65-7.5(4H，m)；4.31(1H，m)；4.05(1H，dd，J＝1.8，8.6)；3.12(2H，m)；2.69(2H，q，J＝7.0)；2.54(1H，m)；2.20(1H，m)；2.05(2H，t，J＝7.5)；2.01(1H，m)；1.85-1.1(21H，m)；1.22(3H，s)；1.21(3H，s)；0.82(6H，d，J＝6.6)；0.79(3H，s).
實施例19N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基-8-(乙磺醯氨基)辛醯胺 根據上述實施例17的方法，從8-乙磺醯氨基-辛酸(實施例7)和實施例3的產物使用合適的試劑和反應條件製備標題化合物。分析數據1H-NMR(DMSOd6)8.81(1H，br s)；8.51(1H，br)；7.98(1H，d，J＝7.8Hz)；8.3-7.5(2H，br)；6.93(1H，t，J＝5.7)4.32(1H，m)；4.06(1H，dd，J＝1.8，8.6)；3.13(2H，m)；2.95(2H，q，J＝7.3)；2.87(2H，q，J＝6.7)；2.55(1H，m)；2.19(1H，m)；2.10(2H，t，J＝7.0)；2.00(1H，m)；1.85-1.1(17H，m)；1.23(3H，s)；1.21(3H，s)；1.16(3H，t，J＝7.3)；0.83(6H，d，J＝6.6)；0.79(3H，s)。
實施例20[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[(11-氰十一烷醯)氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]-硼酸 手性向DMAP(4-二甲基氨基吡啶，22.7mg，0.185mmol)和11-氰基十一酸(97.2mg，0.46mmol)的二氯甲烷(5.2ml)溶液中加入PS-HOBT(1-羥基苯並三唑-6-亞磺醯氨基甲基聚苯乙烯，277mg，0.31mmol，載荷1.12mmol/g)。混合物在室溫攪拌10分鐘，然後加入二異丙基碳二亞胺(0.218ml，1.39mmol)的DCM(二氯甲烷，0.6ml)溶液。懸液在室溫搖動4小時然後在氮氛下過濾樹脂並用DMF(3×5ml)，DCM(3×5ml)，DMF(3×5ml)和THF(3×5ml)洗滌數次。充分乾燥的樹脂懸浮於實施例4的[(1R)-1-[[(2S)-2-氨基-5-[[亞氨基(硝基氨基)-甲基]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸鹽酸鹽(55.2mg，0.15mmol)和DIPEA(N，N-二異丙基乙基胺，0.051ml，0.293mmol)的DCM(4ml)和DMF(0.6ml)溶液中。反應混合物在室溫搖動過夜。過濾掉樹脂並用DMF(10ml)和DCM(2ml)洗滌，溶劑被濃縮至乾燥。在ISOLUTE SPE-DIOL柱體上，使用從95/5到50/50的DCM/甲醇混合物洗脫而純化殘餘物。收集含有產物的級分並濃縮。通過在2g ISOLUTE SPE-SI常相柱體上使用從100/0到50/50的DCM/甲醇混合物洗脫而最終純化(25mg，收率35％)。
分析數據MS[M-18]H+508.5
實施例21[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[(9-氰基壬醯基)氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸 手性根據上述實施例20的方法，從11-氰基-壬酸和實施例4的產物使用合適的試劑和反應條件製備標題化合物。分析數據MS[M-18]H+480.1實施例22[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[[7-(甲氧基羰基)庚醯基]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸 手性實施例12的方法製備的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-4-(甲氧基羰基)庚醯胺(300mg，0.47mmol)，2-甲基丙基硼酸(96mg，0.94mmol)和4N鹽酸二噁烷溶液(120μl)的甲醇∶己烷40∶60非均相混合物(10ml)的混合物在室溫攪拌2小時。添加己烷(5ml)，混合物攪拌一段時間，然後除去己烷層。加入新鮮己烷(5ml)，4N鹽酸二噁烷溶液(120μl)和2-甲基丙基硼酸(96mg，0.94mmol)，並將混合物在室溫攪拌2小時。除去己烷層，並將甲醇相用己烷(2×5ml)洗滌。濃縮甲醇相獲得的殘餘物通過矽膠柱層析純化，使用40∶40∶20丙酮∶甲醇∶己烷混合物洗脫。產物重新溶解於乙酸乙酯(200ml)，用水洗滌有機相(2×10ml)，對硫酸鈉乾燥並濃縮。殘餘物溶解於最小量的甲醇中，將溶液濾過棉塞並濃縮。用二乙基醚研碎殘餘物。傾出液體收集固體，然後用乙酸乙酯(15ml)研碎。傾出液體收集固體並真空乾燥產生白色固體產物(30mg，產率13％)。
分析數據1H NMR(DMSO-d6)8.60(1H，d，J＝8.4Hz)；8.50(1H，br)；8.06(1H，d，J＝7.9)；7.92(2H，br)；4.36(1H，m)；3.58(3H，s)；3.13(2H，m)；2.55(1H，m)；2.28(2H，t，J＝7.5)；2.12(2H，m)；1.69(1H，m)；1.49(7H，m)；1.24(7H，m)；0.81(6H，m)。
元素分析計算值C47.82％ H7.83％ N16.73％實驗值C48.13％ H7.50％ N16.34％實施例23[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[(10-(1，3-二氫-1，3-二氧-2H-異吲哚-2-基)-1-氧癸基)-]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸 手性根據上述實施例22的方法，從實施例10的產物使用合適的試劑和反應條件製備標題化合物。
分析數據1H-NMR(MeOH-d4)7.82(4H，m)；4.52(1H，m)；3.66(2H，t，J＝7.3)；3.27(2H，m)；2.75(1H，m)；2.24(2H，t，J＝7.3Hz)；1.9-1.2(20H，m)；0.91(6H，d，J＝6.6).
實施例24[(1R)-1-[[(2S)-5-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]-2-[[6-(乙醯氨基)己醯基]氨基]-1-氧戊基]氨基]-3-甲基丁基]硼酸 手性實施例15的N-[(1S)-1-[[[(1R)-1-[(3aS，4S，6S，7aR)-六氫-3a，5，5-三甲基-4，6-亞甲基-1，3，2-苯並二噁borol-2-基]-3-甲基丁基]氨基]-羰基]-4-[[亞氨基(硝基氨基)甲基]氨基]丁基]-6-(乙醯氨基)己醯胺(48mg，0.077mmol)溶解於Et2O(2ml)，並在0℃小心加入37％HCl(1ml)。反應混合物被加溫到室溫並搖動過夜。混合物被濃縮至乾燥，將殘餘物溶解於MeOH(1ml)並從ISOLUTE PSA柱體上用MeOH(10ml)洗脫。蒸發溶劑，並使用從90/10到50/50的DCM/甲醇混合物從500mg ISOLUTEPSA柱體上洗脫而純化粗產物以產生標題化合物(19.4mg，收率52％)。
分析數據MS[M-18]H+470.2實用性化合物活性本發明的化合物可以抑制蛋白酶體活性。下表F-1提供與數個本發明示例化合物例如，抑制蛋白酶體活性的能力有關的數據。
方法和組合物本發明的化合物可以抑制蛋白酶體的活性，導致抑制或阻斷多種與蛋白酶體直接或間接相關的細胞內功能。例如，蛋白酶體抑制劑可以調控，例如誘導細胞內的凋亡。在一些實施方案中，此處的化合物可以通過誘導凋亡而殺死腫瘤細胞。因此，本發明化合物可以用於治療癌症，腫瘤或其他增殖失調。
在另外的實施方案中，通過本發明化合物抑制蛋白酶體功能可以抑制轉錄因子NF-κB的活化或加工。該蛋白在涉及免疫和炎症反應以及細胞存活的基因的調控中發揮作用。蛋白酶體功能的抑制還抑制了泛素/蛋白水解途徑。該途徑催化選擇性降解高度異常的蛋白和短壽命調控蛋白等。在一些實施方案中，本發明的化合物可以防止通常被泛素依賴的途徑降解的p53的降解。泛素/蛋白水解途徑還涉及將內吞的細胞或病毒抗原加工成為結合到MHC-I分子的抗原性肽。因此，本發明的化合物可以用於降低許多細胞類型的胞質ATP-泛素依賴的蛋白水解系統的活性。
因此，這些化合物的用處包括治療，例如治療與蛋白酶體有關的各種疾病或失調。方法包括對哺乳動物，例如患有與蛋白酶體有關的疾病或失調的人給藥治療有效量的本發明化合物或其組合物。「治療有效量」指足以防止，減輕或改善任何現象，例如本領域已知與疾病或失調相關的起因或症狀的量。
可治療的疾病或失調(異常身體狀況)可以與正常或異常的蛋白酶體活性有關，例如凋亡的調控。多種與蛋白酶體有關的或通過誘導凋亡而合意地治療的疾病或失調是已知的，並包括例如，各種癌症和腫瘤，包括與皮膚癌，前列腺癌，結腸直腸癌，胰腺癌，腎癌，卵巢癌，乳腺癌，肝癌，舌癌，肺癌，和平滑肌組織癌相關的那些疾病。優選的可以通過蛋白酶體抑制劑而治療的腫瘤包括但不限於血液腫瘤，例如白血病，淋巴瘤，非-Hodgkin淋巴瘤，骨髓瘤，和多發性骨髓瘤，以及實體瘤例如結腸直腸瘤，乳腺瘤，前列腺瘤，肺瘤和胰腺瘤。為引發治療效果，蛋白酶體抑制劑可以作為單個試劑或與一種或多種抗腫瘤或抗癌試劑和/或放射療法組合給藥到病人。其他可以有利地與蛋白酶體抑制劑伴隨給藥的抗腫瘤或抗癌劑的例子包括但不限於，阿黴素，道諾黴素，甲氨蝶呤，長春新鹼，6-巰基嘌呤，胞嘧啶阿拉伯糖苷，環磷醯胺，5-FU，六甲基三聚氰胺，卡鉑，順鉑，伊達比星，紫杉醇，紫杉萜，喜樹鹼，依立替康，吉西他濱，L-PAM，BCNU和VP-16。體外測定凋亡的方法是本領域公知的而試劑盒可以商業購得。參見例如來自Promega公司，Madison WI，USA的Apo-ONETM均相Caspase-3/7分析(技術公告號295，2/02修改，Promega公司)。
與蛋白酶體相關的其他疾病或失調包括在萎縮的肌肉中發生的加速或增強的蛋白水解，例如通常與包括泛素的需非溶酶體ATP過程的活化有關。加速或增強的蛋白水解可以是眾多起因中任何一種的結果，原因包括膿血症，燒傷，外傷，癌症，感染，神經變性疾病，例如肌肉萎縮症，酸毒症或脊髓/神經損傷，甾醇激素的使用，發燒，壓力和飢餓。本發明的化合物可以通過本領域已知的任何方法，例如通過測量修飾的胺基酸3-甲基組氨酸的尿排洩(參見，如，Young等，FederationProc.，1978，37，229)，而檢測對肌肉損耗的抑制作用。
本發明的化合物還可進一步用於治療或防止與NF-κB活性有關的疾病或失調，包括例如，人免疫缺陷病毒(HIV)感染和來自例如，移植排斥，關節炎，感染，炎性腸炎，哮喘，骨質疏鬆，骨關節炎，牛皮癬，再狹窄，和自身免疫疾病的炎性失調。因此，防止患有上述病的病人中NF-κB的活化的方法將是治療上有利的。NF-κB活性的抑制可以通過使用例如Palombella等，Cell，1994，78，773描述的DNA結合分析來測量。
本領域技術人員使用標準診斷技術容易地鑑定易於或懷疑患有這種疾病或失調的個體。
實施例A20S人紅細胞蛋白酶體(HEP)胰凝乳蛋白酶樣活性的分析根據以下方法分析本發明化合物的蛋白酶體胰凝乳蛋白酶樣活性。
在96-孔量滴定中，以0.2μg/mL(大約0.6nM催化位點)的0.04％SDS 20mM Tris緩衝液覆蓋購白Immatics Biotechnologies Inc.，Tubingen，德國的20S人紅細胞蛋白酶體(HEP)。購自Sigma Inc.，St.Louis，MO，USA的螢光測定底物Suc-LLVY-AMC(琥珀醯-Leu-Leu-Val-Tyr-7-氨基-4-甲基香豆素)從10mM的二甲亞碸儲存液添加到終濃度為100μM。反應體積為每孔100μL。在37℃孵育不同時間後，在Perkin Elmer HTS 7000Plus微量滴定板讀板機上以370nM激發波長和465nM發射波長測定游離AMC(氨基甲基香豆素)的濃度。在底物水解隨時間線性增加和螢光信號的改變與游離AMC的濃度成比例的條件下測定蛋白酶體活性。
實施例Bα胰凝乳蛋白酶活性的分析在96-孔微量滴定板中，以10ng/mL(大約2pM催化位點)的0.5MNaCl 50mM Hepes緩衝液覆蓋購自Sigma Inc.的牛α-胰凝乳蛋白酶。購自Sigma Inc.，St.Louis，MO，USA的螢光測定底物Suc-AAPF-AMC(琥珀醯-Ala-Ala-Pro-Phe-7-氨基-4-甲基香豆素)從10mM的二甲亞碸儲存液添加到終濃度為25μM。反應體積為每孔100μL。在室溫孵育不同時間後，在Perkin Elmer HTS 7000Plus微量滴定板讀板機上以370nM激發波長和465nM發射波長測定游離AMC的濃度。在底物水解隨時間線性增加和螢光信號的改變與游離AMC的濃度成比例的條件下測定α胰凝乳蛋白酶活性。
實施例CHEP和α-胰凝乳蛋白酶抑制劑IC50值的測定IC50值通常被定義為對酶活性產生50％抑制所必需的化合物濃度。IC50值是化合物對其指定用途的活性的有用指標。本發明的蛋白酶體抑制劑如果對於抑制人紅細胞蛋白酶體(HEP)的IC50值小於大約1μmol，則該因子可以認為是有活性的。在一些實施方案中，該抑制劑顯示對於HEP的一些特異性並且抑制牛α-胰凝乳蛋白酶的IC50相對與抑制HEP的IC50的比率，即IC50(α-胰凝乳蛋白酶)/IC50(HEP)，大於大約100。
對HEP和牛α-胰凝乳蛋白酶的胰凝乳蛋白酶樣活性的抑制通過將酶與各種濃度的假定抑制劑在添加底物之前在37℃(或對於α胰凝乳蛋白酶而言為室溫)孵育15分鐘而測定。各實驗條件重複評估三份，並且對此處描述的抑制劑進行重複實驗。
在上述鑑定的分析中，如果對於抑制HEP的IC50值小於1000nM，則本發明的化合物可以認為是有活性的。優選本發明的化合物抑制HEP的IC50值小於100nM。本發明更優選的化合物對抑制HEP的IC50值會小於10nM。本發明的化合物在上述鑑定的分析中已經顯示抑制HEP的IC50值小於1000nM。
實施例D在Molt-4細胞系中對蛋白酶體胰凝乳蛋白酶樣活性的細胞分析根據以下方法在Molt-4細胞(人白血病)中分析蛋白酶體胰凝乳蛋白酶樣活性。以前已經公開了該方法的簡要描述(Harding等，J.Immunol.，1995，155，1767)。
洗滌Molt-4細胞並重懸於HEPES-緩衝的鹽水中(5.4mM KCl，120mM NaCl，25mM葡萄糖，1.5mM MgSO4，1mM丙酮酸鈉，20mMHepes)並以終濃度6×106個細胞/孔覆蓋於96孔微量滴定板中。然後將250×DMSO溶液用HEPES-緩衝的鹽水稀釋50倍製備各種5×蛋白酶體抑制劑濃縮液(或稀釋的DMSO用作對照)，以1×終濃度添加到板中。在37℃孵育15分鐘後，購自Enzyme Systems Products，目錄號AFC-88的螢光測定的細胞可滲透的底物(MeOSuc-FLF-AFC)(甲氧基琥珀醯-Phe-Leu-Phe-7-氨基-4-三氟甲基香豆素)從20mM的DMSO儲存溶液以終濃度25μM加入到各孔中。反應體積為每孔100μl。
在Polastar Optima，BMG Labtechnologies微量滴定板讀板機上使用激發波長390nm和發射波長520nm以每1.5分鐘檢測游離AFC的濃度，持續30分鐘(22個循環)。在底物水解隨時間線性增加和螢光信號的改變與游離AFC的濃度成比例的條件下測定蛋白酶體活性。
實施例E在MOLT-4細胞系中測定蛋白酶體抑制劑的EC50值EC50值通常被定義為產生最小和最大反應(對該分析而言分別為0％和85-90％)之間半途酶活性抑制所需的化合物濃度。EC50是化合物對其指定用途的活性的有用指標。本發明的化合物如果其EC50值小於大約10μM，則可以認為是有活性的。
對MOLT-4細胞中蛋白酶體的胰凝乳蛋白酶樣活性的抑制通過將細胞與各種濃度的假定抑制劑在添加底物之前在37℃孵育15分鐘而測定。各實驗條件進行三份重複評估，並且對此處描述的抑制劑進行重複實驗。
在上述鑑定的分析中，如果對於MOLT-4細胞中蛋白酶體抑制的EC50值小於10μM，則本發明的化合物可以認為是有活性的。優選本發明的化合物在MOLT-4細胞中蛋白酶體抑制的EC50值小於2μM。更優選本發明的化合物在MOLT-4細胞中蛋白酶體抑制的EC50值小於200nM。本發明的化合物在上述鑑定的分析中已經顯示在MOLT-4細胞中蛋白酶體抑制的EC50值小於10μM。
實施例F蛋白酶體胰蛋白酶樣活性的分析人蛋白酶體的蛋白酶樣活性可以根據具有如下修改的上述方法進行分析。在補充有1mM 2-巰基乙醇的Tris-甘油緩衝液(pH9.5)中進行反應，而底物可以是產生螢光的底物例如苄氧基羰基--Phe--Arg--AMC(100μM)。
在37℃孵育不同時間段後，在FluoroskanII分光螢光計上使用激發濾器390nm和發射濾器460nm檢測游離AMC的濃度。在底物水解隨時間線性增加和螢光信號的改變與游離AMC的濃度成比例的條件下測定蛋白酶體活性。
實施例G體內抑制細胞肌肉的分解抑制劑對幼年大鼠比目魚肌減重萎縮的影響可以通過例如Tischler，Metabolism，1990，39，756描述的方法測定。例如，幼年雌性Sprague-Dawley大鼠(80-90g)可以如Jaspers等，J.Appl.Physiol.，1984，57，1472的描述固定尾(tail-cast)，懸吊後肢。動物的後肢被升高超出各動物被分別飼餵的籠舍的地板。動物可以自由獲得食物和水，並可以在懸吊開始時和結束時稱重。在懸吊期間，每天檢查動物以保證它們的趾尖不觸及籠舍地板，並且沒有由固定引起的尾部腫脹。
實驗設計—第一部分各實驗以懸吊20隻大鼠開始，這些大鼠被隨機分為4組、每組5隻。A組被懸吊2天，提供基線數據以估計懸吊更長時間的其他動物比目魚肌的大小。研究開始時組的平均體重可以比較並用作身體大小差異的校正因子。組B是另一個對照組，其一肢的比目魚肌在減重兩天後用汞撒利的水溶液處理，以顯示各組動物減緩減重過程中的肌肉萎縮的能力。在開始減重後2天，將汞撒利的水溶液(200nM；4.mu.l/100g初始體重)注射到一個比目魚肌。對側的肌肉注射相似體積的0.9％鹽水(「媒介物」)。在原位注射過程中動物可以用Innovar-vet(10μl/100g體重)維持鎮靜。注射後，動物再懸吊另外24小時，取出比目魚肌。各實驗的組C和D用於分別測試公開的化合物兩個不同實施方案。動物可以如組B一樣處理，除了可以在一條腿的比目魚肌注射1mM蛋白酶體抑制劑的二甲亞碸(DMSO)，而在對側比目魚肌只注射DMSO。因此，各實驗由兩個對照組和本發明的蛋白酶體抑制劑的測試組成。完成具有不同對抑制劑的5個這樣的實驗對檢測各抑制劑而言「n」值為10，並且各因子可以在不同批次的動物中測試。
比目魚肌肌肉的處理--第一部分在處死動物後，可以切碎比目魚肌，剔除脂肪和結締組織，並小心稱重。然後在10％三氯乙酸(TCA)中將肌肉勻漿並通過離心沉澱蛋白。沉澱物用10％TCA洗滌一次和用乙醇∶醚(1∶1)洗滌一次。最終沉澱可以溶解在4ml 1N氫氧化鈉中。然後通過雙縮脲方法使用白蛋白作為標準品分析樣品的蛋白含量。
數據分析--第一部分抑制劑對總肌肉蛋白含量的影響主要通過與未處理的對側肌肉的配對比較而檢測。計算含量比率並通過分析差異(「ANOVA」)而統計分析。左腿總是處理過的腿，所以蛋白含量比例還可以與未處理的對照動物比較。以這種方式，通過比較兩條腿蛋白含量而顯示顯著差異以及測試的抑制劑的相對效力。還可以對各單獨處理的效果進行配對的學生檢驗。未處理的對照數據也提供第2天蛋白含量的估計值。這使得對B，C，D各組在24小時處理中的蛋白改變進行近似計算。
實驗設計--第二部分各實驗由10隻動物組成，其中每組5隻用一種抑制劑測試其對蛋白合成的影響。對這方面研究而言不需要對照動物，因為對側DMSO處理的肌肉用作抑制劑處理的肌肉的配對對照。各組可以如第一部分中組C和D的描述進行注射。原位處理後24小時，可以在兩個比目魚肌肌肉中分析蛋白合成的分數(fractional rate)。各肌肉可以注射含有3H-苯丙氨酸(50mM；1μCi/ml)的0.9％鹽水溶液(3.5μl/100g終體重)。15分鐘後切下中間三分之二的肌肉，並如下處理該肌肉。
比目魚肌肌肉的處理--第二部分肌肉首先在為終止蛋白合成含有0.5mM環己醯亞胺和為捕獲細胞中的苯丙氨酸含有20mM環亮氨酸的0.84％鹽水中洗滌10分鐘。然後在冰冷的2％高氯酸中將肌肉勻漿。通過離心收集沉澱的蛋白。取一等分上清液用於液體閃爍計數，另一等分上清被處理將苯丙氨酸轉化為苯乙基胺以螢光測定可溶的苯丙氨酸濃度.參見，如Garlick等，Biochem.J.，1980，192，719。這些值可以提供細胞內的比活性。肌肉蛋白中苯丙氨酸的比活性可以在6N HCl中通過加熱水解蛋白後而測定。釋放的胺基酸溶解在緩衝液中。取一等分用於閃爍計數，而另一等分用於分析上清部分的苯丙氨酸。蛋白合成的分數可以計算為蛋白比活性/細胞內比活性.次數.時間。
數據分析--第二部分對各抑制劑可以在配對基礎上分析蛋白合成。對側肌肉的學生配對t檢驗比較可以測定抑制劑是否對蛋白合成有影響。蛋白分解可以大約計算為蛋白合成的分數(來自第二部分)加上蛋白增長的分數(來自第一部分)，其中蛋白損失產生蛋白增長的負值。
定性而言，抑制劑減緩蛋白損失而不影響蛋白合成的能力表示這蛋白降解的減慢。
實施例H抗腫瘤活性的體內研究材料用於體內研究的蛋白酶體抑制劑配製在合適的介質中用於靜脈內(iv)或口服(po)給藥。例如，對iv給藥而言，化合物可以溶解在0.9％NaCl，或例如比例分別為87∶10∶3(v∶v∶v)的0.9％NaCl，solutol HS15和二甲亞碸的混合物中給藥。
細胞系下列不同組織來源的人或鼠腫瘤細胞系可以用於檢測本發明的化合物的抗腫瘤活性H460(人，肺)，A2780(人，卵巢)，PC-3(人，前列腺)，LoVo(人，結腸)，HCT116(人，結腸)，BXPC3(人，胰腺)，PANC-1(人，胰腺)，MX-1(人，乳腺)，MOLT(人，白血病)，多發性骨髓瘤(人，骨髓瘤)，YC8(鼠，淋巴瘤)，L1210(鼠，白血病)，3LL(鼠，肺)。
動物種類商購得到5-6周免疫活性的或免疫失能(immunodeprived)的小鼠，例如從Harlan(Correzzana，Mi Italy)購得。CD1 nu/nu小鼠維持在無菌條件下，使用無菌籠舍，草墊，食物和酸化水。
腫瘤細胞植入和生長不同組織類型(hystotype)(肺，卵巢，乳腺，前列腺，胰腺，結腸)實體瘤的模型可以皮下(sc.)移植到免疫活性小鼠(鼠模型)或免疫失能小鼠(人模型)的腋窩區域。原始獲白ATCC的人腫瘤細胞系可以從「體外培養物」調整為在「體內」生長成實體瘤。
人或鼠的血液腫瘤模型可以根據它們的最高腫瘤一次採集量移植到免疫活性小鼠(鼠模型)或免疫失能小鼠(人白血病，淋巴瘤和骨髓瘤模型)的不同部位(iv，ip，ic或sc)。
藥學處理荷實體瘤(階段性的)或血液腫瘤的小鼠在實驗組(10隻小鼠/組)中是隨機分配的。對於實體瘤，各組平均腫瘤重量80-100mg被認為可以開始進行處理，棄去具有最小和最大腫瘤的小鼠。
實驗組被隨機分配藥學處理和對照組。取決於化合物的生物利用用度，根據下列處理計劃，動物可以iv或口服處理每周一次或兩次iv給藥，或每日口服給藥。
在實體瘤模型上，當植入腫瘤後(第0天)腫瘤大小在80-100mg範圍時開始藥學處理。
化合物可以在合適的溶劑中以10mL/公斤體重/小鼠的體積進行給藥。
抗腫瘤活性參數下列參數可用於評估抗腫瘤活性每周兩次卡鉗測量而檢測各小鼠原發實體瘤的生長；處理的小鼠與對照小鼠存活時間的比較；每周兩次評估單個小鼠體重。
在最後一次藥學處理後一周，腫瘤生長抑制TWI％(原發腫瘤生長抑制與媒介處理的對照組的百分比)或分階段的腫瘤情形下相對腫瘤生長抑制RTWI％進行評估，並且如下計算腫瘤重量(TW)TW＝1/2ab2其中a和b是腫瘤質量的長徑和短徑，以mm表示。
抗腫瘤活性可以測定為腫瘤重量抑制(TWI％)，其按如下方程式計算 在最後一次藥學處理後一周，對RTWI％(原發腫瘤生長抑制與媒介處理的對照組的相對百分比)根據如下方程式進行評估
其中 腫瘤消退的百分比可以按相對腫瘤重量的降低計算，測定為在給定日的腫瘤重量除以在實驗開始時的初始腫瘤重量。
在血液腫瘤模型中，抗腫瘤活性可以測定為小鼠存活時間中值增加百分比，表示為處理組(T)與對照組(C)存活時間中值的比例(T/C％)。在實驗結束(移植後60天)無腫瘤的小鼠不計算在內並視為長期存活者(LTS)。
荷瘤小鼠中的毒性評估可以在粗屍檢發現和重量損失的基礎上每天評估毒性。當小鼠在媒介處理的對照動物之前死亡，或觀察到顯著的重量損失(＞20％)和/或脾臟和肝臟大小降低時，被認為死於毒性作用。
如下評估BWC％(體重改變％)100-(給定日的小鼠平均體重/處理開始時的平均體重)×100。該值在用測試化合物處理一周後測定。
實施例K細胞體外存活性根據以下方法，測定在存在測試化合物的情況下體外測量細胞存活性的IC50值。細胞可以不同密度接種在96孔板中，然後在24小時後使用Calcein-AM存活性分析測定各細胞類型的最佳終密度。接著細胞以測定密度的100μL本領域技術人員已知的合適的細胞培養基接種在96孔板中。
可以對測試化合物進行連續稀釋以使得濃度為所需評估濃度的兩倍。當100μL該稀釋液被加入到覆蓋在100μL培養基中的細胞時，可以獲得終濃度例如，0，11.7，46.9，187.5，375，和750nM。在接種細胞後3到4小時加入化合物至板，然後將板在37℃孵育所需的時間(如，一，二，或三天)。
在所需的時間點如下進行Calcein-AM存活性分析。使用多頭管和金屬板抽吸培養基只留下大約50μL/孔。孔用200μl DPBS洗滌三次，每次用多頭管抽吸，留下50μL/孔。製備8μM Calcein-AM的DPBS溶液並向各孔加入150μL。然後將板在37℃孵育30分鐘。孵育後，calcein可以用多頭管抽吸並如前用200μL DPBS洗滌。在最終抽吸後，使用Cytofluor 2300螢光讀板機測量螢光。陰性對照可以包含培養基而沒有細胞，實驗重複三份。
實施例L體外動力學實驗可以使用Rock等，Cell，1994，78，761描述的方案測試本發明的化合物的蛋白酶體抑制活性。根據該方法，當蛋白酶體和測試化合物相互作用形成複合物時建立平衡的解離常數(Ki)。反應可以用來自兔肌肉的SDS-活化的20S蛋白酶體進行，蛋白酶體底物為Suc-LLVY-AMC。
實施例M抑制NF-κB的活化通過實施Palombella等，Cell，1994，78，773所描述的分析對本發明的化合物抑制NF-κB的活性進行分析。例如，MG63骨癌細胞可以通過用TNF-α處理指定的時間而刺激。製備全細胞提取物並通過電泳遷移分析使用來自人IFN-β基因啟動子的PRO II探針進行分析。
實施例N化合物活性使用上述實施例C和實施例E的分析，下面的表F-1顯示本發明的化合物抑制蛋白酶體的實用性。在下表中，對於HEP的抑制而言，實施例C，具有「+」的本發明的化合物對HEP抑制的IC50小於1000nM；具有「++」的本發明的化合物小於100nM；具有「+++」的本發明的化合物小於10nM。在下表中，對於MOLT4的抑制而言，實施例E，具有「+」的本發明的化合物對HEP抑制的EC50小於10000nM；具有「++」的本發明的化合物小於2000nM；具有「+++」的本發明的化合物小於200nM。當出現「＞+」時，活性大於分析的界限。當沒有顯示IC50值或EC50值時，數據還有待測定。
表F-1
藥學製劑和劑型當用作藥學時，通式(I)的化合物可以藥學組合物的形式給藥。這些組合物可以多種途徑給藥，包括口服、直腸、經皮、皮下、靜脈內、肌內和鼻內，並且可以用藥學領域眾所周知的方式製備。
本發明還包括藥學組合物，其含有作為活性成分的上述通式(I)的一種或多種化合物與一種或多種藥學可接受的載體組合。在製備本發明的組合物時，活性成分通常與賦形劑混合，被賦形劑稀釋或例如以膠囊、小袋、紙或其他容器的形式封裝在這樣的載體之內。當賦形劑用作稀釋劑時，其可以是用作活性成分的媒介、載體或介質的固體、半固體或液體材料。因此，組合物可以採取的形式為片劑、丸劑、粉劑、錠劑、小袋，扁囊劑、酏劑、懸劑、乳劑、溶液、糖漿、氣溶膠(作為固體或在液體介質中)，含有例如直至10％重量活性化合物的油膏，軟和硬明膠膠囊、栓劑、無菌注射液和無菌包裝的粉末。
在製備製劑時，活性化合物可以在與其他成分組合前被粉碎以提供合適的顆粒大小。如果活性化合物是基本不溶的，其可以被粉碎到小於200目的顆粒大小。如果活性化合物是基本水溶的，顆粒大小可以通過粉碎調整以提供製劑中基本均一的分布，如大約40目。
一些合適的賦形劑的例子包括乳糖，葡萄糖，蔗糖，山梨糖醇，甘露糖醇，澱粉，阿拉伯膠，磷酸鈣，藻酸鹽，西黃蓍膠，明膠，矽酸鈣，微晶纖維素，聚乙烯吡咯烷酮，纖維素，水，糖漿，和甲基纖維素。該製劑還可以包括潤滑劑例如滑石，硬脂酸鎂，和礦物油；溼潤劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑例如甲基和丙基羥基苯甲酸酯；甜味劑和調味劑。本發明的組合物可以通過使用本領域已知的方法，被製成製劑以在給藥到病人之後提供活性成分迅速持續或延緩的釋放。
所述組合物能夠被製成單位劑型，各劑量含有從大約5到大約100毫克，更通常大約10到大約30毫克的所述活性成分。所述術語「單位劑型」指物理上離散的單位，適合用於人對象及其他哺乳動物的單一劑量，各單位含有計算產生所需的治療效果的預定量的活性物質，以及合適的藥學賦形劑。
活性化合物在寬的劑量範圍內有效，並通常以藥學有效量給藥。然而應該理解，實際給藥的化合物的量通常由醫生根據有關的情形確定，這些情形包括治療的病症，選擇的給藥途徑，實際給藥的化合物，單個病人的年齡、體重和反應，病人症狀的嚴重程度等等。
對於製備固體組合物例如片劑而言，主要的活性成分與藥學賦形劑混合以形成含有本發明化合物的均勻混合物的固體預製劑組合物。當稱這些預製劑組合物為均相時，活性成分通常均勻地分散在整個組合物使得組合物可以容易地再分到相同有效單位劑型例如片劑、丸劑和膠囊中。這個固體預製劑然後再分到含有例如0.1到大約500mg本發明活性成分的上述類型的單位劑型中。
本發明的片劑或丸劑可以被塗布或複合以提供具有延長作用優點的劑型。例如，片劑或丸劑可以包含內部劑量和外部劑量組分，後者是前者之上的外殼形式。這兩個組分可以被腸衣層分開，該層用於抵抗胃中的分解並允許內部組分完整地進入十二指腸或延緩釋放。多種材料能被用於這樣的腸衣層或塗層，這樣的材料包括多種聚合物酸以及聚合物酸與例如蟲膠，鯨蠟醇和纖維素醋酸酯等材料的混合物。
其中本發明的化合物和組合物可以被引入用於口服或注射給藥的液體形式包括水溶液，合適調味的糖漿，水或油的懸液，和用食用油例如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油調味的乳劑，以及酏劑和類似的藥學媒介。
用於吸入或吹入的組合物包括藥學可接受的水或有機溶劑或其混合物的溶液和懸液，以及粉末。液體或固體組合物可以包含上述合適的藥學可接受的賦形劑。在一些實施方案中，組合物通過口腔或鼻呼吸路徑用於局部或全身效果而給藥。組合物可以利用惰性氣體而霧化。霧化的溶液可以從霧化裝置直接吸入，或者霧化裝置可以連接到面罩或間歇性正壓呼吸機。溶液，懸液，或粉末組合物從以適當方式遞送該製劑的裝置經口或經鼻給藥。
給藥到病人的化合物或組合物的量將取決於給藥的物質，給藥的目的例如預防或治療，病人的狀態，給藥的方式等等而改變。在治療性應用中，組合物以足夠治療或至少部分阻止疾病的症狀及其併發症的量給藥到已經患有疾病的病人。足以實現此目的的量稱為「治療有效量」。有效劑量將取決於被治療的疾病狀況以及護理臨床醫生根據疾病的嚴重程度，病人的年齡、體重以及總體狀況等因素而判斷。
給藥到病人的組合物可以是如上所述藥學組合物的形式。這些組合物可以通過常規的無菌技術殺菌，或可以無菌過濾。水溶液可以被包裝使用，或凍幹，凍幹製劑在給藥前與無菌的含水載體結合。化合物製劑的pH通常在3到11之間，更優選從5到9，以及最優選從7到8。應該理解，上述賦形劑、載體或穩定劑的使用會導致形成藥學鹽。
本發明化合物的治療劑量可以根據例如該治療的具體用途，化合物的給藥方式，病人的健康狀況，以及處方醫生的判斷而改變。藥學組合物中本發明化合物的比例或濃度可以取決於多種因素而改變，包括劑量，化學特性(如疏水性)，以及給藥途徑。例如，本發明化合物可以提供於含有大約0.1到大約10％w/v化合物的水性生理緩衝液中用於非腸道給藥。一些通常的劑量範圍為每天大約1μg/kg到大約1g/kg體重。在一些實施方案中，劑量範圍從每天大約0.01mg/kg體重到大約100mg/kg體重。劑量極可能取決於這樣的變量，如疾病或失調的類型和進展程度，具體病人的總體健康狀態，選定的化合物的相對生物學功效，賦形劑的配方，及其給藥途徑。有效劑量可以從來自體外或動物模型測試系統的劑量反應曲線推出。
本發明還包括有效用於治療或預防炎性疾病的藥學試劑盒，其包含一種或多種含有包含治療有效量的通式(I)的化合物的藥學組合物的容器。如果需要，這樣的試劑盒還包括一種或多種不同的常規藥學試劑盒組分，比如具有一種或多種藥學可接受的載體的容器，其他容器等等，這對於本領域技術人員而言是顯而易見的。還可以在試劑盒中包含，或者作為插頁或者作為標籤的顯示給藥組分量的說明書，用於給藥的指南，和/或用於混合組分的指南。
除此處描述的那些之外，對本領域技術人員而言根據上述描述對本發明進行的各種修改是顯而易見的。這樣的修改也落在權利要求的範圍內。本申請引用的各參考文獻在此以其全文引作參考。
權利要求
1.通式(I)的化合物或其藥學可接受的鹽，立體異構或互變異構形式 其中R1是C1-C4烷基；Y是H，CN，NO2，或胍基保護基團；Z是-CN，-C(＝O)OR5，苯二甲醯亞氨基，-NHSO2R6，或-NR3R4；R3是H或C1-C4烷基；R4選自芳基-SO2-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，和烷基-NHC(＝O)-；其中芳基或芳烷基任選被一個或多個甲基或甲氧基取代；R5是H，C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，其中R5任選被一個或多個滷素，C1-C4烷基，芳基，或雜芳基取代；R6是C1-C8烷基，C2-C8鏈烯基，C2-C8炔基，其中R6任選被一個或多個滷素，C1-C4烷基，芳基，或雜芳基取代；Q選自B(OR9)2，蒎烷二醇硼酸酯，頗哪醇硼酸酯，1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，1，2-二異丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，1，2-二環己基乙二醇硼酸酯，雙環己基-1，1』-二醇硼酸酯，和1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯；R9是H，C1-C4烷基，環烷基，環烷基烷基，芳基，或芳烷基；m是2，3，或4；以及n是3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，或14。
2.權利要求1的化合物，其中R1是乙基，丙基，或丁基。
3.權利要求1的化合物，其中R1是2-丙基。
4.權利要求1的化合物，其中Q是蒎烷二醇硼酸酯。
5.權利要求1的化合物，其中Q是雙環己基-1，1』-二醇硼酸酯。
6.權利要求1的化合物，其中Q是B(OH)2。
7.權利要求1的化合物，其中Z是苯二甲醯亞氨基，NHR4，或CN。
8.權利要求1的化合物，其中n是8，9，10，或11。
9.權利要求1的化合物，其中m是3。
10.權利要求1的化合物，其中n是8，9，10，或11；以及m是3。
11.權利要求1的化合物，或其藥學可接受的鹽，立體異構或互變異構形式，具有下列通式(I) 其中R1是2-丙基；Y是-NO2；Z是-CN，-C(＝O)或R5，苯二甲醯亞氨基，-NHSO2R6，或-NHR4；R4選自芳基-SO2-，烷基-SO2-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，和烷基-NHC(＝O)-；其中所述芳基或芳烷基任選被一個或多個甲基或甲氧基取代；R5是H或C1-C6烷基，其中所述烷基任選被一個或多個滷素，芳基，或雜芳基取代；R6是C1-C6烷基，其中所述烷基任選被一個或多個滷素，芳基，或雜芳基取代；Q選自B(OR9)2，蒎烷二醇硼酸酯，頗哪醇硼酸酯，1，2-乙二醇硼酸酯，1，3-丙二醇硼酸酯，1，2-丙二醇硼酸酯，2，3-丁二醇硼酸酯，1，1，2，2-四甲基乙二醇硼酸酯，1，2-二異丙基乙二醇硼酸酯，5，6-癸二醇硼酸酯，1，2-二環己基乙二醇硼酸酯，雙環己基-1，1』-二醇硼酸酯，和1，2-二苯基-1，2-乙二醇硼酸酯；R9是H或C1-C4烷基；m是3；以及n是4，5，6，7，8，9，10或11。
12.權利要求1的化合物或其藥學可接受的鹽，立體異構或互變異構形式，具有下列通式(I-s) 其中R1是C1-C4烷基；Y是CN或NO2；Z是-CN，-C(＝O)OR5，苯二甲醯亞氨基，-NHSO2R6，或-NR3R4；R3是H或C1-C4烷基；R4選自芳基-SO2-，烷基-SO2-，芳基-C(＝O)-，芳烷基-C(＝O)-，烷基-C(＝O)-，芳基-OC(＝O)-，芳烷基-OC(＝O)-，烷基-OC(＝O)-，芳基-NHC(＝O)-，和烷基-NHC(＝O)-；其中所述芳基或芳烷基任選被一個或多個甲基或甲氧基取代；R5是H，C1-C6烷基，C2-C6鏈烯基，C2-C6炔基，其中R5任選被一個或多個滷素，C1-C4烷基，芳基，或雜芳基取代；R6是C1-C8烷基，C2-C8鏈烯基，C2-C8炔基，其中R6任選被一個或多個滷素，C1-C4烷基，芳基，或雜芳基取代；Q選自B(OR9)2，蒎烷二醇硼酸酯，1，2-二環己基乙二醇硼酸酯，和雙環己基-1，1』-二醇硼酸酯；R9是H或C1-C4烷基；m是2，3，或4；以及n是3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，或14。
13.權利要求1的化合物，或其藥學可接受的鹽或游離鹼形式，具有下列通式
14.一種組合物，含有權利要求1-13之一的化合物和藥學可接受的載體。
15.一種抑制蛋白酶體活性的方法，包括將權利要求1-13之一的化合物與所述蛋白酶體接觸。
16.一種治療癌症的方法，包括對具有或傾向於具有所述癌症的哺乳動物給藥治療有效量的權利要求1-13之一的化合物。
17.一種治療癌症的方法，包括對具有或傾向於具有所述癌症的哺乳動物給藥治療有效量的權利要求1-13之一的化合物，其中所述癌症選自皮膚癌，前列腺癌，結腸直腸癌，胰腺癌，腎癌，卵巢癌，乳腺癌，肝癌，舌癌，肺癌，和平滑肌組織癌。
18.一種治療癌症的方法，包括對具有或傾向於具有所述癌症的哺乳動物給藥治療有效量的權利要求1-13之一的化合物，其中所述癌症選自白血病，淋巴瘤，非-Hodgkin淋巴瘤，骨髓瘤，和多發性骨髓瘤。
19.一種治療癌症的方法，包括對具有或傾向於具有所述癌症的哺乳動物給藥治療有效量的權利要求1-13之一的化合物，並結合一種或多種抗腫瘤或抗癌劑和/或放射療法。
20.一種抑制轉錄因子NF-κB活性的方法，包括將轉錄因子NF-κB的抑制劑IκB與權利要求1-13之一的化合物接觸。
全文摘要
本發明提供能夠例如通過抑制蛋白酶體活性而調控凋亡的硼酸化合物，硼酸酯，及其組合物。所述化合物和組合物可以用於誘導凋亡和治療疾病例如癌症和其他直接或間接與蛋白酶體活性有關的失調的方法中。
文檔編號A61K31/69GK1839139SQ200480023384
公開日2006年9月27日 申請日期2004年8月13日 優先權日2003年8月14日
發明者桑卡爾·查特吉, 穆罕默德·伊克巴勒, 埃內斯託·門塔, 安布羅焦·奧利瓦 申請人:賽福倫公司