一種特女貞苷的製備方法

2023-12-05 22:37:26 1

專利名稱：一種特女貞苷的製備方法
技術領域：
本發明屬於天然藥物化學領域，涉及一種從女貞子中提取特女貞苷粗品(> 80% )和高純度特女貞苷(> 98% )的方法。
背景技術：
女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidum Ait.的乾燥成熟果實。女貞子主要含有三萜類、醚萜類、苯乙醇類、黃酮類等化學成分。特女貞苷，英文名為Specnuezhenide， 為女貞子中一種裂環環烯醚萜苷，特女貞苷作為專屬性較強的一個成分，首次收載為2010 版中國藥典女貞子藥材含量測定的指標成分，其分子式為C31H42O17，分子量為686. 5，它在女貞子中是一個含量較高的成分，其藥理研究較少，研究發現其有免疫調節、抗突變等藥理作用。目前文獻報導關於特女貞苷的分離純化方法較少，見有一項公開的發明專利 CN101704857A，該項專利涉及從女貞子中分離純化得到高純度特女貞苷的方法，該方法主要為用乙醇提取，然後用石油醚、氯仿、正丁醇、有機溶劑萃取，經大孔樹脂純化，再用反相矽膠純化而得。該方法能分離純化得到高純度的特女貞苷，但是流程和操作相對較為複雜， 同時不適合大量製備純度較高的特女貞苷。

發明內容
本發明提供一種規模化、流程簡單製備特女貞苷生粗品和高純度特女貞苷的工藝路線和方法。本發明解決其技術問題所採用的技術方案為1)粉碎取女貞子藥材，置乾燥箱中乾燥，取出放冷，粉碎機粉碎，過三號篩，得女貞子藥材粉末。2)提取取女貞子粉，每次加水5-10倍煎煮池，提取3次，過濾，合併三次濾液。3)大孔樹脂純化取女貞子提取液，濃縮至上樣液濃度約為0. 5g藥材/ml，上樣， 先用水為洗脫液洗脫，棄去水洗脫液，再用20% -40%乙醇洗脫，收集洗脫液。4)乙醇沉澱將大孔樹脂洗脫液濃縮至流浸膏狀，取工業酒精(95%乙醇)適量調整乙醇濃度為80% -95%，充分振搖混合，放置沉澱，過濾，取濾液蒸乾。5)矽膠柱純化先用正相矽膠柱純化，溼法裝柱，幹法上樣，洗脫液為三氯甲烷-甲醇5 1。製得更高純度特女貞苷則需用反向矽膠柱純化，流動相為甲醇-水 30 70。


附圖為製備特女貞苷的工藝路線圖。
具體實施方式
以下參照實施例來說明本發明，本實施例僅用於更好的說明本發明，其不以任何方式限制本發明的發明範圍。下述實施例中的高效液相含量測定方法的具體方法參照《中國藥典》2010版一部中規定的含量測定方法，結合方法學考察，最終確定的可行的HPLC含量測定條件為色譜柱ZorbaxC18柱(5 μ m, 4. 6 X 150mm)流動相甲醇-水(30 70, ν/ν)流速1. Oml · min-1檢測波長2Mnm柱溫35°C。所用女貞子藥材按照《中國藥典》2010版女貞子項下的含量測定方法測得特女貞苷的含量為2. 13%，按照本發明的提取方法測得女貞子藥材中特女貞苷的含量為3. 23%。實施例一取女貞子藥材10kg，粉碎，先後加10倍、8倍、8倍藥材量水煎煮3次，每次煎煮 2h，分別每次過濾並合併濾液，濾液適當濃縮；濃縮液上樣於D-101大孔樹脂柱上，先以水洗脫，棄去水洗液，再用20%乙醇洗脫，收集洗脫液，濃縮至流浸膏狀；加甲醇充分攪拌，放置沉澱，過濾，濾液蒸乾；最後用正相矽膠柱和反向矽膠柱分離純化得到一純度達到98% 的化合物約^g，結合核磁共振波譜鑑定結果和已有文獻研究譜圖數據，確定該化合物為特女貞苷。實施例二取女貞子藥材，粉碎；稱得203g，加水400ml浸泡30min，再加水1200ml提取2h， 過濾，再分別加水1600ml提取兩次，過濾，合併三次濾液，濾液濃縮至約400ml ；上樣於 D-101大孔樹脂柱，先用水洗脫，棄去水洗脫液，再用40%乙醇洗脫，洗脫液濃縮至流浸膏狀(約40ml)；加入工業酒精(95%乙醇)200ml，充分攪拌搖勻，放置池沉澱，過濾，濾液蒸乾；再用正相矽膠色譜柱純化，得到的特女貞苷粗品3. 375g，純度為81. 18%，此時的收率為63. 61%，再用反向矽膠色譜柱純化，得到的特女貞苷純品1.440g，純度為98. 13%，此時的收率為21. 55%。實施例三按照專利CN101704857A製備特女貞苷的方法，取已粉碎女貞子藥材227g，純化得到特女貞苷純品1.853g，HPLC含量測定得其含量為98. 40%，此時特女貞苷的收率為 20.03%。對比發現發明專利CN101704857A製備特女貞苷的收率略低於本專利方法。實施例二製得特女貞苷純品1.440g，純度為98. 13%，參照實驗室購進各試劑和材料的價格計算其成本為799. 3元/g ；專禾Ij CN101704857A製備方法製得特女貞苷純品1. 853g， 含量為98. 40%,同實施例二的成本計算方法計算成本為925. 0元/g。當加大投藥量至 IOOkg時，成本進一步降低，結合各試劑和材料的市場價格進一步合理的推算和計算得本專利製備特女貞苷的成本可降至約608元/g，專利CN101704857A可以降低至約766元/ go由上可知本專利不但能夠製備高純度的特女貞苷，而且收率高，其成本也有明顯的降低。分別對以上三個實施例樣品1HNMR譜圖和13C NMR譜圖的數據進行分析，其譜圖數據一致=1H-WR(600MHz，CD30D) δ 7. 58 (1Η, s, H-3)，7. 12 (2H, dd, J = 8. 5，1. 9Hz, H_4"『 禾口 H-8" 『 ) ,6. 76 (2H, dd, J = 8. 5,1. 9Hz, H-5"『禾口 H—7" 『 ) ,6. 15 (1H, q, J = 6. 8Hz,H-8), 5. 98(lH,br. s，H_l)，4· 87(lH，d，J = 7. 4Ηζ，Η_1' )，4· 37(lH，d，J = 7. 4Hz，H_l〃 )， 4. 28 (1H, dd, J = 11. 9,5. 8Hz，H_l〃 ' ) ,4. 27 (1H，m，H_5)，3. 94 (1H, dd, J = 12. 2,5. 8Hz, H-I 「 ' ) ,4. 42-3. 39 (10H, m, sugars)，3. 75 (3H, s, -0CH3)，3. 61 (1H, m, H_5)，2. 91 (2H, m, H-2" ' ) ,2. 82 (1H, dd, J = 14. 3,4. 9Hz, H_6)，2. 55 (1H，dd, J = 14. 3,4. 9Hz, H_6)， 1. 66 (3H, d, J = 7. 2Hz, H-10) ； 13C-WR(150MHz，CD30D) : δ 173. 2 (C_7)，168. 9 (C-ll)， 156. 9(C-6 " ' )，153.6(C-3)，131. l(C-4 〃 『，C_8 〃 ' )，130. 7 (C_8)，125. 1 (C_9)， 116. 3(C-5 「 『，C-7 〃 ' )，109. 6(C-4)，104. 5(C-1 〃 ),101. O (C-l ' ) ,95. 3 (C-I), 78. 5 (C-5 ' ) ,78. 1 (C_3 ' ), 78. O (C_3 「 ),75.3 (C_5 「 ),75.1 (C_2 ' ), 74. 9 (C_2 「)， 71. 7(C-4 ' )，72.3(C-4〃 ) ,71. 6 (C-l " ' ),65.2 (C-6 " ) ,62. 8(C-6 ' ),52.1 (OMe), 41.5(C-6)，36.5(C-2" ' )，31. 9 (C_5)，13. 9 (C-10)。其 NMR數據與已有文獻[1]特女貞苷 (Nuezhenide)的波譜數據一致，確定該化合物為特女貞苷。
權利要求
1.一種特女貞苷的製備方法，其特徵是包括以下步驟1)粉碎取女貞子，置乾燥箱中乾燥，放冷，粉碎機粉碎，過三號篩；2)提取取步驟1)中的女貞子粉，加水煎煮，過濾，濃縮；3)大孔樹脂純化取步驟幻中的濃縮液，上大孔樹脂柱，洗脫，濃縮；4)乙醇沉澱將步驟幻中大孔樹脂洗脫濃縮液進行乙醇沉澱，沉澱後過濾，濾液濃縮至幹膏；5)矽膠柱純化取步驟4)中幹膏，用正相矽膠柱色譜法純化，得到特女貞苷粗品；用反向矽膠柱色譜法進行純化得到高純度的特女貞苷。
2.如權利要求1所述的特女貞苷的製備方法，其特徵在於步驟2)的提取方法為加水煎煮3次，每次煎煮池，每次水用量為5-10倍藥材量。
3.如權利要求1所述的特女貞苷的製備方法，其特徵在於步驟3)中大孔樹脂上樣液濃度為0. 3-0. 7g藥材/ml。
4.如權利要求1所述的特女貞苷的製備方法，其特徵在於步驟3)的洗脫順序為先用水為洗脫液洗脫，棄去水洗脫液，再用20% -40%乙醇洗脫，收集洗脫液。
5.如權利要求1所述的特女貞苷的製備方法，其特徵在於步驟3)的洗脫液濃縮程度為濃縮至流浸膏狀。
6.如權利要求1所述的特女貞苷的製備方法，其特徵在於步驟4)醇沉過程中溶液乙醇濃度為70% -95%。
7.如權利要求1所述的特女貞苷的製備方法，其特徵在於步驟5)用的正相矽膠色譜純化中流動相為三氯甲烷-甲醇5 1 3 1。
8.如權利要求1所述的特女貞苷的製備方法，其特徵在於步驟5)用的反相矽膠色譜純化中流動相為甲醇-水溶液，甲醇濃度為20% 40%。
全文摘要
本發明屬於天然藥物化學領域，涉及一種從女貞子中提取特女貞苷粗品(＞80%)和高純度特女貞苷(＞98%)的方法。用女貞子為原料，先粉碎藥材，選用水煎煮提取的方法，提取液稍濃縮後用大孔樹脂柱純化，然後進行醇沉處理，最後選用正相矽膠柱純化和反向矽膠柱純化來製得含量要求不同的特女貞苷。本方法可以規模化製備含量略低的特女貞苷，收率高，操作簡單，成本低；也可以製備含量很高的特女貞苷，收率略低，成本較高，可以根據含量需要進行選擇，同時兩種方法製備的原料材料和試劑部分可以重複利用，製備成本低於現有製備方法。
文檔編號C07H17/04GK102372754SQ201110337108
公開日2012年3月14日 申請日期2011年10月31日 優先權日2011年10月31日
發明者張國林, 王飛, 章從恩, 陳前鋒 申請人:中國科學院成都生物研究所