人類g蛋白偶聯受體和用於治療細胞死亡相關病症的其調節物的製作方法

2023-05-30 21:25:46

專利名稱：人類g蛋白偶聯受體和用於治療細胞死亡相關病症的其調節物的製作方法
技術領域：
本發明涉及鑑定一種候選化合物是否為G蛋白偶聯受體(GPCR)的調節物的方法。在某些實施例中，該GPCR是人類的。在某些實施例中，該GPCR是由神經細胞或者肌細胞內源性表達。在某些實施例中，該GPCR具有神經保護性或者肌保護性。在某些實施例中，該GPCR是一種護腦素受體。本發明同時涉及使用所述GPCR的調節物的方法。一種優選的調節物是激動劑。本發明的激動劑一般用作治療劑以預防或者治療神經退化性疾病，該疾病包括阿爾茲海默氏病、帕金森氏病、朊毒體相關疾病、中風和運動神經元疾病，特別是周圍神經病、腦澱粉樣β-蛋白血管病和缺血性心臟病，包括心肌梗塞和充血性心力衰竭。
背景技術：
A.細胞死亡相關病症下列討論是用以方便對本發明的理解，而非傾向於或者承認本發明的先前技術。
非正常細胞死亡是許多病理的組分，包括神經退化性疾病、腦澱粉樣β-蛋白血管病(CAA)和一些心肌病。所述非正常細胞死亡可包含細胞凋亡。細胞死亡保護性藥劑具有用於預防或治療所述病理的功效。特別是，神經保護性或者肌保護性藥劑具有用於預防或者治療所述神經退化性疾病或者所述肌病的功效。
阿爾茲海默氏病是一種進行性神經退化性疾病，其特徵在於一個以上認知區域的功能顯著喪失，並且經常伴以行為或個性的改變(阿爾茲海默氏病；決策資源公司(Decision Resources，Inc.)；2001年11月)。三種不同基因的突變可以引起早發性家族阿爾茲海默氏病(FAD)澱粉樣前體蛋白(APP)、早老素1(PS1)和早老素2(PS2)。然而，早發性家族阿爾茲海默氏病僅佔所有阿爾茲海默氏病病例的不足5％。更典型地，阿爾茲海默氏病常見於65歲或者更老的人。阿爾茲海默氏病是痴呆的最常見原因，全世界約有2千萬人患有此病。人們認為澱粉樣β-肽(Aβ)在阿爾茲海默氏病的病理中起主要作用。
輕度認知障礙(MCI)是認知障礙的一種病狀，通常僅僅是記憶障礙，並未嚴重到足以顯著影響職業或社會功能。然而，許多患有MCI的人已逐漸發展為阿爾茲海默氏病，其是以每年10-15％的速率發展並且在五年內增至60％。增長的證據顯示，阿爾茲海默氏病病理的開始遠早於嚴重到足以準許阿爾茲海默氏標準診斷的症狀的出現。2001年，美國神經學會(AAN)出版了用於MCI檢測的臨床實踐參數，其將增加對MCI和阿爾茲海默氏病輕度形式的認識、診斷和治療。
帕金森氏病是一種慢性進行性神經退化性病症，在美國、日本和西歐，超過兩百七十萬人患有此病。帕金森病的特徵在於諸如震顫、運動徐緩、肌強直、步伐紊亂和姿態不穩的運動症狀。雖然研究人員已經確定黑質中的多巴胺能神經元退化是最初的病理生理學機制，但他們認為其它神經遞質系統-諸如5-羥色胺能和穀氨酸能系統-也不同程度地捲入此疾病進程中。
朊毒體相關疾病包括(但不限於)牛海綿狀腦病、克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、庫魯病(kuru)、GSS綜合症(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome)和致死性家族性失眠症[Collins等人，《柳葉刀》(Lancet)(2004)351-61]。
中風是一種在腦中由於血管阻塞或者出血而引起的急性血流中斷。幾乎所有中風的90％是局部缺血的；也就是說，其是由於腦循環降到臨界極限以下。在工業化國家，中風佔醫學相關死亡的10-12％，並且在世界範圍內是第三號死因。在美國，每年中風人數的全面估計範圍為500000到700000人。
運動神經元疾病的特徵在於脊髓、腦幹或者運動皮層的運動神經元的選擇性退化。臨床亞型是由主要退化位點來區別。在肌萎縮性脊髓側索硬化症中，涉及上運動神經元、下運動神經元和腦幹運動神經元。在進行性脊髓性肌萎縮症和相關綜合症中，脊髓中的運動神經元首先受到影響。在進行性延髓麻痺中，最初的退化出現在腦幹。在原發性側索硬化症中，皮層神經元在隔離時受到影響。
周圍神經病是一個用來描述多種病症的廣義術語，通常表現為四肢疼痛或不適感覺，並且神經病是其病因。人們認為神經退化在周圍神經病中起作用。這種病狀常見於末期腎病和糖尿病患者。遠端對稱性多發性神經病(DSP)(一種影響身體兩側並且侵害末梢感覺神經的神經病)是糖尿病性神經病的最常見臨床表現，並且大約佔所有在糖尿病患者中觀察到的神經病的80-85％。DSP影響30-40％的糖尿病1型和2型患者。糖尿病性神經病一般可損害許多不同的神經，包括坐骨神經。
腦澱粉樣β-蛋白(Aβ)血管病(CAA)是阿爾茲海默氏病和相關病症的關鍵特徵。CAA是一種腦中小血管疾病，其中澱粉樣蛋白在血管壁中的沉積物可導致中風、腦出血或者痴呆。血管澱粉樣沉澱導致此血管壁退化和動脈瘤形成，並且可能是10-15％的老年出血性中風的病因。
心肌梗塞是由於心肌區域的氧氣供應不足而導致該區域受損或者死亡。心肌梗塞通常是由阻斷冠狀動脈之一(將血液和氧氣攜帶至心肌的血管)的凝塊引起。該凝塊阻止血液和氧氣到達此心臟區域，導致此區域中的心肌細胞死亡。
充血性心力衰竭影響將近5百萬美國人，並且每年診斷出超過500000個新病例。缺血性心臟病是充血性心力衰竭的最常見原因，佔所有病例的60-70％。在定義上，充血性心力衰竭是一種臨床綜合症，其中心臟病會減少心輸出量、增加靜脈壓力並伴以分子異常，其引起患病心臟的進行性惡化以及未成熟心肌細胞(cardiomyocyte，cardiac muscle cell)死亡。任何未考慮會加速心肌死亡的分子進程的心力衰竭定義都忽視了此綜合症的一個主要臨床特徵。小鼠和大鼠中的證據證明，心肌細胞死亡途徑的抑制劑明顯地改善心臟功能和動物存活率[Laugwiz等人，《人類基因治療》(Hum GeneTher)(2001)122051-63]。
B.護腦素下列討論是用以方便對本發明的理解，而非傾向於或承認本發明的先前技術。
護腦素多肽起初是通過其保護神經細胞不受阿爾茲海默氏病相關毒性影響的能力而得以鑑別[Hashimoto等人，Biochem Biophys Res Commun(2001)283460-8]。護腦素具有以下胺基酸序列Met-Ala-Pro-Arg-Gly-Phe-Ser-Cys-Leu-Leu-Leu-Leu-Thr-Ser-Glu-Ile-Asp-Leu-Pro-Val-Lys-Arg-Arg-Ala(基因序列資料庫登記號AAK50430)。據報導，一種在胺基酸位置14由甘氨酸取代絲氨酸的護腦素類似物([Gly14]-護腦素)明顯比護腦素更具活性[Niikura等人，《神經科學研究雜誌》(JNeurosci Res)(2002)70380-91]。已經在一名阿爾茲海默氏病患者腦中檢測到護腦素免疫反應性，但是在正常人腦中很少發現[Tajima等人，《神經科學通信》(Neurosci Lett)(2002)324227-31]。
我們已經發現護腦素會保護神經細胞免受許多毒性損傷。其包括由三種引起FAD的突變基因以及Aβ調節的神經毒性[Hashimoto等人，《美國國家科學院期刊》(Proc Natl Acad Sci USA)(2001)986336-41；Niikura等人，《神經科學研究雜誌》(J Neurosci Res)(2002)70380-91]。Aβ神經毒性涉及c-Jun N-末端激酶(JNK)途徑，而且護腦素是作用於JNK下遊的一點[Hashimoto等人，《神經化學雜誌》(J Neurochem)(2003)84864-77]。人們也已經報導護腦素對於抗血清缺失的神經元具有保護活性[Takahashi等人，《神經報告》(Neuroreport)(2002)13903-7]。據報導，護腦素的大鼠直向同源物對於抗興奮毒性死亡的神經元具有保護活性[Caricasole等人，《美國實驗生物學協會聯合會雜誌》(FASEB J)(2002)161331-3]。
護腦素同樣顯示出可從朊毒體肽誘導的凋亡中挽救皮層神經元[Sponne等人，《分子細胞神經科學》(Mol Cell Neurosci)(2004)2595-102]。
另外，人們也已經證明護腦素會改善小鼠的學習和記憶障礙，因而證明其作為有益於預防或者治療所述學習或者記憶障礙的藥劑的功效[Mamiya Ukai，《英國藥理學雜誌》(Br J Pharmacol)(2001)1341597-9]。
最近，護腦素已顯示出肌細胞保護性。護腦素會從Aβ誘導的毒性中挽救人類腦血管平滑肌細胞。
總之，上述內容說明護腦素和證明護腦素活性的化合物具有細胞死亡保護性。所述細胞死亡可包含細胞凋亡。特別是，護腦素和證明護腦素活性的化合物會保護神經細胞和肌細胞免於細胞死亡，並且具有用於預防或者治療神經退化性疾病、腦澱粉樣血管病和一些心肌病的功效。
C.G蛋白偶聯受體下列討論是用以方便對本發明的理解，而非傾向於或承認本發明的先前技術。
雖然人體內存在多種受體類別，但是此G蛋白偶聯受體(GPCR)類別表現出最大的豐富性和治療相關性。估計在人類基因組中存在約30000-40000種基因，且估計所述基因中之大約2％可編碼GPCR。
對於醫藥產品開發來說，GPCR代表一個重要領域已由已知的100種GPCR中的大約20種研製出所有處方藥物的大約60％。例如，在1999年，前100種商標處方藥物中的下列藥物與GPCR相互作用(括號中說明藥物相關性治療的原發性疾病及/或病症)Claritin(過敏) Prozac(抑鬱症) Vasotec(高血壓)Paxil(抑鬱症) Zoloft(抑鬱症) Zyprexa(精神病症)Cozaar(高血壓) Imitrex(偏頭痛) Zantac(逆流性疾病)Propulsid(逆流性疾病) Risperdal(精神分裂症) Serevent(哮喘)Pepcid(逆流性疾病) Gaster(潰瘍) Atrovent(支氣管痙攣)Effexor(抑鬱症) Depakote(癲癇) Cardura(前列腺肥大)Allegra(過敏) Lupron(前列腺癌) Zoladex(前列腺癌)Diprivan(知覺喪失) BuSpar(焦慮症) Ventolin(支氣管痙攣)Hytrin(高血壓) Wellbutrin(抑鬱症) Zyrtec(鼻炎)Plavix(MI/中風) Toprol-XL(高血壓) Tenormin(心絞痛)Xalatan(青光眼) Singulair(哮喘) Diovan(高血壓)Harnal(前列腺肥大)(醫藥廣告新聞(Med Ad News)1999數據)。
GPCR共享一個通用結構基元，其具有七個含有22至24種疏水胺基酸的序列，所述序列形成七個α螺旋，每一個螺旋都跨膜(每一個區段是由數字標識，即跨膜區-1(TM-1)、跨膜區(TM-2)等)。這些跨膜螺旋是由細胞膜外部(或「胞外」側)的跨膜區-2和跨膜區-3、跨膜區-4和跨膜區-5以及跨膜區-6和跨膜區-7之間(其分別稱作「胞外」區域1、2和3(EC-1、EC-2和EC-3))的胺基酸鏈連接。這些跨膜螺旋也是由細胞膜內部(或者「胞內」側)的跨膜區-1和跨膜區-2、跨膜區-3和跨膜區-4以及跨膜區-5和跨膜區-6之間(其分別稱作「胞內」區域1、2和3(IC-1、IC-2和IC-3))的胺基酸鏈連接。受體的「羧基」(「C」)末端處於細胞內的胞內空間，並且該受體的「氨基」(「N」)末端處於細胞外部的胞外空間。
一般而言，當一個配體與受體結合時(通常稱作受體「活化」)，受體構象發生改變以利於其胞內區域與胞內「G蛋白」之間的偶聯。據報導，GPCR與G蛋白「雜交」，即一種GPCR可與一種以上的G蛋白相互作用。(見Kenakin，T.，43《生命科學》(Life Sciences)1095(1988))。儘管存在其它G蛋白，現在已經鑑定出的G蛋白為Gq、Gs、Gi、Gz和Go。與G蛋白偶聯的配體活化GPCR起始一個信號級聯過程(稱作「信號轉導」)。在一般條件下，信號轉導最終導致細胞活化或者抑制作用。雖然不希望受理論限制，但是我們認為IC-3環和受體羧基末端都與G蛋白相互作用。
另外，也存在雜交G蛋白，其似乎與磷脂酶C途徑中的多種類別GPCR偶聯，諸如Gα15或者Gα16[Offermanns和Simon的《生物學化學雜誌》(J Biol Chem)(1995)27015175-80]；或者存在設計為與同一途徑(例如磷脂酶C)中的大量不同GPCR偶聯的嵌合G蛋白[Milligan和Rees的《醫藥科學進展》(Trends in Pharmaceutical Sciences)(1999)20118-24]。
與Gi偶聯的GPCR會降低胞內cAMP含量。Gi樣G蛋白是同樣導致胞內cAMP含量降低的G蛋白。按照此標準，Go和Gz都是Gi樣G蛋白。黑素細胞技術(見下文)適於鑑定與Gi偶聯的GPCR，並且同樣適於鑑定所述Gi偶聯GPCR的調節物。
在生理條件下，GPCR存在於細胞膜中，在兩種不同構象之間達到平衡「非活性」狀態和「活性」狀態。處於非活性狀態的受體不能和胞內信號轉導途徑連接以起始會導致一種生物響應的信號轉導。將受體構象改變為活性狀態會允許其與信號轉導途徑相連(通過G蛋白)，並且產生一種生物響應。
受體可以通過配體或者諸如藥物的化合物而在活性狀態下穩定。最近的發現(包括，但是並非排外性地限制於受體胺基酸序列的修飾)提供不同於配體或者藥物的方法以增進並且穩定受體的活性狀態構象。這些方法通過模擬與受體結合的配體的效應而有效地使該受體在活性狀態下穩定。通過這些配體獨立性方法達到的穩定稱作「組成性受體活化」。
D.FPRL2下列討論是用以方便對本發明的理解，而非傾向於或承認本發明的先前技術。
FPRL2(基因序列資料庫登記號L14061)是一種仍未證實內源性配體的GPCR。最近，合成肽WKYMVm已顯示出在成熟人類樹突細胞上與FPRL2結合，並且引起胞內Ca2+增加[Yang等人，《白血球生物學雜誌》(J Leukoc Biol)(2002)72598-607]。
FPRL2與GPCR FPRL1(基因序列資料庫登記號AF054013)和FPR(基因序列資料庫登記號M60627)最相似。最近，據報導護腦素使用FPRL1作為功能受體[Ying等人，《幹擾素和細胞因子研究雜誌》(Journal of Interferonand Cytokine Research)(2002)22(Supplement 1)S180]。FPRL1或者FPR的內源性配體並未顯示出同樣是FPRL2的配體，並且實際上FPRL1或者FPR的許多內源性配體(例如脂氧素A4)已顯示出並非FPRL2的配體。

發明內容
申請者出乎意料地鑑定出護腦素是FPRL2的一種選擇性激動劑，並且因而提供護腦素作為FPRL2的第一種內源性配體。另外，申請者出乎意料地鑑定出FPRL2是一種護腦素選擇性結合的受體。
本發明部分地涉及鑑定一種測試化合物是否為護腦素GPCR的調節物的方法，其中所述護腦素GPCR是FPRL2。本發明同樣包含由所述方法鑑定的調節物以及將所述調節物用於預防或治療細胞死亡相關病症的方法，尤其是與神經細胞或者肌細胞死亡相關的病症。
第一方面，本發明的特徵在於鑑定一種候選化合物是否為護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中該受體與G蛋白偶聯；該方法包含下列步驟(a)使該候選化合物與所述受體接觸；(b)確定受體功能性是否得到調節；其中受體功能性的變化表示該候選化合物是護腦素GPCR的調節物。
在某些實施例中，所述GPCR是重組的。在某些實施例中，所述接觸包含與宿主細胞或與表達GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，該載體包含編碼受體的多核苷酸。
在一些實施例中，所述接觸是在GPCR的已知配體存在下進行。在一些實施例中，所述的已知配體是GPCR的激動劑。在一些實施例中，所述激動劑是護腦素或者其肽類似物或衍生物。在一些實施例中，所述類似物是[Gly14]-護腦素。在某些實施例中，所述護腦素或者所述[Gly14]-護腦素的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的護腦素來說，EC50是約0.32μM，並且EC75是約1.5μM。護腦素和[Gly14]-護腦素可在市場上購得(PeptidesInternational，Louisville，KY)。在一些實施例中，所述激動劑是化合物1(表1中的「Cmpd1」)。在某些實施例中，所述化合物1的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的化合物1來說，EC50是約2.8μM，並且EC75是約15μM。
本發明同時涉及鑑定一種候選化合物是否為細胞死亡保護性GPCR的調節物的方法，其包含以下步驟(a)使該候選化合物與包含FPRL2胺基酸序列的GPCR接觸，其中該受體與G蛋白偶聯；和(b)確定受體功能性是否得到調節；其中受體功能性的變化表示該候選化合物為細胞死亡保護性GPCR的調節物。
在某些實施例中，所述GPCR是重組的。在某些實施例中，所述接觸包含與宿主細胞或與表達GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，該載體包含編碼受體的多核苷酸。
在某些實施例中，所述細胞是神經細胞並且所述GPCR具有神經保護性。在某些實施例中，所述細胞是肌細胞並且所述GPCR具有肌保護性。在一些實施例中，所述細胞不是神經細胞且不是肌細胞。在某些實施例中，所述細胞表達人類FPRL2。
在一些實施例中，所述細胞死亡包含細胞凋亡。在一些實施例中，所述細胞死亡包含Aβ誘導的細胞死亡。在一些實施例中，所述細胞死亡包含依賴INK活化的細胞死亡。在一些實施例中，所述細胞死亡包含由血清組分缺失所誘導的細胞死亡。在一些實施例中，所述細胞死亡包含興奮毒性細胞死亡。
在一些實施例中，所述接觸是在GPCR的已知配體存在下進行。在一些實施例中，所述的已知配體是GPCR的激動劑。在一些實施例中，所述激動劑是護腦素或者其肽類似物或衍生物。在一些實施例中，所述類似物是[Gly14]-護腦素。在某些實施例中，所述護腦素或者所述[Gly14]-護腦素的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的護腦素來說，EC50是約0.32μM，並且EC75是約1.5μM。護腦素和[Gly14]-護腦素可在市場上購得(PeptidesInternational，Louisville，KY)。在一些實施例中，所述激動劑是化合物1。在某些實施例中，所述化合物1的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的化合物1來說，EC50是約2.8μM，並且EC75是約15μM。
本發明同時涉及鑑定一種候選化合物是否為神經保護調節物的方法，其包含以下步驟(a)使該候選化合物與包含FPRL2胺基酸序列的GPCR接觸，其中該受體與G蛋白偶聯；和(b)確定受體功能性是否得到調節；其中受體功能性的變化表示該候選化合物為神經保護調節物。
在某些實施例中，所述GPCR是重組的。在某些實施例中，所述接觸包含與宿主細胞或與表達GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，該載體包含編碼受體的多核苷酸。
在某些實施例中，受體功能性的增加表示該候選化合物為神經保護性化合物。
在一些實施例中，所述接觸是在GPCR的已知配體存在下進行。在一些實施例中，所述的已知配體是GPCR的激動劑。在一些實施例中，所述激動劑是護腦素或者其肽類似物或衍生物。在一些實施例中，所述類似物是[Gly14]-護腦素。在某些實施例中，所述護腦素或者所述[Gly14]-護腦素的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的護腦素來說，EC50是約0.32μM並且EC75是約1.5μM。護腦素和[Gly14]-護腦素可在市場上購得(Peptides International，Louisville，KY)。在一些實施例中，所述激動劑是化合物1。在某些實施例中，所述化合物1的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的化合物1來說，EC50是約2.8μM並且EC75是約15μM。
本發明同時涉及鑑定一種候選化合物是否為肌保護調節物的方法，其包含以下步驟(a)使該候選化合物與包含FPRL2胺基酸序列的GPCR接觸，其中該受體與G蛋白偶聯；和(b)確定受體功能性是否得到調節；其中受體功能性的變化表示該候選化合物為肌保護調節物。
在某些實施例中，所述GPCR是重組的。在某些實施例中，所述接觸包含與宿主細胞或與表達GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞表達載體，所述載體包含編碼受體的多核苷酸。
在某些實施例中，受體功能性的增加表示該候選化合物為肌保護性化合物。
在一些實施例中，所述接觸是在GPCR的已知配體存在下進行。在一些實施例中，所述的已知配體是GPCR的激動劑。在一些實施例中，所述激動劑是護腦素或者其肽類似物或衍生物。在一些實施例中，所述類似物是[Gly14]-護腦素。在某些實施例中，所述護腦素或者所述[Gly14]-護腦素的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的護腦素來說，EC50是約0.32μM並且EC75是約1.5μM。護腦素和[Gly14]-護腦素可在市場上購得(Peptides International，Louisville，KY)。在一些實施例中，所述激動劑是化合物1。在某些實施例中，所述化合物1的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的化合物1來說，EC50是約2.8μM並且EC75是約15μM。
本發明同時涉及鑑定一種候選化合物是否為護腦素GPCR的調節物的方法，其包含以下步驟(a)在允許表達重組護腦素GPCR的條件下培養表達護腦素GPCR的宿主細胞，所述宿主細胞已轉染了包含編碼所述重組護腦素GPCR的多核苷酸的表達載體，所述重組護腦素GPCR包含FPRL2胺基酸序列，其中該受體與G蛋白偶聯；(b)使步驟(a)中的表達護腦素GPCR的宿主細胞或者步驟(a)中的所述宿主細胞的膜與候選化合物接觸；(c)使對照宿主細胞或者所述對照宿主細胞的膜與步驟(b)中的候選化合物接觸，其中所述對照宿主細胞不表達重組護腦素GPCR蛋白；(d)測量與來自步驟(a)的宿主細胞和步驟(c)的對照宿主細胞的重組護腦素GPCR相互作用的候選化合物的調節效應；和(e)比較測試化合物在宿主細胞和對照宿主細胞上的調節效應。
在某些實施例中，所述經轉染宿主細胞是瞬時轉染。在某些實施例中，所述宿主細胞是穩定轉染。
本發明同時涉及鑑定一種候選化合物是否為護腦素GPCR的調節物的方法，其包含以下步驟(a)在允許表達重組護腦素GPCR的條件下培養表達護腦素GPCR的宿主細胞，所述宿主細胞已轉染了包含編碼所述重組護腦素GPCR的多核苷酸的表達載體，所述重組護腦素GPCR包含FPRL2胺基酸序列，其中該受體與G蛋白偶聯；(b)使步驟(a)中的表達護腦素GPCR的宿主細胞的第一個群體或者步驟(a)中的表達護腦素GPCR的細胞的所述第一個群體的膜與所述護腦素GPCR的已知配體接觸；(c)使步驟(a)中的表達護腦素GPCR的宿主細胞的第二個群體或者步驟(a)中的表達護腦素GPCR的細胞的所述第二個群體的膜與所述候選化合物和已知護腦素GPCR配體接觸；(d)使對照宿主細胞或者所述對照宿主細胞的膜與步驟(c)中的候選化合物接觸，其中所述對照宿主細胞不表達重組護腦素GPCR蛋白；(e)測量候選化合物的調節效應，所述候選化合物在來自步驟(b)、步驟(c)和步驟(d)的細胞的已知護腦素GPCR配體存在與不存在下都與重組護腦素GPCR相互作用；和(f)比較由步驟(b)、步驟(c)和步驟(d)所確定的候選化合物的調節效應。
在一些實施例中，所述配體是該護腦素GPCR的激動劑。在一些實施例中，所述激動劑是護腦素或者其肽類似物或衍生物。在一些實施例中，所述類似物是[Gly14]-護腦素。在某些實施例中，所述護腦素或者所述[Gly14]-護腦素的所述存在為約0.1μM至1.5μM，更佳為約0.5μM至1μM。在某些實施例中，所述激動劑的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的護腦素來說，EC50是約0.3μM並且EC75是約1.5μM。在一些實施例中，所述激動劑是化合物1。在某些實施例中，所述化合物1的所述存在對於所述確定方法來說為約EC50至約EC75。舉例說明且不加限制，對於[35S]GTPγS結合分析中的化合物1來說，EC50是約2.8μM並且EC75是約15μM。
在某些實施例中，所述經轉染宿主細胞是瞬時轉染。在某些實施例中，所述宿主細胞是穩定轉染。
本發明同樣涉及鑑定一種候選化合物是否為護腦素GPCR的調節物的方法，其包含以下步驟(a)在允許表達重組護腦素GPCR的條件下培養表達護腦素GPCR的宿主細胞，所述宿主細胞已轉染了包含編碼所述重組護腦素GPCR的多核苷酸的表達載體，所述重組護腦素GPCR包含FPRL2胺基酸序列，其中該受體與G蛋白偶聯；(b)使步驟(a)中的表達護腦素GPCR的宿主細胞的第一個群體或者步驟(a)中的表達護腦素GPCR的宿主細胞的所述第一個群體的膜與候選化合物接觸；(c)使步驟(a)中的表達護腦素GPCR的細胞的第二個群體或者步驟(a)中的表達護腦素GPCR的細胞的所述第二個群體的膜不與步驟(b)的候選化合物接觸；(d)使對照宿主細胞或者所述對照宿主細胞的膜與步驟(b)中的候選化合物接觸，其中所述對照宿主細胞不表達重組護腦素GPCR蛋白；(e)測量候選化合物的調節效應，所述化合物與來自步驟(b)和步驟(c)的細胞和來自步驟(d)的細胞的重組護腦素GPCR蛋白相互作用；和(f)比較由步驟(b)和步驟(c)與由步驟(d)所確定的候選化合物的調節效應。
在某些實施例中，所述經轉染宿主細胞是瞬時轉染。在某些實施例中，所述經宿主細胞是穩定轉染。
在一些實施例中，FPRL2胺基酸序列是SEQ ID NO2的胺基酸序列。在一些實施例中，FPRL2胺基酸序列是SEQ ID NO2胺基酸序列的變異體。在一些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體是所述胺基酸序列的等位基因變異體或者哺乳動物直向同源物。在一些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體是所述胺基酸序列或所述胺基酸序列的等位基因變異體或者哺乳動物直向同源物的非內源性、組成性活化突變體。在某些實施例中，所述非內源性、組成性活化突變體是SEQ ID NO12的胺基酸序列。在某些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體是所述胺基酸序列或所述胺基酸序列的等位基因變異體或者哺乳動物直向同源物的生物活性片段。在某些實施例中，所述生物活性片段是SEQ ID NO2胺基酸序列或者所述胺基酸序列的等位基因變異體或者哺乳動物直向同源物的胺基酸2-353。在某些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體與SEQ IDNO2胺基酸序列具有至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或者至少約99％的一致性。在一些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或者至少約99％的一致性。
在某些實施例中，包含FPRL2胺基酸序列的所述GPCR是包含一種或一種以上抗原決定部位標記物的融合蛋白。在某些實施例中，包含一種或一種以上抗原決定部位標記物的所述融合蛋白是SEQ ID NO6的胺基酸序列。
在某些實施例中，所述G蛋白對百日咳毒素敏感。在某些實施例中，所述G蛋白是Gi或者Go。在某些實施例中，所述G蛋白是Gi。在某些實施例中，所述G蛋白是Go。
在某些實施例中，所述G蛋白是Gα15或者Gα16。在某些實施例中，所述G蛋白是Gα15。在某些實施例中，所述G蛋白是Gα16。
在某些實施例中，所述G蛋白是Gq。
在另外某些實施例中，所述確定或者所述比較是通過使用黑素細胞分析來進行。
在某些實施例中，所述確定或者所述比較是通過測量選自由環AMP(cAMP)、環GMP(cGMP)、肌醇三磷酸(IP3)、二醯基甘油(DAG)和Ca2+組成的群組的第二信使含量來進行。在其他優選實施例中，所述第二信使是cAMP。在某些實施例中，cAMP含量有所降低。在一些實施例中，cAMP的所述測量是在包含所述GPCR的膜中完成。
在某些實施例中，所述確定或所述比較是通過CRE-報告基因分析來進行。在某些實施例中，所述報告基因是螢光素酶。在一些實施例中，所述報告基因是β-半乳糖苷酶。
在某些實施例中，所述確定或所述比較是通過測量胞內Ca2+來進行。在某些實施例中，胞內Ca2+含量有所增加。在某些實施例中，所述Ca2+測量是由FLIPR完成。
在某些實施例中，所述宿主細胞包含Gα15或Gα16或嵌合Gq(del)/Giα亞單位，並且所述確定或所述比較是通過測量胞內Ca2+來進行。在某些實施例中，所述宿主細胞包含Gα15，並且所述確定或所述比較是通過測量胞內Ca2+來進行。在某些實施例中，所述宿主細胞包含Gα16，並且所述確定或所述比較是通過測量胞內Ca2+來進行。在某些實施例中，所述宿主細胞包含嵌合Gq(del)/Giα亞單位，並且所述確定或所述比較是通過測量胞內Ca2+來進行。
在某些實施例中，所述確定或所述比較是通過測量胞內IP3來進行。在某些實施例中，胞內IP3含量有所增加。
在某些實施例中，所述宿主細胞包含Gα15或Gα16或嵌合Gq(del)/Giα亞單位，並且所述確定或所述比較是通過測量胞內IP3來進行。在某些實施例中，所述宿主細胞包含Gα15，並且所述確定或所述比較是通過測量胞內IP3來進行。在某些實施例中，所述宿主細胞包含Gα16，並且所述確定或所述比較是通過測量胞內IP3來進行。在某些實施例中，所述宿主細胞包含嵌合Gq(del)/Giα亞單位，並且所述確定或所述比較是通過測量胞內IP3來進行。
在某些實施例中，所述確定或所述比較是通過測量與包含所述GPCR的膜結合的GTPγS來進行。在某些實施例中，所述GTPγS是以[35S]標記。
在某些實施例中，所述方法另外包含下列步驟，即比較由該候選化合物引起的受體調節與通過使受體與該受體的已知調節物接觸所引起的第二受體調節。在某些實施例中，所述的已知調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是護腦素或者其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，護腦素的所述類似物是[Gly14]-護腦素。在某些實施例中，所述激動劑是化合物1。
在第二方面，本發明的特徵在於一種化合物，其中所述化合物是式(I)的二甲基八氫菲羧酸醯胺衍生物 其中R1-R4是各自獨立地選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧基羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基氨基、C2-6二烷基甲醯胺、滷素、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基、C1-4滷代烷硫基、羥基、硝基和硫醇組成的群組；或其醫藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。
在某些實施例中，至少一個R1-R4基團不是H。
在某些實施例中，當R1、R3和R4都是H時，R2不是-OAc或-OCH3。
在某些實施例中，當R1和R4都是H並且R3是-CH3時，R2不是-OH。
在某些實施例中，當R1和R4都是H並且R2是H或Br時，R3不是-CH(CH3)2。
在某些實施例中，當R1、R2和R3都是H時，R4不是-OAc。
在某些實施例中，R1是H或滷素。在某些實施例中，R1是H並且可由下文所示的式(Ib)代表 其中式(Ib)中的各變量具有與本文(上文和下文)所述內容相同的含義。
在某些實施例中，R4是H或者滷素。在某些實施例中，R4是H並且可由下文所示的式(Id)代表 其中式(Id)中的各變量具有與本文(上文和下文)所述內容相同的含義。在某些實施例中，本發明的化合物是式(Id)，其中R1是H；這些化合物可由下文所示的式(If)代表 其中式(Id)中的各變量具有與本文(上文和下文)所述內容相同的含義。
在某些實施例中，R2是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
在某些實施例中，R2是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧基羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
在某些實施例中，R2是H或者滷素。在一些實施例中，R2是H。
在某些實施例中，R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。在某些實施例中，R3是C1-6烷基。在某些實施例中，R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧基羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
在第三方面，本發明的特徵在於一種式(I)化合物 其中R1-R4是各自獨立地選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧基羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基氨基、C2-6二烷基甲醯胺、滷素、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基、C1-4滷代烷硫基、羥基、硝基和硫醇組成的群組；或其醫藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。
在第四方面，本發明的特徵在於根據第一方面的方法所鑑定的GPCR調節物，但是該調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。本發明的特徵也在於根據第一方面的方法所鑑定的GPCR調節物，但是該調節物不是肽。
本發明的特徵也在於可根據第一方面的方法鑑定的GPCR調節物，但是該調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。本發明的特徵也在於可根據第一方面的方法鑑定的GPCR調節物，但是該調節物不是肽。
在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些實施例中，所述調節物是激動劑。在某些實施例中，所述調節物是部分激動劑。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在某些實施例中，所述調節物優選是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在一些實施例中，所述調節物是EC50小於100μM、小於10μM或者小於1μM的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是EC50小於選自1μM到100μM區間的值的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是EC50小於選自1μM到10μM區間的值的激動劑。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是一種激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM 到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是一種激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在一些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在一些實施例中，所述調節物可調節護腦素GPCR。
在一些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在一些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在第五方面，本發明的特徵在於一種製備醫藥學或生理學上可接受的組合物的方法，其包含將載劑與護腦素GPCR的調節物混合，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，該調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，該調節物是部分激動劑。在某些實施例中，該調節物是反向激動劑。在某些實施例中，該調節物是拮抗劑。在某些實施例中，該調節物優選激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
本發明的特徵也在於一種製備醫藥學或生理學上可接受的組合物的方法，其包含鑑定護腦素GPCR的調節物，其中所述受體包含FPRL2胺基酸序列；並且隨後將載劑與該調節物混合，其中該調節物可由根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，由根據第一方面的方法來鑑定該調節物。在某些實施例中，該調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，該調節物是部分激動劑。在某些實施例中，該調節物是反向激動劑。在某些實施例中，該調節物是拮抗劑。在某些實施例中，該調節物優選是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述組合物是藥物。在某些實施例中，所述組合物是生理學上可接受的組合物。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在一些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在一些實施例中，所述調節物可調節護腦素GPCR。
在一些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在一些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在第六方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，該方法包含使該受體與該受體的調節物接觸。在某些實施例中，該調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，該調節物是部分激動劑。在某些實施例中，該調節物是反向激動劑。在某些實施例中，該調節物是拮抗劑。在某些實施例中，該調節物優選是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
本發明的特徵也在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，該方法包含使該受體與該受體的調節物接觸，其中該調節物可由第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，該調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，該調節物是部分激動劑。在某些實施例中，該調節物是反向激動劑。在某些實施例中，該調節物是拮抗劑。在某些實施例中，該調節物優選激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在一些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在一些實施例中，所述調節物可調節護腦素GPCR。
在一些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物保護細胞免於死亡。
在一些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在一些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述接觸包含將調節物投用到包含受體的膜。
在某些實施例中，所述接觸包含將調節物投用到包含受體的細胞。
在某些實施例中，所述接觸包含將調節物投用到包含受體的組織。
在某些實施例中，所述接觸包含將調節物投用到包含受體的個體。在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最佳是人類。
在某些實施例中，個體的所述投藥方式是口服。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑且所述個體需要預防或治療細胞死亡，其中所述細胞不是神經細胞且不是肌細胞。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑且所述個體需要預防或治療細胞死亡相關病症，其中所述細胞不是神經細胞且不是肌細胞。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑且所述個體需要保護細胞免於死亡，其中所述細胞不是神經細胞且不是肌細胞。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑且所述個體需要預防或治療細胞增生病症，其中所述細胞不是神經細胞且不是肌細胞。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑且所述個體需要減少神經細胞死亡。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑且所述個體需要預防或治療神經細胞死亡相關病症。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑且所述個體需要保護神經細胞免於死亡。
在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑且所述個體需要預防或治療神經細胞增生病症。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在其它實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑且所述個體需要減少肌細胞死亡。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑且所述個體需要預防或治療肌細胞死亡相關病症。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心急梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑且所述個體需要保護肌細胞免於死亡。
在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑且所述個體需要預防或治療肌細胞增生病症。在某些實施例中，所述肌細胞增生病症是選自由動脈粥樣硬化、再狹窄和腫瘤支持性血管生成組成的群組。
在第七方面，本發明的特徵在於第六方面的方法，其中體外細胞培養物包含一種或一種以上包含所述護腦素GPCR的細胞，並且其中所述細胞培養需要預防或治療細胞死亡。
在某些實施例中，所述方法包含將有效劑量的調節物投用到包含受體的細胞。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述一種或一種以上細胞包含一種或一種以上神經細胞。
在某些實施例中，所述一種或一種以上細胞包含一種或一種以上肌細胞。
在一些實施例中，所述一種或一種以上細胞包含一種或一種以上非神經細胞和非肌細胞。
在某些實施例中，在所述細胞培養中使用的培養基包含所述調節物。
在某些實施例中，所述調節物是作為細胞培養基的補充物來提供。
在某些實施例中，所述調節物是根據第一方面的方法來鑑定。
在某些實施例中，所述調節物是根據第二方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物是化合物1。
在某些實施例中，所述調節物是化合物1並且化合物1的所述有效劑量為約0.5μM、約1.0μM、約2.0μM、約3.0μM、約4.0μM、約5.0μM、約6.0μM、約7.0μM、約8.0μM、約9.0μM、約10.0μM、約20.0μM、約30.0μM、約40.0μM或約50μM。
在第八方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中減少神經細胞死亡，該方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。
本發明的特徵也在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療神經細胞死亡相關病症，該方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，該調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在一些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸將所述調節物口服投用到所述個體。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
本發明也涉及一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療神經細胞增生病症，所述方法包含使治療有效劑量的所述受體的調節物與所述受體接觸。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞-增生病症是神經母細胞瘤。在其它實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最優選人類。
在第九方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中減少肌細胞死亡，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。
本發明的特徵也在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β蛋白血管病。在一些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，該調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
本發明也涉及一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療肌細胞增生病症，所述方法包含使治療有效劑量的該受體的調節物與所述受體接觸。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和(c)腫瘤支持性血管生成。
在一些實施例中，該肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是再狹窄。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最優選人類。
在第十方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中減少細胞死亡，其中所述細胞不是神經細胞且不是肌細胞，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。
本發明的特徵也在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療細胞死亡相關病症，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，該調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
本發明也涉及一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療細胞增生病症，所述方法包含使治療有效劑量的該受體的調節物與所述受體接觸。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最優選人類。
在第十一方面，本發明的特徵在於一種減少個體中的神經細胞死亡的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述GPCR包含FPRL2胺基酸序列。
本發明的特徵也在於一種預防或治療個體中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，該調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
本發明的特徵也在於一種預防或治療個體中的神經細胞增生病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在其它實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最優選人類。
在第十二方面，本發明的特徵在於一種減少個體中的肌細胞死亡的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述GPCR包含FPRL2胺基酸序列。
本發明的特徵也在於一種預防或治療個體中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β蛋白血管病。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，該調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
本發明也涉及一種預防或治療個體中的肌細胞增生病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和(c)腫瘤支持性血管生成。
在一些實施例中，該肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是再狹窄。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最優選人類。
在第十三方面，本發明的特徵在於一種減少個體中的細胞死亡的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述GPCR包含FPRL2胺基酸序列。
本發明的特徵也在於一種預防或治療個體中的細胞死亡相關病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，該調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
本發明也涉及一種預防或治療個體中的細胞增生病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最優選人類。
在第十四方面，本發明的特徵在於一種醫藥學或生理學上可接受的組合物，其包含護腦素GPCR調節物、基本上由所述調節物組成或由所述調節物組成，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述組合物是藥物。在某些實施例中，所述組合物是生理上可接受的組合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在第十五方面，本發明的特徵在於一種減少神經細胞死亡的方法，其包含將所述第十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的個體。
本發明的特徵也在於一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將所述第十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，將治療有效劑量的所述醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到所述個體。
在某些實施例中，所述醫藥學或生理學上可接受的組合物的所述提供或投用方式是口服。
本發明也涉及一種預防或治療神經細胞增生病症的方法，其包含將所述第十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在其它實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最優選人類。
在第十六方面，本發明的特徵在於一種減少肌細胞死亡的方法，其包含將所述第十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的個體。
本發明的特徵也在於一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含所述第十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，將治療有效劑量的所述醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到所述個體。
在某些實施例中，所述醫藥學或生理學上可接受的組合物的所述提供或投用方式是口服。
本發明也涉及一種預防或治療肌細胞增生病症的方法，其包含將所述第十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和(c)腫瘤支持性血管生成。
在某些實施例中，該肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在某些實施例中，該肌細胞增生病症是再狹窄。在某些實施例中，該肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最優選人類。
在第十七方面，本發明的特徵在於一種減少細胞死亡的方法，其包含將所述第十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的個體。
本發明的特徵也在於一種預防或治療細胞死亡相關病症的方法，其包含將所述第十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，將治療有效劑量的所述醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到所述個體。
在某些實施例中，所述醫藥學或生理學上可接受的組合物的所述提供或投用方式是口服。
本發明也涉及一種預防或治療細胞增生病症的方法，其包含將所述第十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。最優選人類。
在第十八方面，本發明的特徵在於一種用於通過療法來治療人類動物體的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在人類或動物中，更佳是人類。
在第十九方面，本發明的特徵在於一種用於通過療法來減少人類動物體內的神經細胞死亡的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
本發明的特徵也在於一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的神經細胞死亡相關病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在一些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明也涉及一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的神經細胞增生病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在人類或動物中，優選人類。
在第二十方面，本發明的特徵在於一種用於通過療法來減少人類動物體內的肌細胞死亡的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
本發明的特徵也在於一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的肌細胞死亡相關病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β蛋白血管病。在一些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100V的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明也涉及一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的肌細胞增生病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和(c)腫瘤支持性血管生成。
在一些實施例中，所述肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在一些實施例中，所述肌細胞增生病症是再狹窄。在一些實施例中，所述肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在人類或動物中，更佳是人類。
在第二十一方面，本發明的特徵在於一種用於通過療法來減少人類動物體內的細胞死亡的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
本發明的特徵也在於一種用於通過療法來預防或減少人體或動物體內的細胞死亡相關病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明也涉及一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的細胞增生病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔、小鼠、大鼠、非人類靈長類動物或人類。在人類或動物中，更佳是人類。
在第二十二方面，本發明的特徵在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於減少神經細胞死亡的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
本發明的特徵也在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
本發明的特徵也在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療神經細胞增生病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在第二十三方面，本發明的特徵在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於減少肌細胞死亡的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
本發明的特徵也在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β蛋白血管病。在一些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在一些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明也涉及一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療肌細胞增生病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組
(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和(c)腫瘤支持性血管生成。
在一些實施例中，所述肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在一些實施例中，所述肌細胞增生病症是再狹窄。在一些實施例中，所述肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。
在第二十四方面，本發明的特徵在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於減少細胞死亡的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
本發明的特徵也在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或等位基因變異體、同源物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，該調節物不是肽。在某些實施例中，該調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，該調節物是激動劑。在某些實施例中，所述激動劑是根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述激動劑是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明也涉及一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療細胞增生病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在第二十五方面，本發明的特徵在於一種調節人類GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中減少神經細胞死亡，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。
本發明的特徵也在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
本發明同樣涉及一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療神經細胞增生病症，所述方法包含使治療有效劑量的所述受體的調節物與所述受體接觸。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在其它實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第二十六方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中減少肌細胞死亡，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。
本發明的特徵也在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
本發明同樣涉及一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療肌細胞增生病症，所述方法包含使治療有效劑量的所述受體的調節物與所述受體接觸。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，該肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和(c)腫瘤支持性血管生成。
在一些實施例中，該肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是再狹窄。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第二十七方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中減少細胞死亡，其中所述細胞不是神經細胞且不是肌細胞，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。
本發明的特徵也在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療細胞死亡相關病症，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由下列各物組成的群組坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心、肺、胰臟、骨和卵巢。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
本發明同樣涉及一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療細胞增生病症，所述方法包含使治療有效劑量的所述受體的調節物與所述受體接觸。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第二十八方面，本發明的特徵在於一種減少個體中的神經細胞死亡的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述GPCR包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。
本發明的特徵也在於一種預防或治療個體中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；
(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
本發明的特徵也在於一種預防或治療個體中的神經細胞增生病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在其它實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第二十九方面，本發明的特徵在於一種減少個體中的肌細胞死亡的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述GPCR包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。
本發明的特徵也在於一種預防或治療個體中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物口服投用到所述個體。
本發明同樣涉及一種預防或治療個體中的肌細胞增生病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和(c)腫瘤支持性血管生成。
在一些實施例中，該肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是再狹窄。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第三十方面，本發明的特徵在於一種減少個體中的細胞死亡的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述GPCR包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。
本發明的特徵也在於一種預防或治療個體中的細胞死亡相關病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由下列各物組成的群組坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心、肺、胰臟、骨和卵巢。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述接觸包含將所述調節物投用到所述個體。
本發明同樣涉及一種預防或治療個體中的細胞增生病症的方法，所述個體需要所述預防或治療，所述方法包含使治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第三十一方面，本發明的特徵在於一種醫藥學或生理學上可接受的組合物，其包含護腦素GPCR調節物、基本上由所述調節物組成或由所述調節物組成，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物可通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述調節物是通過執行根據第一方面的方法來鑑定。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述組合物是藥物。在某些實施例中，所述組合物是生理學上可接受的組合物。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在第三十二方面，本發明的特徵在於一種減少神經細胞死亡的方法，其包含將所述第三十一方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的個體。
本發明的特徵也在於一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將所述第三十一方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，將治療有效劑量的所述醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到所述個體。
在某些實施例中，所述醫藥學或生理學上可接受的組合物的所述提供或投藥方式是口服。
本發明同樣涉及一種預防或治療神經細胞增生病症的方法，其包含將所述第三十一方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在其它實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第三十三方面，本發明的特徵在於一種減少肌細胞死亡的方法，其包含將所述第三十一方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的個體。
本發明的特徵也在於一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將所述第三十一方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，將治療有效劑量的所述醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到所述個體。
在某些實施例中，所述醫藥學或生理學上可接受的組合物的所述提供或投藥方式是口服。
本發明同樣涉及一種預防或治療肌細胞增生病症的方法，其包含將所述第三十一方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，該肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和(c)腫瘤支持性血管生成。
在一些實施例中，該肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是再狹窄。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第三十四方面，本發明的特徵在於一種減少細胞死亡的方法，其包含將所述第三十一方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的個體。
本發明的特徵也在於一種預防或治療細胞死亡相關病症的方法，其包含將所述第三十一方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，將治療有效劑量的所述醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到所述個體。
在某些實施例中，所述醫藥學或生理學上可接受的組合物的所述提供或投藥方式是口服。
本發明同樣涉及一種預防或治療細胞增生病症的方法，其包含將所述第三十一方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的個體。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第三十五方面，本發明的特徵在於一種用於通過療法來治療人體或動物體的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物可通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述調節物是通過執行根據第一方面的方法來鑑定。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於100μM、小於10μM或小於1μM。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μMEC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第三十六方面，本發明的特徵在於一種用於通過療法來減少人體或動物體內的神經細胞死亡的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物可通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述調節物是通過執行根據第一方面的方法來鑑定。
本發明的特徵也在於一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的神經細胞死亡相關病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物可通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述調節物是通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組
(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明同樣涉及一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的神經細胞增生病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在其它實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第三十七方面，本發明的特徵在於一種用於通過療法來減少人體或動物體內的肌細胞死亡的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物可通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述調節物是通過執行根據第一方面的方法來鑑定。
本發明的特徵也在於一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的肌細胞死亡相關病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物可通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述調節物是通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明同樣涉及一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的肌細胞增生病症的方法中的護腦素GPCR受體，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，該肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和
(c)腫瘤支持性血管生成。
在一些實施例中，該肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是再狹窄。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第三十八方面，本發明的特徵在於一種用於通過療法來減少人體或動物體內的細胞死亡的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物可通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述調節物是通過執行根據第一方面的方法來鑑定。
本發明的特徵也在於一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的細胞死亡相關病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物可通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述調節物是通過執行根據第一方面的方法來鑑定。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60M、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明同樣涉及一種用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的細胞增生病症的方法中的護腦素GPCR調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第三十九方面，本發明的特徵在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於減少神經細胞死亡的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。
本發明的特徵也在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(d)創傷性腦損傷；
(e)脊髓損傷；(f)周圍神經病；和(g)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有神經保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100M、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
本發明的特徵也在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療神經細胞增生病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在其它實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在第四十方面，本發明的特徵在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於減少肌細胞死亡的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。
本發明的特徵也在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有肌保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明同樣涉及一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療肌細胞增生病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。在某些實施例中，該肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組(a)動脈粥樣硬化；(b)再狹窄；和(c)腫瘤支持性血管生成。
在一些實施例中，該肌細胞增生病症是動脈粥樣硬化。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是再狹窄。在一些實施例中，該肌細胞增生病症是腫瘤支持性血管生成。
在第四十一方面，本發明的特徵在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於減少細胞死亡的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。
本發明的特徵也在於一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述方法包含執行根據第一方面的方法以由此鑑定調節物。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。在某些實施例中，所述調節物不是肽。在某些實施例中，所述調節物是根據第四方面。在某些實施例中，所述調節物是選自由下列各物組成的群組激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑。在某些優選實施例中，所述調節物是激動劑。
在某些實施例中，所述調節物對GPCR具有選擇性。
在某些實施例中，所述調節物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用調節物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述調節物具有細胞死亡保護性。
在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其具有小於100μM、小於10μM或小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到100μM區間的值。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其EC50小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述EC50是獲自選自由下列各方法組成的群組的分析由來自經轉染CHO細胞的膜來執行的GTPγS結合分析，所述CHO細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；使用經轉染黑素細胞來執行的黑素細胞分析，所述黑素細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽；和使用經轉染HEK293細胞來執行的全細胞cAMP分析，所述HEK293細胞表達具有SEQ ID NO2或SEQ ID NO6胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於100μM、小於10μM或者小於1μM的EC50。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於100μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於90μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於80μM的EC50的反向激動劑或者拮抗劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於70μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於60μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於50μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於40μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於30μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於20μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於10μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於9μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於8μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於7μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於6μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於5μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於4μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於3μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於2μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是在所述分析中具有小於1μM的EC50的激動劑。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的EC50。在一些實施例中，所述調節物是激動劑，其在所述分析中具有小於選自1μM到10μM區間的值的EC50。
在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其在選自由GTPγS結合分析、黑素細胞分析和全細胞cAMP分析組成的群組的分析中具有小於選自1μM到100μM區間的值的IC50，其中所述分析是使用表達具有SEQ ID NO12胺基酸序列的重組護腦素GPCR多肽的轉染細胞來完成。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於100μM、小於90μM、小於80μM、小於70μM、小於60μM、小於50μM、小於40μM、小於30μM、小於20μM或小於10μM。在一些實施例中，所述調節物是反向激動劑或拮抗劑，其IC50在所述分析中小於選自1μM到10μM區間的值。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑或者拮抗劑，其IC50在所述分析中小於10μM、小於9μM、小於8μM、小於7μM、小於6μM、小於5μM、小於4μM、小於3μM、小於2μM或小於1μM。
本發明同樣涉及一種使用護腦素GPCR調節物來製備用於預防或治療細胞增生病症的醫藥品的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述調節物是反向激動劑。在某些實施例中，所述調節物是拮抗劑。
在四十二方面，本發明的特徵在於一種製備醫藥學或生理學上可接受的組合物的方法，其包含將根據第二方面的化合物與載劑混合。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第四十三方面，本發明的特徵在於一種製備醫藥學或生理學上可接受的組合物的方法，其包含將根據第三方面的化合物與載劑混合。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第四十四方面，本發明的特徵在於一種醫藥學或生理學上可接受的組合物，其包含根據第二方面的化合物、基本上由該化合物組成或由該化合物組成。
在某些實施例中，所述組合物是藥物。在某些實施例中，所述組合物是生理學上可接受的組合物。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第四十五方面，本發明的特徵在於一種醫藥學或生理學上可接受的組合物，其包含根據第三方面的化合物、基本上由該化合物組成或由該化合物組成。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第四十六方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中減少神經細胞死亡，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第四十七方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；
(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在四十八方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中減少肌細胞死亡，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第四十九方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中減少細胞死亡，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十一方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節是用於在需要所述調節的個體中預防或治療細胞死亡相關病症，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十二方面，本發明的特徵在於一種減少個體中的神經細胞死亡的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物(具有護腦素GPCR)接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十三方面，本發明的特徵在於一種預防或治療個體中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物(具有護腦素GPCR)接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；
(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十四方面，本發明的特徵在於一種減少個體中的肌細胞死亡的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物(具有護腦素GPCR)接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十五方面，本發明的特徵在於一種預防或治療個體中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物(具有護腦素GPCR)接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十六方面，本發明的特徵在於一種減少個體中的細胞死亡的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含使所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物(具有護腦素GPCR)接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十七方面，本發明的特徵在於一種預防或治療個體中的細胞死亡相關病症的方法，所述個體需要所述減少，所述方法包含所述受體與治療有效劑量的根據第二或第三方面的化合物接觸或與治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物(具有護腦素GPCR)接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與治療有效劑量的根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十八方面，本發明的特徵在於一種減少神經細胞死亡的方法，其包含將根據第二或第三方面的化合物或治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物提供給或投用到需要所述減少的個體。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第三方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受組合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第五十九方面，本發明的特徵在於一種治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據第二或第三方面的化合物或治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物提供給或投用到需要所述治療或預防的個體。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第三方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；
(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第六十方面，本發明的特徵在於一種減少肌細胞死亡的方法，其包含將根據第二或第三方面的化合物或治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物提供給或投用到需要所述減少的個體。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第三方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第六十一方面，本發明的特徵在於一種治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據第二或第三方面的化合物或治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物提供給或投用到需要所述治療或預防的個體。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第三方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第六十二方面，本發明的特徵在於一種減少細胞死亡的方法，其包含將根據第二或第三方面的化合物或治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物提供給或投用到需要所述減少的個體。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第三方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第六十三方面，本發明的特徵在於一種治療細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據第二或第三方面的化合物或治療有效劑量的根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物提供給或投用到需要所述治療或預防的個體。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第二方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根據第三方面的化合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。在某些實施例中，所述提供或投用醫藥學或生理學上可接受的組合物是提供或投用根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述個體是哺乳動物。在某些實施例中，所述個體是非人類哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。在某些實施例中，所述哺乳動物是小鼠、大鼠、非人類靈長目動物或人類。最優選人類。
在第六十四方面，本發明的特徵在於一種根據第二或第三方面的化合物，其是用於通過療法來治療人體或動物體的方法中。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第六十五方面，本發明的特徵在於一種根據第二或第三方面的化合物，其是用於通過療法來減少人體或動物體內的神經細胞死亡的方法中。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第六十六方面，本發明的特徵在於一種根據第二或第三方面的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的神經細胞死亡相關病症的方法中。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第六十七方面，本發明的特徵在於一種根據第二或第三方面的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的肌細胞死亡的方法中。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第六十八方面，本發明的特徵在於一種根據第二或第三方面的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的肌細胞死亡相關病症的方法中。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第六十九方面，本發明的特徵在於一種根據第二或第三方面的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的細胞死亡的方法中。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第七十方面，本發明的特徵在於一種根據第二或第三方面的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體內的細胞死亡相關病症的方法中。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在某些實施例中，所述動物是哺乳動物。在某些實施例中，所述哺乳動物是馬、牛、羊、豬、貓、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人類靈長目動物。在人類或動物中，更優選人類。
在第七十一方面，本發明的特徵在於一種使用根據第二或第三方面的化合物來製備用於減少神經細胞死亡的醫藥品的方法。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第七十二方面，本發明的特徵在於一種使用根據第二或第三方面的化合物來製備用於預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品的方法。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；
(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。
運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是阿爾茲海默氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是帕金森氏病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是中風。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是運動神經元疾病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是學習或記憶障礙。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是創傷性腦損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是脊髓損傷。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是周圍神經病。在一些實施例中，該神經細胞死亡相關病症是朊毒體相關疾病。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第七十三方面，本發明的特徵在於一種使用根據第二或第三方面的化合物來製備用於減少肌細胞死亡的醫藥品的方法。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。
某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第七十四方面，本發明的特徵在於一種使用根據第二或第三方面的化合物來製備用於預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品的方法。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣β-蛋白血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是腦澱粉樣β-蛋白血管病。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是心肌梗塞。在一些實施例中，該肌細胞死亡相關病症是充血性心力衰竭。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第七十五方面，本發明的特徵在於一種使用根據第二或第三方面的化合物來製備用於減少細胞死亡的醫藥品的方法。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中，所述化合物是根據第三方面。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第七十六方面，本發明的特徵在於一種使用根據第二或第三方面的化合物來製備用於預防或治療細胞死亡相關病症的醫藥品的方法。在某些實施例中，所述化合物是根據第二方面。在某些實施例中所述化合物是根據第三方面。在某些實施例中，所述細胞屬於或起源於表達人類FPRL2的組織。在某些實施例中，所述表達人類FPRL2的組織是選自由坐骨神經、前海馬回、全腦、海馬回、黑質、脾、心臟、肺、胰腺、骨和卵巢組成的群組。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第七十七方面，本發明的特徵在於一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法包含使所述受體與根據第二或第三方面的化合物接觸或與根據第四十四或第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與根據第二方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與根據第三方面的化合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與根據第四十四方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。在某些實施例中，所述接觸是與根據第四十五方面的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
在某些實施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於腹膜內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些實施例中，所述口服生物利用度相對於靜脈內投藥為至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。
在某些實施例中，所述口服生物可利用化合物另外能夠通過血腦屏障。
在第七十八方面，本發明的特徵在於一種鑑定候選化合物是否與護腦素GPCR結合的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法包含下列步驟(a)在該候選化合物存在或不存在下，使受體與可經檢測標記的已知GPCR配體接觸；(b)確定所述經標記配體的結合在該候選化合物存在時是否受到抑制；其中，所述抑制作用表示該候選化合物與護腦素GPCR結合。
在某些實施例中，該護腦素GPCR是重組的。在某些實施例中，所述接觸包含與宿主細胞或與表達GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，該載體包含編碼該受體的多核苷酸。
本發明同樣涉及一種確定候選化合物是否與護腦素GPCR結合的方法，其包含下列步驟(a)在允許表達重組護腦素GPCR的條件下培養表達護腦素GPCR的宿主細胞，所述宿主細胞是經包含編碼所述重組護腦素GPCR的多核苷酸的表達載體轉染，該GPCR包含FPRL2胺基酸序列；(b)將步驟(a)中表達護腦素GPCR的細胞的第一個群體暴露於所述護腦素GPCR的已知可檢測標記配體中；(c)將步驟(a)中表達護腦素GPCR的細胞的第二個群體暴露於該化合物和步驟(b)中的所述護腦素GPCR的已知可檢測標記配體中；
(d)確定步驟(b)和步驟(c)中所述表達護腦素GPCR的細胞的已知經標記配體的結合；和(e)將該已知經標記配體與所述護腦素GPCR的結合和其與步驟(b)和步驟(c)中表達護腦素GPCR的細胞的結合相比；其中所述護腦素GPCR的已知經標記配體的結合在該化合物存在時受到抑制表示該化合物與護腦素GPCR結合。
本發明同樣涉及一種確定候選化合物是否與護腦素GPCR結合的方法，其包含下列步驟(a)在允許表達重組護腦素GPCR的條件下培養表達護腦素GPCR的宿主細胞，所述宿主細胞是經包含編碼所述重組護腦素GPCR的多核苷酸的表達載體轉染，該GPCR包含FPRL2胺基酸序列；(b)由步驟(a)中表達護腦素GPCR的細胞來制膜；(c)將步驟(b)中的第一個膜製劑群體暴露於步驟(b)中所述護腦素GPCR的已知可檢測標記配體中；(d)將步驟(b)中的第二個膜製劑體暴露於該候選化合物和所述護腦素GPCR的已知經標記配體中；(e)確定所述護腦素GPCR的已知經標記配體與步驟(c)和步驟(b)中的膜製劑的結合；和(f)將所述護腦素GPCR的已知經標記配體的結合與步驟(c)和步驟(d)中的膜製劑的結合相比；其中所述護腦素GPCR的已知經標記配體的結合在該化合物存在時受到抑制表示該化合物與護腦素GPCR結合。
在一些實施例中，該FPRL2胺基酸序列是SEQ ID NO2胺基酸序列。在一些實施例中，該FPRL2胺基酸序列是SEQ ID NO2胺基酸序列的變異體。在一些實施例中，該SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體是所述胺基酸序列的等位基因變異體或哺乳動物直向同源物。在一些實施例中，該SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體是所述胺基酸序列或所述胺基酸序列的等位基因變異體或哺乳動物直向同源物的非內源性、組成性活化突變體。在某些實施例中，所述非內源性、組成性活化突變體是SEQ ID NO12胺基酸序列。在某些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體是所述胺基酸序列或所述胺基酸序列的等位基因變異體或哺乳動物直向同源物的生物活性片段。在某些實施例中，所述生物活性片段是SEQ ID NO2胺基酸序列或所述胺基酸序列的等位基因變異體或哺乳動物直向同源物的胺基酸2-353。在某些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％的一致性。在某些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％的一致性。
在某些實施例中，所述膜製劑是通過用Brinkman Polytron使細胞勻化來製備。在某些實施例中，通過用每一個所述勻漿器(polytron)進行勻化來製備所述膜製劑，歷經3個持續時間為10-20秒的脈衝。
在某些實施例中，所述候選化合物並非護腦素變異體或等位基因變異體、同系物、直系同源類似物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。
在某些實施例中，所述候選化合物不是肽。
在某些實施例中，所述已知配體是護腦素。
在某些實施例中，所述已知配體是護腦素的肽類似物或衍生物。
在某些實施例中，所述已知配體是[Gly14]-護腦素。
在某些實施例中，所述已知配體是化合物1。
在某些實施例中，所述已知配體是根據第二方面的化合物。
在某些實施例中，所述已知配體是根據第三方面的化合物。
在某些實施例中，所述已知配體是根據第四方面的化合物。
在某些實施例中，所述已知配體是對GPCR具有特異性的抗體或該抗體的衍生物。在一些實施例中，所述抗體衍生物是抗體的抗原結合片段。
在某些實施例中，所述標記物是選自由下列各物組成的群組(a)放射性同位素；(b)酶；和(c)螢光團。
在某些實施例中，所述標記物是放射性同位素。在某些實施例中，所述標記物是選自由3H、14C、35S和125I組成的群組。
可使用此項技術中已知的技術來化學合成經放射性標記的護腦素或[Gly14]-護腦素[例如，見克雷頓(Creighton)，1983年，《(蛋白質》(Proteins).紐約，紐約W.H.Freeman和公司；和Hunkapiller等人，《(自然》(Nature)(1984年)310105-11]。通過經放射性標記的胺基酸來引入放射性同位素。在某些實施例中，所述經放射性標記的胺基酸是3H-精氨酸或14C-精氨酸。
在某些實施例中，所述經放射性標記的護腦素或[Gly14]-護腦素的所述存在為約0.1μM到約1.5μM。
可使用此項技術中已知的技術(下文)來放射性標記化合物1。在某些實施例中，使用3H或14C來放射性標記化合物1。
在某些實施例中，所述經放射性標記的化合物1的所述存在為約1μM到約15μM。
在其它實施例中，所述方法另外包含下列步驟將候選化合物對第一種已知經標記配體的結合作用的抑制水平與已知結合到GPCR的第二種配體對所述第一種已知經標記配體的結合作用的第二個抑制水平相比。
在第七十九方面，本發明的特徵在於一種檢測與護腦素GPCR相結合的配體的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法包含下列步驟使測試配體與宿主細胞或與表達所述受體的宿主細胞膜在允許所述受體與所述測試配體之間存在相互作用的條件下接觸；並檢測與所述受體結合的配體。
在一些實施例中，該FPRL2胺基酸序列是SEQ ID NO2胺基酸序列。在一些實施例中，該FPRL2胺基酸序列是SEQ ID NO2胺基酸序列的變異體。在一些實施例中，該SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體是所述胺基酸序列的等位基因變異體或哺乳動物直向同源物。在一些實施例中，該SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體是所述胺基酸序列或所述胺基酸序列的等位基因變異體或哺乳動物直向同源物的非內源性、組成性活化突變體。在某些實施例中，所述非內源性、組成性活化突變體是SEQ ID NO12胺基酸序列。在某些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體是所述胺基酸序列或所述胺基酸序列的等位基因變異體或哺乳動物直向同源物的生物活性片段。在某些實施例中，所述生物活性片段是SEQ ID NO2胺基酸序列或所述胺基酸序列的等位基因變異體或哺乳動物直向同源物的胺基酸2-353。在某些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％的一致性。在某些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的所述變異體與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％的一致性。
在某些實施例中，該護腦素GPCR是重組的。在某些實施例中，所述接觸包含與宿主細胞或與表達GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，該載體包含編碼該受體的多核苷酸。
在某些實施例中，所述候選化合物並非護腦素變異體或等位基因變異體、同系物、直向同源物或其肽類似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。在某些實施例中，該調節物並非抗體或其衍生物。
在某些實施例中，所述測試配體不是肽。
在某些實施例中，所述膜製劑是通過用Brinkman Polytron使細胞勻化來製備。在某些實施例中，通過用每一個所述勻漿器進行勻化來製備所述膜製劑，歷經3個持續時間為10-20秒的脈衝。
在某些實施例中，所述測試配體已經標記。在某些實施例中，所述標記物是放射性同位素。在某些實施例中，所述標記物是選自由3H、14C、35S和125I組成的群組。
申請者保留將任何一種或一種以上候選化合物排除在本發明任一實施例以外的權利。申請者同樣保留將任何一種或一種以上調節物排除在本發明任一實施例以外的權利，所述調節物包括(但不限於)護腦素或其任何肽類似物或衍生物。申請者另外保留將任何多核苷酸或多肽排除在本發明任一實施例以外的權利。此外，申請者保留將任何細胞死亡相關病症或任何神經細胞死亡或肌細胞死亡病症排除在本發明任一實施例以外的權利。
在本申請案全文中，列舉各種公開案、專利和經公布專利申請案。在本申請案中引用的此等公開案、專利和經公布專利申請案的揭示內容是以全文引用的方式併入本揭示內容中。公開案、專利或經公布專利申請案的申請者在本文中所提供的引文並未被所述公開案、專利或經公布專利申請案的申請者視為現有技術。
在所屬領域的技術人員的權限內對所揭示發明作出的修改和擴充涵蓋在上述揭示內容和從屬權利要求範圍內。


圖1舉例說明且不加限制，圖1描述「目標受體」的候選化合物的初始篩選結果，該「目標受體」是內源性、組成性活性Gs偶聯GPCR的Gsα融合蛋白構建物。「化合物A」的結果提供於孔A2中。「化合物B」的結果提供於孔G9中。(見實例7)圖2使用一種定製的高密度寡核苷酸微陣列在人類組織樣品上進行微陣列分析，所述微陣列含有監控FPRL2表達的探針。該柱狀圖提供對每一種繪圖的組織重複測量FPRL2所得到的相對表達水平(平均差)和標準誤差。相對表達水平在縱軸上說明。組織身份顯示在水平軸上並且是(從左到右)腦橋，上部；腦下垂體，女性；坐骨神經；嗅球；腦下垂體，男性；胼胝體、前海馬回、扣帶回、腹側被蓋區(VTA)；神經祖細胞；腦橋，下部；脊髓；下丘腦，前；星形細胞，休眠；小腦；前腦皮層，上BM9；扁桃體；全腦；海馬回；蒼白球；延髓；黑質；背根神經節；丘腦；星形細胞，活化；胎兒腦；紋狀體；單核細胞，附著；Jurkat；U87；脾；單核細胞，CD14+；胸腺，樹突狀細胞前體；嗜中性粒細胞；嗜曙紅細胞；自然殺傷細胞；骨髓；血小板；紅系祖細胞；淋巴結；T細胞，CD4+休眠；AC133+；T細胞，CD4+活化；T細胞，CD8+休眠；B細胞，CD19+；T細胞，CD8+活化；CD34+祖細胞；軟骨；脂肪細胞，原代；脂肪；前成脂肪細胞，經培養；脂肪細胞，經培養；心包；主動脈內皮細胞；主動脈；HUVEC；主動脈平滑肌細胞，增殖；主動脈平滑肌細胞，可收縮；心臟；直腸；小腸；結腸；胃；肝臟；胎兒肝臟；肺；骨骼肌；食道；胰腺；膀胱；甲狀腺；氣管；腎；唾液腺；皮膚；腎上腺；胰島；間質幹細胞；骨；子宮；前列腺；睪丸；卵巢；胎盤；子宮頸；乳腺；前列腺上皮。
觀察該圖，說明人類FPRL2的表達涵蓋腦、周圍神經和心臟。腦中的表達涵蓋前海馬回、海馬回和黑質。周圍神經中的表達涵蓋坐骨神經。顯著FPRL2表達也在(例如)脾、肺、胰腺、骨和卵巢中觀察到。(見實例9)。
圖3對人類FPRL2(圖A)、FPRL1(圖B)和FPR(圖C)進行護腦素和[Gly14]護腦素促進的[35S]GTPγS結合分析。在FPRL2中，護腦素的EC50是約320nm，而[Gly14]護腦素的EC50則為約72nm。這些值比在FPRL1中的相應值(其對於護腦素約為9.24μM，而對於[Gly14]護腦素約為1.5μM)低一個以上的數量級。護腦素或[Gly14]-護腦素無法證明在FPR中顯示高達10μM劑量的顯著活性。因而護腦素和[Gly14]-護腦素是FPRL2的強選擇性激動劑。(見實例10)圖4在黑素細胞中，人類FPRL2以劑量依賴性方式和Gi偶聯，對護腦素作出響應。在黑素細胞中，護腦素促進的色素聚集(Gi偶聯)的EC50約為239nM。(見實例11)圖5在人類FPRL2、FPRL1和FPR中，化合物1(表1中的「Cmpd1」)的活性是由[35S]GTPγS結合分析和黑素細胞分析來確定。我們發現化合物1是FPRL2的強選擇性激動劑。(見實例21)圖6在人類FPRL2和FPRL1中，護腦素、[Gly14]-護腦素和化合物1的活性是由全細胞腺苷酸環化酶分析來確定。雖然護腦素和[Gly14]-護腦素是FPRL2和FPRL1兩者的激動劑(圖A)，但化合物1是FPRL2的選擇性激動劑。(見實例21)圖7通過人類FPRL2傳遞信號的護腦素的百日咳敏感性是由腺苷酸環化酶分析來確定。通過人類FPRL2傳遞信號的化合物1的百日毒素咳敏感性是由相似方法來確定。由護腦素(圖A)或由化合物1(圖B)調節的cAMP抑制作用對百日咳敏感，說明FPRL2在對護腦素或化合物1的響應中與對百日咳敏感的G蛋白偶聯。(見實例22)圖8FPRL2在對護腦素、[Gly14]-護腦素或化合物1的響應中與Gα16偶聯的能力是由IP3分析來確定。觀察到護腦素(圖A)、[Gly14]-護腦素(圖B)和化合物1(圖C)使胞內IP3含量呈劑量依賴性增加，說明在對護腦素或者化合物1的響應中，FPRL2都可以通過Gα16傳遞信號。(見實例23)圖9在由腦起源性神經生長因子(BDNF)促使分化之前或之後確定由人類神經母細胞瘤細胞系SH-SY5Y進行的FPRL2和FPRL1表達。FPRL2mRNA在未分化和已分化的SH-SY5Y細胞中都可以檢測到，而FPRL1 mRNA在兩種細胞中都不可檢測。(見實例24)
圖10護腦素或化合物1抑制血清除盡的分化SH-SY5Y細胞的細胞死亡的能力是由LDH分析(圖A)或臺盼藍染色(圖B)來檢測。護腦素和化合物1都抑制血清除盡的SH-SY5Y細胞的細胞死亡。(見實例25)圖11確定護腦素或化合物1抑制由抗APP mAb 22C11誘導的原代小鼠皮層神經元的細胞死亡的能力。圖A是原代小鼠皮層神經元的5天培養物的照片。護腦素和化合物1保護原代小鼠皮層神經元免於出現由抗APP mAb22C11誘導的細胞死亡(圖B)。(見實例26)圖12確定護腦素或化合物1抑制分化SH-SY5Y細胞的Aβ誘導的細胞死亡的能力。護腦素和化合物1保護分化SH-SY5Y細胞免於出現由Aβ誘導的細胞死亡。(見實例27)圖13展示一種缺氧/復氧體外模型的概圖。
圖14通過免疫組織化學來確定阿爾茲海默氏病腦中的FPRL2表達相對於非阿爾茲海默氏病腦中的FPRL2表達的情形。在阿爾茲海默氏病腦樣品中的FPRL2表達相對於非阿爾茲海默氏病腦樣品中的FPRL2表達有所上調。
具體實施例方式
定義已經圍繞受體而展開的科學文獻採用了許多術語來指示對受體具有各種影響的配體。為清晰和一致起見，在所述專利文獻全文中將使用以下定義。在這些定義與這些術語的其他定義相牴觸時，應參照以下定義激動劑應指與受體結合時可激活胞內響應的物質(例如配體、候選化合物)。在一些實施例中，激動劑是與受體結合時可激活胞內響應(例如，增強GTPγS與膜的結合或降低胞內cAMP含量)的那些先前未知物質。在一些實施例中，激動劑是與受體結合時具有神經保護性或肌保護性的那些先前未知物質。
變構調節物應指影響受體的功能活性而不抑制內源性配體與受體結合的物質(例如配體、候選化合物)。變構調節物包括反向激動劑、部分激動劑和激動劑。
阿爾茲海默氏病是一種進行性神經退化性疾病，其特徵在於一個以上認知區域中的功能顯著喪失，並常伴有行為或個性的改變。阿爾茲海默氏病是痴呆的最普遍原因。人們認為β-澱粉樣肽(Aβ)在阿爾茲海默氏病的病理中起主要作用。
本文所用的胺基酸縮寫列於表A中。
表A

拮抗劑應指在同一位點與激動劑競爭結合至受體而不激活胞內響應並可因此抑制由激動劑引起的胞內響應的物質(例如配體、候選化合物)。在激動劑不存在下，拮抗劑不減少基線胞內響應。在一些實施例中，拮抗劑是與受體結合時與激動劑競爭來抑制細胞響應的那些先前未知物質，例如其中細胞響應為GTPγS結合至膜或胞內cAMP含量降低。
本文中的抗體是用來涵蓋單克隆抗體和多克隆抗體。抗體進一步是用來涵蓋IgG、IgA、IgD、IgE和IgM。抗體包括全抗體(包括單鏈全抗體)和其抗原結合片段(包括Fab、Fab′、F(ab)2和F(ab′)2)。抗體可來自任何動物來源。抗體更優選來自人類、鼠科動物、兔、山羊、豚鼠、倉鼠、駱駝、驢、綿羊、馬或雞的抗體。更佳地，抗體具有解離常數或Kd值小於5×10-6M、10-6M、5×10-7M、10-7M、5×10-8M、10-8M、5×10-9M、10-9M、5×10-10M、10-10M、5×10-11M、10-11M、5×10-12M、10-12M、5×10-13M、10-13M、5×10-14M、10-14M、5×10-15M和10-15M的結合親和力。本發明的抗體可通過此項技術中已知的任何合適方法來製備。抗體的衍生物是用來涵蓋(但不限於)抗原結合片段。
GPCR多肽或胺基酸序列的生物活性片段應指具有天然存在GPCR的結構功能和生化功能的多肽或胺基酸序列的片段。在某些實施例中，此生物活性片段與G蛋白偶聯。在某些實施例中，此生物活性片段結合至護腦素。
候選化合物應指可經受篩選技術檢驗的分子(例如且不限於化合物)。
腦澱粉樣β-蛋白血管病或腦澱粉樣血管病(CAA)是阿爾茲海默氏病和相關病症的關鍵特徵。CAA是腦中出現的小血管疾病，其中澱粉樣蛋白在管壁上的沉積物可導致中風、腦出血或痴呆。血管澱粉樣沉積導致管壁惡化和動脈瘤形成，並且可能是10-15％的老年出血性中風的病因。
化學基團(GROUP、MOIETY或RADICAL)術語「C1-5醯基」表示連接羰基的C1-4烷基，其中烷基的定義與本文所述的定義相同；一些實例包括(但不限於)乙醯基、丙醯基、正丁醯基、異丁醯基、2-甲基-丁醯基、2，2-二甲基-丙醯基(即新戊醯基)、3-甲基-丁醯基和其類似基團。
術語「C1-5醯氧基」表示連接氧原子的C1-5醯基，其中C1-5醯基的定義與本文所述的定義相同；一些實例包括(但不限於)乙醯氧基、丙醯氧基、正丁醯氧基、異丁醯氧基、2-甲基丁醯氧基、2，2-二甲基-丙醯氧基(即新戊醯氧基)、3-甲基丁醯氧基和其類似基團。
術語「C2-6烯基」表示含有2至6個碳的基團，其中存在至少一個碳-碳雙鍵，一些實施例為2至3個碳，並且一些實施例具有2個碳。術語「烯基」包含E和Z異構體。此外，術語「烯基」包括二烯類。因此，如果存在一個以上的雙鍵，那麼所述雙鍵可都為E或Z或為E與Z的混合物。烯基的實例包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、異丙烯基、2-甲基-丙烯基、1-甲基-丙烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1，3-二烯基和其類似基團。
術語「C1-4烷氧基」表示如本文所定義的直接連接氧原子的烷基。實例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基和其類似基團。
術語「C1-6烷基」表示含有所指示的碳數的直鏈或支鏈碳基，例如，在一些實施例中，烷基是「C1-4烷基」並且此基團含有1至4個碳，在其他實施例中，烷基是「C2-6烷基」並且此基團含有2至6個碳。在一些實施例中，烷基含有1至3個碳，一些實施例含有1至2個碳，並且一些實施例含有1個碳。烷基的實例包括(但不限於)甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、異戊基、仲戊基、新戊基、己基、異己基、仲己基、新己基和其類似基團。
術語「C1-4烷基甲醯胺基」或「C1-4烷基甲醯胺」表示連接醯胺基中的氮的單一C1-4烷基，其中烷基的定義與本文所建立的定義相同。所述C1-5烷基甲醯胺基可由下式來代表
實例包括(但不限於)N-甲基甲醯胺、N-乙基甲醯胺、N-正丙基甲醯胺、N-異丙基甲醯胺、N-正丁基甲醯胺、N-仲丁基甲醯胺、N-異丁基甲醯胺、N-叔丁基甲醯胺和其類似物。
術語「C2-6炔基」表示含有2至6個碳和至少一個碳-碳三鍵的基團，一些實施例為2至4個碳，並且一些實施例具有2個碳。炔基的實例包括(但不限於)乙炔基、丙-1-炔基、3-丙-2-炔基、丁-1-炔基、1-甲基-丙-2-炔基、丁-1，3-二炔基和其類似基團。術語「炔基」包括二炔類。
術語「C1-4烷基胺基」表示一個連接胺基的烷基，其中此烷基的含義與本文所述的含義相同。一些實例包括(但不限於)甲胺基、乙胺基、正丙胺基、異丙胺基、正丁胺基、仲丁胺基、異丁胺基、叔丁胺基和其類似基團。
術語「C1-4烷基磺醯胺」表示術語「C1-4烷基亞磺醯基」表示連接式-S(O)-的亞碸基的C1-6烷基，其中此烷基的定義與本文所述的定義相同。實例包括(但不限於)甲基亞磺醯基、乙基亞磺醯基、正丙基亞磺醯基、異丙基亞磺醯基、正丁基亞磺醯基、仲丁基亞磺醯基、異丁基亞磺醯基、叔丁基亞磺醯基和其類似基團。
術語「C1-4烷基磺醯基」表示連接式-S(O)2-的碸基的C1-6烷基，其中此烷基的定義與本文所述的定義相同。實例包括(但不限於)甲磺醯基、乙磺醯基、正丙基磺醯基、異丙基磺醯基、正丁基磺醯基、仲丁基磺醯基、異丁基磺醯基、叔丁基磺醯基和其類似基團。
術語「C1-4烷硫基」表示連接式-S-的硫化物基團的C1-6烷基，其中此烷基的定義與本文所述的定義相同。實例包括(但不限於)甲硫基(即CH3S-)、乙硫基、正丙硫基、異丙硫基、正丁硫基、仲丁硫基、異丁硫基、叔丁硫基和其類似基團。
術語「C1-4烷基脲基」表示術語「氨基」表示-NH2基團。
術語「C1-6-烷氧基羰基」表示羧酸的C1-6烷基酯，其中所述烷基是如本文所定義。實例包括(但不限於)甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、異丙氧羰基、丁氧羰基、仲丁氧羰基、異丁氧羰基、叔丁氧羰基和其類似基團。
術語「甲醯胺」表示-CONH2基團。
術語「羧基」(「carboxy」或「carboxyl」)表示-CO2H基團；也可稱為羧酸基。
術語「氰基」表示-CN基。
術語「C3-6環烷基」表示含有3至6個碳的飽和環基；一些實施例含有3至5個碳，一些實施例含有3至4個碳。實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基。
術語「C2-6二烷基氨基」表示由兩個相同或不同烷基取代的氨基，其中烷基的定義與本文所述的定義相同。C2-6二烷基氨基可由以下基團來代表 C2-6二烷基氨基的實例包括(但不限於)二甲氨基、甲基乙基氨基、二乙氨基、甲基丙基氨基、甲基異丙基氨基和其類似基團。
術語「C1-4二烷基甲醯胺基」或「C1-4二烷基甲醯胺」表示兩個連接甲醯胺基的相同或不同烷基，其中烷基的定義與本文所述的定義相同。C1-4二烷基甲醯胺基可由以下基團來代表 其中C1-4的定義與本文所述的定義相同。二烷基甲醯胺的實例包括(但不限於)N，N-二甲基甲醯胺、N-甲基-N-乙基甲醯胺、N，N-二乙基甲醯胺、N-甲基-N-異丙基甲醯胺和其類似物。
術語「滷素」或「滷基」表示氟基、氯基、溴基或碘基。
術語「C1-4滷代烷氧基」表示如本文所定義的滷代烷基，其直接連接氧原子。實例包括(但不限於)二氟甲氧基、三氟甲氧基、2，2，2-三氟乙氧基、五氟乙氧基和其類似基團。
術語「C1-4滷代烷基」表示烷基，其中所述烷基是經滷素單取代至全取代，其中全取代滷代烷基可由式ChL2h+1來代表，其中L為滷素且「h」代表碳原子數；當存在一個以上的滷素時，這些滷素可相同或不同並是選自由F、Cl、Br和I組成的群組；應了解，術語「烷基」和「滷素」的定義與本文所建立的定義相同。在一些實施例中，滷代烷基是「C1-4滷代烷基」且此基團含有1至4個碳，一些實施例含有1至3個碳，一些實施例含有1至2個碳，一些實施例含有1個碳。當滷代烷基是經滷素原子全取代時，本文中將此基團稱為全滷烷基，一個實例是經氟原子全取代的烷基並且在本文中稱為「全氟烷基」。在一些實施例中，滷代烷基的實例包括(但不限於)二氟甲基、氟甲基、2，2，2-三氟-乙基、2，2-二氟-乙基、2-氟-乙基、1，2，2-三氟-乙基、1，2-二氟-乙基、1，1-二氟-乙基、1，1，2-三氟-乙基、3，3，3-三氟-丙基、2，2-二氟-丙基、3，3-二氟-丙基、3-氟-丙基、2，3，3-三氟-丙基、2，3-二氟-丙基、2，2，3，3，3-五氟-丙基、2，2，3，3-四氟-丙基、2，2，3-三氟-丙基、1，2，3，3-四氟-丙基、1，2，3-三氟-丙基、3，3-二氟-丙基、1，2，2，3-四氟-丙基、4，4-二氟-丁基、3，3-二氟-丁基、4，4，4-三氟-丁基、3，3-二氟-丁基和其類似基團。在一些實施例中，全氟烷基的實例包括(但不限於)三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基、1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基和其類似基團。
術語「C1-4滷代烷基亞磺醯基」表示連接式-S(O)-的亞碸基的滷代烷基，其中此滷代烷基的定義與本文所述的定義相同。
術語「C1-4滷代烷基磺醯基」表示連接式-S(O)2-的碸基的滷代烷基，其中滷代烷基的定義與本文所述的定義相同。
術語「C1-4滷代烷硫基」表示直接連接硫原子的滷代烷基，其中此滷代烷基的含義與本文所述的含義相同。
術語「羥基」表示-OH基。
術語「硝基」表示-NO2基。
密碼子應指三個核苷酸(或核苷酸的等同物)的群組，其一般包含與磷酸鹽基團偶聯的核苷酸[腺苷(A)、鳥苷(G)、胞苷(C)、尿苷(U))和胸苷(T)]，並且其在接受翻譯時可編碼胺基酸。
組合物是指包含至少一種組分的物質。「醫藥組合物」是組合物的實例。
化合物效能應指對化合物抑制或激發受體功能性的能力(即激活/抑制信號轉導途徑的能力，與受體結合親和力相反)的衡量。檢測化合物效能的示範性方法在本專利文獻的實例部分有所揭示。
在本文中，包含、基本上由......組成和由......組成是根據其標準含義來定義的。在《專利審查程序手冊》(M.P.E.P.)中所闡明的規定含義涵蓋此項技術中所規定的含義，且參照性聯邦巡迴法院先前案例(Federal Circuitcase law)中所闡明的規定含義涵蓋《專利審查程序手冊》所闡明的含義。
充血性心力衰竭應指一種病症，其中心臟喪失其有效泵血的能力。隨著年齡增長，充血性心力衰竭變得更為普遍。缺血性心臟病是充血性心力衰竭的最普遍原因，佔所有病例的60-70％。高於12mmHg的靜脈壓增加是充血性心力衰竭的主要弗雷明漢標準(Framingham criteria)之一，心輸出量的減少與大於25秒的循環時間等效。
組成性活性受體應指通過與使受體與其配體或其化學等同物結合不同的方式而在活性狀態下穩定的受體。組成性活性受體可為內源性或非內源性受體。
組成性活化受體應指已進行修飾以便具有組成性活性的內源性受體。
組成性受體活化應指在受體不與其配體或其化學等同物結合的情況下使受體活化。
接觸(CONTACT或CONTACTING)應指無論在體外系統還是在體內系統中，將至少兩個半族聚集到一起。
降低(DECREASE)是用於指出可測量的減少，並且在使用時與術語減少(「reduce」、「diminish」、「lower」和「lessen」)同義。
內源性應指哺乳動物自然產生的物質。關於(例如且不限於)術語「受體」的內源性應指其是哺乳動物(例如且不限於人類)自然產生的。應了解，內源性包含基因的等位基因變異體和這樣編碼的等位基因多肽變異體。在本文中使用時，「內源性GPCR」(「endogenous GPCR」和「native GPCR」)是交換使用的。相反，上下文中的術語「非內源性」應指其並不是由哺乳動物(例如且不限於人類)自然產生的。例如(但並不限於此)，內源性形式不具有組成性活性而當經過處理時變得具有組成性活性的受體在本文中最好稱作「非內源性、組成性活化受體」。
表達載體在本文中是定義為在適於所述表達載體的宿主細胞重組體中，克隆DNA的轉錄和轉錄mRNA s的翻譯所需的DNA序列。適當構建的表達載體應含有用於在宿主細胞中自主複製的複製起點、可選擇標誌、有限數目的有效限制酶位點、高拷貝數的潛能和活性啟動子。將所述的待轉錄的克隆DNA可行性地連接至所述表達載體中的組成性或條件性活性啟動子。作為說明(但並非限制)，pCMV是一種表達載體。
在本文所揭示的本發明上下文中，G蛋白偶聯受體融合蛋白和GPCR融合蛋白各自是指包含與至少一個G蛋白融合的內源性、組成性活性GPCR或非內源性、組成性活化GRCR的非內源性蛋白，所述GPCR最佳與所述G蛋白的α亞單位(此亞單位是結合GTP的亞單位)融合，此G蛋白優選與和內源性GPCR自然偶聯的G蛋白同型。例如(且不限於)在內源性狀態下，如果G蛋白「Gsα」是與GPCR偶聯的優勢蛋白，那麼基於特異性GPCR的GPCR融合蛋白將是包含與Gsα融合的GPCR的非內源性蛋白；如下文所述，非優勢G蛋白在一些情形下同樣可與GPCR融合。G蛋白可直接與組成性活性GPCR的C-末端融合或在兩者之間可存在間隔物。
宿主細胞應指其中能夠併入載體的細胞。在某些實施例中，該載體是表達載體。示範性宿主細胞包括(但不限於)293、293T、CHO、MCB3901和COS-7細胞與黑素細胞。
當與化合物有關時，護腦素活性應指所述化合物結合至護腦素受體並是其調節物，其中所述受體優選具有內源性且更優選FPRL2，並且其中所述調節物優選激動劑。
本文所使用的需要預防或治療是指由護理者(就人類來說，例如醫生、護士、從業護士等；就動物(包括非人類哺乳動物)來說，例如獸醫)做出的判斷，即個體或動物需要治療或將從治療中受益。此判斷是基於護理者的專業知識領域內的多種因素而做出的，但此判斷包括以下認識，即所述個體或動物由於一種可通過本發明化合物來治療的病症而患病或將要患病。
本文所使用的個體是指任何動物，包括哺乳動物，優選小鼠、大鼠、其他齧齒動物、兔、狗、貓、豬、牛、綿羊、馬或靈長類動物，並且最佳為人類。
與術語「響應」有關係的抑制(INHIBIT或INHIBITING)應指在化合物存在下，響應與此化合物不存在下相對有所減少或得到預防。
反向激動劑應指與受體的內源性形式或組成性活化形式結合的物質(例如配體、候選化合物)，其使得在激動劑不存在下所觀察到的受體的基線胞內響應有所減少。
缺血性心臟病應指由於心臟組織缺乏氧氣而引起的病症，其中心肌受到影響並且心臟不能適當泵血。在美國，缺血性心臟病是最普遍的心肌病。
被分離應指物質從它的初始環境(例如，如果此物質是天然存在的，那麼在自然環境)中被移除。例如，存在於活體動物中的自然產生多核苷酸或多肽並不會被分離，而從自然系統中的一些或所有共存物質中分離出來的相同多核苷酸或DNA或多肽卻會被分離。所述多核苷酸可以是載體的一部分和/或所述多核苷酸或多肽可以是組合物的一部分，並且，在該載體或組合物並不是其自然環境的一部分時，所述多核苷酸或多肽仍將得到分離。
配體應指特異性結合至GPCR的分子。例如，配體可以是多肽、脂質、小分子、抗體。內源性配體是天然GPCR的內源性、天然配體。配體可以是GPCR「拮抗劑」、「激動劑」、「部分激動劑」或「反向激動劑」或其類似物。
如本文所用，術語調節或修飾是指一種特殊活性、功能或分子的數量、質量或功效的增加或減少。作為說明(且不加限制)，G蛋白偶聯受體的激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑是此受體的調節物。
運動神經元疾病應指一種疾病，其特徵在於脊髓、腦幹或運動皮質的運動神經元的選擇性退化。臨床亞型是通過主要退化位點來區分。
心肌梗塞應指心肌的某個區域由於缺乏充足的氧氣供應而損害或壞死。心肌梗塞通常是由阻塞一條冠狀動脈(將血液和氧氣帶入心肌的血管)的凝塊引起。這個凝塊阻止血液和氧氣到達心臟的那個區域，從而導致那個區域中的心臟細胞死亡。
在一個或一個以上的上下文中，肌保護性應指保護肌細胞免於死亡的特性。由此可見，肌保護性GPCR的調節物是肌保護調節物。
在一個或一個以上的上下文中，神經保護性應指保護神經細胞免於死亡的特性。由此可見，神經保護性GPCR的調節物是神經保護調節物。
帕金森氏病是一種慢性、進行性神經退化性病症，其特徵在於例如震顫、運動徐緩、肌強直、步伐紊亂和姿態不穩的運動症狀。雖然研究人員已經確定黑質中的多巴胺能神經元退化是最初的病理生理學機制，但他們認為其他神經遞質系統(如5-羥色胺能系統和穀氨酸能系統)也不同程度地捲入此疾病的進程中。
部分激動劑應指與受體結合時激活胞內響應的物質(例如配體、候選化合物)，其作用程度(degree/extent)比完全激動劑的程度要輕。
周圍神經病是一個用來描述多種病症的廣義術語，通常表現為四肢疼痛或不適感覺，並且神經病是其病因。這種病狀常見於末期腎病和糖尿病患者。遠端對稱性多發性神經病(DSP)(一種影響身體兩側並且侵害末梢感覺神經的神經病)是糖尿病性神經病的最常見臨床表現，並且大約佔所有在糖尿病患者中觀察到的神經病的80-85％。
醫藥組合物應指包含至少一種活性成分的組合物，由此所述組合物可在哺乳動物(例如且不限於人類)中研究出詳細、有效的結果。所屬領域的技術人員應了解並清楚適於確定一種活性成分是否具有基於技術人員需要的所要有效結果的技術。
多核苷酸應指單鏈或雙鏈形式的一種以上核苷酸的RNA、DNA或RNA/DNA混合序列。本發明的多核苷酸可通過任何已知方法來製備，包括合成、重組(不包括體內產生)或其組合和利用此項技術中已知的任何純化方法。
多肽應指胺基酸的聚合物，而不考慮此聚合物的長度。因而，在多肽的定義中包括肽類、寡肽類和蛋白類。此術語也不規定或排除多肽的表達後修飾。例如，術語「多肽」清楚地涵蓋包括糖基、乙醯基、磷酸鹽基團、脂質基團和其類似物的共價連接的多肽。
本文中使用引物來表示一種特殊的寡核苷酸序列，其與目標核苷酸序列互補並用於與目標核苷酸序列雜交。引物充當由DNA聚合酶、RNA聚合酶或逆轉錄酶催化的核苷酸聚合的起始點。
本文中的朊毒體相關疾病是用於涵蓋(但不限於)牛海綿狀腦病、克雅氏病、庫魯病、GSS綜合症和致死性家族性失眠症。
本文中的純化是用於描述已經從其他化合物中分離出來的本發明的多核苷酸或多核苷酸載體，這些化合物包括(但不限於)其他核酸、碳水化合物、脂質和蛋白(如在多核苷酸的合成中所使用的酶)。在某些實施例中，當至少約50％、至少約60％、至少約75％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％、至少約99％或至少約99.5％的樣品含有單一多核苷酸序列時，此多核苷酸大體上是純的。在一些實施例中，大體上純的多核苷酸通常包含約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％或約99.5％(重量/重量)的多核苷酸樣品。
同樣，本文中的術語純化是用於描述已經從其他化合物中分離出來的本發明的多肽，這些化合物包括(但不限於)核酸、脂質、碳水化合物和其他蛋白。在某些實施例中，當樣品中至少約50％、至少約60％、至少約75％、至少約85％、至少約90％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％、至少約99％或至少約99.5％的多肽分子具有單一胺基酸序列時，此多肽大體上是純的。在一些實施例中，大體上純的多肽通常包含約50％、約60％、約70％、約80％、約90％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％或約99.5％(重量/重量)的蛋白樣品。
同樣，本文中的術語純化是用於描述本發明的調節物。在某些實施例中，大體上純的調節物通常包含至少約70％、至少約80％、至少約90％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％、至少約99％或至少約99.5％(重量/重量)的所述調節物的製劑。在某些實施例中，所述調節物具有「至少」在90％與100％之間(精確至任何數至千分之一位)的純度(例如，至少99.995％純度)。
此外，本文中所用的術語純化不需要絕對純度；更確切的說，其是指一個相對定義。
受體功能性應指受體在細胞中接收刺激並緩和效應的正常操作，其包括(但不限於)調節基因轉錄、調節離子流入或流出、影響催化反應和/或通過G-蛋白來調節活性。
第二信使應指由於受體活化而產生的胞內響應。例如，第二信使可包括三磷酸肌醇(IP3)、甘油二酯(DAG)、環AMP(cAMP)、環GMP(cGMP)和Ca2+。可測量第二信使響應來確定受體活化。另外，可測量第二信使響應來確定候選化合物(例如，反向激動劑、部分激動劑、激動劑和拮抗劑)。
信號噪聲比應指對活化、擴增或刺激作出響應而產生的信號，其中所述信號是在對非活化、非擴增或非刺激作出響應的背景噪聲或基準水平之上。
間隔物應指若干被翻譯的胺基酸，其位於基因(例如，所關注的GPCR)的末尾密碼子或末尾胺基酸之後，但在所關注G蛋白的起始密碼子或開始區域之前，其中被翻譯的若干胺基酸與所關注G蛋白的開始區域一起放置在框內。被翻譯胺基酸的數目可為1、2、3、4等，並且可多達12個。
與術語「反應」相關的刺激(STIMULATE或STIMULATING)應指在存在一種化合物時，與缺乏此化合物的情況相反，反應有所增加。
中風是影響血管向大腦供應血液的心血管疾病，並在本文中用於包括腦血栓症(中風的最常見類型)。當血凝塊形成時，發生腦血栓症並且阻塞將血液帶入大腦部分的動脈血流。血凝塊通常形成於受動脈粥樣硬化破壞的動脈中。
患者應指靈長類動物，包括(但不限於)人類和狒狒與寵物(例如狗和貓)、實驗動物(例如大鼠和小鼠)和家畜(例如馬、綿羊和母牛)。
本文所使用的治療有效劑量是指在研究人員、獸醫、醫師或其他臨床醫師正在探尋的組織、系統、動物、個體或人類中引起生物學或醫學響應的活性化合物或藥劑的量，所述響應包括下列一項或一項以上(1)預防疾病；例如預防個體的疾病、病狀或病症，所述個體可能易患此疾病、病狀或病症，但尚未經歷或顯示此疾病的病理或症狀；(2)抑制疾病；例如抑制個體的疾病、病狀或病症，所述個體正在經歷或顯示此疾病、病狀或病症的病理或症狀(即阻止病理和/或症狀的進一步發展)；並(3)改善疾病；例如改善個體的疾病、病狀或病症，所述個體正在經歷或顯示此疾病、病狀或病症的病理或症狀(即逆轉病理和/或症狀)。
本文中所使用的術語變異體是分別與參考多核苷酸或多肽不同(但保持本質特性)的多核苷酸或多肽。多核苷酸的典型變異體在核苷酸序列上與另一參考多核苷酸不同。變異體的核苷酸序列變化可改變或不可改變參考多核苷酸所編碼的多肽的胺基酸序列。多肽的典型變異體在核苷酸序列上與另一參考多肽不同。變異體和參考多肽可在胺基酸序列上有所不同，這種不同表現為一個或一個以上的取代、增加、缺失的任何組合。多核苷酸或多肽的變異體可為自然發生的變異體(如等位基因變異體)，或可為不知是否會自然發生的變異體。多核苷酸和多肽的非自然發生變異體可通過突變技術或直接合成而製得。
A.引言以下部分的次序是為了獲得直觀效果而提出，並且不希望也不應理解為其是對揭示內容或隨後的權利要求書的限制。
B.受體表達1.所關注的GPCR多肽本文所使用的「FPRL2胺基酸序列」是用來涵蓋SEQ ID NO2的內源性人類FPRL2胺基酸序列和變異胺基酸序列，後者與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％的一致性。換句話說，包含SEQ ID NO2胺基酸序列的變異體的GPCR也可用於本方法。在某些實施例中，可用於本方法的GPCR可包含SEQ ID NO2胺基酸序列的等位基因變異體。作為說明(且不加限制)，SEQ ID NO2胺基酸序列的等位基因變異體可包含在SEQ ID NO2的胺基酸位置94上由丙氨酸取代甘氨酸、在SEQ ID NO2的胺基酸位置211上由蘇氨酸取代絲氨酸、在SEQ ID NO2的胺基酸位置338上由組氨酸取代天冬氨酸，或可包含所述胺基酸取代的任何組合(基因序列資料庫登記號AAA58482)。在某些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的等位基因變異體是由內源性FPRL2核苷酸序列來編碼，此內源性FPRL2核苷酸序列可通過使用特異性引物SEQ ED NO3和SEQ ED NO4在人類DNA樣品上進行聚合酶鏈反應(PCR)來獲得。在一些實施例中，SEQ ID NO2胺基酸序列的等位基因變異體是由內源性FPRL2核苷酸序列來編碼，此內源性FPRL2核苷酸序列可通過使用包含SEQ ED NO3的特異性引物和包含SEQ ED NO4的特異性引物在人類DNA樣品上進行聚合酶鏈反應(PCR)來獲得。在某些實施例中，可用於本方法中的變異胺基酸序列是SEQ ID NO2胺基酸序列的哺乳動物直向同源物。作為說明(且不加限制)，設想黑猩猩的FPRL2胺基酸序列(例如，基因序列資料庫登記號P79243)、大猩猩的FPRL2胺基酸序列(例如，基因序列資料庫登記號P79178)、猩猩的FPRL2胺基酸序列(例如，基因序列資料庫登記號P79237)和恆河猴(Macaca mulatto)的FPRL2胺基酸序列(基因序列資料庫登記號P79191)在「FPRL2胺基酸序列」範圍內。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含SEQ ID NO2胺基酸序列的非內源性、組成性活化突變體、SEQ ID NO2的等位基因或SEQ ID NO2的哺乳動物直向同源物。如此項技術中所知，可使用多種方法(參見，例如1998年10月22日公布的PCT申請號為PCT/US98/07496的WO 98/46995；和美國專利第6,555,339號；各專利的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中)來製得組成性活化GPCR。本發明可使用來自下列各物的生物活性片段SEQ ID NO2的胺基酸序列；SEQ ID NO2的等位基因；SEQ ID NO2的哺乳動物直向同源物；內源性FPRL2的非內源性、組成性活化突變體；或與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％一致性的胺基酸序列。作為說明(且不加限制)，設想N-末端蛋氨酸或N-末端信號肽的缺失提供可用於本方法的生物活性片段。
在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約75％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約80％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約85％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約90％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約91％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約92％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約93％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約94％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約95％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約96％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ IDNO2胺基酸序列具有至少約97％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少約98％一致性的胺基酸序列。在某些實施例中，可用於本方法中的GPCR可包含與SEQID NO2胺基酸序列具有至少約99％一致性的胺基酸序列。與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少(例如)95％「一致性」的胺基酸序列是指所述胺基酸序列與SEQ ID NO2胺基酸序列相同，但在每100個SEQ ID NO2胺基酸序列的胺基酸中，它可包括多達5個胺基酸改變。因而，為獲得與SEQ ID NO2胺基酸序列具有至少95％一致性的胺基酸序列，可插入、刪除或用另一種胺基酸(與SEQ ID NO2胺基酸序列相比)來取代所述序列中的多達5％(100個中的5個)胺基酸殘基。這些改變可出現在氨基或羧基末端或那些末端位置之間的任何位置，單獨散布於序列中的殘基中或散布於序列中的一個或一個以上相鄰基團中。
在一些實施例中，可用於本方法的FPRL2胺基酸序列是由多核苷酸序列的互補序列編碼的G蛋白偶聯受體的胺基酸序列，此互補序列在嚴格環境下與結合在過濾器上的具有SEQ ID NO1中所述序列的DNA雜交。雜交技術已為熟練技術工人所熟知。優選的嚴格雜交環境包括在42℃下，在包含50％甲醯胺、5xSSC(150mM NaCl、15mM檸檬酸三鈉)、50mM磷酸鈉(pH7.6)、5x登哈特溶液(Denhardt′s solution)、10％硫酸右旋糖酐和20μg/ml變性、已剪切鮭精DNA的溶液中培養一整夜；接著，在約65℃下在0.1xSSC中洗滌該過濾器。
a.序列一致性用於確定查詢序列(例如SEQ ID NO2胺基酸序列)與待詢問序列之間的最佳全面匹配的優選方法(也稱作全域序列匹配)可使用基於Brutlag等人[《計算機應用生物科學》(1990)6237-245；此揭示內容以全文引用的方式併入本文中]的運算法則的FASTDB電腦程式來確定。在序列匹配中，查詢序列和所詢問序列都是胺基酸序列。所述全域序列匹配的結果是以一致百分數來表示。FASTDB胺基酸匹配中使用的優選參數為矩陣＝PAM 0、k-元組＝2、錯配罰分＝1、連接罰分＝20、隨機化組＝25、長度＝0、截斷值＝1、視窗大小＝序列長度、空隙罰分＝5、空隙大小罰分＝0.05、視窗大小＝247或所詢問胺基酸序列的長度(無論哪一個較短)。
如果由於N-或C-末端缺失(而非內部缺失)而導致所詢問序列比查詢序列短，那麼必須用手校正一致百分數的結果，因為在計算全域一致百分數時，FASTDB程序不解釋所詢問序列的N-和C-末端截斷。對於在N-和C-末端被截斷的所詢問序列來說，相對於查詢序列，其一致百分數是通過計算查詢序列的殘基數來進行校正，這些殘基在所詢問序列的N-和C-末端、與相應的詢問序列的殘基不匹配、佔查詢序列的總鹼基的一個百分比。通過FASTDB序列匹配的結果來確定殘基是否匹配。接著，從一致百分數中減去這個百分比，通過上述FASTDB程序、使用規定的參數來進行計算，從而達到最終的一致百分數數值。此最終的一致百分數值是用於達成本發明目的的數值。為了手動調整一致百分數值，只考慮在所詢問序列的N-和C-末端、與查詢序列不匹配的殘基。即，只考慮所詢問序列的N-和C-最末端殘基外部的查詢胺基酸殘基。
例如，90胺基酸殘基的所詢問序列與待確定一致百分數的100-殘基的查詢序列匹配。在所詢問序列的N-末端發生缺失且因此，FASTDB匹配在N-末端與第一種殘基不匹配。10個未配對殘基佔序列的10％(N-和C-末端不匹配的殘基數/查詢序列中的總殘基數)，因此，從FASTDB程序所計算出的一致百分數數值中減去10％。如果剩餘的90個殘基正確匹配，那麼最終一致百分數將為90％。
在另一個實例中，將90-殘基的所詢問序列與100-殘基的查詢序列相比。此時，缺失在內部，因此在所詢問序列的N-或C-末端沒有與查詢序列不匹配的殘基。在這種情況下，通過FASTDB計算出的一致百分數並未手動校正。再一次，如FASTDB匹配所顯示，只手動校正位於所詢問序列的N-和C-末端外部、與查詢序列不匹配的殘基。未進行其他用於達成本發明目的的校正。
b.融合蛋白在某些實施例中，所關注的多肽是融合蛋白，並且可能含有(例如)親和標記域或報告域。合適的親和標記物包括任何可與另一半族(通常是另一多肽，最通常是抗體)特異性結合的胺基酸序列。合適的親和標記物包括抗原決定部位標記物，例如此項技術中已知的V5標記物、FLAG標記物、HA標記物(來自流感病毒血凝素)、myc標記物和其類似物。合適的親和標記物也包括已知結合底物的域，例如此項技術中已知的HIS、GST和MBP標記物；和可獲得特異結合伴侶(例如抗體，尤其是單克隆抗體)的來自其他蛋白的域。合適的親和標記物也包括任何蛋白-蛋白相互作用區域(如IgG Fc域)，使用合適的結合伴侶(例如IgG Fc受體)可使其特異性結合併可對其進行檢測。明確地設想，所述融合蛋白可含有在框架中與N-末端蛋氨酸殘基已被刪除或已由替代胺基酸取代的GPCR融合的異種N-末端域(例如抗原決定部位標記物)。
合適的報告域包括任何可報導多肽存在的域。同時應承認，使用(例如)特異性結合至親和標記物的已標記抗體可將所述親和標記物用於報告多肽的存在，更常使用發光報告域。合適的發光報告域包括螢光素酶(例如，來自於螢火蟲、海螢(Vargula)、海參(Renilla reniformis)或牟氏海參(Renilla muelleri))或其發光變異體。其他合適的報告域包括螢光蛋白(例如，來自於水母、珊瑚和其他來自於水母(Aequoria)、海參(Renilla)、海筆(Ptilosarcus)、白海筆(Stylatula)種的腔腸動物)或其發光變異體。在此項技術中，這些報告蛋白的發光變異體已為我們所熟知並且與自然報告蛋白相比，其可更明亮、更暗淡或具有不同的激發和/或發射光譜。例如，如此項技術所知，一些變異體在改變之後不再呈現出綠色，並可能呈現出藍色、青色、黃色、加強型黃紅色(分別稱為BFP、CFP、YFP、eYFP和RFP)或具有其他發射光譜。其他合適的報告域包括可通過生物化學或顏色變化來報告多肽存在的域，如β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酸酶、氯黴素乙醯轉移酶和分泌性胚胎鹼性磷酸酶。
此項技術中同樣已知，親和標記物或報告域可存在於所關注多肽的任何位置。然而，在大多數實施例中，他們是存在於所關注多肽的C-或N-末端。
2.編碼所關注GPCR多肽的核酸由於用於操縱核酸的遺傳密碼和重組技術是已知的，並且所關注GPCR多肽的胺基酸序列是如上所述，編碼所關注GPCR多肽的核酸的設計和產生完全在技術工人的技術範圍內。在某些實施例中，使用標準重組DNA技術(Ausubel等人的《精編分子生物學實驗指南》(Short Protocols inMolecular Biology)，第3版，威利父子公司(Wiley Sons)，1995年；Sambrook等人的《分子克隆實驗室手冊》(Molecular CloningALaboratory Manual)，第2版，(1989年)冷泉港實驗室(Cold Spring Harbor)，紐約)方法。例如，使用多種無需在本文中描述的重組方法中的任一種或其組合可從GPCR編碼序列庫中分離GPCR編碼序列。在編碼蛋白的核酸序列中，也可使用標準重組DNA技術來進行隨後的核苷酸取代、缺失和/或添加。
例如，在編碼所關注多肽的多核苷酸中，可使用定位誘變和亞克隆來引入/刪除/取代核酸殘基。在其他實施例中，可使用PCR。編碼所關注多肽的核酸也可通過化學合成而完全由寡核苷酸製得(例如Cello等人，《科學》(Science)(2002年)2971016-8)。
在一些實施例中，將編碼所關注多肽的核酸密碼子最優化以在特殊物種(特別是哺乳動物，例如小鼠、大鼠、倉鼠、非人類靈長類動物或者人類物種)的細胞中進行表達。在一些實施例中，將編碼所關注多肽的核酸密碼子最優化以在特殊物種(特別是兩棲類物種)的細胞中進行表達。
a.載體本發明進一步提供包含該核酸的載體(也稱為「構建物」)。在本發明的多個實施例中，該核酸序列在已經可行性地連接至表達控制序列(例如，包括啟動子)之後將在宿主中進行表達。該核酸一般也是放置在表達載體中，此表達載體可在宿主細胞中複製成為游離體或宿主染色體DNA的主要部分。一般地，表達載體將含有選擇標記物(例如四環素或新黴素)，從而容許檢測那些以所要DNA序列轉化的細胞(參見，例如美國專利第4,704,362號，其是以引用的方式併入本文中)。載體(包括單表達和雙表達盒式載體)在此項技術中已為我們所熟知(Ausubel等人的《精編分子生物學實驗指南》，第3版，威利父子公司，1995年；Sambrook等人的《分子克隆實驗室手冊》，第2版，(1989年)冷泉港實驗室，紐約)。合適的載體包括病毒載體、質粒、裝配型質粒、人工染色體(人類人工染色體、細菌人工染色體、酵母人工染色體等)、微型染色體和其類似物。可使用逆轉錄病毒載體、腺病毒載體和腺相關病毒載體。
為了在細胞中產生所關注的多肽，所屬領域的技術人員可利用多種表達載體。一種合適的載體是pCMV，其已用於某些實施例中。依據《國際承認用於專利程序的微生物寄存布達佩斯條約》(Budapest Treaty for theInternational Recognition of the Deposit of Microorganisms for thePurpose of Patent Procedure)的規定，此載體已在1998年10月13日寄存於美國模式培養物保藏所(American Type Culture Collection)(ATCC)(10801學院大街(University Blvd.)，馬納薩斯(Manassas)，維吉尼亞州(VA)20110-2209，美國)中。所述DNA已由ATCC檢驗並被確定為具有生存力。ATCC已將以下寄存號分配給pCMVATCC#203351。
該核酸通常包含編碼所關注多肽的單一可讀框架，然而在某些實施例中，由於用於表達所關注多肽的宿主細胞可能是真核細胞(例如哺乳動物細胞，如人類細胞)，所述可讀框架可能會被內含子中斷。所述核酸一般是轉錄單元的部分，除所述核酸之外，所述單元也可能含有可引導RNA穩定性、翻譯效率等的3′和5′未翻譯區域(UTR)。所述核酸也可是表達盒的部分，除所述核酸之外，所述表達盒也含有引導所關注多肽的轉錄和表達的啟動子和轉錄終止子。
真核啟動子可以是任何在真核宿主細胞中具有功能的啟動子，包括病毒啟動子和源自真核基因的啟動子。示範性真核啟動子包括(但不限於)以下各物小鼠金屬硫蛋白I基因序列的啟動子(Hamer等人，《分子應用基因雜誌》(J.Mol.Appl.Gen.)，1273-288，1982年)；皰疹病毒的TK啟動子(McKnight，《細胞》(Cell)31355-365，1982年)；SV40早期啟動子(Benoist等人，自然(Nature)(倫敦)290304-310，1981年)；酵母gall基因序列啟動子(Johnston等人，《美國科學院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.)(美國)796971-6975，1982年)；Silver等人，《美國科學院院刊》(美國)815951-59SS，1984年)、CMV啟動子、EF-1啟動子、(多種)蛻皮激素反應啟動子、四環素反應啟動子和其類似物。由於病毒啟動子通常是強啟動子，其可能受到特別關注。在某些實施例中，所使用的啟動子即為目標病原體的啟動子。選擇本發明中所用的啟動子，從而使得其在引入細胞類型(和/或動物)中時具有功能性。在某些實施例中，所述啟動子是CMV啟動子。
在某些實施例中，該載體也可提供可選擇標記物的表達。合適的載體和可選擇標記物在此項技術中已為我們所熟知，並在Ausubel等人的(《精編分子生物學實驗指南》，第3版，威利父子公司，1995年)和Sambrook等人的(《分子克隆實驗室手冊》，第3版(2001年)冷泉港實驗室，紐約)中有所討論。已經使用多種不同的基因來作為選擇標記物，並且在該載體中用作可選擇標記物的特別基因的選擇首先是為方便起見。已知的可選擇標記基因包括胸苷激酶基因、CAD、腺甙脫氨酶基因、天冬醯胺合成酶基因、抗生素抗性基因(例如四環素抗性基因、氨苄青黴素抗性基因、氯黴素抗性基因或氯黴素乙醯轉移酶基因、卡那黴素抗性基因或新黴素抗性基因(氨基糖苷磷酸轉移酶基因))、潮黴素B磷酸轉移酶基因和其類似物。
如上所述，所關注的多肽可為含有親和域和/或報告域的融合蛋白。用於在報告基因或標記物與GPCR之間(例如在GPCR的C-或N-末端)構造融合物的方法完全在所屬領域的技術人員的技術範圍內(例如McLean等人的《分子藥理學》(Mol.Pharma.Mol Pharmacol.)第561182-91，1999年；Ramsay等人的《英國藥理學雜誌》(Br.J.Pharmacology)2001年，第315-323頁)，並將不再進行任何進一步描述。明確地設想，所述融合蛋白可含有在框架中與N-末端蛋氨酸殘基已被刪除或已由替代胺基酸取代的GPCR融合的異種N-末端域(例如抗原決定部位標記物)。應了解，所關注的多肽首先可由內源性多肽製得，並接著可行性地連接至如上所述的合適的報告基因/標記物。
通常為了便於構建編碼所關注多肽的核酸，該核酸也可含有限制位點、多克隆位點、引物結合位點、可連接末端、重組位點等。
b.宿主細胞本發明進一步提供包含載體的宿主細胞，此載體包含核酸。合適的宿主細胞包括原核細胞，例如細菌細胞(如大腸桿菌(E.coli))；和真核細胞，例如動物細胞(如昆蟲、哺乳動物、魚、兩棲動物、鳥或爬行動物細胞)；植物細胞(如玉米或擬南芥(Arabidopsis)細胞)或真菌細胞(如釀酒酵母(S.cerevisiae)細胞)。在某些實施例中，任何適於表達編碼所關注多肽的核酸的細胞都可用做宿主細胞。通常使用動物宿主細胞系，其實例是如下所述猴腎細胞(COS細胞)、由SV40轉化的猴腎CVI細胞(COS-7，ATCCCRL 165 1)；人類胚腎細胞(HEK-293[「293」]，Graham等人的《基因病毒學雜誌》(Gen Virol)3659，1977年)；HEK-293T[「293T」]細胞；幼倉鼠腎細胞(BHK，ATCC CCL 10)；中國倉鼠卵巢細胞(CHO，Urlaub和Chasin，美國科學院院刊(美國)774216(1980年))；敘利亞金倉鼠細胞MCB3901(ATCC CRL-9595)；小鼠塞爾託利細胞(TM4，Mather，《生殖生物學》(Biol.Reprod.)23243-251(1980年))；猴腎細胞(CVI ATCC CCL70)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人類宮頸癌細胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬腎細胞(MDCK，ATCC CCL 34)；布法羅大鼠肝細胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442；人類肺細胞(W138，ATCC CCL 75)；人類肝細胞(hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562，ATCC CCL 51)；TRI細胞(Mather等人，《紐約科學院年報》38344-68(1982年))；NIH/3T3細胞(ATCCCRL-1658)；和小鼠L細胞(ATCC CCL-1)。在某些實施例中，使用黑素細胞。黑素細胞是在低等脊椎動物中發現的的皮膚細胞。根據美國專利第5,462,856號和美國專利第6,051,386號的揭示內容，將遵循相關的物質和方法。這些專利揭示內容是以全文引用的方式併入本文中。額外細胞系對於所屬領域的技術人員來說將變得顯而易見，並且多種細胞系可從美國模式培養物保藏所(10801學院大街，馬納薩斯，維吉尼亞州20110-2209)購得。
C.候選化合物的篩選1.通用GPCR篩選分析技術當G蛋白受體變得具有活性時，其結合至G蛋白(例如Gq、Gs、Gi、Gz、Go)並刺激GTP結合至G蛋白。此G蛋白接著充當GTP酶並緩慢地將GTP水解為GDP，由此使所述受體在正常環境下變得失去活性。然而，活化受體繼續將GDP交換為GTP。可使用GTP的不可水解類似物[35S]GTPγS來監控與表達活化受體的膜的增強結合。據報導，在配體不存在和存在下，可使用[35S]GTPγS來監控G蛋白與膜的偶聯。在所屬領域的技術人員熟知並可利用的其他實例中，Traynor和Nahorski在1995年報導了此監控的實例。不考慮與受體的胞內區域相互作用的特殊G蛋白，由於此分析系統一般適用於所有G蛋白偶聯受體，此系統的優選用途是候選化合物的最初篩選。
2.特異性GPCR篩選分析技術一旦使用「通用」G蛋白偶聯受體分析(即選擇激動劑或反向激動劑化合物的分析)來確定候選化合物，在一些實施例中優選進一步篩選來證實此化合物在受體位點上已相互作用。例如，通過「通用」分析所確定的化合物可能未結合至受體，但其可能僅將G蛋白從胞內區域「去偶聯」。
a.Gs、Gz和Gi.
Gs會刺激腺苷酸環化酶。另一方面，Gi(和Gz和Go)會抑制腺苷酸環化酶。腺苷酸環化酶可催化ATP轉化為cAMP；因而，與Gs蛋白偶聯的活化GPCR與增加的細胞cAMP含量有關。另一方面，與Gi(或Gz、Go)蛋白偶聯的活化GPCR與減少的細胞cAMP含量有關。一般，見《(突觸傳遞的直接機制》(Indirect Mechanisms of Synaptic Transmission)第8章，從神經元到大腦(From Neuron To Brain)(第3版)Nichols，J.G.等人編，SinauerAssociates，Inc.(1992年)。因而，可利用檢測cAMP的分析來確定一種候選化合物是(例如)受體的反向激動劑(即所述化合物將減少cAMP含量)。可利用此項技術中已知的多種用於測量cAMP的方法；在一些實施例中，優選方法依賴於抗cAMP抗體在基於ELISA的模式下的用途。另一種可利用的分析類型是全細胞第二信使報告系統分析。基因啟動子可推動由特殊基因編碼的蛋白的表達。環AMP通過促進cAMP響應性DNA結合蛋白的結合或轉錄因子(CREB)來推動基因表達，其接著在被稱為cAMP響應元件的特異性位點與啟動子結合併推動基因表達。可構建報告系統，其具有在報告基因之前含有多個cAMP響應元件的啟動子，例如β-半乳糖苷酶或螢光素酶。因而，與G s連接的活化受體引起cAMP的積聚，其接著激活基因和報告蛋白的表達。接著，可使用標準生物化學分析(Chen等人，1995)來刪除報告蛋白，如β-半乳糖苷酶或螢光素酶。
b.Go和GqGo和Gq與磷脂酶C的活化有關，磷脂酶C的活化依次水解磷脂PIP2、釋放兩種胞內信使甘油二酯(DAG)和1，4，5-三磷酸肌醇(IP3)。IP3的積聚增加與Gq-和Go-相關受體的活化有關。一般，見《突觸傳遞的直接機制》第8章，從神經元到大腦(第3版)Nichols，J.G.等人編，Sinauer Associates，Inc.(1992年)。可利用檢測IP3積聚的分析來確定候選化合物是否是(例如)Gq-和Go-相關受體的的反向激動劑(即所述化合物將降低IP3含量)。由於Gq-依賴性磷脂酶C引起含有AP1元件的基因的活化，也可使用AP1報告分析來確定Gq-相關受體；因而，活化Gq-相關受體將證明所述基因的表達有所增加，由此反向激動劑又將證明所述表達的減少，並且激動劑將證明所述表達的增加。用於所述檢測的市售分析是可用的。
3.GPCR融合蛋白將內源性、組成性活性GPCR或非內源性、組成性活化GPCR用於篩選候選化合物以直接確定反向激動劑或激動劑的用途提供一種有趣的篩選挑戰，因為根據定義，所述受體即使在缺乏所結合的內源性配體時仍具有活性。因而，為了區分(例如)在候選化合物存在下的非內源性受體和缺乏所述化合物時的非內源性受體，為使所述區分能使人們了解所述化合物是否是反向激動劑或激動劑或是否對所述受體無影響，在一些實施例中優選可增強所述區分的方法來加以利用。在一些實施例中，優選方法是使用GPCR融合蛋白。
一般地，一旦使用上文所闡述的分析技術(和所屬領域的技術人員已知的其他技術)來確定非內源性GPCR已進行組成性活化，即有可能確定與內源性GPCR偶聯的主要G蛋白。G蛋白與GPCR的偶聯提供一條可評估的信號途徑。在一些實施例中，優選使用哺乳動物表達系統來進行篩選，預期所述系統中將具有內源性G蛋白。因而，根據定義，此非內源性、組成性活化GPCR在所述系統中將連續發出信號。在一些實施例中，最好使此信號增強，從而使得在(例如)受體的反向激動劑存在下(特別是在篩選時)，更有可能使與反向激動劑接觸的受體更易於區分。
GPCR融合蛋白是用於增強與非內源性GPCR偶聯的G蛋白的效能。優選將GPCR融合蛋白與內源性、組成性活性GPCR或非內源性、組成性活化GPCR一起用於篩選，因為所述方法會增加所述篩選技術中產生的信號。促進形成顯著的「信號噪聲」比是重要的；優選將所述顯著比率用於篩選本文所揭示的候選化合物。
適用於表達GPCR融合蛋白的構建物的構建在所屬領域的技術人員的技術範圍內。市售的表達載體和系統提供多種滿足研究者特殊需要的方法。所述GPCR融合蛋白構建物的重要構建標準包括(但不限於)GPCR序列和G蛋白序列均在框架中(內源性GPCR的序列優選位於G蛋白序列的上遊)；並且GPCR的「終止」密碼子被刪除或替代，從而使得在GPCR表達之後，G蛋白隨即也可得到表達。GPCR可直接連接至G蛋白，或在兩者之間可存在間隔物殘基(優選僅有12個，儘管這個數字可被所屬領域的任何技術人員輕易地確定)。基於便利性考慮，優選使用間隔物。在一些實施例中，與非內源性GPCR偶聯的G蛋白較佳將在GPCR融合蛋白構建物產生之前得到確定。因為只有少數G蛋白已得到確定，較佳可在包含G蛋白序列(即通用G蛋白構建物，見以下實例5(a))的構建物中插入內源性GPVR序列；在大規模篩選多種具有不同序列的不同內源性GPCR的情況下，此提供更高效率。
如上所述，預期與Gi、Gz和Go偶聯的活化GPCR能抑制cAMP的形成，使得基於這些GPCR類型的分析具有挑戰性[即，一旦經活化，cAMP的信號即減弱；因而使得(例如)激動劑(其將進一步減弱此信號)的直接確定具有挑戰性]。如本文所揭示，人們已確定這些類型的受體有可能不基於GPCR的內源性G蛋白而產生GPCR融合蛋白，旨在建立基於環化酶的可行性分析。因而，(例如)可將內源性Gi偶聯受體與Gs蛋白融合，所述的融合構建物一旦經表達即「推動」或「促使」內源性GPCR與(例如)Gs(而不是「內源性」Gi蛋白)偶聯，從而可建立基於環化酶的分析。因而，對於Gi、Gz和Go偶聯受體來說，在一些實施例中，當使用GPCR融合蛋白且基於腺苷酸環化酶的活性檢測來進行分析時，最好由Gs(或刺激腺苷酸環化酶形成的G蛋白等同物)來建立所述融合構建物。
表B

利用與Gs、Gi、Gz或Go蛋白融合的Gq蛋白的G蛋白融合構建物是同樣有效的。在一些實施例中，優選融合構建物可與Gq蛋白一起完成，其中G蛋白α-亞單位(「Gαq」)的最初6個胺基酸被刪除且Gαq的C-末端的最後5個胺基酸被所關注G蛋白的相應Gα胺基酸替代。例如，融合構建物可具有與Gi蛋白融合的Gq(6個胺基酸缺失)，導致「Gq/Gi融合構建物」。此融合構建物將促使內源性Gi偶聯受體與其非內源性G蛋白Gq偶聯，從而可測量第二信使(例如三磷酸肌醇或甘油二酯)，而非測量cAMP的產生。
4.目標Gi偶聯GPCR與信號增強子Gs偶聯GPCR的共轉染(基於cAMP的分析)已知Gi偶聯受體可抑制腺苷酸環化酶，並因此降低cAMP的產生含量，其可使cAMP含量的評估具有挑戰性。在某些實施例中，用於測量cAMP產生的減少(表示活化時主要與Gi偶聯的受體的活化)的有效技術可通過使信號增強子(例如，在活化時主要與Gs偶聯的非內源性、組成性活化受體(例如TSHR-A623I；見下文))與連接有Gi的GPCR共轉染來實現。顯而易見，Gs偶聯受體的活化可基於cAMP產生的增加而得到確定。Gi偶聯受體的活化導致cAMP產生的減少。因而，共轉染方法是用於有利地利用這些「相對」影響。例如，非內源性、組成性活化Gs偶聯受體(「信號增強子」)與單獨的表達載體的共轉染提供一個基線cAMP信號(即儘管Gi偶聯受體將降低cAMP含量，此「降低」是相對於由組成性活化Gs偶聯信號增強子建立的cAMP含量的實質性增加來說的)。接著，通過使信號增強子與「目標受體」共轉染，Gi偶聯目標受體的反向激動劑將增加所測得的cAMP信號，而Gi偶聯目標受體的激動劑將減弱此信號。
應獨立評估使用此方法直接確定的候選化合物，從而確保這些化合物未把信號增強受體作為目標(此評估可在篩選共轉染受體之前或之後進行)。
D.藥物化學候選化合物可對此項技術中已知的任何分子調節(增加或減少)本發明GPCR活性的能力進行測試。為了確定可調節活性的化合物，可直接將候選化合物提供給表達受體的細胞。
本發明的這個實施例極其適於從化學庫中篩選調節(例如抑制、拮抗或激動)受體數量或活性的分子。此等化學文庫可為肽文庫、肽模擬物文庫、化學合成文庫、重組體文庫(例如噬菌體呈現文庫)和基於體外翻譯的文庫、其他非肽合成有機文庫等。本發明的這個實施例也極其適於篩選包含生物物質(包括(但不限於)血漿和組織提取物)的內源性候選化合物和篩選已知具有生物活性的內源性化合物文庫。
在一些實施例中，對候選化合物的直接確定是和經過組合化學技術產生的化合物一起進行的，由此隨機製備數千種用於所述分析的化合物。此候選化合物可以是化學文庫中的一個成員。此文庫可包含任何合適數目的獨立成員，例如數十種到數百種到數千種到數百萬種合適的化合物，如肽類、類肽類和其他寡聚化合物類(環狀或直鏈)和基於模板的小分子類(例如苯並二氮類、乙內醯脲類、聯芳基類、碳環和多環化合物(如萘類、吩噻嗪類、吖啶類、類固醇類等))、碳水化合物和胺基酸衍生物類、二氫吡啶類、二苯甲基類和雜環類(如三嗪類、吲哚類、噻唑烷類等)。所引用的數目和所列舉出的化合物類型是作為說明，而非用於限制。優選的化學文庫包含低分子量的化合物和潛在的治療劑。
示範性化學文庫可從若干來源(ArQule、Tripos/PanLabs、ChemDesign、Pharmacopoeia)購得。在一些情況下，這些化學文庫是使用組合策略所產生的，其在成員化合物所連接的底物上對文庫中的每一成員的特徵進行編碼，因而允許對作為有效調節物的分子進行直接且快速的鑑定。因而，在多種組合方法中，化合物在板上的位置規定了此化合物的組成。同樣，在一個實例中，單個的板位置可具有1-20種化學物質，其可通過投入含有所關注的相互作用的孔中而進行篩選。因而，如果調節作用被刪除，那麼可用於分析調節活性的相互作用對的集合體越來越小。通過這些方法，可以篩選多種候選化合物。
在此項技術中，多種適於使用的多樣性文庫已為人們所知且可用於提供待根據本發明進行測試的化合物。或者，可使用標準方法來構建文庫。此外，更一般地，也可使用結構上受到限制的有機多樣性(例如非肽)文庫。舉例來說，可使用苯並二氮文庫(例如，見Bunin等人的《美國科學院院刊》(美國)1994年，914708-4712)。
在本發明的另一實施例中，可使用組合化學來鑑定本發明GPCR的調節物。組合化學能夠創造含有幾十萬種化合物的文庫，其中多種化合物可在結構上類似。當高流通量篩選程序能夠篩選出這些對已知目標具有親和性的龐大文庫時，已經發展出新的方法，其獲得較小規模的文庫，但提供最多的化學多樣性(例如，見Matter的《藥物化學雜誌》(Journal of MedicinalChemistry)1997年，401219-1229)。
先前已經使用了一種組合化學方法(親和指紋分析)來測試離散的小分子文庫與規定的蛋白板的結合親和力。將通過篩選所獲得的指紋用於預測獨立的文庫成員與其他所關注蛋白或受體(在本發明中，是指本發明的受體)的親和力。將此指紋與由其他已知可與所關注蛋白反應的化合物獲得的指紋相比較，從而預測文庫化合物是否會同樣地反應。例如，在測試配體與複合物或蛋白成分的相互作用時，僅可測試與已知具有活性的其他化合物具有相似指紋的配體，而非測試龐大文庫中的每一個配體(例如，參見Kauvar等人的《化學和生物學》(Chemistry and Biology)1995年，2107-118；Kauvar的《親和指紋，國際藥物製造》(Affinity fingerprinting，Pharmaceutical Manufacturing International)1995年，825-28；和Kauvar的《農用化學品免疫分析的新領域中通過模式識別進行的毒性化學物質檢驗》(Toxic-Chemical Detection by Pattern Recognition in NewFrontiers in Agrochemical Immunoassay)，D.Kurtz、L.Stanker和J.H.Skerritt編輯，1995年，官方農業化學家協會(AOAC)(華盛頓哥倫比亞特區)，305-312)。
鑑定為調節物的候選化合物一般地，所述篩選的結果將為具有獨特核心結構的化合物；之後，這些化合物可以在(多個)優選的核心結構周圍經歷額外化學修飾，從而進一步增強其藥用特性。所述技術已為所屬領域的技術人員所知且在本專利文獻中將不再詳述。
在某些實施例中，所述經鑑定的調節物具有生物有效性。多種可為所屬領域的技術人員利用的計算方法已研究用於預測藥物的口服生物利用度[Ooms等人，《生物化學與生物物理學學報》(Biochim Biophys Acta)2002年，1587118-25；Clark和Grootenhuis，Curr OpinDrug Discov Devel，2002年，5382-90；Cheng等人，《計算機化學雜誌》(J Comput Chem)2002年，23172-83；Norinder和Haeberlein，《先進藥物輸送評論》(Adv DrugDeliv Rev)2002年，54291-313；Matter等人，《組合化學高流通量篩選》(Comb Chem High Throughput Screen)2001年，4453-75；Podlogar和Muegge，《現代頂尖藥物化學》(Curr Top Med Chem)1257-75；其中各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。此外，正電子發射X射線斷層成像術(PET)已成功地被多個團體用於在口服藥物之後獲得哺乳動物體內(包括非人類靈長類動物體內和人體內)的藥物分布的直接測量，包括對口服生物利用度的評估[Noda等人的《核醫療學雜誌》(J Nucl Med)2003年，44105-8；Gulyas等人的《歐洲核醫療學和分子成像雜誌》(Eur J NuclMed Mol Imaging)291031-8；Kanerva等人的《精神藥理學》(Psychopharmacology)1999年，14576-81；其中各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。也可參見下文，包括實例18。
在某些實施例中，所述經鑑定具有生物有效性的調節物進一步能夠穿過血腦屏障。多種可為所屬領域的技術人員利用的計算方法已研究用於預測血腦屏障的滲透[Ooms等人，《生物化學與生物物理學學報》2002年，1587118-25；Clark和Grootenhuis，Curr OpinDrug Discov Devel，2002年，5382-90；Cheng等人，《計算機化學雜誌》2002年，23172-83；Norinder和Haeberlein，《先進藥物輸送評論》2002年，54291-313；Matter等人，《組合化學高流通量篩選》2001年，4453-75；Podlogar和Muegge，《現代頂尖藥物化學》1257-75；其中各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。多種用於預測藥物的血腦屏障滲透性的體外方法已經得到發展[Lohmann等人，《靶向藥物雜誌》(J Drug Target)2002年，10263-76；Hansen等人，《藥學與生物醫學分析雜誌》(J Pharm Biomed Anal)2002年，27945-58；Otis等人，《藥物學與毒物學方法雜誌》(J Pharmocol ToxicolMethods)2001年，4571-7；Dehouck等人，《神經化學雜誌》(J Neurochem)1990年，541798-801；其中各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。此外，已發展了多種用於增強穿過血腦屏障的藥物傳輸的策略[Scherrmann，《血管藥物學》(Vascul Pharmacol)2002年，38349-54；Pardridge，《神經病學文獻》(Arch Neurol)2002年，5935-40；Pardridge，《神經元》(Neuron)2002年，36555-8；其中各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。最後，正電子發射X射線斷層成像術(PET)已成功地被多種團體用於獲得哺乳動物體內(包括非人類靈長類動物體內和人體內)的藥物分布的直接測量，包括腦中藥物分布的直接測量[Noda等人，《核醫療學雜誌》2003年，44105-8；Gulyas等人，《歐洲核醫療學和分子成像雜誌》2002年，291031-8；Kanerva等人，《精神藥理學》1999年，14576-81；其中各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。
E.本發明化合物本發明化合物本發明的一個方面是關於式(I)的某些二甲基八氫菲羧酸甲醯胺衍生物 其中R1-R4是各自獨立地選自由下列各基團組成的群組H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧基羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基氨基、C2-6二烷基甲醯胺、滷素、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基、C1-4滷代烷硫基、羥基、硝基和硫醇；或其醫藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。
在一些實施例中，至少一個R1-R4基團不是H。
在一些實施例中，當R1、R3和R4是H時，R2不是-OAc或-OCH3。
在一些實施例中，當R1和R4是H且R3是-CH3時，R2不是-OH。
在一些實施例中，當R1和R4是H且R2是H或Br時，R3不是-CH(CH3)2。
在一些實施例中，當R1、R2和R3是H時，R4不是-OAc。
在一些實施例中，R1是H或滷素。在一些實施例中，R1是H，並可用如下所示的式(Ib)來代表 其中式(Ib)的每個變量具有如本文(上文和下文)所述的含義。
在一些實施例中，R4是H或滷素。在一些實施例中，R4是H，並可用如下所示的式(Id)來代表 其中式(Id)的每個變量具有如本文(上文和下文)所述的含義。在一些實施例中，本發明化合物具有式(Id)，其中R1是H；這些化合物可用如下所示的式(If)來代表
其中式(Id)的每個變量具有如本文(上文和下文)所述的含義。
在一些實施例中，R2是選自由下列各基團組成的群組H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇。
在一些實施例中，R2是選自由下列各基團組成的群組H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧基羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基。
在一些實施例中，R2是H或滷素。在一些實施例中，R2是H。
在一些實施例中，R3是選自由下列各基團組成的群組H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇。在一些實施例中，R3是C1-6烷基。在一些實施例中，R3是選自由下列各基團組成的群組H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧基羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基。
本發明的一個方面是關於包含醫藥學上可接受的載劑或賦形劑和式(I)化合物的醫藥組合物
其中R1-R4是各自獨立地選自由下列各基團組成的群組H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧基羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基氨基、C2-6二烷基甲醯胺、滷素、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基、C1-4滷代烷硫基、羥基、硝基和硫醇；或其醫藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。
F.用於製造本發明化合物的合成方法本發明化合物可易於根據多種合成方式來製備，其中所有合成方式都為所屬領域的技術人員所熟悉。一種用於製備本發明化合物的方法是通過芳香族親電取代反應，其中芳香環可經取代(即至少一個R1-R4基團不是H)或可不經取代(即R1-R4基團是H)。作為說明，由1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸甲醯胺(A)或其經保護衍生物開始，可在芳環上引入多種芳香族取代。化合物(A)已在下列文獻中得到描述Wenkert和同事的《美國化學學會雜誌》(the Journal of the AmericanChemical Society)(1958年)，80211-17；和《美國化學學會雜誌》(1958年)，80217-19，其是以全文引用的方式併入本文中。一個可使用的芳香族取代反應實例是硝化反應。多種硝化試劑和程序都可在所述文獻中獲得，例如在溶劑存在或不存在下使用的H2SO4/HNO3、在(多種)極性溶劑(如環丁碸)中的四氟硼酸硝和其類似物。例如，使用SnCl4、H2(在Pd催化劑存在下)和其類似物可將化合物(B)的硝基還原為胺(C)。這些實例是如下所示 可使胺(C)與多種試劑反應。例如，使用已知的偶聯試劑可將C1-4烷基羧酸與胺(C)偶聯，從而產生甲醯胺(D)。或者，首先可將所述羧酸轉化為其相應的醯基氯，並接著可使其與胺(C)反應來產生甲醯胺(D)。在另一程序中，可使C1-4烷基異氰酸酯與胺(C)反應來產生尿素(E)。在另一程序中，通過此項技術中已知的方法可將胺(C)轉化為C1-4烷基氨基或C2-6二烷基氨基(F)，例如用多聚甲醛(用於甲基化作用)或更高級的醛或酮進行處理，接著用NaBH3CN或此項技術中已知的類似還原劑進行還原。或者，胺(C)可易於烷基化，例如在鹼存在下通過使用C1-4烷基滷化物來使其烷基化。應了解，試劑的當量將對產物是C1-4烷基氨基或C2-6二烷基氨基產生影響，使用約1.0至1.2當量的試劑將提供取代基為-NHC1-4烷基的化合物F，而使用至少2當量將提供取代基為-N(C1-4烷基)2的化合物(F)。此外，可通過進行單獨的單烷基化步驟而獲得不對稱-N(C1-4烷基)2取代基，其中所述烷基有所不同。這些實例是如下所示 在另一個程序中，使用(例如)NaNO2/H3O+可將胺(C)轉化為重氮鹽中間體(G)，並接著使其與多種試劑反應，例如CuCl、CuBr、CuCN、氟硼酸、H2O、Cu(I)/C1-4烷基SH和其類似物。少數說明性實例是如下所示。
使用H2O2、mCPBA和其類似物可進一步將化合物(L)氧化而產生C1-4烷基亞磺醯基和C1-4烷基磺醯基。在另一種方式中，使用此項技術中的已知方法，可通過滷化反應直接由化合物(A)來製備化合物(H)[R3＝Br]，例如Br2、Br2/AlBr3、Br2/FeBr3和類似試劑。在類似方式中，使用(例如)I2、I2/HNO3和類似試劑可將化合物(A)碘化。在另一實例中，使用此項技術中已知的酸性或鹼性條件可易於將化合物(H)(R3＝CN)的腈水解為甲醯胺。在另一實例中，使用此項技術中的已知方法(例如DIBAL和其類似方法)可將化合物(H)(R3＝CN)的腈轉化為醛(R3＝CHO)。在隨後的步驟中，可將所述醛氧化為羧基(R3＝CO2H)。在與上述方式相比的另一種方式中，在水解之後可通過達金反應(Dakin Rxn)由化合物(H)(R3＝CHO)來製備化合物(K)。在另一實例中，在鹼存在下，使用C1-4烷基滷化物或類似試劑可易於將化合物(K)烷基化而產生C1-4烷氧基。在另一實例中，使用此項技術中已知的方法可將化合物(K)醯基化而產生化合物(M)的C1-5烷氧基，例如在鹼存在下使用烷基醯基氯和其類似方式。在隨後的程序中，可在弗裡斯(Fries)重排條件下將化合物(M)重排而產生化合物(N′)和/或(N″)；合適的條件包括(例如)路易斯酸、AlCl3、Sc(OTf)3和其類似物。化合物(D)的氨基在光(hv)條件下也可發生類似重排。
另一種製備本發明化合物的方法可通過傅列德爾-克拉夫茨(Friedel-Crafts)醯基化反應來進行。舉例來說，在路易斯酸(如AlCl3和其類似物)存在的條件下使用C1-5醯基滷化物可將化合物(A)醯基化而產生化合物(O)。在將醯基滷化物用於此反應的實例中，所得的化合物是苯乙酮(P)。代表性實例是如下所示 此外，可使用此項技術中的方法來氧化化合物(P)，從而產生相應的羧基，例如KOCl、KOI、KOBr和其類似物。使用此項技術中已知的甲醯胺化或酯化方法可易於將所述羧基轉化為多種基團，從而產生(例如)甲醯胺、C1-4烷基甲醯胺、C2-6二烷基甲醯胺和C1-6-烷氧基羰基。在另一實例中，可用(例如)Zn(Hg)/HCl、NH2NH2/鹼和其類似物來還原化合物(O)或(P)中的羰基，從而產生烷基。在另一實例中，使用此項技術中已知的偶聯技術(例如Heck反應、Suzuki反應、Stille反應、Sonogashira偶聯和其類似方法)可將化合物(H)(其中R3＝Br或I)或作為三氟甲磺酸鹽(-OSO2CF3)的化合物(K)轉化為C2-6烯基(化合物(Q))、C1-6烷基(化合物(R))或C2-6炔基(化合物(S))；合適的催化劑包括Pd(OCOCH3)2、PdCl2、Pd(dba)3、Pd(PPh3)4、PhCH2Pd、Pd(dppf)Cl2、PhCH2Pd(PPh3)2Cl2和其類似物，同樣合適的其他配體(即L)包括PAr3、dppp、binap和其類似物，這些偶聯反應通常包括鹼的使用，例如TEA、Na2CO3、K2CO3、NaOCOCH3、K3PO4、TIOH、NaOCH2CH3和其類似物。
另一種方法包括磺化芳香環。例如，可將化合物(A)與氯磺醯基氯化物反應以產生化合物(T)。其他合適的方法在此項技術中已為人們所知，例如使用H2SO4/SO3來產生磺酸，其接著可轉化為化合物(T)。可使多種胺類與化合物(T)反應，例如使C1-4烷基胺類與化合物(T)反應來產生化合物(U)的C1-4烷基磺醯胺基團。
應了解，在本發明化合物的製備過程中，可需要不同的保護方案。如本文所定義，術語「經保護衍生物」是指一種分子，其中至少一個作為該分子的一部分的化學基已經改變，從而使得此基團在合成步驟中基本上穩定。一個實例可以是C(1)甲醯胺基，其可需要得到保護、轉化為不同的官能團或轉化為不同的官能團並在合成過程中進一步得到保護。對甲醯胺或可轉化為C(1)甲醯胺的基團的保護使得甲醯胺或該基團在用於修飾芳香環的反應條件下基本穩定，並且一旦反應完成，其隨後即「去保護」或「去保護並再轉化」為甲醯胺。
因而，適於多種合成轉化的代表性保護基在下列文獻中有所揭示Greene和Wuts的《有機合成中的保護基》(Protective Groups in OrganicSynthesis)第3版，約翰威利父子公司(紐約)，1999年，其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中。
可用於製備中間體或本文所揭示化合物的其他合成程序的參考文獻可見於下列文獻例如，Smith，M.B.和March，J.的《高等有機化學》(Advanced Organic Chgemistry)第5版，Wiley-Interscience(2001年)；或Larock，R.C.的《綜合有機轉換，官能團製備指導》(ComprehensiveOrganic Transformations，A Guide to Functional Group Preparations)第2版，VCH出版社(VCH Publishers，Inc.)(1999年)，兩者的引文是以全文引用的方式併入本文中。
儘管以上合成說明表示一種異構體，應了解其僅具說明性且由任何所給出的反應可形成一種以上的位置異構體。例如，化合物(A)的硝化可產生一種以上如下所示的位置異構體 可通過層析(例如(但不限於)急驟層析、低壓層析、HPLC和其類似方法)、分步結晶和所屬領域的技術人員所熟知的其他方法來進行位置異構體的分離。應了解，所述文獻中存在多種可影響位置異構體比率的條件，例如溶劑、溫度、催化劑的存在或不存在、吸電子基或給電子基的存在和其類似物。
應了解，用於製備本發明化合物的合成程序和方法實例具有代表性且決不限於特殊細節，根據本揭示內容，其他變化將為所屬領域的技術人員所知或明白。
通過使用微波技術可改良各種反應，包括如本文所述的芳香族親電取代反應和偶聯反應。因此，通過使用微波照射可輔助本文所述的反應。微波照射可由多種不同的微波源產生。一種特別適於產生用於有機合成的微波的儀器是史密斯合成器(Smith Synthesizer)和來自瑞典烏普薩拉的個人化學公司AB(Personal Chemistry AB，Uppsala Sweden)的相關儀器。
另外，式(I)化合物涵蓋其所有醫藥學上可接受的鹽、溶劑化物和特殊水合物。本發明同樣涵蓋非對映異構體和光學異構體，例如對映異構體的混合物，其包括外消旋混合物和單獨的對映異構體和非對映異構體，其是由於某些式(I)化合物的結構不對稱性而產生。單獨異構體的分離可通過層析(包括通過使用手性酸或鹼來進行的手性層析、手性拆分)或所屬領域的技術人員所熟知的各種其他方法來獲得。更特殊地，通過已知方法可將外消旋混合物拆分為光學純對映異構體，例如，使用光學活性酸來分離其非對映異構體鹽，並通過用鹼處理來釋放光學活性胺化合物。同樣地，使用光學活性鹼來分離外消旋混合物的非對映異構體鹽，並通過用酸進行處理來釋放光學活性酸化合物，從而可拆分外消旋混合物。另一種用於將外消旋物拆分為光學純對映異構體的方法是基於在光學活性基質或手性載體上進行的層析。因此，本發明的某些外消旋化合物可拆分為其光學對映體，例如通過d-或l-鹽(酒石酸鹽、扁桃酸鹽或樟腦磺酸鹽)的分步結晶來進行拆分。本發明化合物同樣可通過使本發明化合物與光學活性胺或醇(如衍生自(+)或(-)α-甲基苄胺或其類似物的胺或醇)反應形成非對映異構甲醯胺或酯來進行拆分，通過分步結晶、手性層析或類似方法並且隨後水解來進行分離。
可使用所屬領域的技術人員已知的用於拆分光學異構體的額外方法，且這些方法對於所屬領域的技術人員來說是顯而易見的。所述方法包括下列文獻所討論的那些方法J.Jaques、A.Collet和S.Wilen的《對映異構體、外消旋物和拆分》(Enantiomers，Racemates，and Resolutions)約翰威利父子公司，紐約(1981)。
應了解，本文所述的化學反應具有代表性且不打算以任何方式加以限制。
表1顯示本發明的代表性實例。
表1




G.醫藥組合物本發明提供治療(預防)方法，所述方法是通過向需要所述治療(或預防)的個體投用治療有效劑量的本發明調節物來實現[例如，也見2002年8月29日公布的PCT申請案第PCT/IB02/01461號的WO 02/066505；其中各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。在一個優選方面，所述調節物大體上經純化。所述個體優選動物，包括(但不限於，例如)母牛、豬、馬、小雞、貓、狗、兔、大鼠、小鼠等動物，並且優選哺乳動物且最優選人類。
可將本發明的調節物單獨或以醫藥學或生理學上可接受的組合物(其中使用所屬領域的技術人員熟知的技術將所述調節物與合適的載劑或賦形劑混合)形式投用給非人類動物[見下文實例]和/或人類。所屬領域的技術人員可獲得合適的醫藥學上可接受的載劑；例如，見《(雷氏藥學大全》(Remington′s Pharmaceutical Science s)第16版，1980年，麥克出版社(Mack Publishing Co.)(Oslo等人)。
接著，提供治療有效劑量的醫藥學或生理學上可接受的組合物。如將本文所述方法作為說明所確定且不受所述方法限制，治療有效劑量是指足以使細胞死亡相關病症或者神經細胞死亡或肌細胞死亡病症的症狀或生理學狀態得到預防或改善的調節物的量。
我們清楚地認為，本發明的調節物可單獨提供或與其他醫藥學或生理學上可接受的化合物組合提供。當前，其他用於治療本發明病症的化合物已為所屬領域的技術人員所熟知。本發明的一個方面涵蓋根據本文所揭示實施例的用途，其進一步包含一種或一種以上選自由下列各物組成的群組的藥劑多奈哌齊(donepezil)、酒石酸卡巴拉汀(rivastigmine)、加蘭他敏(galantamine)、他克林(tacrine)、吡拉西坦(piracetam)、阿尼西坦(aniracetam)、銀杏(ginkgo biloba)、尼麥角林(nicergoline)、尼莫地平(minodipine)、美金剛胺(memantine)、利培酮(risperidone)、奧氮平(olanzapine)、氟哌丁苯(haloperidol)、帕羅西汀(paroxetine)、西酞普蘭(citalopram)、氟西汀(fluoxetine)、氟伏沙明(fluvoxamine)、舍曲林(sertaline)、三唑酮(trazodone)和泰必利(tiapride)。在一些實施例中，所述藥劑是選自由下列各物組成的群組左旋多巴(levodopa)、左旋多巴-卡比多巴(levodopa-carbidopa)、左旋多巴-苄絲肼(levodopa-benserazide)、溴麥亭(bromocriptine)、培高利特(pergolide)、麥角乙脲(lisuride)、卡麥角林(cabergoline)、普拉克索(pramipexole)、羅平尼咯(ropinirole)、他利克索(talipexole)、阿樸嗎啡(apomorphine)、恩他卡朋(entacapone)、託卡朋(tolcapone)、司立吉林(selegiline)、苯海索(trihexyphenidyl)、苯託品(benztropine)、比哌立登(biperiden)、昂他丁(arantadine)和布地品(budipine)。在一些實施例中，所述藥劑是選自由下列各物組成的群組鹽酸阿米洛利(amiloride hydrochloride)、安體舒通(spironolactone)、阿替洛爾(atenolol)、比索洛爾(bisoprolol)、卡維地洛(carvedilol)、酒石酸美託洛爾(metoprololtartrat)和地高辛(digoxin)。
在一些實施例中，細胞死亡相關病症是神經細胞死亡相關病症，其是選自由下列各病組成的群組阿爾茲海默氏病、帕金森氏病、朊毒體相關疾病、中風、運動神經元疾病、學習或記憶障礙、創傷性腦損傷、脊髓損傷和周圍神經病。在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病。
在一些實施例中，細胞死亡相關病症是肌細胞死亡相關病症，其是選自由下列各病組成的群組腦澱粉樣血管病、心肌梗塞和充血性心力衰竭。
給藥途徑合適的給藥途徑包括口服、經鼻、經直腸、經黏膜或腸內給藥、腸胃外傳送，包括使用此項技術中已知的方法進行肌肉內、皮下、髓內注射和鞘內、直接在心室內、靜脈內、腹膜內、鼻內、肺內(吸入)或眼內注射。其他特別優選的給藥途徑是氣霧劑和長效配方。我們明確地預期本發明醫藥品的緩釋配方，特別是長效配方。在某些實施例中，給藥途徑為口服。
組合物/配方根據本發明使用的醫藥學或生理學上可接受的組合物和醫藥品可以常規方式使用一種或一種以上包含賦形劑和助劑的生理學上可接受的載劑來配製。適當的配方取決於所選的給藥途徑。
本文所述的某些醫藥品應包括醫藥學或生理學上可接受的載劑和至少一種本發明調節物。為了注射，可將本發明的藥劑配製成水溶液，較佳調配在生理學相容性緩衝劑(例如漢克氏溶液(Hanks′s solution)、林格氏溶液(Ringer′s solution))或生理鹽水緩衝劑(如磷酸鹽或碳酸氫鹽緩衝劑)中。為了經黏膜給藥，在配方中使用適於透過屏障的滲透劑。所述滲透劑在此項技術中通常已為人們所知。
可口服的醫藥學或生理學上可接受的製劑包括由明膠製成的推入配合式膠囊與由明膠和增塑劑(如丙三醇或山梨糖醇)製成的柔軟、密封膠囊。推入配合式膠囊可含有與填充物(如乳糖)、粘合劑(如澱粉)和/或潤滑劑(如滑石粉或硬脂酸鎂)和視情況加入的穩定劑混合的活性成分。在軟膠囊中，可將活性化合物溶解或懸浮於合適的液體中，如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。另外，可添加穩定劑。用於口服的所有配方都應使用適合所述給藥方式的劑量。
為了經口腔給藥，所述組合物可採取以常規方式配製的片劑或錠劑的形式。
為了通過吸入給藥，根據本發明使用的化合物適於以加壓包裝的噴霧器中的氣霧劑噴霧傳遞的形式傳輸，同時使用合適的氣體推進物，例如二氧化碳。就加壓氣霧劑來說，通過提供閥門來傳遞計量的量，從而可確定劑量單位。在吸入器或吹藥器中使用的(例如)明膠膠囊和藥筒可配製成含有所述化合物和合適的粉末基質(如乳糖或澱粉)的粉末混合物。
所述化合物可配製成通過注射(例如通過彈丸注射或連續輸注)來用於腸胃外給藥。用於注射的配方可以單位劑量的形式來提供，例如添加有防腐劑的安瓿或多劑量容器。所述組合物可採取如含水媒介物中的懸浮液、溶液或乳狀液的形式，並且可含有如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑的調配劑。
用於腸胃外給藥的醫藥學或生理學上可接受的配方包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。含水懸浮液可含有增加懸浮液粘度的物質，如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或右旋糖酐。所述懸浮液同樣可視情況含有合適的穩定劑或增加化合物溶解度的試劑，從而允許製備高濃度溶液。
或者，活性成分在使用之前可以粉末或凍幹形式與合適的媒介物(如無菌無熱原的水)組成製劑。
除了先前所描述的劑型之外，所述化合物也可配製為長效製劑。可通過植入(例如皮下植入或肌肉內植入)或通過肌肉內注射來投用所述長期起作用的配方。因而，舉例來說，所述化合物可與合適的聚合或疏水性物質(例如，在可接受的油中的乳狀液)或離子交換樹脂一起配製，或配製為微溶性衍生物，例如微溶鹽。
在特定實施例中，所述化合物可通過受控釋放系統來傳遞。在一個實施例中，可使用泵(上文的Langer；Sefton，1987年，《英國生物醫藥CRC標準參考文獻》(CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.)14201-240；Buchwald等人，《外科》(Surgery)1980年，88507-516；Saudek等人，《新英格蘭醫學雜誌》(N.Engl.J.Med.)1989年，321574-579)。在另一實施例中，可使用聚合物質(《受控釋放藥物的應用》(Medical Applications ofControlled Release)，Langer和Wise編輯，CRC印刷社，波卡瑞頓(BocaRaton)，佛羅裡達，1974年；《控制藥物的生物利用度、藥物產品的設計和性能》(Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design andPerformance)，Smolen和Ball編輯，威利出版社(Wiley)，紐約，1984年；Ranger和Peppas，《大分子科學綜述大分子化學》(Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.)1983年，2361；Levy等人，《科學》1985年，228190-192；During等人，《神經病學年鑑》(Ann.Neurol.)1989年，25351-356；Howard等人，《神經外科雜誌》(J.Neurosurg.)1989年，71858-863)。其他受控釋放系統在Langer的綜述(《科學》1990年，2491527-1533)中有所討論。
另外，所述化合物可使用緩釋系統來傳遞，例如含有治療劑的固體疏水性聚合物的半透性基質。多種緩釋物質已被確立並已為所屬領域的技術人員所熟知。視化學性質而定，緩釋膠囊可在數周直至100天內釋放所述化合物。
視治療劑的化學性質和生物穩定性而定，可採用額外策略來用於調節物穩定性。
所述醫藥學或生理學上可接受的組合物也可包含合適的固相或凝膠相載劑或賦形劑。所述載劑或賦形劑的實例包括(但不限於)碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖類、澱粉類、纖維素衍生物類、明膠和聚合物，如聚乙二醇。
有效劑量適用於本發明的醫藥學或生理學上可接受的組合物包括下列組合物，其中含有有效劑量的活性成分以達到預期目的。更明確地，治療有效劑量是指有效預防所治療患者的疾病發展或減輕其現有症狀的量。有效劑量的確定完全在所屬領域的技術人員的能力範圍內，特別是根據本文所提供的詳細揭示內容。
對於本發明方法中所用的任何化合物來說，治療有效劑量最初可由細胞培養分析來進行估算。例如，在動物模型中可設計一個劑量來達到循環濃度範圍，其包括或涵蓋一個在體外系統中表現出細胞死亡保護性的濃度點或範圍。[見下文實例，用於體外分析和體內動物模型。]可使用所述資料來更精確地確定人類的有效劑量。
治療有效劑量是指導致患者症狀改善的化合物的量。所述化合物的毒性和治療效能可通過細胞培養或實驗動物的標準醫藥學程序來確定，例如確定LD50(導致測試總體的50％死亡的劑量)和ED50(有效治療測試總體的50％的劑量)。毒性和治療效應之間的劑量比率是治療指數，並且其可用LD50和ED50之間的比率來表示。優選顯示出高治療指數的化合物。
由這些細胞培養和動物研究所獲得的數據可用於設計供人類使用的劑量範圍。所述化合物的劑量較佳是處於包括ED50的循環濃度範圍內，具有極少毒性或沒有毒性。視所用的劑型和所用的給藥途徑而定，劑量可在此範圍內變化。可由個人醫師根據患者病狀來選擇精確劑型、給藥途徑和劑量。(例如，見Fingl等人的《治療學的藥理學基礎》(The Pharmacological Basisof Therapeutics)第1章，1975年)。
視特殊情況而定，可個別調整劑量和時間間隔以提供足以預防或治療本發明病症的活性化合物的血漿含量。達到這些效果所需的劑量將取決於個體特徵和給藥途徑。
給藥時間間隔同樣可使用最小有效濃度值來確定。應使用在10-90％的時間(較佳在30-99％之間且最佳在50-90％之間)內使血漿含量保持在最小有效濃度以上的療法來投用化合物。在局部給藥或選擇性攝取的情況下，藥物的有效局部濃度與血漿濃度可不相關。
當然，所投用化合物的量將取決於所治療患者、患者體重、痛苦的嚴重程度、給藥方式和處方醫師的判斷。
可在每日或常規基礎上給藥來達到所要結果的本發明調節物的優選劑量範圍包括(但不限於)減少神經細胞死亡或預防或治療肌細胞死亡的劑量是0.1-100mg/kg體重。其他優選劑量範圍是0.1-30mg/kg體重。其他優選劑量範圍是0.1-10mg/kg體重。其他優選劑量範圍是0.1-3.0mg/kg體重。當然，這些每日劑量可在一天中按時以少量來傳遞或投用。應注意，這些劑量範圍只是優選範圍且並不限於本發明。
H.治療方法本發明尤其是關於減少細胞死亡相關病症的方法，特別是神經細胞死亡相關病症和肌細胞死亡相關病症，所述方法包含向需要所述治療的個體提供本發明的調節物。在一些實施例中，所述調節物具有口服生物有效性。在一些實施例中，所述口服生物有效調節物能進一步穿過血腦屏障。在某些實施例中，此調節物是以醫藥學或生理學上可接受的口服組合物形式提供給個體。在某些實施例中，此個體是哺乳動物。在某些實施例中，此個體或哺乳動物是人類。
在某些實施例中，細胞死亡相關病症是神經細胞死亡相關病症。在某些實施例中，所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組阿爾茲海默氏病、帕金森氏病、朊毒體相關疾病、中風、運動神經元疾病、學習或記憶障礙、創傷性腦損傷、脊髓損傷和周圍神經病。在一些實施例中，阿爾茲海默氏病包含輕度認知障礙(MCI)。運動神經元疾病包括(但不限於)肌萎縮性脊髓側索硬化症、進行性脊髓性肌萎縮症、進行性延髓麻痺和原發性側索硬化症。周圍神經病包括(但不限於)糖尿病性神經病和涉及坐骨神經的神經病。糖尿病性神經病包括(但不限於)遠端對稱性多發性神經病(DSP)。
在某些實施例中，細胞死亡相關病症是肌細胞死亡相關病症。在某些實施例中，所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組腦澱粉樣血管病、心肌梗塞和充血性心力衰竭。
本發明同樣關於預防或治療細胞增生病症的方法，特別是神經細胞增生病症和肌細胞增生病症，其包含向需要所述治療的個體提供本發明的調節物。所述調節物較佳具有口服生物有效性。在一些實施例中，所述口服生物有效調節物較佳能進一步穿過血腦屏障。此調節物較佳以醫藥組合物的形式提供給個體，所述組合物較佳口服。此個體較佳是哺乳動物且最佳是人類。
在某些實施例中，細胞增生病症是神經細胞增生病症。在某些實施例中，所述神經細胞增生病症是神經母細胞瘤。在其他實施例中，所述神經細胞增生病症是髓母細胞瘤。
在某些實施例中，細胞增生病症是肌細胞增生病症。在某些實施例中，所述肌細胞增生病症是選自由下列各病組成的群組動脈粥樣硬化、再狹窄和腫瘤支持性血管生成。
I.其他功效調節(即增加、減少或阻斷)FPRL2護腦素受體功能性的藥劑可通過將候選化合物與FPRL2護腦素受體接觸並確定候選化合物對FPRL2護腦素受體功能性的影響來進行鑑別。調節FPRL2護腦素受體功能性的化合物的選擇性可通過將其對FPRL2護腦素受體的影響與其對其他G蛋白偶聯受體的影響相比較來進行評估。在鑑別調節FPRL2護腦素受體功能性的化合物之後，為證實或量化其活性，所述候選化合物可進一步在其他分析中進行測試，包括(但不限於)體內模型。FPRL2護腦素受體功能性的調節物在其中涉及正常或異常FPRL2護腦素受體功能性的疾病和生理病症的治療中具有治療有效性。
作為FPRL2護腦素受體的配體的藥劑可通過將候選化合物與FPRL2護腦素受體接觸並確定此候選化合物是否結合至FPRL2護腦素受體來進行鑑別。結合至FPRL2護腦素受體的化合物的選擇性可通過將其與FPRL2護腦素受體的結合和其與其他受體的結合相比較來進行評估。作為FPRL2護腦素受體功能性調節物的配體在其中涉及正常或異常FPRL2護腦素受體功能性的疾病和生理病症的治療中具有治療有效性。
本發明同樣關於已鑑定為護腦素受體調節物或配體的本發明化合物的經放射性同位素標記型式，其不僅適用於放射成像，而且在體外和體內分析中適用於組織樣品(包括人類)中的FPRL2護腦素受體的定位和定量，並通過抑制經放射性同位素標記的化合物的結合來鑑別FPRL2護腦素受體配體。本發明的進一步目的是發展新穎的FPRL2護腦素受體分析，其包含所述經放射性同位素標記的化合物。
本發明涵蓋已鑑定為FPRL2護腦素受體調節物或配體的本發明化合物的放射性同位素標記型式。
本發明同樣關於測試配體的放射性同位素標記型式，其適於檢測與FPRL2護腦素受體結合的配體。在一些實施例中，本發明清楚地設想適於檢測與FPRL2護腦素受體結合的配體的所述放射性標記測試配體的文庫。在某些實施例中，所述文庫包含至少約10、至少約102、至少約103、至少約105或至少約106的所述放射性標記測試化合物。本發明的進一步目的是發展新穎的FPRL2護腦素受體分析，其包含所述經放射性同位素標記的測試配體。
在一些實施例中，化合物的放射性同位素標記型式等同於此化合物，但是一個或一個以上的原子已由原子質量或原子質量數與一般可在自然中發現(即自然產生)的原子質量或原子質量數不同的原子替代或取代。可併入本發明化合物中的合適的放射性核素包括(但不限於)2H(氘)、3H(氚)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、18F、35S、36Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I和131I。併入所述放射性標記化合物中的放射性核素將取決於此放射性標記化合物的特定應用。例如，為了進行體外FPRL2護腦素受體標記和競爭分析，併入3H、14C、82Br、125I、131I、35S的化合物通常將最適用。對於放射成像應用來說，通常11C、18F、125I、123I、124I、131I、75Br、76Br或77Br通常將最適用。在一些實施例中，所述放射性核素是選自由下列各物組成的群組3H、11C、18F、14C、125I、124I、131I、35S和82Br。
用於將放射性同位素併入有機化合物中的合成方法適用於本發明化合物，並在此項技術中已為人們所熟知。這些合成方法(例如，將放射性水平的氚合併入目標分子中)是如下所示A.使用氚氣來進行催化還原-此程序通常產生高比放射性產物並需要滷化或不飽和前驅物。
B.使用硼氫化鈉[3H]來進行還原-此程序的成本極低並需要含有可還原官能團的前驅物，例如醛類、酮類、酯類和其類似物。
C.使用氫化鋁鋰[3H]來進行還原-此程序提供幾乎具有理論比放射性的產物。其同樣需要含有可還原官能團的前驅物，例如醛類、酮類、酯類和其類似物。
D.氚氣暴露標記-此程序涉及在合適的催化劑存在下將含有可交換質子的前驅物暴露於氚氣中。
E.使用碘化甲烷[3H]來進行N-甲基化-通常使用此程序，通過用高比放射性碘化甲烷[3H]處理適當的前驅物來製備O-甲基或N-甲基(3H)產物。此方法通常導致更高比放射性，例如約70-90Ci/mmol。
用於將放射性水平的125I併入目標分子中的合成方法包括A.桑德邁耶(Sandmeyer)和其類似反應-此程序將芳基胺或雜芳基胺轉化為重氮鹽，例如四氟硼酸鹽，並且隨後使用Na125I將其轉化為經125I標記的化合物。Zhu，D.-G.和同事在《有機化學雜誌》(J.Org.Chem.)2002年，67943-948中報告其代表性程序。
B.苯酚類的鄰碘化(125I)-此程序使得苯酚的鄰位併入125I，如Collier，T.L.和同事在J.Labeled Compd Radiopharm.1999年，42，S264-S266中所報告。
C.芳基和雜芳基溴化物與125I交換-此方法通常為兩個步驟的過程。第一個步驟是使用(例如)Pd催化反應[即Pd(Ph3P)4]或通過芳基或雜芳基鋰，在三烷基滷化錫或六烷基二錫[例如(CH3)3SnSn(CH3)3]的存在下將芳基或雜芳基溴化物轉化為相應的三烷基錫中間體。Bas，M.-D.和同時在J.LabeledCompd Radiophann.2001年，44S280-S282中報告了代表性程序。
在一些實施例中，化合物的放射性同位素標記型式等同於此化合物，但添加有一個或一個以上包含放射性核素的取代基。在一些其他實施例中，所述化合物是多肽。在一些其他實施例中，所述化合物是抗體或其抗原結合片段。在一些其他實施例中，所述抗體是單克隆抗體。合適的所述放射性核素包括(但不限於)2H(氘)、3H(氚)、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、18F、35S、36Cl、82Br、75Br、76Br、77Br、123I、124I、125I和131I。併入所述放射性標記化合物中的放射性核素將取決於此放射性標記化合物的特定應用。例如，為了進行體外FPRL2護腦素受體標記和競爭分析，併入3H、14C、82Br、125I、131I、35S的化合物通常將最適用。對於放射成像應用來說，11C、18F、125I、123I、124I、131I、75Br、76Br或77Br通常將最適用。在一些實施例中，所述放射性核素是選自由下列各物組成的群組3H、11C、18F、14C、125I、124I、131I、35S和82Br。
用於添加一個或一個以上包含放射性核素的取代基的方法在熟練技術工人的能力範圍內，並且包括(但不限於)通過酶催法[Marchalonic JJ，《生物化學雜誌》(Biochemical Journal)1969年，113299-305；ThorellJI和Johansson BG，《生物化學與生物物理學學報》(Biochimica etBiophysica Acta)1969年，251363-9；其中各專利的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]和/或通過氯胺-T/Iodogen/Iodobead法[Hunter WM和Greenwood FC，《自然》(Nature)1962年，194495-6；Greenwood FC等人，《(生物化學雜誌》1963年，89114-23；其中各專利的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]來添加放射性同位素碘。
特別是基於此專利文件的綜述，所揭示受體和方法的其他用途對於所屬領域的技術人員來說將變得顯而易見。
實例下列實例的提出是為解釋本發明，而非限制本發明。當本文揭示特定核酸和胺基酸序列時，我們相信在獲得與下文所報導的結果相同或者大體上相似的結果時，所屬領域的技術人員具有對這些序列做出細微修改的能力。本文所揭示的突變方法並不依賴於此方法，而是基於算法和相隔位於人類GPCR的TM6域中的保守脯氨酸殘基的位置距離。一旦此方法是可靠的，相信所屬領域的技術人員具有做出細微修改的能力，從而達到與本文所揭示的結果大體上相同的結果(即組成性活化)。我們認為所述修改方法在本揭示內容的範圍內。
下列實例的提供是為達到說明的目的，而非一種限制方式。所屬領域的技術人員能夠根據本文的揭示內容來設計等同的分析和方法，其中所有分析和方法形成本發明的部分。
涉及本發明的主題且已為所屬領域的技術人員熟知的重組DNA技術可見於以下文獻例如，Maniatis T等人的《分子克隆實驗室手冊》(Molecular CloningA Laboratory Manual)(1989)，冷泉港實驗室；美國專利第6399373號；和2002年8月29日公布的PCT申請案第PCT/IB02/01461號的WO 02/066505；各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中。
實例1人類GPCR的全長克隆a.內源性人類FPRL2(SEQ ID NO1和SEQ ID NO2)編碼全長FPRL2(基因序列資料庫登記號L14061)的多核苷酸序列是如本文所述進行克隆。SEQ ID NO1是人類FPRL2多核苷酸編碼序列。SEQ IDNO2是已編碼的FPRL2多肽。我們相信所屬領域的技術人員具有對本文所展示的實驗方案做出細微修改的能力，從而類似地克隆內源性人類FPRL1(基因序列資料庫登記號AF054013)多核苷酸和內源性人類FPR(基因序列資料庫登記號M60627)多核苷酸。
使用作為模板的基因組DNA和具有由製造商提供的緩衝劑系統的rTth聚合酶(PerMn Elmer)、0.25mM的每種引物和0.2mM的每4種核苷酸來進行PCR。循環條件是在94℃下歷時1分鐘、在64℃下歷時1分鐘和在72℃下歷時1分鐘20秒鐘的30個循環。5′PCR引物在該序列中含有EcoRI位點5′-AAAGAATTCAGGTGTGGGAAGATGGAAACC-3′(SEQ ID NO3)。
3』引物在該序列中含有BamHI位點5′-AAAGGATCCCCGACCTCACATTGCTTGTA-3′(SEQ ID NO4)。
1.1kb PCR片段是用EcoRI和BamHI來消化並且克隆到pCMV表達載體的EcoRI-BamHI位點中。
b.HA/V5雙標記內源性人類FPRL2(SEQ ID NO5和SEQ ID NO6)編碼全長FPRL2多肽並具有N末端HA抗原決定部位標記物和安置在C末端的V5抗原決定部位標記物的多核苷酸是如下文所述進行克隆。HA抗原決定部位標記物是胺基酸序列MYPYDVPDYA；V5抗原決定部位標記物是胺基酸序列GKPIPNPLLGLDST。SEQ ID NO5是具有5′-末端HA抗原決定部位標記物和安置在3』位置的V5抗原決定部位標記物的人類FPRL2多核苷酸編碼序列。SEQ ID NO6是已編碼的HA/V5雙標記FPRL2多肽。我們相信所屬領域的技術人員具有對本文展示的實驗方案做出細微修改的能力，從而類似地克隆HA/V5雙標記內源性人類FPRL1(基因序列資料庫登記號AF054013)多核苷酸和HA/V5雙標記內源性人類FPR(基因序列資料庫登記號M60627)多核苷酸。
使用作為模板的上述(a)中的克隆FPRL2多核苷酸和具有由製造商提供的緩衝劑系統(補充有10％DMSO)的pfu聚合酶(Stratagene)、0.25mM的每種引物和0.5mM的每4種核苷酸來進行PCR。循環條件是在94℃下歷時1min、在60℃下歷時1min和在72℃下歷時2min的25個循環。
5′PCR引物在該序列中含有HindIII位點5′-CCCAAGCTTCATGGAAACCAACTTCTCCATTCCTC-3′(SEQ ID NO7)。
3』引物在該序列中含有BamHI位點5′-CCCGGATCCCATTGCTTGTAACTCCGTCTCCTC-3′(SEQ ID NO8)。
1.06kb PCR片段是用HindIII和BamHI消化並且克隆到HA/V5雙標記pCMV表達載體的HindlII-BamHI位點中。
實例2製備非內源性、組成性活化人類FPRL2(SEQ ID NO11和SEQ ID NO12)我們相信所屬領域的技術人員具有選擇用於核苷酸序列突變的技術的能力。下文展示用來產生人類GPCR的非內源型式的方法。下文所揭示的FPRL2突變是基於一種算法，由此使隔開保守脯氨酸(或其內源性、保守性取代)殘基(位於GPCR的TM6域中，在TM6/IC3界面處附近)的第十六位胺基酸(位於GPCR的IC3域中)突變，較佳地突變成為丙氨酸、組氨酸、精氨酸或賴氨酸胺基酸殘基，最佳地突變成為賴氨酸殘基。
非內源性、組成性活化人類FPRL2是通過使胺基酸位置240的亮氨酸殘基突變成為賴氨酸而得以完成(L240K)，其中使用下列序列引物5′-TCCAGCCGTCCCAAACGTGTCTTCGCTGC-3′(SEQ ID NO9；下劃線處為突變序列)和5′-CTCCTTCGGTCCTCCTATCGTTGTCAGAAGT-3′(SEQ ID NO10)。
SEQ ID NO11是非內源性、組成性活化(L240K)FPRL2多核苷酸編碼序列。SEQ ID NO12是已編碼的非內源性、組成性活化(L240K)FPRL2多肽。見(例如)2002年9月6日公布的PCT申請案第PCT/US02/05625號的WO02068600，其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中。
1.轉化體定位TM誘變非內源性人類GPCR的製備可根據製造商說明書在人類GPCR上使用轉化體定位TM誘變試劑盒(Clontech)來完成。利用兩種誘變引物，最佳是產生賴氨酸突變的賴氨酸誘變寡核苷酸和選擇標記寡核苷酸。為方便起見，也以標準形式來標記併入人類GPCR中的密碼子突變。
2.QuikChange定位TM誘變非內源性人類GPCR的製備也可通過使用QuikChangeTM定位TM誘變試劑盒(Stratagene，根據製造商說明書)來完成。較佳將內源性GPCR用作模板並且利用兩種誘變引物，並且最佳是賴氨酸誘變寡核苷酸和選擇標記寡核苷酸(包括在試劑盒中)。為方便起見，以標準形式來標記併入新型人類GPCR中的密碼子突變和各種寡核苷酸。
實例3受體表達儘管多種細胞可用於蛋白表達技術，最佳是利用哺乳動物細胞或者黑素細胞。首要原因是基於實用性，即如果有可能，使用(例如)酵母細胞來表達GPCR會在方案中引入非哺乳動物細胞，其可能不(實際上就酵母來說，不)包括進化用於哺乳動物系統的受體偶聯、遺傳機制和分泌途徑，因而在非哺乳動物細胞中獲得的結果即使可用，也不如由哺乳動物細胞或黑素細胞所獲得的結果較佳。對於哺乳動物細胞來說，CHO、COS-7、MCB3901、293和293T尤其較佳，儘管所用的特定哺乳動物細胞可基於技術工人的特殊需要。在一些實施例中，心肌細胞是較佳的。見下文涉及黑素細胞的部分，包括實例11。
a.瞬時轉染第一天，析出6×106個293細胞/10cm培養皿。第二天，準備兩支反應管(各管的容積與每個培養板相稱)通過在0.5ml不含血清的DMEM(GibcoBRL)中混合4μg DNA(例如pCMV載體；帶有受體cDNA的pCMV載體)來製備管A；通過在0.5ml不含血清的DMEM中混合24μl脂轉染胺(GibcoBRL)來製備管B。將管A和B倒置(數次)來使其混合，隨後在室溫下培養30-45分鐘。該混合物稱作「轉染混合物」。用1XPBS來洗滌所塗的293細胞，然後添加5ml不含血清的DMEM。向細胞中添加1ml轉染混合物，隨後在37℃下/5％CO2中培養4小時。通過抽吸來移除轉染混合物，然後添加10ml的DMEM/10％胎牛血清。在37℃下/5％CO2中培養細胞。培養48小時以後，收集細胞並將其用於分析。
b.穩定細胞系將大約12×106個293細胞塗於15cm組織培養板上。使其在含有10％胎牛血清和1％丙酮酸鈉、L-穀氨醯胺和抗生素的DME高葡萄糖培養基中生長。在塗覆293細胞之後24小時(或達到約80％匯合度時)，使用12μg DNA(例如帶有受體cDNA的pCMV載體)來轉染所述細胞。將12μg DNA與60μl脂轉染胺和2ml不含血清的DME高葡萄糖培養基結合。自培養板中吸出培養基，並將細胞用不含血清的培養基洗滌一次。將DNA、脂轉染胺和培養基混合物與10ml不含血清的培養基一起添加到培養板中。在37攝氏度下培養四到五小時以後，吸出培養基並添加25ml含血清的培養基。在轉染以後二十四小時，再次吸出培養基並添加含血清的新鮮培養基。在轉染以後四十八小時，吸出培養基並添加含有遺傳黴素(G418藥物)的含血清的新鮮培養基，其最終濃度為。將大約12×106個293細胞塗於15cm組織培養板上。使其在含有10％胎牛血清和1％丙酮酸鈉、L-穀氨醯胺和抗生素的DME高葡萄糖培養基中生長。在塗覆293細胞之後24小時(或達到約80％匯合度時)，使用12μg DNA(例如帶有受體cDNA的pCMV載體)來轉染所述細胞。將12μg DNA與60μl脂轉染胺和2ml不含血清的DME高葡萄糖培養基結合。自培養板中吸出培養基，並將細胞用不含血清的培養基洗滌一次。將DNA、脂轉染胺和培養基混合物與10ml不含血清的培養基一起添加到培養板中。在37攝氏度下培養四到五小時以後，吸出培養基並添加25ml含血清的培養基。在轉染以後二十四小時，再次吸出培養基並添加含血清的新鮮培養基。在轉染以後四十八小時，吸出培養基並添加含有遺傳黴素(G418藥物)的含血清的新鮮培養基，其最終濃度為500μg/ml。所述轉染細胞現在正經歷對含有G418抗性基因的陽性轉染細胞的選擇。在選擇發生時，每四到五天更換培養基。在選擇期間，使細胞生長以產生穩定群體，或使其分裂以用於穩定克隆選擇。
實例4用於確定GPCR活性的分析多種方法可用於評估人類GPCR的活性。下列內容具有說明性；我們相信所屬領域的技術人員具有確定最有益於技術工人需要的技術的能力。
1.膜結合分析[35S]GTPγS分析當G蛋白偶聯受體處於其活性狀態時，無論是由於配體結合或是由於組成性活化，該受體與G蛋白偶聯並刺激GDP釋放和隨後的GTP與G蛋白的結合。G蛋白受體複合物的α亞單位充當GTP酶並緩慢地將該GTP水解為GDP，此時該受體通常失活。活化受體持續將GDP轉換為GTP。不可水解的GTP類似物[35S]GTPγS可用於證明[35S]GTPγS與表達活化受體的膜的結合有所增強。使用[35S]GTPγS結合來測量活性的優勢在於(a)其在遺傳學上可用於所有G蛋白偶聯受體；(b)其最接近膜表面，從而使其不太可能去接取影響胞內級聯的分子。
該分析利用G蛋白偶聯受體可刺激[35S]GTPγS與表達相關受體的膜的結合的能力。因而，該分析可用於直接鑑定方法以篩選內源性GPCR和非內源性、組成性活化GPCR的候選化合物。該分析是通用的，並已應用於所有G蛋白偶聯受體的藥物發現。
在20mM HEPES和1至約20mM MgCl2(可對此量進行調整以優化結果，優選20mM，pH7.4)、含有約0.3至約1.2nM[35S]GTPγS的結合緩衝劑(可對此量進行調整以優化結果，儘管優選1.2)和12.5-75μg膜蛋白(例如，表達Gs融合蛋白的293細胞；可對此量進行調整以優化結果)與10μM GDP(此量可變化以優化結果)中，將[35S]GTPγS分析培養1小時。隨後添加麥胚凝集素珠(25μl；Amersham)，並且將該混合物在室溫下另外培養30分鐘。隨後在室溫下使所述管以1500xg離心5分鐘且隨後在閃爍計數器中計數。
2.腺苷酸環化酶可對設計用於基於細胞的分析的閃光培養板TM腺苷酸環化酶試劑盒(New England Nuclear；目錄號SMP004A)進行修飾以用於粗質膜。該閃光培養板孔可含有閃爍塗層，其也含有一種識別cAMP的特異性抗體。在所述孔中產生的cAMP可通過直接競爭放射性cAMP示蹤劑與cAMP抗體的結合來計量。下列內容充當用於測量在表達該受體的全細胞中的cAMP含量變化的簡要方案。
在瞬時轉染之後約二十四小時，收集轉染細胞。小心吸出培養基並丟棄。向每隻細胞培養皿中緩慢加入10ml PBS，隨後小心抽吸。向每隻培養板中加入1ml Sigma細胞解離緩衝劑和3ml PBS。用移液管將細胞吸出該培養板，並將細胞懸浮液收集到50ml錐形離心管中。隨後在室溫下使細胞以1100rpm離心5分鐘。小心地使細胞沉澱物再懸浮於適當體積的PBS(約3ml/培養板)中。隨後，使用血細胞計對細胞計數，並添加額外的PBS以給出適當數目的細胞(最終體積為約50μl/孔)。
根據製造商說明書來製備和保存cAMP標準物和檢測緩衝劑(包含1μCi示蹤劑[125I cAMP(50μl)]/11ml檢測緩衝劑)。新近製備用於篩選的分析緩衝劑，並且其含有50μl刺激緩衝劑、3μl測試化合物(12μM最終分析濃度)和50μl細胞。使用之前將分析緩衝劑儲存在冰上。通過將50μl cAMP標準物添加到適當孔中來起始分析，隨後向孔H-11和H-12中添加50μl PBSA。向所有孔中添加50μl刺激緩衝劑。使用一種能夠分散3μl化合物溶液的針頭工具向適當孔中添加DMSO(或所選的候選化合物)，獲得12μM測試化合物的最終分析濃度和100μl的總分析體積。隨後將細胞加入孔中，並在室溫下培養60分鐘。隨後，將含有示蹤劑cAMP的100μl檢測混合物加入孔中。隨後將培養板額外培養2小時，然後在WallacMicroBeta閃爍計數器中計數。然後，由每個分析培養板中所含的標準cAMP曲線外推cAMP/孔的值。
3.用於Gi偶聯目標GPCR的基於細胞的cAMP分析TSHR是一種Gs偶聯GPCR，其在活化時引起cAMP累積。TSHR通過胺基酸殘基623的突變(即丙氨酸殘基變為異亮氨酸殘基)而得以組成性活化。預期Gi偶聯受體可抑制腺苷酸環化酶且因而降低cAMP產生含量，其可使cAMP含量的評估具有挑戰性。一種用於測量cAMP產量降低(表示Gi偶聯受體的組成性活化)的有效技術最好可通過使作為「信號增強子」的非內源性、組成性活化TSHR(TSHR-A623I)(或內源性、組成性活性Gs偶聯受體)與Gi連接的目標GPCR共轉染以建立cAMP的基線含量來完成。一旦產生Gi偶聯受體的非內源性形式，隨後使目標GPCR的這種非內源性形式與該信號增強子共轉染，並且此物質可用於篩選。當使用cAMP分析時，我們將利用該方法來有效地產生信號；此方法較佳是用於Gi偶聯受體的候選化合物的直接鑑定。應注意，對於Gi偶聯GPCR來說，當使用此方法時，目標GPCR的反向激動劑將增強該cAMP信號，而激動劑則降低該cAMP信號。
第一天，析出2×104個293細胞/孔。第二天，準備兩個反應管(各管的容積與每個培養板相稱)通過在1.2ml不含血清的DMEM(IrvineScientific，Irvine，CA)中混合轉染到哺乳動物細胞中的各受體的2μgDNA(總計4μg DNA)(例如pCMV載體；帶有突變THSR(THSR-A623I)的pCMV載體；THSR-A623I和GPCR等)來製備管A；通過在1.2ml不含血清的DMEM中混合120μl脂轉染胺(Gibco BRL)來製備管B。隨後使管A和B倒置(數次)以使其混合，隨後在室溫下培養30-45分鐘。該混合物稱作「轉染混合物」。用1XPBS來洗滌所塗的293細胞，然後添加10ml不含血清的DMEM。隨後向細胞中添加2.4ml的轉染混合物，隨後在37℃下/5％CO2中培養4小時。隨後，通過抽吸來移除轉染混合物，然後添加25ml的DMEM/10％胎牛血清。隨後在37℃下/5％CO2中培養細胞。培養24小時之後收集細胞，並將其用於分析。
閃光培養板TM腺苷酸環化酶試劑盒(New England Nuclear；目錄號SMP004A)是設計用於基於細胞的分析，但是可根據熟練技術工人的需要來修飾以用於粗質膜。該閃光培養板孔將含有閃爍塗層，其也含有一種識別cAMP的特異性抗體。在孔中所產生的cAMP可通過直接競爭放射性cAMP示蹤劑與cAMP抗體的結合來計量。下列內容充當用於測量在表達該受體的全細胞中的cAMP含量變化的簡要方案。
在瞬時轉染之後約二十四小時，收集轉染細胞。小心吸出培養基並丟棄。向每隻細胞培養皿中緩慢加入10ml PBS，隨後小心抽吸。向每隻培養板中加入1ml Sigma細胞解離緩衝劑和3ml PBS。用移液管將細胞吸出所述培養板，並將細胞懸浮液收集到50ml錐形離心管中。隨後在室溫下使細胞以1100rpm離心5分鐘。小心地使細胞沉澱物再懸浮於適當體積的PBS(約3ml/培養板)中。隨後，使用血細胞計對細胞計數，並添加額外的PBS以給出適當數目的細胞(最終體積為約50μl/孔)。
根據製造商說明書來製備和保存cAMP標準物和檢測緩衝劑(包含1μCi示蹤劑[125I cAMP(50μl)]/11ml檢測緩衝劑)。應新近製備用於篩選的分析緩衝劑，並且其含有50μl刺激緩衝劑、3μl測試化合物(12μM最終分析濃度)和50μl細胞。使用之前將分析緩衝劑儲存在冰上。通過將50μl cAMP標準物添加到適當孔中來起始分析，隨後向孔H-11和H12中添加50μl PBSA。向所有孔中添加50μl刺激緩衝劑。使用一種能夠分散3μl化合物溶液的針頭工具向適當孔中添加所選化合物(例如TSH)，獲得12μM測試化合物的最終分析濃度和100μl的總分析體積。隨後將細胞加入孔中，並在室溫下培養60分鐘。隨後，將含有示蹤劑cAMP的100μl檢測混合物加入孔中。隨後將培養板額外培養2小時，然後在WallacMicrcBeta閃爍計數器中計數。然後，由每個分析培養板中所含的標準cAMP曲線外推cAMP/孔的值。
4.基於報告基因的分析a.CRE-Luc報告基因分析(Gs相關受體)以每孔2×104個細胞的密度將293和293T細胞塗於96孔培養板上，並根據製造商說明書在第二天使用脂轉染胺試劑(BRL)來進行轉染。如下所述來製備用於各6孔轉染的DNA/脂質混合物使100μl DMEM中的260ng質粒DNA緩慢地與100μl DMEM中的2μl脂質混合(該260ng質粒DNA是由以下物質組成200ng的8xCRE-Luc報告基因質粒、僅包含內源性受體或非內源受體或pCMV的50ng pCMV和10ng GPRS表達質粒(pcDNA3中的GPRS(Invitrogen))。如下所述來製備該8XCRE-Luc報告基因質粒通過在Bgl-HindIII位點將大鼠的促生長素抑制素啟動子(-71/+51)克隆到pβgal-Basic載體(Clontech)中來獲得載體SRIF-β-gal。通過腺病毒模板AdpCF126CCRE8的PCR來獲得cAMP響應元件的八個(8)複製體(見7《人類基因治療》(Human Gene Therapy)1883(1996))，並在Kpn-BglV位點將其克隆到SRIF-β-gal載體中，得到8xCRE-β-gal報告載體。由下列方式來產生8XCRE-Luc報告基因質粒在HindIII-BamHI位點用獲自pGL3-基本載體(Promega)的螢光素酶基因來替代8xCRE-β-gal報告載體中的β-半乳糖苷酶基因。在室溫下培養30分鐘之後，以400μl DMEM來稀釋該DNA/脂質混合物並將100μl的稀釋混合物添加到各孔中。在細胞培養箱中培養4小時以後，將含有10％FCS的100μl DMEM添加到各孔中。第二天，用200μl/孔的含有10％FCS的DMEM來給轉染細胞換液。八(8)小時以後，在以PBS洗滌之後將所述孔換為100μl/孔不含酚紅的DMEM。第二天，根據製造商說明書使用LucLiteTM報告基因分析試劑盒(Packard)來測量螢光素酶活性，並在1450MicroBetaTM閃爍和螢光計數器(Wallac)上讀數。
b.AP1報告基因分析(Gq相關受體)一種檢測Gq刺激作用的方法是依賴於Gq依賴性磷脂酶C的已知性質，所述性質使得其啟動子中含有AP1元件的基因活化。Pathdetect AP-1順式報告系統(Stratagene，目錄號219073)可根據上文中關於CREB報告基因分析所述的方案來利用，但是磷酸鈣沉澱物的組分是410ng pAP1-Luc、80ng pCMV受體表達質粒和20ng CMV-SEAP。
c.SRF-LUC報告基因分析(Gq相關受體)一種檢測Gq刺激作用的方法是依賴於Gq依賴性磷脂酶C的已知性質，所述性質使得其啟動子中含有血清響應因子的基因活化。PathdetectSRF-Luc報告系統(Stratagene)可用以分析(例如)COS7細胞中的Gq偶聯活性。根據製造商說明書，使用哺乳動物轉染TM試劑盒(Stratagene，目錄號200285)由該系統的質粒組分和編碼內源性或非內源性GPCR的指示性表達質粒來轉染細胞。簡單地說，根據製造商說明書，在磷酸鈣沉澱物上結合410ng SRF-Luc、80ng pCMV-受體表達質粒和20ng CMV-SEAP(分泌型鹼性磷酸酯酶表達質粒；在轉染細胞的培養基中測量鹼性磷酸酯酶活性以對比樣品之間的轉染效率變化)。將沉澱物的一半均等分配到96孔培養板的3個孔中，使細胞在不含血清的培養基中保持24小時。在最後5小時內，用所指示的1μM血管緊張肽來培養細胞。隨後使細胞溶解，並根據製造商說明書使用LucliteTM試劑盒(Packard，目錄號6016911)和「Trilux 1450Microbeta」液體閃爍和螢光計數器(Wallac)來進行螢光素酶活性分析。可使用GraphPad Prism 2.0a(GraphPad Software Inc.)來分析數據。
d.胞內IP3累積分析(Gq相關受體)第一天，將包含受體(內源性及/或非內源性)的細胞塗於24孔培養板上，通常為1×105個細胞/孔(儘管此數目可優化)。第二天，首先可通過使50μl不含血清的DMEM/孔中的0.25μg DNA和50μl不含血清的DMEM/孔中的2μl脂轉染胺混合來轉染細胞。將所述溶液緩慢混合併在室溫下培養15-30分鐘。用0.5ml PBS來洗滌細胞，並將400μl不含血清的培養基和轉染培養基混合且添加到細胞中。隨後在37℃下/5％CO2中將細胞培養3-4小時，並且隨後移除轉染培養基並代之以1ml/孔的常規生長培養基。第三天，以3H肌醇來標記細胞。簡單的說，移除培養基並用0.5ml PBS洗滌細胞。隨後添加0.5ml不含肌醇/不含血清的培養基(GIBCO BRL)/孔和0.25uCi3H肌醇/孔，並且將所述細胞在37℃下/5％CO2中培養16-18小時過夜。第四天，用0.5ml PBS來洗滌細胞並添加0.45ml的分析培養基(其含有不含肌醇/不含血清的培養基、10μM帕吉林、10mM氯化鋰)或添加0.4ml分析培養基和50μl 10x酮色林(ket)，直至最終濃度為10μM。隨後將細胞在37℃下培養30分鐘。隨後用0.5ml PBS來洗滌細胞，並在每孔中添加200μl新鮮/冰冷終止溶液(1M KOH；18mM硼酸鈉；3.8mM EDTA)。將溶液在冰上保持5-10分鐘或直至細胞溶解，並且隨後用200μl新鮮/冰冷中和溶液(7.5％HCL)進行中和。隨後將溶解物轉移到1.5ml愛本德(eppendorf)管中，並在每個管中加入1ml氯仿/甲醇(1∶2)。將溶液振蕩15秒並將上層相應用於Biorad AG1-X8TM陰離子交換樹脂(100-200個網眼)。首先，用水以1∶1.25W/V來洗滌所述樹脂且將0.9ml上層相裝載於管柱中。用10ml 5mM肌醇和10ml 5mM硼酸鈉/60mM甲酸鈉來洗滌所述管柱。用2ml 0.1M甲酸/1M甲酸銨將三磷酸肌醇洗入含有10ml閃爍混合物的閃爍小瓶中。通過用10ml 0.1M甲酸/3M甲酸銨洗滌來使所述管柱再生，並用dd H2O漂洗兩次且在4℃下儲存在水中。
實例5融合蛋白製備a.GPCR:Gs融合構建物可如下所述來實現GPCR-G蛋白融合構建物的設計將大鼠G蛋白Gsα(長鏈形式；Itoh，H.等人的83PNAS 3776(1986))的5』和3』末端設計為其中包括HindIII(5′-AAGCTT-3′)序列。在確認正確序列(包括側接的HindIII序列)之後，通過使用pcDNA3.1(-)(Invitrogen，目錄號V795-20)的HindIII限制性位點進行亞克隆而將整個序列穿梭進入該載體中。在pcDNA3.1(-)亞克隆之後確定該Gsα序列的正確定向。然後，鑑定在HindIII序列上包含大鼠Gsα基因的修飾pcDNA3.1(-)；該載體現可用作「通用」Gsα蛋白載體。該pcDNA3.1(-)載體在HindIII位點上遊含有各種熟知的限制性位點，因此有利地在Gs蛋白上遊提供插入內源性組成性活性GPCR的編碼序列的能力。可使用此方法來產生其他「通用」G蛋白載體且當然可利用技術人員已知的其他市售或專有載體，重要標準是GPCR的序列在G蛋白序列的上遊和框內。
b.Gq(6胺基酸缺失)/Gi融合構建物可如下所述來實現Gq(del)/Gi融合構建物的設計刪除具有TLESIM Gαq-亞單位序列的N末端六(6)種胺基酸(胺基酸2至7)，並用具有序列DCGLF的Gαi蛋白的相應胺基酸來代替具有序列EYNLV的C末端五(5)種胺基酸。使用下列引物由PCR來獲得該融合構建物5′-gatcAAGCTTCCATGGCGTGCTGCCTGAGCGAGGAG-3′(SEQ ID NO.13)和5′-gatcGGATCCTTAGAACAGGCCGCAGTCCTTCAGGTTCAGCTGCAGGATGGTG-3′(SEQ ID NO.14)，並且以含有具有血凝素標記物的小鼠Gαq-野生型型式的質粒63313作為模板。包括充當間隔物的帶有低級帽的核苷酸。
通過下列循環將TaqPlus Precision DNA聚合酶(Stratagene)用於擴增(將步驟2至4重複35次)95℃，2分鐘；95℃，20秒；56℃，20秒；72℃，2分鐘；和72℃，7分鐘。PCR產物將在pCRII-TOPO載體(Invitrogen)中克隆，並使用ABI Big Dye Terminator試劑盒(P.E.Biosystems)對其排序。來自含融合構建物序列的TOPO克隆的插入物將在HindIII/BamHI位點通過2個步驟的克隆過程穿梭進入表達載體pcDNA3.1(+)中。另外，見2002年9月6日公布的PCT申請案第PCT/US02/05625號WO02068600，其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中。
實例6[35S]GTPγS分析A.膜製備在一些實施例中，包含用於鑑定候選化合物(例如反向激動劑、激動劑或拮抗劑)的所關注目標GPCR的膜較佳是如下所述來製備a.物質「刮膜緩衝劑」包含20mM HEPES和10mM EDTA，pH7.4；「洗膜緩衝劑」包含20mM HEPES和0.1mM EDTA，pH7.4；「結合緩衝劑」包含20mMHEPES、100mM NaCl和10mM MgCl2，pH7.4。
b.程序在整個程序中將所有物質保持在冰上。首先將培養基從匯合的單層細胞中抽出，隨後用10ml冷PBS漂洗，然後將其抽出。其後添加5ml刮膜緩衝劑來刮細胞；隨後將細胞提取物轉移至50ml離心管中(在4℃下以20,000rpm離心17分鐘)。其後抽出上清液，並且將沉澱物再懸浮於30ml洗膜緩衝劑中，隨後在4℃下以20,000rpm離心17分鐘。然後抽出上清液，並將沉澱物再懸浮於結合緩衝劑中。然後使用Brinkman PolytronTM勻漿器使其勻化(15-20秒脈衝，直到所有物質呈懸浮形式)。本文中將此稱為「膜蛋白」。
Bradford蛋白分析勻化之後，使用Bradford蛋白分析來確定膜蛋白濃度(可將蛋白稀釋至約1.5mg/ml，等分並冷凍(-80℃)以待稍後使用；冷凍時，使用方案是如下所述在分析當天，將冷凍膜蛋白在室溫下解凍，隨後振蕩且然後用Polytron以約12×1,000rpm勻化約5-10秒；應注意為了多次製備，在不同製劑的勻化過程中應徹底清洗勻漿器)。
a.物質根據製造商說明書(Biorad，目錄號500-0006)，使用結合緩衝劑(如上所述)、Bradford染色劑、Bradford蛋白標準物。
b.程序製備兩個管，一個包括膜且一個為「空白」對照物。各管含有800μl結合緩衝劑。其後，將10μl Bradford蛋白標準物(1mg/ml)添加至各管中，並且接著將10μl膜蛋白僅添加至一個管中(非空白管)中。其後，將200μl Bradford染色劑添加至各管中，隨後振蕩各管。五(5)分鐘之後，重新振蕩各管，並將其中物質轉移至比色皿中。然後在595波長下，使用CECIL 3041分光光度計來讀取比色皿。
鑑定分析a.物質GDP緩衝劑是由37.5ml結合緩衝劑和2mg GDP(Sigma，目錄號G-7127)組成，隨後連續稀釋該結合緩衝劑以獲得0.2μM GDP(各孔中的GDP最終濃度為0.1μM GDP)；包含候選化合物的各孔具有200μl最終體積，其是由100μl GDP緩衝劑(最終濃度，0.1μM GDP)、50μl溶於結合緩衝劑中的膜蛋白和50μl溶於結合緩衝劑中的[35S]GTPγS(0.6nM)(每10ml結合緩衝劑含有2.5μl[35S]GTPγS)組成。
b.程序較佳使用96孔培養板格式來篩選候選化合物(所述化合物可在-80℃下冷凍)。將膜蛋白(或具有包括目標GPCR(作為對照物)的表達載體的膜)簡單地勻化，直到呈懸浮形式。隨後使用上述Bradford蛋白分析來確定蛋白濃度。隨後將結合緩衝劑中的膜蛋白(和對照物)稀釋至0.25mg/ml(最終分析濃度為12.5μg/孔)。其後，向Wallac ScintistripTM(Wallac)的各孔中添加100μl GDP緩衝劑。隨後使用5μl針形工具將5μl候選化合物轉移至所述孔中(意即，5μl在200μl總分析體積中之比例為1∶40，從而使候選化合物的最終篩選濃度為10μM)。另外，為了避免汙染，在各轉移步驟之後應將所述針形工具在三個包含水(1X)、乙醇(1X)和水(2X)的貯器中進行漂洗-每次漂洗之後應自所述工具中振蕩出過量液體且以紙和無塵紙使其乾燥。其後，向各孔中添加50μl膜蛋白(也採用包含不具有目標GPCR的膜的對照孔)且在室溫下預培養5-10分鐘。其後，向各孔中添加結合緩衝劑中的50μl[35S]GTPγS(0.6nM)，繼而在室溫下在振蕩器中培養60分鐘(另外，在此實例中，培養板是用箔覆蓋)。接著，在22℃下使培養板以4000RPM旋轉15分鐘，接著停止分析。以8通道歧管來抽吸所述培養板且用培養板蓋來密封。隨後使用「Prot.#37」設定在Wallac1450上讀取培養板(根據製造商說明書)。
實例7環AMP分析通過使用基於環化酶的分析來實現另一種用於鑑定候選化合物(例如反向激動劑、激動劑或拮抗劑)的分析方法。除直接鑑定以外，該分析方法可用作獨立方法以提供對上文實例6中所述的[35S]GTPγS方法的結果確認。
根據下列方案，經修飾的閃光培養板TM腺苷酸環化酶試劑盒(NewEngland Nuclear；目錄號SMP004A)較佳是用於直接鑑定作為內源性或非內源性組成性活化GPCR的反向激動劑和激動劑的候選化合物。
在轉染之後約三天時收集經轉染細胞。通過在含有20mM HEPES(pH7.4)和10mM MgCl2的緩衝劑中勻化懸浮細胞來製備膜。使用Brinkman PolytronTM在冰上勻化約10秒。在4℃下，以49,000Xg將所得均質物離心15分鐘。然後將所得沉澱物再懸浮於含有20mM HEPES(pH7.4)和0.1mM EDTA的緩衝劑中，勻化10秒，隨後在4℃下以49,000Xg離心15分鐘。然後將所得沉澱物儲存在-80℃下，直到使用。在直接鑑定篩選當天，將膜沉澱物在室溫下緩慢解凍，再懸浮於含有20mM HEPES(pH7.4)和10mM MgCl2的緩衝劑中，從而得到0.60mg/ml的最終蛋白濃度(將再懸浮的膜置於冰上，直到使用)。
根據製造商說明書來製備且保存cAMP標準物和檢測緩衝劑(包含2μCi示蹤劑{[125I]cAMP(100μl)/11ml檢測緩衝劑)。新近製備用於篩選的分析緩衝劑，且其含有20mM HEPES(pH7.4)、10mM MgCl2、20mM磷酸肌酸(Sigma)、0.1單位/ml肌酸磷酸激酶(Sigma)、50μM GTP(Sigma)和0.2mM ATP(Sigma)；然後將分析緩衝劑在冰上儲存，直到使用。
較佳將候選化合物(3μl/孔；12μM最終分析濃度)與40μl膜蛋白(3μg/孔)和50μl分析緩衝劑一起添加至96孔培養板的孔中。然後將該混合物在室溫下培養30分鐘，同時緩慢振蕩。
培養之後，將100μl檢測緩衝劑添加至各孔中，隨後培養2-24小時。然後使用「Prot.#31」，在Wallac MicroBetaTM培養板讀數器中對培養板計數(根據製造商說明書)。
作為實例而非限制，圖1給出所得的代表性篩選分析培養板(96孔格式)結果。各條形圖表示各孔中的不同化合物的結果，「目標GPCR」是內源性組成性活性Gs-偶聯GPCR的Gsα融合蛋白構建物。圖1給出的代表性結果也提供基於各培養板的平均結果的標準偏差(「m」)，並且所述平均值加上兩個用於自最初篩選中選擇作為「引導物」的反向激動劑的任意優選值涉及選擇使響應百分數至少減少所述平均培養板響應(減去兩個標準偏差)的候選化合物。相反地，用於自最初篩選中選擇作為「引導物」的激動劑的任意優選值涉及選擇使響應百分數至少增加所述平均培養板響應(加上兩個標準偏差)的候選化合物。基於這些選擇過程，直接將下列各孔中的候選化合物分別鑑定為孔A2和G9中的所述內源性GPCR的假定反向激動劑(化合物A)和激動劑(化合物B)。見圖1。應明確注意，這些化合物的直接鑑定並未使用任何關於該GPCR的內源性配體的知識。通過關注基於受體功能的分析技術而非關注化合物結合親和力，我們能夠確定能減少此受體(化合物A)的功能活性並增加受體(化合物B)功能活性的化合物。
實例8用於測量胞內鈣濃度的螢光成像板讀數器(FLIPR)分析將來自各無性繁殖系的經目標受體(實驗)和pCMV(陰性對照)穩定轉染的細胞以5.5×104個細胞/孔接種到經聚-D-賴氨酸預處理的含有完全培養基(含有10％FBS、2mM L-穀氨醯胺、1mM丙酮酸鈉的DMEM)的96孔培養板(Becton-Dickinson，#356640)中，以用於第二天分析。為製備Fluo4-AM(分子探針，#F14202)培養緩衝儲備液，將1mg Fluo4-AM溶於467μl DMSO和467μl泊洛尼克酸(Pluoronicacid)(分子探針，#P3000)中，從而得到1mM可在20℃下儲存一個月的儲備液。Fluo4-AM為螢光鈣示蹤劑染料。
在清洗緩衝劑(1X HBSS/2.5mM丙磺舒(Probenicid)/20mM HEPES，pH7.4)中製備候選化合物。
分析時，將培養基自孔中移出且使細胞負載100μl 4μM的Fluo4-AM/2.5mM丙磺舒(Sigma，#P8761)/20mM HEPES/完全培養基(pH7.4)。在37℃/5％CO2下，繼續培養60分鐘。
培養1小時以後，移出Fluo4-AM培養緩衝劑，並用100μl清洗緩衝劑將細胞清洗2次。各孔中剩下100μl清洗緩衝劑。再次將培養板置於37℃/5％CO2下的培養箱中，歷時60分鐘。
使FLIPR(螢光成像板讀數器，分子裝置)程序化，從而在第30秒添加50μl候選化合物且在另外150秒內記錄由候選化合物引起的胞內鈣濃度([Ca2+])的瞬間變化。使用FLIPR軟體，將總螢光變化數用於確定激動劑活性。所述儀器軟體將螢光讀數標準化，從而在零時產生等效初始讀數。
在一些實施例中，包含目標受體的細胞進一步包含Gα15、Gα16或嵌合Gq/Giα單元。
儘管上文提供使用穩定轉染細胞來確定激動劑活性的FLIPR分析，所屬領域的技術人員將能夠易於修改所述分析來表徵激動劑活性。所屬領域的所述技術人員也應易於理解或者可使用瞬時轉染細胞。
實例9人類FPRL2的組織分布AFFYMETRIX基因晶片技術將胺基酸序列提交至用於設計並製造含有寡核苷酸的微陣列的Affymetrix，從而使用其基因晶片技術來監控G蛋白-偶聯受體(GPCR)的表達量。在所述微陣列上也存在用於表徵來自Harvard Brain Band或由市售來源所獲得的人類腦組織的探針。將RNA樣品擴增，標記，與微陣列雜交，並根據製造商說明書對數據進行分析。
使用基因晶片來研究人類FPRL2的表達譜。見圖2。圖2是表示各種組織中的人類FPRL2表達量的圖表。顯然，人類FPRL2的表達涵蓋腦、外圍神經和心臟。腦中的表達包括前海馬回、海馬回和黑質。外圍神經中的表達包括坐骨神經。例如，也在脾、肺、胰、骨和卵巢中發現顯著FPRL2表達。
實例10作為人類FPRL2選擇性激動劑的護腦素的鑑定使用瞬時轉染CHO細胞，通過[35S]GTPγS結合分析來確定人類FPRL2、FPRL1和FPR上的護腦素和[Gly14]-護腦素活性。
所用的質粒為pCMV中的HA/V5雙標記內源性FPRL2、pCMV中的HA/V5雙標記內源性FPRL1、pCMV中的HA/V5雙標記內源性FPR和單獨pCMV(見實例1)。在CHO-K1細胞上進行瞬時轉染。在一個15cm匯合細胞培養皿中，將12μg質粒DNA和60μl脂轉染胺(Invitrogen，Carlsbad，CA)添加至各培養板中。感染後24小時，如下所述來分離質膜。然後，如下所述來進行分析。
1.膜製備a.物質「刮膜緩衝劑」是由20mM HEPES和10mM EDTA(pH7.4)組成；「洗膜緩衝劑」是由20mM HEPES和0.1mM EDTA(pH7.4)組成；「結合緩衝劑」是由20mM HEPES、100mM NaCl和10mM MgCl2(pH7.4)組成。
b.程序在整個程序中將所有物質保持在冰上。首先將培養基從匯合的單層轉染細胞中抽出，隨後用10ml冷PBS漂洗，然後將其抽出。其後添加10ml刮膜緩衝劑來刮細胞；隨後將細胞提取物轉移至50ml離心管中(在4℃下以20,000rpm離心17分鐘)。其後抽出上清液，並且將沉澱物再懸浮於30ml洗膜緩衝劑中，隨後在4℃下以20,000rpm離心17分鐘。然後抽出上清液，並將沉澱物再懸浮於結合緩衝劑中。然後使用Brinkman PolytronTM勻漿器使其勻化(15-20秒脈衝，直到所有物質呈懸浮形式)。本文中將此稱為「膜蛋白」。
對各實驗樣品(FPRL2、FPRL1、FPR、pCMV)進行蛋白確定(Bradford蛋白分析)，並用冷結合緩衝劑將膜蛋白的蛋白濃度調節至1.0mg/ml。
2.鑑定分析a.物質GDP緩衝劑是由37.5ml結合緩衝劑和2mg GDP(Sigma，目錄號G-7127)組成，隨後連續稀釋結合緩衝劑以獲得0.2μM GDP(各孔中的GDP最終濃度為0.1μM GDP)；包含候選化合物的各孔具有200μl最終體積，其是由100μl GDP緩衝劑(最終濃度，0.1μM GDP)、50μl溶於結合緩衝劑中的膜蛋白和50μl溶於結合緩衝劑中的[35S]GTPγS(0.6nM)(每10ml結合緩衝劑含有2.5μl[35S]GTPγS)組成。
b.程序使用96孔培養板格式來研究護腦素和[Gly14-護腦素]活性。首先，將100μl GDP緩衝劑添加至Wallac ScintistripTM(Wallac)的各孔中。然後將5μl適當濃度的護腦素或[Gly14-護腦素]或5μl溶劑添加至各孔中。其後，將50μl膜蛋白添加至各孔(也可使用包含不含GPCR蛋白的膜的對照孔)中，並在室溫下預培養5-10分鐘。其後，將50μl溶於結合緩衝劑中的[35S]GTPγS(0.6nM)添加至各孔中，隨後在室溫下在振蕩器中培養60分鐘(此外，在該實例中，培養板是用箔覆蓋)。然後，在22℃下使所述培養板以4000RPM旋轉15分鐘，接著停止該分析。以8通道歧管來抽吸所述培養板且用培養板蓋來密封。隨後使用「Prot.#37」設定在Wallac 1450上讀取培養板(根據製造商說明書)。
3.結果我們出乎意料地發現護腦素和[Gly14-護腦素]具有選擇性且是FPRL2的強激動劑(見圖3)。申請者提供作為FPRL2的第一內源性配體的護腦素(圖3)。FRPL2中的護腦素EC50為約320nm，並且[Gly14]-護腦素的EC50為約72nm(圖A)。這些數值比FRPL1的相應數值(圖B)低一個數量級以上，其對護腦素來說為約9.24μM且對[Gly14]-護腦素來說為約1.5μM。護腦素或[Gly14]-護腦素並未顯示出中高達10μM劑量的FPR顯著活性(圖C)。因此，這些結果進一步出乎意料地將FPRL2鑑定為護腦素選擇性接合的受體。
實例11黑素細胞技術a.實驗系統黑素細胞是在低等脊椎動物中發現的皮膚細胞。其含有稱作黑素體的色素細胞器。在G-蛋白偶聯受體(GPCR)活化時，黑素細胞能夠使所述黑素體沿微管網絡重新分布。此色素移動的結果是細胞明顯變亮或變暗。在黑素細胞中，由Gi-偶聯受體活化所引起的胞內cAMP含量降低會導致黑素體遷移至細胞中心，導致顏色顯著變亮。如果cAMP含量在Gs-偶聯受體活化之後接著增加，那麼黑素體將再次分散且細胞再次變暗。由Gq-偶聯受體活化所引起的甘油二酯含量增加也可包括這種再分散。此外，該技術也適於研究某些受體酪氨酸激酶。黑素細胞在受體活化的數分鐘內出現響應，並導致簡單的強顏色變化。使用常規吸光率微型板讀數器或適合的視頻影像系統可易於檢測該響應。與其他皮膚細胞不同，黑素細胞是來自神經冠且看來似乎表達信號蛋白的全部補體。這些細胞尤其表達各種G-蛋白，且因此在功能上表達幾乎所有GPCR。
可使用黑素細胞來鑑定對抗GPCR的化合物，包括天然配體。此方法可通過引入一種色素細胞系的測試細胞來執行，所述測試細胞能夠使其響應特定刺激的色素分散或聚集並表達GCPR外源性克隆編碼。刺激物(例如，褪黑激素)可設置色素分散的初始狀態，其中如果GPCR活化導致色素分散，那麼該色素在測試胞內聚集。然而，用刺激物刺激該細胞來設置色素分散的初始狀態，其中如果GPCR活化導致色素聚集，那麼該色素將分散。然後將測試細胞與化合物接觸，並確定細胞中的色素分散是否自色素分散的初始狀態發生變化。因候選化合物(包括，但不限於配體)與GPCR偶聯所引起的色素細胞分散將在皮氏培養皿上呈現暗色，而色素細胞的聚集將呈現亮色。
物質和方法將遵循美國專利第5,462,856號和美國專利第6,051,386號的揭示內容。這些專利揭示內容是以全文引用的方式併入本文中。
將細胞塗於96孔培養板中(每個培養板一個受體)。轉染後48小時，將各培養板中的一半細胞用10nM褪黑激素處理。褪黑激素可活化黑素細胞中的內源性Gi-偶聯受體，並導致色素聚集。將剩餘的一半細胞轉移至不含血清的培養基0.7XL-15(Gibco)中。1小時之後，不含血清的培養基中的細胞仍處於色素分散狀態，而經褪黑激素處理的細胞卻處於色素聚集狀態。此時，用響應劑量的測試/候選化合物來處理細胞。如果所塗的GPCR結合至測試/候選化合物，那麼預期黑素細胞將因響應該化合物而經歷顏色變化。如果受體是Gs或Gq偶聯受體，那麼褪黑激素聚集的黑素細胞將經歷色素分散。相反，如果受體為Gi偶聯受體，那麼預期色素分散細胞將經歷量依賴性色素聚集。
b.FPRL2因響應護腦素而在黑素細胞中與Gi偶聯使用黑素細胞技術，我們發現人類FPRL2會與Gi或類Gi的G蛋白偶聯，以劑量依賴方式響應護腦素。類Gi的G蛋白是類似Gi的G蛋白，其導致胞內cAMP含量減少。驅使黑素細胞(Gi偶聯)中色素聚集的護腦素的EC50為約239nM(圖4)。簡單地說，使用胰蛋白酶(0.7X)自匯合燒瓶(T-185cm2燒瓶)中收集黑素細胞，並通過電穿孔技術進行轉染。將FPRL2雙標記(HA/V5)DNA用於轉染黑素細胞。電穿孔之後，將細胞預塗於燒瓶中，歷經約3-4小時以除去不能存活的細胞和碎屑。上述過程完成之後，隨後使燒瓶胰蛋白酶化並將其塗在經聚-D-賴氨酸塗覆的96孔培養板上以用於分析。轉染後48小時，進行所有分析，並用護腦素來評估FPRL-2活性。在整個48小時期間，將細胞保存在纖維母細胞條件培養基(CFM)中。在分析當天，將黑素細胞自CFM中移出並置於(0.7X)L-15培養基中。在分析之前將細胞曝露於室內照明下約1小時以達到平衡。在SpectraMax讀數器上讀取初始T＝0時的讀數以評估背景吸光率。如圖4所示，將劑量範圍的護腦素添加至細胞中。在讀取T＝60之前，將細胞曝露於這些劑量濃度下約1小時。用T＝0至T＝6時的吸光率變化％來表示黑素細胞細胞聚集的程度，該聚集表示短暫表達FPRL2的黑素細胞中的Gi偶聯。
實例12由Aβ誘導毒性來挽救小鼠原發性皮層神經元使用Hashimoto等人的[J Neurosci(2001)219235-45；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述的體外模型，本發明的激動劑可顯示出由Aβ誘導毒性來挽救小鼠原發性皮層神經元。使用0.1-100μM的該激動劑。一些較佳的該濃度是選自由0.1μM、0.3μM、1.0μM、3.0μM、10μM、30μM和100μM組成的群組。對安慰劑群組單獨投用媒介物。護腦素和[Gly14]-護腦素是作為對照物包括在所述方案中。
如其他文獻[Sudod等人的Mol Cell Neurosci(2000)16708-23；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述，在血清不存在而N2補體存在下，在經聚-D-賴氨酸塗覆的24孔培養板(Sumitomo Bakelite，Akita，日本)中進行小鼠皮層神經元的原始培養。通過這種方法所達到的神經元純度大於98％。用(或不用)所述激動劑將所製備的神經元(每個孔含有1.25×105個細胞且每個孔含有250μl培養基)預培養16小時，並在該激動劑存在或不存在下用25μl Aβ處理72小時。Aβ是由Bachem(Budendorf，瑞士)和Peptide Institute(Osaka，日本)購得。通過臺盼藍(trypan blue)排斥分析或鈣素染色法來測量細胞生存力。如其他文獻[Hashimoto等人的Proc Natl Acad Sci USA(2001)986336-41；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述來執行鈣素染色法。簡單地說，將6μM鈣素AM{3′，6′-二-(O-乙醯基)-2′，7′-雙[N，N-雙(羧甲基)氨甲基]螢光素，四乙醯氧基甲酯；Dojindo}添加至神經元中，並在鈣素AM處理之後超過30分鐘時，通過螢光顯微術來觀察或通過分光螢光計(Wallacl420 ARVOsx，多標記計數器)來測量鈣素特異性螢光(激發波長，485nm；發射波長，535nm)。
本研究中所述的所有實驗至少獨立重複處理3次。用司徒頓t測試(Student′s t test)來進行統計分析，其中估計p＜0.05有效。
實例13由Aβ誘導毒性來挽救人類腦血管平滑肌細胞使用Jung和Van Nostrand的[J Neurochem(2003)84266-72；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述的體外模型，本發明的激動劑可顯示出由Aβ誘導毒性來挽救人類腦血管平滑肌細胞。使用0.1-100μM所述激動劑。一些較佳的該濃度是選自由0.1μM、0.3μM、1.0μM、3.0μM、10μM、30μM和100μM組成的群組。對安慰劑群組單獨投用媒介物。護腦素和[Gly14]-護腦素是作為對照物包括在所述方案中。
如其他文獻[Van Nostrand等人的Amyloid(1994)11-7]所述來確定並表徵人類腦血管平滑肌(HCSM)細胞的原始培養。HCSM細胞是來自對照成人患者的柔腦膜血管，並顯示出特異性標記物血管平滑肌細胞α-肌動蛋白、血管平滑肌細胞肌球蛋白和SM22α的強表達。在24孔培養板中，在補充有10％胎牛血清(Gemini Bio-Products，Woodland，CA)、1mM非必需胺基酸、2mM穀氨醯胺、1000U/mL青黴素、1000μg/mL鏈黴素(LifeTechnologies，Rockville，MD)的Dulbecco改良伊格爾(Eagle)培養基(DMEM)中培養HCSM細胞。為了進行實驗，使細胞生長至接近匯合(90％)，並在處理之前用含有0.1％牛血清白蛋白(BSA)的不含血清的DMEM代替培養基來培養24小時。在該激動劑存在或不存在下，將細胞(一式三份)用新近溶解的β-澱粉樣Dutch變異體(Aβ40D，25μM，American Peptide Co.，Sunnyvale，CA)處理6天。使用倒置系統Olympus IX70相差顯微鏡(OlympusAmerica Inc.，Lake Success，NY)對細胞進行常規檢驗。
根據製造商方案(Molecular Probes，Eugene，OR)，使用螢光活/死分析來評估細胞生存力。簡單地說，在該激動劑存在或不存在下用Aβ40D處理之後，使細胞曝露於鈣素Am和溴乙非啶同二聚體-1中，並使用倒置系統Olympus IX 70螢光顯微鏡進行觀察。活細胞中的胞內酯酶將底物鈣素AM轉化成亮綠螢光產物鈣素。當DNA螯合劑溴乙非啶同二聚體-1進入具有受損細胞膜的細胞中時，觀察死細胞，導致亮紅螢光。對於各實驗來說，根據至少三個獨立孔中的若干個場(n＝4-6)對活細胞和死細胞計數。
使用GraphPad INSTAT程序(San Diego，CA)來進行統計分析。
實例14
血清除盡PC12H細胞的細胞死亡的抑制作用使用Kariya等人的[NeuroReport(2002)13903-7；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述的體外模型，本發明的激動劑可顯示出抑制血清除盡PC12h細胞的細胞死亡。使用0.1-100μM該激動劑。一些較佳的該濃度是選自由0.1μM、0.3μM、1.0μM、3.0μM、10μM、30μM和100μM組成的群組。對安慰劑群組單獨投用媒介物。護腦素和[Gly14]-護腦素是作為對照物包括在所述方案中。
在37℃/5％CO2下，將大鼠PC12h細胞保存在補充有血清的培養基(含有0.45％葡萄糖、5％胎牛血清和10％馬血清的DMEM)中。然後，將這些細胞以2×104個細胞/孔的密度塗在經膠原塗覆的96孔培養板上並培養24小時。為顯示通過該激動劑來抑制血清除盡PC12h細胞的細胞死亡，在所述激動劑存在或不存在下將各孔中補充有血清的培養基替換為不含血清的培養基。在初步培養(0小時、12小時、24小時、36小時或48小時)之後，將所有孔中的培養基替換為含有20％MTS溶液的補充有血清的培養基，且將所述培養板在37℃下培養90分鐘。在492nm下由培養板讀數器來評估顏色強度，其與代謝活性細胞的數目成正比例。同時檢測該激動劑對健全PC12h細胞的影響。
將本研究中所述的所有實驗至少獨立重複3次。用司徒頓t測試來進行統計分析。
實例15改善由茛菪胺誘導的學習和記憶障礙使用Mamiya和Ukai[Br J Pharmacol(2001)1341597-9；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述的體內小鼠模型，本發明的激動劑可顯示出改善由莨菪胺誘導的學習和記憶障礙。茛菪胺(毒蕈鹼性乙醯膽鹼受體拮抗劑)誘導的障礙模型是廣泛用於評估抗健忘藥對實驗模型的學習能力的影響。通過腹膜內注射來投用所述激動劑。較佳劑量為0.1-100mg/kg。其他較佳劑量是選自由0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg組成的群組。對安慰劑群組單獨投用媒介物。護腦素和[Gly14]-護腦素是作為對照物包括在所述方案中。
使用6-8周大的雄性ddY小鼠(Nihon SLC Co.，Shizuoka，日本)。將動物放置在受控環境(23±1℃，50±5％溼度)中並隨意提供食物和水。提供0800至2000小時的室內照明。將莨菪胺HBr(1mg/kg，皮下注射，Sigma)和該激動劑溶於鹽水中。如其他文獻[Hiramatsu等人的Br J Pharmacol(1998)123920-6；Mamiya等人的Neuropharmacology(2000)392391-8；Ukai等人的Eur J Pharmacol(2000)395211-5；各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所報導，在輕微醚麻醉下進行側腦室(i.c.v.)注射。為確定注射位置，因為徒手注射而用印度墨水對一組小鼠進行側腦室注射。接著，檢查出在超過90％的受檢動物中，墨水擴散到整個腦室中。在Y-迷宮測試之前，分別以30和15分鐘來投用莨菪胺HBr(0.1ml/10g體重)和該激動劑(5μl/小鼠)。根據先前報導[Hiramatsu和Inoue的Br JPharmacol(1999)127655-60，Ukai等人的Eur J Pharmacol(2000)395211-5；各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]來執行所述方案。簡單地說，通過監測Y-迷宮測試中的自發交替行為來檢查短期記憶行為。所述迷宮是由黑漆木製成；各臂為40cm長、12cm高、3cm底寬和10cm頂寬。所述壁在最長軸線為4cm的等邊三角形中心區域中集中。將該裝置放置在實驗室的地板上，並用距離其上方200cm的100W燈泡照射。將各小鼠放在一個臂的末端，並允許其在8分鐘時間內在迷宮內自由移動，真實記錄臂進口系列。交替是定義為連續進入三個臂，三個一組重疊。交替行為(％)是以真實交替與可能交替(定義為臂進口的總數減二)的比率乘以100來計算[Mamiya等人的Neuropharmacology(2000)392391-8；Ukai等人的Eur J Pharmacol(2000)395211-5；各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。實驗之後，計算臂進口數目和排洩物。結果是用平均值±s.e.平均值表示。由單因素方差分析來確定統計顯著性。隨後進行Dunnett多重比較測試。將P＜0.05視為顯著差異水平。
實例16心臟保護使用Fryer等人[Circ Res(1999)84846-51；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述的體內大鼠模型，本發明的激動劑可顯示出心臟保護性。通過腹膜內注射來投用所述激動劑。較佳劑量為0.1-100mg/kg。其他較佳劑量是選自由0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg組成的群組。對安慰劑群組單獨投用媒介物。護腦素和[Gly14]-護腦素是作為對照物包括在所述方案中。
在本研究所有階段使用350g至450g的雄性Wistar大鼠。在外科實驗方案前1、12、24、48或72小時，通過腹膜內注射來對大鼠投用所述激動劑或鹽水。隨後，通過腹膜內投用硫代仲丁比妥鈉(Inactin，ResearchBiochemical International；100mg/kg)來使大鼠麻醉。執行氣管切開術，並用連接至齧齒動物呼吸器(CIV-101型，Columbus Instruments；或683型，Harvard Apparatus)的插管來插入氣管。用補充有O2的室內空氣使大鼠以每分鐘60-65次呼吸來吸氧。通過維持5-10mm水的呼氣末正壓來預防肺不張。通過血氣系統(AVL 995pH/血氣分析儀，AVL Medical Instruments)來監測動脈pH值、PCO2和PO2(作為對比，15分鐘堵塞和60與120分鐘再灌注)，並通過調節呼吸率和/或潮氣量將動脈pH值、PCO2和PO2維持在正常生理範圍(pH7.35至7.45；PCO225至40mm Hg；PO280至110mm Hg)內。通過使用熱墊將體溫維持在38℃，並因需要將動脈血pH值維持在正常生理水平而經靜脈內投用碳酸氫鹽。
將導管插入右頸動脈中，並由連接至Grass(7型)多種波動描記器的Gould PE50或Gould PE23壓力傳感器來測量血壓和心率。將導管插入右頸靜脈中以用於灌輸鹽水、碳酸氫鹽和藥物。在第五肋間隙處執行左開胸術，隨後執行心包切開術並調整左心耳以露出左冠狀動脈位置。使繃帶(6-0普羅綸)通過左心耳正下方區域至左心室右部的冠狀動脈下方。使縫合端穿過丙烯管以形成一個圈套器。通過將縫合端拉緊並用止血器夾緊心外膜表面上的德奈爾(dnare)來堵塞冠狀動脈。通過心外膜發紺和隨後的血壓降低來驗證心臟冠狀動脈阻塞。通過鬆開止血器並鬆開圈套器來開始心臟再灌注，並通過肉眼觀察心外膜充血響應來確認。在所述實驗方案開始之前允許穩定心率和血壓。
將大鼠隨機分成指定實驗組。在30分鐘局部缺血和2小時再灌注(I/R)之前24小時，對對照大鼠投用鹽水。為顯示由該激動劑引起的敏銳心臟保護功能，在持續局部缺血損傷之前1小時投用所述激動劑。為顯示預防急性局部缺血損傷的遲發心臟保護功能，在I/R之前12或24小時以指定劑量來投用所述激動劑。也可在I/R之前48或72小時以指定劑量來投用所述激動劑。
在完成上述方案時，堵塞冠狀動脈並通過用經過頸靜脈投用的專利藍染料進行負染色來確定危險區(AAR)。用15％KCl溶液使大鼠安樂死。切除心臟，並從剩餘組織剖開左心室且隨後將其切成6個橫切薄片。此方法考慮到相對於AAR染成藍色的正常區的描述，該正常區隨後保持粉色。從非局部缺血區切除AAR，並將所述組織放置在獨立小瓶中，並在37℃下用1.0％2，3，5-三苯基氯化四唑(TTC)染色劑在100mmol/L磷酸鹽緩衝劑(pH7.4)中培養15分鐘。TTC是可存活和不可存活組織的指示劑。TTC是由可存活心肌中存在的脫氫酶來還原並產生甲臘沉澱物，其將導致深紅色，然而使梗塞區仍為灰色{Klein等人的Virchows Arch[Pathol Anat](1981)393287-97}。將組織在含有10％甲醛的小瓶中儲存一整夜，並在解剖顯微鏡(CambridgeInstruments)照明下自AAR剖開梗塞心肌。通過重量分析法來確定梗塞大小(IS)、AAR和左心室重量。AAR是用LV百分數(AAR/LV)來表示，並且IS是用AAR百分數(IS/AAR)來表示。
如果大鼠出現嚴重低血壓(＜30mm Hg收縮壓)，或如果由於代謝性酸中毒或鹼中毒而不能維持正常生理範圍內的足夠血氣值，那麼將這些大鼠排除在數據分析之外。
將所有值用平均值±SEM表示。使用單因素方差分析和Bonferroni測試來確定血液動力學、IS和AAR的群組中是否存在任何顯著差異。在P＜0.05處確定顯著差異。
據預想，或者可使用(例如)體內非人類靈長類動物模型來使本發明的激動劑顯示出心臟保護性。
實例17抑制支架內新生內膜生長雷帕黴素-和紫杉醇-洗脫支架與動物研究和最初人類實驗中降低的再狹窄率有關。雷帕黴素已顯示出可抑制體外血管平滑肌細胞增殖。用於抑制支架內新生內膜生長的有效系統治療應用是下列能力，即一旦基於局部支架的藥物耗盡(即完全從支架釋放)，即提供重複激發劑用藥。
使用Farb等人[Circulation(2002)1062379-84；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述的體內兔模型，本發明的反向激動劑或拮抗劑可顯示出抑制支架內新生內膜生長。該反向激動劑或拮抗劑可顯示出減少新生內膜厚度、新生內膜面積和支架狹窄百分數，並可增加管腔面積。根據經口管飼法，每日以2ml/kg的量來投用所述反向激動劑或拮抗劑。較佳劑量為0.1-100mg/kg。其他較佳劑量是選自由0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg組成的群組。在植入支架之前1-3天開始用藥。對安慰劑組單獨投用媒介物。
在螢光檢查法指導下，對已麻醉的兔子執行兩側髂動脈囊損傷，隨後放置2×12-mm MULTI-LINK(Guidant Corp)支架(6ATM，30秒充氣膨脹，支架與動脈的比率為1.2∶1)。所有動物每日口服40mg阿司匹林，直到安樂死。
植入支架之後28天，麻醉動物並在安樂死前完成髂動脈的血管造影，隨後執行安樂死和灌流固定。用取自各支架的近側、中部和遠側部分的切片將已植入支架的動脈放入甲基丙烯酸甲酯中。處理僅位於支架近側和遠側的3mm動脈段並將其染色，以評估邊緣效應。將所有區域用HE和Movat五鉻染色劑染色。為評估細胞增殖，如其他文獻[Farb等人的Int J RadiatOncol Biol Phys(2000)48889-98]所述，使動物在安樂死之前服用溴脫氧尿苷(BrdU)。中部支架切片也用RAM11(Dako Corp)抗體染色以鑑定巨噬細胞和纖維素(American Diagnostica，Inc.)。為評估支架內皮化，如上所述在其他兔子中植入支架，隨後縱向切去支架。
盲目檢查所有動脈段。如前所述[Farb等人的Int J Radiat Oncol BiolPhys(2000)48889-98]對所有植入支架的切片執行用計算機處理的面積法。總細胞數目、RAM11-陽性巨噬細胞和纖維素是由中部支架切片的整個新生內膜來定量。新生內膜細胞增殖指數(增殖細胞百分數)是定義為BrdU陽性新生內膜細胞與總新生內膜細胞數目的比率。內皮化的支架內膜面積百分數是根據整個支架表面的掃描電子顯微鏡圖來測量。數據是用平均值±SD表示。殘缺新生內膜癒合是定義為存在纖維素或發炎或不存在內皮細胞。使用ANOVA來完成組織數據的統計分析。將p＜0.05視為統計學有效。
實例18抑制神經母細胞瘤生長在年齡低於5歲的兒童中，神經母細胞瘤佔所有癌症的14％。大多數神經母細胞瘤是侵襲性轉移性腫瘤，儘管採用加強型多手段治療，其臨床控制結果仍較差。
使用Ponthan等人[Int J Cancer(2003)104418-24；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述的異種大鼠模型，本發明的反向激動劑或拮抗劑可顯示出抑制體內神經母細胞瘤生長。通過連續經口治療，用胃進食管來投用所述反向激動劑或拮抗劑。較佳劑量為每日0.1-100mg/kg。較佳劑量為0.1-100mg/kg。其他較佳劑量是選自由0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg組成的群組。在植入支架之前1-3天開始給藥。對安慰劑群組單獨投用媒介物。
將裸大鼠麻醉並在各自後腿注射20×106個人類SH-SY5Y神經母細胞瘤細胞。當通過觸診可知和/或可見明顯腫瘤出現時，每兩天用卡尺測量腫瘤長度(沿腫瘤長軸)和寬度(垂直於長軸)。腫瘤體積是如下計算長度×寬度2×0.44[Wassberg等人的Pediatr Res(1997)41327-33]。真實腫瘤重量在屍檢中記錄。使用測量體積除以治療開始時在腫瘤出現處所測量的體積來計算腫瘤體積指數。
當動物中的腫瘤量達到0.3ml時(指定為第0天)，將大鼠隨機分成一或兩組並開始治療。當治療開始時，僅對那些達到0.3ml的腫瘤量進行追蹤和響應評估。治療持續12天。在第2、4、6、8、10和12天測量腫瘤量，計算腫瘤量指數，並繪出該腫瘤量指數百分數相對於僅投用媒介物的腫瘤量指數百分數的曲線。
使用Mann-Whitney U測試對兩個獨立樣品進行統計分析。除非另有說明，否則所有p值是指雙側概率。
最近，在[Lindskog等人的Br J Cancer(2003)88478-85]中已描述一種使用質子核磁共振光譜法來評估人類神經母細胞瘤的異種移植模型中的腫瘤生存力的替代性非侵害方法。
實例19口服生物可利用性所屬領域的技術人員已熟知並可使用供直接評估口服生物可利用性的物理化學分析方法[例如，見(不限於)Wong PC等人的Cardiovasc Drug Rev(2002)20137-52和Buchan P等人的Headache(2002)Suppl 2S54-62；各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。作為進一步說明且不加限制，該替代性分析方法可包含液相層析串聯質譜法[Chavez-Eng CM等人的J ChromatogrB Analyt Technol Biomed Life Sci(2002)767117-29；Jetter A等人的Clin Pharmacol Ther(2002)7121-9；Zimmerman JJ等人的J Clin Pharmacol(1999)391155-61；和Barrish A等人的RapidCommunMass Spectrom(1996)101033-7；各文獻的揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。最近，正電子發射斷層顯像(PET)已成功用於在口服藥物之後獲得哺乳動物體內藥物分配的直接測量，包括口服生物可利用性[Gulyas等人的Eur J Nucl Med Mol Imaging(2002)291031-8；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]。
或者，根據已研究的體內數據來舉例說明並不作限制，通過針對心臟保護的上文實例16的大鼠模型來測量本發明調節物的口服生物可利用性。通過經口管飼法來投用調節物，其劑量介於0.1ml/kg至100ml/kg之間。口服調節物顯示出可提供心臟保護作用。調節物的效果顯示為依賴劑量且可與腹膜內投藥後的效果相比較。將口服之後要求達到IS/AAR的最大減少量的一半的調節物劑量與經腹膜內投藥之後要求達到IS/AAR的最大減少量的一半的調節物劑量進行比較。作為說明，如果所述口服劑量是所述腹膜劑量的兩倍，那麼調節物的口服生物可利用性為50％。更一般地，如果所述口服劑量為θml/kg，並且所述腹膜劑量為ρml/kg，那麼將調節物的口服生物可利用性視為百分數[(ρ/θ)×100]。
易於設想參考投藥途徑可不同於腹膜內投藥。在一些實施例中，該參考投藥途徑為靜脈內投藥。
對於所屬領域的技術人員來說，顯然可改進上述測量方法以使用不同於心臟保護的體內動物模型。對於所屬領域的技術人員來說，生物活性讀數顯然也可為不同於IS/ARR的參數。
實例20血腦屏障模型可使用腦源性細胞來確定本發明化合物穿過血腦屏障的能力。作為說明且不加限制，一種預想方法是使用Dehouck等人的[J Neurochem(1990)541798-801；其揭示內容是以全文引用的方式併入本文中]所述的血腦屏障模型，所述模型使用腦部毛細血管內皮細胞與星形細胞的共培養物。
如Meresse等人的[J Neurochem(1989)531363-1371；其是以全文引用的方式併入本文中]所述來分離並表徵牛毛細血管內皮(BBCE)細胞。簡單地說，在通過機械勻化而從牛腦的一個半球分離之後，將微血管接種在用牛角膜內皮細胞所分泌的胞外基質塗覆的培養皿上。接種後5天，第一批內皮細胞從毛細血管中遷移出，並開始形成微菌落。當所述菌落足夠大時，將五個最大的胰島胰蛋白酶化並在補充有15％小牛血清(Seromed)、3mM穀氨醯胺、50μg/ml艮他黴素、2.5μg/ml兩性黴素B(Fungizone)和牛纖維母細胞生長因子(每隔一天添加1ng/ml)的Dulbecco改良伊格爾(Eagle)培養基(DMEM)存在下將其接種在經明膠塗覆的35mm直徑培養皿上(每個培養皿一個菌落)。在匯合處自直徑為35mm的培養皿中收集內皮細胞並將其接種在經明膠塗覆的60mm直徑培養皿上。6-8天之後，將匯合細胞以1∶20的分裂比進行傳代培養。將第三傳代的細胞(約100個培養皿)儲存在液氮中。
星形細胞的原始培養物是由初生大鼠大腦皮層製成。在已清除腦脊膜之後，如Booher和Sensenbrenner[Neurobiology(1972)297-105；其是以全文引用的方式併入本文中]所述，通過尼龍篩小心地推壓腦組織。將補充有10％胎牛血清(Seromed)、2mM穀氨醯胺和50μg/ml艮他黴素的DMEM用於分裂腦組織並產生星形細胞。
將通過對Bornstein等人[Lab Invest(1958)7134-139；其是以全文引用的方式併入本文中]所述的方法進行改進所製備的大鼠尾部膠原塗在培養板插入物(Millicell-CM；孔尺寸，0.4μM；直徑，30mm；微孔)的兩側。
使用倒置的過濾器將星形細胞以2.5×105個細胞/ml的濃度塗在底部。8天之後，將過濾器正放，每星期換兩次培養基。接種之後三星期，星形細胞的培養物已變得穩定。然後，在經明膠塗覆的60mm直徑培養皿上再次培養傳代3已冷凍的BBCE細胞。將匯合細胞胰蛋白酶化並以4×105個細胞的濃度將其塗在過濾器上部。用於共培養的培養基是補充有15％小牛血清、2mM穀氨醯胺、50μg/ml艮他黴素和每隔一天加入的1ng/ml牛纖維母細胞生長因子的DMEM。在這些條件下，BBCE細胞在8天內形成匯合單層。
將培養板設定為6孔培養板，其上腔室中添加有2ml緩衝劑且含有插入物的培養板中添加有2ml。將所述6孔培養板放置在37℃的震動水浴中。將本發明化合物添加到上腔室中，並在不同時間點從下腔室移出100μl。在某些實施例中，測試化合物是經放射性標記。在某些實施例中，放射性標記物為3H或14C。在一些實施例中，最終時間點為約20分鐘、約30分鐘、約40分鐘、約50分鐘、約60分鐘、約70分鐘、約80分鐘或約90分鐘。確定在不同時間點時存在於下腔室中的所有測試化合物的百分數。亮氨酸是用作通透性陽性對照物。菊澱粉是用作通透性陰性對照物。
在某些實施例中，在最終時間點對下腔室中的至少約10％、至少約20％、至少約30％、至少約40％、至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％或至少約90％的本發明化合物的確定表示本發明化合物能夠穿過血腦屏障。
實例21對化合物1作為人類FPRL2的選擇性激動劑的鑑定通過使用瞬時轉染CHO細胞所進行的[35S]GTPγS結合分析或通過黑素細胞分析來確定人類FPRL2、FPRL1和FPR中的化合物1活性。[35S]GTPγS結合分析的詳述可見於實例10。黑素細胞分析的詳述可見於實例11。已發現化合物1為FPRL2的強選擇性激動劑(圖5)。
通過觀察圖6顯然可知化合物1為FPRL2的強選擇性激動劑。在圖6中，通過腺苷酸環化酶活性來確定激動劑活性。簡單地說，在5μM毛喉素存在下用指定濃度的護腦素、[Gly14]-護腦素或化合物1來處理經FPRL1或FPRL2穩定轉染的HEK293細胞(105個細胞/孔)。然後，如上文實例4所述來分析樣品的胞內cAMP含量。然而，我們發現護腦素和[Gly14]-護腦素為FPRL1和FPRL2的激動劑(圖6A)，也發現化合物1為FPRL2的選擇性激動劑(圖6B)。
實例22護腦素和化合物1通過百日咳毒素-敏感機制在人類FPRL2上傳遞信號使用經FPRL2穩定轉染的HEK293細胞，通過腺苷酸環化酶分析來確定通過人類FPRL2傳遞信號的護腦素的百日咳毒素敏感性。同樣確定通過人類FPRL2傳遞信號的化合物1的百日咳毒素敏感性。
簡單地說，在5μM毛喉素存在下用指示濃度的護腦素或化合物1來處理經FPRL2穩定轉染的HEK293細胞(105個細胞/孔)。然後，如上文實例4所述來分析樣品的胞內cAMP含量。為確定傳遞信號的百日咳毒素敏感性，用50ng/ml百日咳毒素將細胞預處理18-20小時，其後在用護腦素或化合物1進行分析之前用預熱(37℃)PBS來清洗細胞。
通過觀察圖7顯然可知，由護腦素(圖7A)或化合物1(圖7B)通過FPRL2所調節的cAMP抑制作用對百日咳具有敏感性，表明FPRL2與響應護腦素或化合物1的百日咳-敏感性G蛋白偶聯。已知Gi和Go為百日咳-敏感性G蛋白。
實例23FPRL2通過響應護腦素或化合物1的Gα16來傳遞信號通過IP3分析來確定FPRL2與響應護腦素、[Gly14]-護腦素或化合物1的Gα16偶聯的能力。簡單地說，使用脂轉染胺(Invitrogen)用6μg FPRL2質粒DNA和6μg Gα16質粒DNA瞬時轉染HEK293細胞，每個15cm培養皿中含有107個細胞。轉染後24小時，用5μCi/ml[3H]-肌-醇將HEK293細胞標記一整夜。然後清洗細胞。通過使HEK293細胞與護腦素、[Gly14]-護腦素或化合物1接觸來開始分析。如上文實例4所述來確定胞內IP3含量。
對圖8進行觀察，表明通過護腦素、[Gly14]-護腦素或化合物1來使胞內IP3含量呈劑量依賴性增加。作為陰性對照物，IP3並未顯示出通過經FPR(未顯示)瞬時轉染的HEK293細胞對護腦素、[Gly14]-護腦素或化合物1作出響應。
實例24由SH-SY5Y細胞來表達FPRL2(而非FPRL1)對人類神經母細胞瘤細胞系SH-SY5Y在通過腦源性神經生長因子(BDNF)分化之前或分化之後對FPRL2和FPRL1的表達進行確定。用維甲酸(10μM)處理5天，隨後用BDNF(10ng/ml)處理2天，從而將SH-SY5Y細胞分化成為類神經元的細胞。使用對FPRL2或FPRL1的編碼區具有特異性的引物，對由未分化(「SH-SY5Y」)或已分化(「SH-/BDNF」)的SH-SY5Y細胞所分離的mRNA進行RT-PCR分析。
使用MMLV反轉錄酶將mRNA轉化為cDNA。使用Taq DNA聚合酶進行擴增。通過瓊脂糖凝膠電泳法和溴化乙錠染色法來進行擴增產物的顯像。由圖9A顯然可知，儘管可在未分化和已分化SH-SY5Y細胞中檢測到FPRL2mRNA(「+RT」樣品)，卻不可檢測到FPRL1mRNA(「+RT」樣品)。在圖9A中，「FPRL2」和「FPRL1」為陽性對照物，其中模板分別為FPRL2或FPRL1cDNA。「NT」為陰性對照物，其中沒有DNA模板。「-RT」為陰性對照物，其中在將mRNA轉化為cDNA的反應中略去反轉錄酶。「1Kb」對應於分子量標記物。
圖9B表明用於FPRL2擴增的引物的特異性，其中當FPRL2cDNA是用作模板而FPRL1cDNA或FPR cDNA並不用作模板時，觀察預期的擴增產物。結果作為溴化乙錠染色的瓊脂糖凝膠的反向照片呈現在圖9B中。
實例25抑制血清除盡SH-SY5Y細胞的細胞死亡確定護腦素或化合物1抑制血清除盡的分化SH-SY5Y細胞的細胞死亡的能力。簡單地說，用維甲酸(10μM)處理5天，隨後用BDNF(10ng/ml)處理2天，從而將SH-SY5Y細胞分化成類神經元細胞。然後，在護腦素或化合物1存在或不存在下將細胞在不含血清的培養基中培養6天。通過乳酸鹽脫氫酶(LDH)分析(Roche，Indianapolis，IN；目錄號1644793)或臺盼藍染色法來確定細胞生存力。LDH為穩定存在於所有細胞中的胞漿酶，其在質膜受到損害時快速釋放。LDH的含量與可存活細胞的數目成反比例。根據製造商說明書來進行LDH分析。
圖10A提供LGH分析的結果且圖10B提供臺盼藍染色法的結果。觀察圖10，表明護腦素和化合物1(「Cmpd1」)可抑制血清除盡SH-SY5Y細胞的細胞死亡。
實例2622C11(抗APP抗體)誘導的原代小鼠皮層神經元的細胞死亡的抑制作用確定護腦素或化合物1抑制由抗體22C11誘導的原代小鼠皮層神經元的細胞死亡的能力。22C11是單克隆抗體(mAb)，其結合於人類、大鼠或小鼠β澱粉樣前體蛋白(APP)的胞外域(Boehringer Mannheim；Indianapolis，IN)。22C11已顯示出誘導原代大鼠皮層神經元凋亡[Rohn等人，《神經化學雜誌》(J Neurochem)(2000)742331-2342；其是以全文引用的方式併入本文中]。
該分析基本上是如Rohn等人在《神經化學》[Neurochem(2000)742331-2342]中的描述來設立。簡單地說，由E17胚胎來建立小鼠皮層神經元的原代培養物。將妊娠泡仔細去頭，將腦收集到Hank s緩衝鹽溶液(HBSS)緩衝劑中。取下皮質並用胰蛋白酶(0.05％，溶於HBSS中)處理，隨後使用21g針將細胞機械解離。隨後使該細胞懸浮液通過70μM過濾器，並將回收細胞塗於經聚D-賴氨酸處理的12孔培養板上。五天培養以後，將細胞用於分析。圖11A展示培養五天以後的細胞的照片。圖11A也顯示如同對皮層神經元的預期，所述細胞對神經絲進行陽性染色。
為了所述分析，建立四個實驗組。在「未處理」組中，並不添加護腦素、化合物1(″Cmpd1″)或mAb 22C11。在「22C11」組中，僅在mAb 22C11存在下培養細胞。在「護腦素」和「Cmpd1」組中，在添加mAb 22C11之前1小時開始分別用護腦素或Cmpd1來培養細胞。整夜對該分析進行處理(約18小時)，之後通過如實例25所述的LDH分析來確定細胞生存力。
觀察圖11B，說明護腦素和化合物1保護原代小鼠皮質神經元免於出現由抗APP mAb 22C11誘導的細胞死亡。
實例27防止已分化SH-SY5Y細胞的Aβ誘導的細胞死亡確定護腦素或化合物1抑制已分化SH-SY5Y細胞的Aβ誘導細胞死亡的能力。SH-SY5Y是一種人類神經母細胞瘤細胞系。用維甲酸(10pM)處理五天，隨後用BDNF(10ng/ml)處理兩天，從而完成SH-SY5Y分化為類神經細胞的過程。Aβ(Aβ1-42)是購自Biosource International(Camarillo，CA；目錄號03-111)。
在單獨細胞(「未處理」)存在下、在僅Aβ1-42存在下、在Aβ1-42和護腦素存在下或在Aβ1-42和化合物1存在下，整夜培養已分化的SH-SY5Y細胞(約18h)。在不含血清的培養基中進行所述分析。以80μg/ml來使用Aβ1-42。以1μM來使用護腦素。以20μM、5μM或1μM來使用化合物1。在添加Aβ1-42之前1小時，開始將護腦素和化合物1添加至培養物中。由臺盼藍染色來確定細胞生存力。
觀察圖12，說明護腦素和化合物1會保護分化SH-SY5Y細胞免於出現Aβ誘導的細胞死亡。
實例28保護分化的SH-SY5Y細胞和原代小鼠皮層神經元免於出現缺氧/復氧誘導的細胞死亡使用體外模型來確定護腦素或化合物1抑制分化SH-SY5Y細胞的缺氧/復氧誘導的細胞死亡的能力。SH-SY5Y人類神經母細胞瘤細胞是如實例24所述來分化。原代小鼠皮層神經元是如實例26所述來分離。
缺氧/復氧體外模型的略圖展示於圖13中。分化的SH-SY5Y細胞或原代小鼠皮層神經元在缺氧處理之前首先在不含血清的培養基中培養24-48小時。使用充以95％N2和5％CO2的密封室來達到缺氧效果。使缺氧處理進行約4到約8小時。在缺氧處理之後，歷時24-48小時將細胞從所述密封室中移到周圍空氣中，然後由LDH分析或DNA斷裂來確定細胞生存力。LDH分析是如實例25中所述來進行。通過在紫外光下由溴化乙錠進行染色來確定使用PUREGENEDNA分離試劑盒(Gentra Systems，Inc.；Minneapolis，MN)所分離的基因組DNA的DNA斷裂。
單獨培養SH-SY5Y細胞或原代小鼠皮層神經元，或在護腦素或化合物1存在下對其進行培養。護腦素或化合物1既可在缺氧處理開始之前約1-2小時添加，也可在缺氧處理終止之後立刻添加。護腦素或化合物1是以約0.5μM到約20μM使用。舉例說明且不加限制，護腦素或化合物1是以1μM、2μM、5μM、10μM或20μM使用。在一些實施例中，分析一種作為FPRL2配體(而非護腦素或化合物1)的化合物保護分化的SH-SY5Y細胞或原代小鼠皮層神經元免於出現由缺氧/復氧誘導的細胞死亡的能力。
實例29阿爾茲海默氏病腦中的FPRL2表達相對於非阿爾茲海默氏病腦中的FPRL2表達有所上調通過免疫組織化學來確定阿爾茲海默氏病腦中的FPRL2表達相對於非阿爾茲海默氏病腦中的FPRL2表達的情形。用於此研究的人類腦組織的獲得是經過正當許可。從一名58歲非阿爾茲海默氏病男性個體(「正常」)的海馬回區域和一名65歲阿爾茲海默氏病男性患者(「AD」)的海馬回區域中獲得新鮮腦組織。將該腦組織用甲醛水溶液固定並用石蠟包埋。將該石蠟包埋物質用於製備4μM切片。使用為對抗FPRL2的C末端肽所形成的兔多克隆抗血清來詢問FPRL2表達。通過由用以產生抗體的肽進行阻斷來證明染色的特異性。
將4μM石蠟切片用抗FPRL2抗血清的1∶100稀釋液來染色。用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)將玻片洗滌三次並將其與辣根過氧化物酶(HRP)的共軛羊抗兔抗體(Dako；CA)一起在室溫下培養30分鐘。隨後將所述玻片洗滌三次並用染色底物二氨基聯苯胺(DAB)處理2分鐘。以水洗滌劑來終止該顯色反應。隨後將該組織切片用甲基綠復染並用蓋玻片覆蓋。
觀察圖14，說明阿爾茲海默氏病腦樣品中的FPRL2表達相對於非阿爾茲海默氏病腦樣品中的FPRL2表達有所上調。由阿爾茲海默氏病腦樣品中的大錐體神經元執行的FPRL2表達相對於由非阿爾茲海默氏病腦樣品中的大錐體神經元執行的FPRL2表達有所上調。
序列表110Arena Pharmaceuticals，Inc.
Villegas.SoniaKelner.Gregory s.
Unett，David J.
Gatlin，Joel120人類G蛋白偶聯受體和用於治療細胞死亡相關病症的其調節物13030.WO115060/455,3161512003-03-1715060/532,0011512003-12-2216014170PatentIn version 3.221012111062212DNA213智人4001atggaaacca acttctccat tcctctgaat gaaactgagg aggtgctccc tgagcctgct60ggccacaccg ttctgtggat cttctcattg ctagtccacg gagtcacctt tgtcttcggg120gtcctgggca atgggcttgt gatctgggtg gctggattcc ggatgacacg cacagtcaac180accatctgtt acctgaacct ggccctagct gacttctctt tcagtgccat cctaccattc240cgaatggtct cagtcgccat gagagaaaaa tggccttttg gctcattcct atgtaagtta300gttcatgtta tgatagacat caacctgttt gtcagtgtct acctgatcac catcattgct360ctggaccgct gtatttgtgt cctgcatcca gcctgggccc agaaccatcg caccatgagt420ctggccaaga gggtgatgac gggactctgg attttcacca tagtccttac cttaccaaat480ttcatcttct ggactacaat aagtactacg aatggggaca catactgtat tttcaacttt540gcattctggg gtgacactgc tgtagagagg ttgaacgtgt tcattaccat ggccaaggtc600tttctgatcc tccacttcat tattggcttc agcgtgccta tgtccatcat cacagtctgc660tatgggatca tcgctgccaa aattcacaga aaccacatga ttaaatccag ccgtccctta720
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223新型序列40010ctccttcggt cctcctatcg ttgtcagaag t3121011
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223新型序列40011atggaaacca acttctccat tcctctgaat gaaactgagg aggtgctccc tgagcctgct60ggccacaccg ttctgtggat cttctcattg ctagtccacg gagtcacctt tgtcttcggg120gtcctgggca atgggcttgt gatctgggtg gctggattcc ggatgacacg cacagtcaac180accacctgtt acctgaacct ggccctagct gacttctctt tcagtgccat cctaccattc240cgaatggtct cagtcgccat gagagaaaaa tggccttttg gctcattcct atgtaagtta300attcatatta tgatagacat caacctgttt gtcagtgtct acctgatcac catcattgct360ctggaccgct gtatttgtgt cctgcatcca gcctgggccc agaaccatcg caccatgagt420ctggccaaga gggtgatgac gggactctgg attttcacca tagtccttac cttaccaaat480ttcatcttct ggactacaat aagtactacg aatggggaca catactgtat tttcaacttt540gcattctggg gtgacactgc tgtagagagg ttgaacgtgt tcattaccat ggccaaggtc600tttctgatcc tccacttcat tattggcttc agcgtgccta tgtccatcat cacagtctgc660tatgggatca tcgctgccaa aattcacaga aaccacatga ttaaatccag ccgtcccaaa720cgtgtcttcg ctgctgtggt ggcttctttc ttcatctgtt ggttccctta tgaactaatt780ggcattctaa tggcagtctg gctcaaagag atgttgttaa atggcaaata caaaatcatt840cttgtcctga ttaacccaac aagctccttg gcctttttta acagctgcct caacccaatt900ctctacgtct ttatgggtcg taacttccaa gaaagactga ttcgctcttt gcccactagt960ttggagaggg ccctgactga ggtcccgtac tcagcccaga ccagcaacac agacaccact1020tctgcttcac ctcctgagga gacggagtta caagcaatat ga106221012211353212PRT
213人工的220
223新型序列40012Met Glu Thr Asn Phe Ser Ile Pro Leu Asn Glu Thr Glu Glu Val Leu1 5 10 15Pro Glu Pro Ala Gly His Thr Val Leu Trp Ile Phe Ser Leu Leu Val20 25 30His Gly Val Thr Phe Val Phe Gly Val Leu Gly Asn Gly Leu Val Ile35 40 45Trp Val Ala Gly Phe Arg Met Thr Arg Thr Val Asn Thr Ile Cys Tyr50 55 60Leu Asn Leu Ala Leu Ala Asp Phe Ser Phe Ser Ala Ile Leu Pro Phe65 70 75 80Arg Met Val Ser Val Ala Met Arg Glu Lys Trp Pro Phe Gly Ser Phe85 90 95Leu Cys Lys Leu Val His Val Met Ile Asp Ile Asn Leu Phe Val Ser100 105 110Val Tyr Leu Ile Thr Ile Ile Ala Leu Asp Arg Cys Ile Cys Val Leu115 120 125His Pro Ala Trp Ala Gln Asn His Arg Thr Met Ser Leu Ala Lys Arg130 135 140Val Met Thr Gly Leu Trp Ile Phe Thr Ile Val Leu Thr Leu Pro Asn145 150 155 160Phe Ile Phe Trp Thr Thr Ile Ser Thr Thr Asn Gly Asp Thr Tyr Cys165 170 175Ile Phe Asn Phe Ala Phe Trp Gly Asp Thr Ala Val Glu Arg Leu Asn180 185 190Val Phe Ile Thr Met Ala Lys Val Phe Leu Ile Leu His Phe Ile Ile195 200 205Gly Phe Ser Val Pro Met Ser Ile Ile Thr Val Cvs Tyr Gly Ile Ile210 215 220Ala Ala Lys Ile His Arg Asn His Met Ile Lys Ser Ser Arg Pro Lys225 230 235 240
Arg Val Phe Ala Ala Val Val Ala Ser Phe Phe Ile cys Trp Phe Pro245 250 255Tyr Glu Leu Ile Gly Ile Leu Met Ala Val Trp Leu Lys Glu Met Leu260 265 270Leu Asn Gly Lys Tyr Lys Ile Ile Leu Val Leu Ile Asn Pro Thr Ser275 280 285Ser Leu Ala Phe Phe Asn Ser Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Val Phe290 295 300Met Gly Arg Asn Phe Gln Glu Arg Leu Ile Arg Ser Leu Pro Thr Ser305 310 315 320Leu Glu Arg Ala Leu Thr Glu Val Pro Asp Ser Ala Gln Thr Ser Asn325 330 335Thr Asp Thr Thr Ser Ala Ser Pro Pro Glu Glu Thr Glu Leu Gln Ala340 345 350Met2101321136212DNA213人工的220
223新型序列40013gatcaagctt ccatggcgtg ctgcctgagc gaggag362101421153212DNA213人工的220
223新型序列40014gatcggatcc ttagaacagg ccgcagtcct tcaggttcag ctgcaggatg gtg5權利要求
1.一種鑑定候選化合物是否為護腦素(Humanin)GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述受體偶聯至G蛋白；所述方法包含下列步驟(a)將所述候選化合物與所述受體接觸；和(b)確定受體功能性是否得到調節；其中，受體功能性的變化表示所述候選化合物是護腦素GPCR的調節物。
2.根據權利要求1所述的方法，其中所述接觸是在所述受體的已知激動劑存在下進行。
3.根據權利要求2所述的方法，其中所述接觸是在護腦素或[Gly14]-護腦素存在下進行。
4.根據權利要求2所述的方法，其中所述接觸是在化合物1存在下進行。
5.根據權利要求1所述的方法，其中所述接觸包含與宿主細胞接觸或與表達所述GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，所述載體包含編碼所述受體的多核苷酸。
6.一種鑑定候選化合物是否為神經保護調節物的方法，其包含下列步驟(a)將所述候選化合物與包含FPRL2胺基酸序列的GPCR接觸，其中所述受體偶聯至G蛋白；和(b)確定受體功能性是否得到調節；其中受體功能性的變化表示所述候選化合物是神經保護調節物。
7.根據權利要求6所述的方法，其中所述接觸是在所述受體的已知激動劑存在下進行。
8.根據權利要求7所述的方法，其中所述接觸是在護腦素或[Gly14]-護腦素存在下進行。
9.根據權利要求7所述的方法，其中所述接觸是在化合物1存在下進行。
10.根據權利要求6所述的方法，其中所述接觸包含與宿主細胞接觸或與表達所述GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，所述載體包含編碼所述受體的多核苷酸。
11.根據權利要求6所述的方法，其中受體功能性的增加表示所述候選化合物是神經保護化合物。
12.一種鑑定候選化合物是否為肌保護調節物的方法，其包含下列步驟(a)將所述候選化合物與包含FPRL2胺基酸序列的GPCR接觸，其中所述受體偶聯至G蛋白；和(b)確定受體功能性是否得到調節；其中受體功能性的變化表示所述候選化合物是肌保護調節物。
13.根據權利要求12所述的方法，其中所述接觸是在所述受體的已知激動劑存在下進行。
14.根據權利要求13所述的方法，其中所述接觸是在護腦素或[Gly14]-護腦素存在下進行。
15.根據權利要求13所述的方法，其中所述接觸是在化合物1存在下進行。
16.根據權利要求12所述的方法，其中所述接觸包含與宿主細胞接觸或與表達所述GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，所述載體包含編碼所述受體的多核苷酸。
17.根據權利要求12所述的方法，其中受體功能性的增加表示所述候選化合物是肌保護化合物。
18.一種式(I)化合物 其中R1-R4各自獨立地選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基氨基、C2-6二烷基甲醯胺、滷素、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基、C1-4滷代烷硫基、羥基、硝基和硫醇組成的群組；或其醫藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，其限制條件為(A)至少一個R1-R4基團不為H；(B)當R1、R3和R4各為H時，R2不為-OAc或-OCH3；(C)當R1和R4都為H，並且R3為-CH3時，R2不為-OH；(D)當R1和R4都為H，並且R2為H或Br時，R3不為-CH(CH3)2；和(E)當R1、R2和R3各為H時，R4不為-OAc。
19.根據權利要求18所述的化合物，其中R2是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
20.根據權利要求18所述的化合物，其中R2是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
21.根據權利要求18所述的化合物，其中R2為H或滷素。
22.根據權利要求18所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
23.根據權利要求18所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
24.根據權利要求18所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
25.根據權利要求18所述的化合物，其中R1為H或滷素。
26.根據權利要求25所述的化合物，其中R2是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
27.根據權利要求25所述的化合物，其中R2是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
28.根據權利要求25所述的化合物，其中R2為H或滷素。
29.根據權利要求25所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
30.根據權利要求25所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
31.根據權利要求25所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
32.根據權利要求25所述的化合物，其中R4為H或滷素。
33.根據權利要求32所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
34.根據權利要求32所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
35.根據權利要求32所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
36.根據權利要求32所述的化合物，其中R2是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
37.根據權利要求36所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
38.根據權利要求36所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
39.根據權利要求36所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
40.根據權利要求32所述的化合物，其中R2是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
41.根據權利要求40所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
42.根據權利要求40所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
43.根據權利要求40所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
44.根據權利要求32所述的化合物，其中R2為H或滷素。
45.根據權利要求44所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
46.根據權利要求44所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
47.根據權利要求44所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
48.根據權利要求25所述的化合物，其中R4為H。
49.根據權利要求48所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
50.根據權利要求48所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
51.根據權利要求48所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
52.根據權利要求48所述的化合物，其中R2是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
53.根據權利要求52所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
54.根據權利要求52所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
55.根據權利要求52所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
56.根據權利要求48所述的化合物，其中R2是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
57.根據權利要求56所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
58.根據權利要求56所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
59.根據權利要求56所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
60.根據權利要求48所述的化合物，其中R2為H或滷素。
61.根據權利要求60所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
62.根據權利要求60所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
63.根據權利要求60所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
64.根據權利要求18所述的化合物，其中R1為H。
65.根據權利要求64所述的化合物，其中R2是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
66.根據權利要求64所述的化合物，其中R2是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
67.根據權利要求64所述的化合物，其中R2為H或滷素。
68.根據權利要求64所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
69.根據權利要求64所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
70.根據權利要求64所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
71.根據權利要求64所述的化合物，其中R4為H或滷素。
72.根據權利要求71所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
73.根據權利要求71所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
74.根據權利要求71所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
75.根據權利要求71所述的化合物，其中R2是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
76.根據權利要求75所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
77.根據權利要求75所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
78.根據權利要求75所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
79.根據權利要求71所述的化合物，其中R2是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
80.根據權利要求79所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
81.根據權利要求79所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
82.根據權利要求79所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
83.根據權利要求71所述的化合物，其中R2為H或滷素。
84.根據權利要求83所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
85.根據權利要求83所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
86.根據權利要求83所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
87.根據權利要求64所述的化合物，其中R4為H。
88.根據權利要求87所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
89.根據權利要求87所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
90.根據權利要求87所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
91.根據權利要求87所述的化合物，其中R2是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
92.根據權利要求91所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
93.根據權利要求91所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
94.根據權利要求91所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
95.根據權利要求87所述的化合物，其中R2是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
96.根據權利要求95所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
97.根據權利要求95所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
98.根據權利要求95所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
99.根據權利要求87所述的化合物，其中R2為H或滷素。
100.根據權利要求99所述的化合物，其中R3是選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C2-6二烷基氨基、滷素、羥基、硝基和硫醇組成的群組。
101.根據權利要求99所述的化合物，其中R3為C1-6烷基。
102.根據權利要求99所述的化合物，其中R3是選自由H、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基甲醯胺、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基和C1-4滷代烷硫基組成的群組。
103.根據權利要求18所述的化合物，其是選自由下列各物組成的群組7-異丁醯基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；7-乙醯基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；7-羥基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-乙醯基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-羥基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；7-甲氧基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；7-異丙氧基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；乙酸8-氨甲醯基-4b，8-二甲基-4b，5，6，7，8，8a，9，10-八氫-菲-2-基酯；1，4a-二甲基-7-硝基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；7-氨基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；7-二甲氨基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；7-乙醯氨基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；7-氟-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；8-氨甲醯基-4b，8-二甲基-4b，5，6，7，8，8a，9，10-八氫-菲-2-羧酸；1，4a-二甲基-6-丙基氨磺醯基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-巰基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；1，4a-二甲基-6-甲硫基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-甲亞磺醯基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-甲磺醯基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；8-氨甲醯基-4b，8-二甲基-4b，5，6，7，8，8a，9，10-八氫-菲-2-羧酸乙酯；1，4a-二甲基-7-乙烯基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；7-溴-6-甲氧基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；乙酸2-溴-8-氨甲醯基-4b，8-二甲基-4b，5，6，7，8，8a，9，10-八氫-菲-3-基酯；1，4a-二甲基-6-硝基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-氨基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-二甲氨基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-乙醯氨基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-氟-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-溴-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；6-氰基-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1，6-二羧酸二醯胺；8-溴-1，4a-二甲基-6-硝基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；和8-溴-1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氫-菲-1-羧酸醯胺；或其醫藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物。
104.一種式(I)化合物 其中R1-R4各自獨立地選自由H、C1-5醯基、C1-5醯氧基、C2-6烯基、C1-4烷氧基、C1-6烷基、C1-4烷基甲醯胺、C2-6炔基、C1-4烷基氨基、C1-4烷基磺醯胺、C1-4烷基亞磺醯基、C1-4烷基磺醯基、C1-4烷硫基、C1-4烷基脲基、氨基、C1-6-烷氧羰基、甲醯胺、羧基、氰基、C3-6環烷基、C2-6二烷基氨基、C2-6二烷基甲醯胺、滷素、C1-4滷代烷氧基、C1-4滷代烷基、C1-4滷代烷基亞磺醯基、C1-4滷代烷基磺醯基、C1-4滷代烷硫基、羥基、硝基和硫醇組成的群組；或其醫藥學上可接受的鹽、溶劑化物或水合物，其限制條件為(A)至少一個R1-R4基團不為H；和(D)當R1和R4都為H，並且R2為H或Br時，R3不為-CH(CH3)2。
105.一種由根據權利要求1至17中任一權利要求所述的方法鑑定的調節物。
106.一種由根據權利要求1至17中任一權利要求所述的方法鑑定的調節物，其中所述調節物是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。
107.一種由根據權利要求1至17中任一權利要求所述的方法鑑定的調節物，其中所述調節物是激動劑。
108.一種由根據權利要求1至17中任一權利要求所述的方法鑑定的調節物，其中所述調節物是部分激動劑。
109.一種由根據權利要求1至17中任一權利要求所述的方法鑑定的調節物，其中所述調節物是反向激動劑。
110.一種由根據權利要求1至17中任一權利要求所述的方法鑑定的調節物，其中所述調節物是拮抗劑。
111.一種由根據權利要求1至17中任一權利要求所述的方法鑑定的調節物，其中所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。
112.一種由根據權利要求1至17中任一權利要求所述的方法鑑定的調節物，其中所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物，或不是抗體或其衍生物。
113.一種由根據權利要求1至17中任一權利要求所述的方法鑑定的調節物，其限制條件在於所述調節物不是肽。
114.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法包含將所述受體與所述受體的調節物接觸的步驟。
115.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的體外細胞培養物中預防或治療細胞死亡，所述培養物包含複數個包含所述受體的細胞，所述方法包含將所述受體與有效劑量的受體調節物接觸。
116.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少神經細胞死亡，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。
117.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。
118.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病(Alzheimer′s disease)；(b)帕金森氏病(Parkinson′s disease)；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
119.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少肌細胞死亡，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。
120.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸。
121.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的受體調節物接觸，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
122.一種減少哺乳動物中的神經細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含將治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
123.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
124.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
125.一種減少哺乳動物中的肌細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含將治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
126.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
127.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的護腦素GPCR調節物與所述受體接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
128.一種製備醫藥學或生理學上可接受的組合物的方法，其包含將載劑與護腦素GPCR的調節物混合，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
129.根據權利要求114至128中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。
130.根據權利要求114至128中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是激動劑。
131.根據權利要求114至128中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物不是肽。
132.根據權利要求114至128中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是根據權利要求18所述的化合物。
133.根據權利要求114至128中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是根據權利要求104所述的化合物。
134.根據權利要求114至128中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是化合物1。
135.根據權利要求116至127中任一權利要求所述的方法，其中所述哺乳動物為人類。
136.一種醫藥學或生理學上可接受的組合物，其包含護腦素GPCR的調節物，大體上由所述調節物組成或由所述調節物組成，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
137.根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。
138.根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物是激動劑。
139.根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物不是肽。
140.根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物是根據權利要求18所述的化合物。
141.根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物是根據權利要求104所述的化合物。
142.根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物是化合物1。
143.一種減少神經細胞死亡的方法，其包含將根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的哺乳動物。
144.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
145.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
146.一種減少肌細胞死亡的方法，其包含將根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的哺乳動物。
147.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
148.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據權利要求136所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
149.根據權利要求143至148中任一權利要求所述的方法，其中所述哺乳動物為人類。
150.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述調節物是用於通過療法來治療人體或動物體的方法中。
151.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述調節物是用於通過療法來減少人體或動物體中的神經細胞死亡的方法中。
152.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述調節物是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的神經細胞死亡相關病症的方法中。
153.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述調節物是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的神經細胞死亡相關病症的方法中，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
154.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述調節物是用於通過療法來減少人體或動物體中的肌細胞死亡的方法中。
155.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述調節物是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的肌細胞死亡相關病症的方法中。
156.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述調節物是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的肌細胞死亡相關病症的方法中，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
157.根據權利要求150至156中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。
158.根據權利要求150至156中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物是激動劑。
159.根據權利要求150至156中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物不是肽。
160.根據權利要求150至156中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物是根據權利要求18所述的化合物。
161.根據權利要求150至156中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物是根據權利要求104所述的化合物。
162.根據權利要求150至156中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物是化合物1。
163.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供減少神經細胞死亡的醫藥品。
164.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品。
165.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
166.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供減少肌細胞死亡的醫藥品。
167.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品。
168.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
169.根據權利要求163至168中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。
170.根據權利要求163至168中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是激動劑。
171.根據權利要求163至168中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物不是肽。
173.根據權利要求163至168中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是根據權利要求18所述的化合物。
174.根據權利要求163至168中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是根據權利要求104所述的化合物。
175.根據權利要求163至168中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是化合物1。
176.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法包含將所述受體與所述受體的調節物接觸的步驟，其中所述調節物可通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定。
177.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的體外細胞培養物中預防或治療細胞死亡，所述培養物包含複數個包含所述受體的細胞，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定調節物；並且，接著將所述受體與有效劑量的調節物接觸。
178.一種製備醫藥學或生理學上可接受的組合物的方法，其包含鑑定護腦素GPCR的調節物，其中所述受體包含FPRL2胺基酸序列；並且，接著將載劑與所述調節物混合，其中所述調節物可通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定。
179.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少神經細胞死亡，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定調節物；並且，接著將所述受體與治療有效劑量的調節物接觸。
180.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定調節物；並且，接著將所述受體與治療有效劑量的調節物接觸。
181.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定調節物；並且，接著將所述受體與治療有效劑量的調節物接觸，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
182.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少肌細胞死亡，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定調節物；並且，接著將所述受體與治療有效劑量的調節物接觸。
183.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定調節物；並且，接著將所述受體與治療有效劑量的調節物接觸。
184.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定調節物；並且，接著將所述受體與治療有效劑量的調節物接觸，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
185.一種減少哺乳動物中的神經細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列；並且，接著將治療有效劑量的調節物與所述受體接觸。
186.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列；並且，接著將治療有效劑量的調節物與所述受體接觸。
187.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列；並且，接著將治療有效劑量的調節物與所述受體接觸，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體-肽誘導的皮層神經元凋亡。
188.一種減少哺乳動物中的肌細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列；並且，接著將治療有效劑量的調節物與所述受體接觸。
189.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列；並且，接著將治療有效劑量的調節物與所述受體接觸。
190.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列；並且，接著將治療有效劑量的調節物與所述受體接觸，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
191.根據權利要求176至190中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。
192.根據權利要求176至190中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是激動劑。
193.根據權利要求176至190中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是部分激動劑。
194.根據權利要求176至190中任一權利要求所述的方法，其中所述候選化合物或所述測試配體不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。
195.根據權利要求176至190中任一權利要求所述的方法，其中所述候選化合物或所述測試配體不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物，或不是抗體或其衍生物。
196.根據權利要求176至190中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物不是肽。
197.根據權利要求179至190中任一權利要求所述的方法，其中所述哺乳動物為人類。
198.一種醫藥學或生理學上可接受的組合物，其包含護腦素GPCR的調節物，大體上由所述調節物組成或由所述調節物組成，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節物可通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定。
199.根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。
200.根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物是激動劑。
201.根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物是部分激動劑。
202.根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。
203.根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物，或不是抗體或其衍生物。
204.根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物，其中所述調節物不是肽。
205.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
206.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
207.一種減少肌細胞死亡的方法，其包含將根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的哺乳動物。
208.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
209.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將根據權利要求198所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
210.根據權利要求205至209中任一權利要求所述的方法，其中所述哺乳動物為人類。
211.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節物是通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定，所述調節物是用於通過療法來治療人體或動物體的方法中。
212.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節物是通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定，所述調節物是用於通過療法來減少人體或動物體中的神經細胞死亡的方法中。
213.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節物是通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定，所述調節物是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的神經細胞死亡相關病症的方法中。
214.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節物是通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定，所述調節物是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的神經細胞死亡相關病症的方法中，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
215.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節物是通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定，所述調節物是用於通過療法來減少人體或動物體中的肌細胞死亡的方法中。
216.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節物是通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定，所述調節物是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的肌細胞死亡相關病症的方法中。
217.一種護腦素GPCR的調節物，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節物是通過執行根據權利要求1所述的方法來鑑定，所述調節物是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的肌細胞死亡相關病症的方法中，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
218.根據權利要求211至217中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。
219.根據權利要求211至217中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物是激動劑。
220.根據權利要求211至217中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物是部分激動劑。
221.根據權利要求211至217中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。
222.根據權利要求211至217中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物，或不是抗體或其衍生物。
223.根據權利要求211至217中任一權利要求所述的調節物，其中所述調節物不是肽。
224.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供減少神經細胞死亡的醫藥品，所述方法包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定所述調節物。
225.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品，其包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定所述調節物。
226.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品，其包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定所述調節物，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
227.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供減少肌細胞死亡的醫藥品，其包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定所述調節物。
228.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品，其包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定所述調節物。
229.一種使用護腦素GPCR的調節物的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法是用於製備供預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品，其包含執行根據權利要求1所述的方法，從而來鑑定所述調節物，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
230.根據權利要求224至229中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是選自由激動劑、部分激動劑、反向激動劑和拮抗劑組成的群組。
231.根據權利要求224至229中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是激動劑。
232.根據權利要求224至229中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物是部分激動劑。
233.根據權利要求224至229中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。
234.根據權利要求224至229中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物，或不是抗體或其衍生物。
235.根據權利要求224至229中任一權利要求所述的方法，其中所述調節物不是肽。
236.一種製備醫藥學或生理學上可接受的組合物的方法，其包含將根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物與載劑混合。
237.根據權利要求236所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
238.一種製備醫藥學或生理學上可接受的組合物的方法，其包含將根據權利要求104所述的化合物與載劑混合。
239.一種醫藥學或生理學上可接受的組合物，其包含根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物，大體上由所述化合物組成或由所述化合物組成。
240.根據權利要求239所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
241.一種醫藥學或生理學上可接受的組合物，其包含根據權利要求104所述的化合物，大體上由所述化合物組成或由所述化合物組成。
242.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法包含將所述受體與根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物接觸。
243.根據權利要求242所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
244.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法包含將所述受體與根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
245.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法包含將所述受體與根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
246.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的體外細胞培養物中預防或治療細胞死亡，所述培養物包含複數個包含所述受體的細胞，所述方法包含將所述受體與有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物接觸。
247.根據權利要求246所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
248.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少神經細胞死亡，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物接觸。
249.根據權利要求248所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
250.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少神經細胞死亡，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
251.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少神經細胞死亡，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
252.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物接觸。
253.根據權利要求252所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
254.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
255.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
256.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物接觸，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
257.根據權利要求256所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
258.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
259.一種調節護腦素GPCR活性的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療神經細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
260.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少肌細胞死亡，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物接觸。
261.根據權利要求260所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
262.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少肌細胞死亡，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
263.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中減少肌細胞死亡，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
264.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物接觸。
265.根據權利要求264所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
266.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
267.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸。
268.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物接觸，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
269.根據權利要求268所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
270.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
271.一種調節護腦素GPCR的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述調節作用是用於在需要所述調節作用的哺乳動物中預防或治療肌細胞死亡相關病症，所述方法包含將所述受體與治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物接觸，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
272.一種減少哺乳動物中的神經細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
273.根據權利要求272所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
274.一種減少哺乳動物中的神經細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
275.一種減少哺乳動物中的神經細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
276.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
277.根據權利要求276所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
278.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
279.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
280.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
281.根據權利要求280所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
282.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
283.一種預防或治療哺乳動物中的神經細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
284.一種減少哺乳動物中的肌細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
285.根據權利要求284所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
286.一種減少哺乳動物中的肌細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
287.一種減少哺乳動物中的肌細胞死亡的方法，所述哺乳動物需要所述減少，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
288.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
289.根據權利要求288所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
290.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
291.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列。
292.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
293.根據權利要求292所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
294.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
295.一種預防或治療哺乳動物中的肌細胞死亡相關病症的方法，所述哺乳動物需要所述預防或治療，所述方法包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物與護腦素GPCR接觸，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
296.一種減少神經細胞死亡的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物提供給或投用到需要所述減少的哺乳動物。
297.根據權利要求296所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
298.一種減少神經細胞死亡的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的哺乳動物。
299.一種減少神經細胞死亡的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的哺乳動物。
300.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
301.根據權利要求300所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
302.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
303.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
304.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
305.根據權利要求304所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
306.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
307.一種預防或治療神經細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
308.一種減少肌細胞死亡的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物提供給或投用到需要所述減少的哺乳動物。
309.根據權利要求308所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
310.一種減少肌細胞死亡的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的哺乳動物。
311.一種減少肌細胞死亡的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述減少的哺乳動物。
312.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
313.根據權利要求312所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
314.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
315.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物。
316.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
317.根據權利要求316所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
318.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求239所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
319.一種預防或治療肌細胞死亡相關病症的方法，其包含將治療有效劑量的根據權利要求241所述的醫藥學或生理學上可接受的組合物提供給或投用到需要所述預防或治療的哺乳動物，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
320.根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物，其是用於通過療法來治療人體或動物體的方法中。
321.根據權利要求320所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
322.根據權利要求104所述的化合物，其是用於通過療法來治療人體或動物體的方法中。
323.根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物，其是用於通過療法來減少人體或動物體中的神經細胞死亡的方法中。
324.根據權利要求323所述的化合物，其中所述化合物為化合物1。
325.根據權利要求104所述的化合物，其是用於通過療法來減少人體或動物體中的神經細胞死亡的方法中。
326.根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的神經細胞死亡相關病症的方法中。
327.根據權利要求326所述的化合物，其中所述化合物為化合物1。
328.根據權利要求104所述的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的神經細胞死亡相關病症的方法中。
329.根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的神經細胞死亡相關病症的方法中，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
330.根據權利要求329所述的化合物，其中所述化合物為化合物1。
331.根據權利要求104所述的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的神經細胞死亡相關病症的方法中，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
332.根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物，其是用於通過療法來減少人體或動物體中的肌細胞死亡的方法中。
333.根據權利要求332所述的化合物，其中所述化合物為化合物1。
334.根據權利要求104所述的化合物，其是用於通過療法來減少人體或動物體中的肌細胞死亡的方法中。
335.根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的肌細胞死亡相關病症的方法中。
336.根據權利要求335所述的化合物，其中所述化合物為化合物1。
337.根據權利要求104所述的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的肌細胞死亡相關病症的方法中。
338.根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的肌細胞死亡相關病症的方法中，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
339.根據權利要求338所述的化合物，其中所述化合物為化合物1。
340.根據權利要求104所述的化合物，其是用於通過療法來預防或治療人體或動物體中的肌細胞死亡相關病症的方法中，其中所述肌細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
341.一種使用根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物來製備用於減少神經細胞死亡的醫藥品的方法。
342.根據權利要求341所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
343.一種使用根據權利要求104所述的化合物來製備用於減少神經細胞死亡的醫藥品的方法。
344.一種使用根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物來製備用於預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品的方法。
345.根據權利要求344所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
346.一種使用根據權利要求104所述的化合物來製備用於預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品的方法。
347.一種使用根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物來製備用於預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
348.根據權利要求347所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
349.一種使用根據權利要求104所述的化合物來製備用於預防或治療神經細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)阿爾茲海默氏病；(b)帕金森氏病；(c)中風；(d)運動神經元疾病；(e)學習或記憶障礙；(f)創傷性腦損傷；(g)脊髓損傷；(h)周圍神經病；和(i)朊毒體相關疾病。
350.一種使用根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物來製備用於減少肌細胞死亡的醫藥品的方法。
351.根據權利要求350所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
352.一種使用根據權利要求104所述的化合物來製備用於減少肌細胞死亡的醫藥品的方法。
353.一種使用根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物來製備用於預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品的方法。
354.根據權利要求353所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
355.一種使用根據權利要求104所述的化合物來製備用於預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品的方法。
356.一種使用根據權利要求18至103中任一權利要求所述的化合物來製備用於預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
357.根據權利要求356所述的方法，其中所述化合物為化合物1。
358.一種使用根據權利要求104所述的化合物來製備用於預防或治療肌細胞死亡相關病症的醫藥品的方法，其中所述神經細胞死亡相關病症是選自由下列各病組成的群組(a)腦澱粉樣血管病；(b)心肌梗塞；和(c)充血性心力衰竭。
359.一種鑑定候選化合物是否與護腦素GPCR結合的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列；所述方法包含下列步驟(a)在所述候選化合物存在或不存在下，將所述受體與可經檢測標記的已知GPCR配體接觸；和(b)在所述候選化合物存在下，確定所述經標記的已知配體與所述受體的結合是否受到抑制；其中所述抑制作用表示所述候選化合物與所述護腦素GPCR結合。
360.根據權利要求190所述的方法，其中所述接觸包含與宿主細胞接觸或與表達所述GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，所述載體包含編碼所述受體的多核苷酸。
361.根據權利要求190或191所述的方法，其中所述已知配體是選自由護腦素、[Gly14]-護腦素和化合物1組成的群組。
362.一種用於檢測與護腦素GPCR結合的配體的方法，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述方法包含下列步驟(a)將測試配體與宿主細胞或與表達所述受體的宿主細胞膜在允許所述受體與所述測試配體之間相互作用的情況下接觸；和(b)檢測與所述受體結合的配體。
363.根據權利要求193所述的方法，其中所述接觸包含與宿主細胞接觸或與表達所述GPCR的宿主細胞膜接觸，其中所述宿主細胞包含表達載體，所述載體包含編碼所述受體的多核苷酸。
364.一種與護腦素GPCR結合的配體，所述受體包含FPRL2胺基酸序列，所述配體是根據權利要求359至363中任一權利要求所述的方法來鑑定。
365.一種根據權利要求359至363中任一權利要求所述的方法鑑定的配體，其中所述配體不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物。
366.一種根據權利要求359至363中任一權利要求所述的方法鑑定的配體，其中所述配體不是護腦素或其等位基因變異體、同源物、直向同源物或肽類似物或衍生物，或不是肽WKYMVm或其肽類似物或衍生物，或不是抗體或其衍生物。
367.一種根據權利要求359至363中任一權利要求所述的方法鑑定的配體，其中所述配體不是肽。
全文摘要
本發明涉及鑑定候選化合物是否為G蛋白偶聯受體(GPCR)的調節物的方法。在某些實施例中，所述GPCR是人類的。在某些實施例中，所述GPCR是由神經細胞或者肌細胞內源性表達。在某些實施例中，所述GPCR具有神經保護性或者肌保護性。在某些實施例中，所述GPCR是一種護腦素(Humanin)受體。本發明同時涉及使用所述GPCR的調節物的方法。一種優選的調節物是激動劑。本發明的激動劑一般用作治療劑以預防或者治療神經退化性疾病，所述疾病包括阿爾茲海默氏病(Alzheimer′s disease)、帕金森氏病(Parkinson′s disease)、朊毒體相關疾病、中風和運動神經元疾病，特別是周圍神經病、腦澱粉樣β－蛋白血管病和缺血性心臟病，包括心肌梗塞和充血性心力衰竭。
文檔編號G01N33/566GK1777812SQ200480007323
公開日2006年5月24日 申請日期2004年3月15日 優先權日2003年3月17日
發明者索尼婭·比列加斯, 格雷戈裡·克爾納, 戴維·阿納特, 喬爾·加特林 申請人:艾尼納製藥公司