葡糖胺基聚糖(gag)模擬物的製作方法

2023-10-05 18:50:14

專利名稱：葡糖胺基聚糖(gag)模擬物的製作方法
技術領域：
本發明即本申請的主題屬於模擬某些糖類結構的化合物領域。更特別地，本發明屬於葡糖胺基聚糖(GAG)模擬物領域。
具體地說，本發明涉及包含至少一個用於模擬GAGs結構的帶電基團的化合物。本發明還涉及製備化合物，包含該類化合物的組合物的方法，以及該類化合物及其組合物用於哺乳動物患者的抗血管形成，抗轉移，抗炎，抗凝血，抗血栓，和/或抗微生物治療的用途。本發明進一步涉及該類化合物及其組合物治療患有需要使用此類藥劑治療的病症的哺乳動物患者的用途。
背景技術：
葡糖胺基聚糖(GAGs)是由大部分動物細胞所產生的直鏈，聚陰離子多糖，通常發現其附著於蛋白質核心[1，2]。GAGs大量存在(作為蛋白多糖)並且由細胞擠壓至細胞表面並進入細胞外基質(ECM)[3]。已經認識到GAGs，尤其是那些屬於硫酸乙醯肝素(HS)家族(HS-GAGs)的GAGs調節很多生理學過程。例如，HS-GAGs在細胞生長和發育，血管生成，凝血，腫瘤轉移，細胞粘附，生長因子的激活，細胞因子和趨化因子的結合，以及細菌和病毒[4-6]的感染中發揮關鍵作用。最近幾年裡與GAGs相互作用的蛋白質的名單顯著增加並且該名單還會持續增長。新出現的觀點是細胞外GAGs的獨特序列與重要的蛋白特異性結合，並經由此影響基本的生物學過程。
已經證明模擬某些GAGs結構的分子-此類分子稱作「模擬物GAG」-可與GAG-結合蛋白結合併調節它們的生物活性例如，各種戊多糖對AT-III的激活作用[7，8]，或蔗糖八硫酸酯對成纖維細胞生長因子(FGFs)的激活作用[9]。相似地，已經證明GAG模擬物可對抗GAG與其目標蛋白質的結合併且由此抑制該蛋白質的生物學或疾病功能。例如，已經開發的靶向HS-結合血管原性生長因子的抗癌劑包括多磺酸化合物[10]，蘇拉明和相關的suradistas[11]，以及硫酸化低聚糖[12，13]。
本發明涉及新的，小分子GAG模擬物，其與GAG-結合蛋白結合併調節它們的功能。該化合物包含至少一種與目標蛋白GAG-結合部位的帶正電荷殘基的殘基相互作用的帶負電荷的基團(優選磺基)，並且還包含一個或多個與上述結合部位的內部以及周圍的其它蛋白質殘基相互作用的取代基。本文所描述的化合物重要和顯著的特徵是它們與以前記述的多硫酸化GAG模擬物例如硫酸化低聚糖相比具有更少的磺基以及更低的分子量[12，13]。另一個重要的特徵是它們的結構基於環架(例如單糖)，具有位於特異性的，預先定義的環周圍的方位的磺基和其它取代基，因此，顯著不同於由Kisilevsky[14]所描述的簡單地，隨機帶電的GAG模擬物。本文所描述的化合物與HS-結合的、血管原性生長因子的選擇性結合可通過表面等離子體諧振(SPR)溶液親和力測定法來證明。另外，通過單純性皰疹病毒證明化合物選擇性抑制HS-介導的細胞感染以及細胞-與-細胞間的傳播。
本發明的一方面是使用Ugi反應[15，16]來提供GAG模擬物的不同排列。論證了單個帶電結構相互連接或與其它官能團連接的方式變化的能力以及模擬GAGs不同的結構變化的適用範圍。正如對於本領域技術人員所顯而易見的，該環架的官能化不局限於Ugi反應。例如，論證了許多其它的反應如烷基化、醯化以及環加成的使用。
發明概述本發明的目標是提供新的帶電化合物，其可用作GAG模擬物。
本發明進一步的目標是提供製備主題化合物的有效合成路線。
根據本發明的第一個實施方案，提供了下式的化合物
其中n是0至2的整數；Z是N，N(O)，O，S，S(O)，S(O)2，P，P(O)，P(O)2，Si，Si(O)，或Si(O)2；X各自獨立的是C，C(O)，N，N(O)，O，S，S(O)，S(O)2，P，P(O)，P(O)2，Si，Si(O)，或Si(O)2或是鍵；和R1至R6各自獨立的是鍵或選自基團氫；滷素；直鏈的，環狀的，支鏈的，取代的，雜環的，雜原子取代的或未取代的烷基，鏈烯基，炔基，芳基，或雜芳基；磷醯基例如磷酸酯，硫代磷酸酯-O-P(S)(OH)2；磷酸酯-O-P(O)(OR)2；硫代磷酸酯-O-P(S)(OR)2；膦酸酯-O-P(O)OHR；硫代膦酸酯-O-P(S)OHR；取代的膦酸酯-O-P(O)OR1R2；取代的硫代膦酸酯-O-P(S)OR1R2；-O-P(S)(OH)(SH)；和環磷酸酯；其它含磷的化合物例如亞磷醯胺-O-P(OR)-NR1R2；和氨基磷酸酯-O-P(O)(OR)-NR1R2；硫基團例如-O-S(O)(OH)，-SH，-SR，-S(→O)-R，S(O)2R，RO-S(O)2-，-O-SO2NH2，-O-SO2R1R2或磺醯胺-NHSO2NH2；氨基例如-NHR，-NR1R2，-NHAc，-NHCOR，-NH-O-COR，-NHSO3，-NHSO2R，-N(SO2R)2，和/或脒基例如-NH-C(＝NH)NH2和/或脲基例如-NH-CO-NR1R2或硫脲基例如-H-C(S)-NH2；結構I的另一個單元，通過任意位置連接，其中Z，X和R1至R6如上所定義；或基於下式基團的亞結構 其中
Y是鍵或選自基團直鏈的，環狀的，支鏈的，取代的，雜環的，雜原子取代或未取代的烷基；直鏈的，環狀的，支鏈的，取代的，雜環的，雜原子取代或未取代的醯基；和芳基，取代的芳基，雜芳基；和R7至R11各自獨立地是至少一個根據式I的結構，或根據式II的結構；條件是當Z是O，X是O或鍵時，R1至R5都不是H或CH2OH；或當Z是N並且X是O或鍵時，R1至R6都不是H。
根據本發明的第二個實施方案，提供了用於預防或治療哺乳動物患者的由血管生成，轉移，炎症，凝血，血栓形成，和/或微生物感染引起的疾病的藥物或獸醫學組合物。該組合物包含至少一種根據第一個實施方案的化合物和對於所述的至少一種化合物而言藥學上或獸醫學上可接受的載體或稀釋劑。
根據本發明的第三個實施方案，提供了根據第一個實施方案的化合物在製備用於預防或治療哺乳動物患者的由血管生成，轉移，炎症，凝血，血栓形成和/或微生物感染引起的疾病的藥物中的用途。
根據本發明的第四個實施方案，提供了用於預防或治療哺乳動物患者的由血管生成，轉移，炎症，凝血，血栓形成，和/或微生物感染引起的疾病的方法，該方法包含對患者施用有效量的至少一種根據第一個實施方案的化合物，或包含所述至少一種化合物的組合物。
在本發明的其它實施方案中，提供了合成如上述定義的根據第一個實施方案化合物的方法。
進一步考慮第一個實施方案化合物，除非另有說明，烷基，芳基和其它取代基與它們在本領域通常的含意一致。例如，烷基和芳基通常具有1至10個碳原子。另外，R1至R5的兩個基團可相互連接形成二環結構；或式I的環狀結構可包含雙鍵，即兩個鄰近的XR1至XR5基團可以是鍵。
本發明優選的化合物具有通式III-VI的通用結構，如以下表1-4所定義。
為了使本發明更容易地理解和實現，現在將通過舉例描述一種或多種優選的實施方案。
優選實施方案詳述本文使用以下縮寫GAG 葡糖胺基聚糖HS 硫酸乙醯肝素FGF 成纖維細胞生長因子aFGF酸性成纖維細胞生長因子(或FGF-1)bFGF鹼性成纖維細胞生長因子(或FGF-2)VEGF血管內皮生長因子SPR 表面等離子體諧振HSV 單純皰疹病毒本發明人發現使用在以下實施例中舉例說明的很多不同的策略可以合成寬範圍的具有GAG模擬物特性的化合物。這些化合物可用於預防或治療哺乳動物患者的由血管生成，轉移，炎症，微生物感染，凝血或血栓形成引起的疾病。這種應用由化合物調節負責疾病過程的GAG-結合蛋白活性的能力而產生。
如上文所指出的，可使用很多不同的路線，包括Ugi反應，在該方法中通常引入磺化作用，來合成本發明的GAG模擬物。
根據如上定義的本發明第一個實施方案的優選化合物包括通用結構I和II所包含的那些以及在下表1-4所包括的那些。
如上文所指出，根據本發明的化合物可用於預防或治療哺乳動物患者的由血管生成，轉移，炎症，微生物感染，凝血或血栓形成所引起的疾病。該化合物可特別用於治療人類的上述疾病。該化合物典型地作為如以下段落中所描述的藥物組合物的組分來施用。
用於口服施用的藥物組合物可以是片劑，膠囊，粉末或液體形式。片劑可以包括固體載體例如明膠或佐劑或惰性稀釋劑。液體藥物組合物通常包括液體載體例如水，石油，動物或植物油，礦物油或合成油。可包括生理鹽水溶液，或二醇例如乙二醇，丙二醇或聚乙二醇。此類組合物和製劑通常將包含至少0.1wt％的化合物。
腸胃外施用包括通過以下途徑施用靜脈內，表皮或皮下，鼻，肌內，眼內，經上皮，腹腔內和局部。局部施用包括皮膚，眼部，直腸，鼻，以及通過吸入劑或通過氣溶膠的方式施用。對於靜脈內，表皮或皮下注射，或在需要治療部位的注射，活性成分為腸胃外可接受的水溶液形式，其不含有熱原並且具有適宜的pH，等滲性和穩定性。本領域的那些技術人員將能夠很好地製備出適宜的溶液，例如，使用主題化合物或其衍生物的溶液。
除至少一種化合物和載體或稀釋劑之外，根據本發明的組合物可進一步包括藥學上或獸醫學上可接受的賦形劑，緩衝劑，穩定劑，等滲調節劑，防腐劑或抗氧劑或任何其它為本領域那些技術人員所熟知的材料。技術人員將會理解此類材料應該無毒並且不幹擾化合物的療效。任何添加劑的準確特徵取決於組合物的施用途徑即組合物是口服施用還是腸胃外施用。關於緩衝劑，含水的組合物典型地包括此類物質以便於維持該組合物接近於生理的pH或至少在大約pH5.0至大約pH8.0範圍之內。
根據本發明的組合物還可包括除至少一種化合物之外的活性成分。此類成分將主要根據它們的功效如作為抗血管生成，抗轉移，抗炎症，抗凝血，抗血栓形成，抗微生物藥劑來選擇，但是還可根據它們對抗任何聯合病症的效力來選擇。
可以將根據本發明的藥物或獸醫學組合物以所考慮的特定情況所必需的預防有效量或治療有效量給患者施用。經由組合物施用的至少一種化合物的實際用量，比例以及施用的時間過程，將取決於所治療或需要預防的病症的性質和嚴重性。治療的處方例如劑量等的決定將是在負責患者治療的執業醫師或獸醫師的技能的範圍內。然而典型地，給人類患者施用的組合物要包括每千克體重大約0.01至100mg的化合物，更優選大約0.1至10毫克/Kg體重。
在組合物中包括的化合物可以為其藥學上或獸醫學上可接受的衍生物。如本文所用，化合物的「衍生物」包括鹽，與金屬鐵例如Mn2+和Zn2+的配位絡合物，酯例如體內可水解的酯，游離酸或鹼，水合物，或前藥。具有酸性基團例如磷酸根或硫酸根的化合物可以與鹼性或鹼土金屬例如Na，K，Mg和Ca，以及與有機胺例如三乙胺和三(2-羥乙基)胺形成鹽。具有鹼性基團的例如胺的化合物，也可以與無機酸例如鹽酸，磷酸或硫酸，或有機酸例如乙酸，檸檬酸，苯甲酸，富馬酸，或酒石酸形成鹽。同時具有酸性和鹼性基團的化合物可形成內鹽。
可以通過使用本領域那些技術人員眾所周知的技術在化合物中存在的羥基或羧基與適當的羧酸或醇反應配偶體之間形成酯。
本發明化合物的前藥衍生物可以在體內或體外轉化成母體化合物。典型地，在化合物的前藥形式中可抑制母體化合物的至少一種生物活性，並且可以通過將前藥轉化為母體化合物或其代謝物來激活。前藥的實例是糖脂衍生物，其中一種或多種脂質部分在該部分作為取代基來提供，通過用具有磷脂酶活性的酶裂解使化合物的游離形式釋放。本發明化合物的前藥包括使用保護基，保護基可在體內除去以釋放活性化合物或用於抑制該藥的清除。適宜的保護基是本領域技術人員所公知的，包括乙酸酯基團。
還如上文所指出的，根據本發明的化合物可用於製備預防或治療哺乳動物患者的由血管生成，轉移，炎症，凝血，血栓形成和/或微生物感染所引起的疾病的藥物。製備此類藥物的方法是本領域那些技術人員所公知的，包括製備上述藥物組合物的方法。
已發現屬於本發明範圍內的化合物可與生長因子結合。特別地，已經確定該化合物對aFGF，bFGF和VEGF具有親合力。因此該化合物在對哺乳動物患者包括人的治療中可用作抗血管生成劑，抗轉移劑和/或抗炎劑。該化合物的用途包括治療血管生成-依賴性疾病例如與實體腫瘤生長有關的血管生成、增生性視網膜病以及治療炎性疾病和病症如類風溼性關節炎。該化合物還可激活生長因子並且因此能用於心血管的治療。
如上文進一步所指出的，本發明的化合物還可用作抗凝血劑或抗血栓形成劑。該化合物因此可用於預防和治療許多血栓形成性和心血管的疾病，這些疾病中最突出的是深部靜脈血栓形成，肺栓塞，血栓性中風，周圍動脈血栓形成，不穩定心絞痛和心肌梗塞。由於帶電的胺基酸化合物的組合物可以經口服輸送，因此該化合物可有吸引力地替代華法林，其是一種廣泛使用的具有嚴重副作用的口服抗凝血劑。
另外已經發現本發明的化合物可抑制病毒感染，因此可用作抗病毒劑治療或預防多種病毒感染。本發明的化合物特別地適用於治療或預防由利用HS作為連接物/入口受體的病原體引起的感染[6]，例如，HSV，HIV，登革熱病毒，黃熱病毒，巨細胞病毒和C型肝炎病毒。相似地，本發明的化合物還適用於治療或預防由利用HS作為連接物/入口的非-病毒性微生物病原體引起的感染，例如，瘧原蟲(瘧疾)。最顯著的是通過本發明的化合物抑制HSV-1和HSV-2的細胞-至-細胞間的傳播。
已經對本發明進行了廣泛地描述，將參考本說明書以下部分簡短描述的附表給出化合物，它們的合成，以及它們的生物活性的非限制性實例。
一般過程二醇烷基化和脫保護的一般過程將在DMF中的二醇(1當量)逐滴地加入在DMF中的冷卻的(0°)，攪拌的預先洗滌(己烷)的NaH(5當量)的混懸液中。一旦添加完成後，繼續攪拌(0°→室溫，20min)。將混合物冷卻(0°，5min)，在持續攪拌狀態下(0°→室溫，o/n)逐滴地加入滷代烷(2當量)。將混合物再次冷卻(0°)，在持續攪拌下(5min)加入MeOH(5mL)。蒸發溶劑，將殘留物進行處理(workup)(EtOAc)，經快速色譜法純化(TLC)。將殘渣共蒸發(2×10mL MeCN)。將在MeOH/MeCN(1∶1)中的粗製混合物和p-TsOH·H2O(50mg)加熱回流(1h)。將混合物冷卻(室溫)，蒸發溶劑前加入Et3N(100μL)。將殘留物經快速色譜(EtOAc/己烷)得到二醇。
醇磺化的一般過程將在DMF中的醇與SO3·三甲胺的混合物(每羥基2當量)(60°，o/n)加熱。使用MeOH處理冷卻的(室溫)反應混合物，然後通過加入Na2CO3(10％w/w)使其成鹼性(至pH＞10)。將混合物過濾，將濾液蒸發，共蒸發(H2O)。在需要硫酸化產物進行脫醯基的情況下，將粗製產物在水中溶解，加入1M NaOH(每醯基2當量)。當脫保護完成，將產物保存至下一階段。將在水中的粗製硫酸化材料經過分子排阻色譜。將精製的部分蒸發，共蒸發(H2O)，然後凍幹(H2O)得到硫酸化產物。當需要時，凍幹後將產物通過離子-交換樹脂柱(AG_-50W-X8，Na+形式，1×4cm，去離子水，15mL)以使產物均一地轉化為鈉鹽形式。將收集的溶液蒸發，凍幹得到終產物，為無色玻璃狀或白色粉末。
分子排阻色譜在Bio-Gel P-25×100cm柱上進行分子排阻色譜(SEC)，0.1MNH4HCO3流速2.8mL/min，收集2.8min時的級分(7.8mL)。通過TLC(炭化)分析該級分碳水化物的含量和/或通過二甲基亞甲藍試驗分析多電(polycharged)種類，然後通過毛細管電泳(CE)分析純度，將那些認為是不含鹽的組分集中並凍幹。
在未硫酸化的(undersulfated)副產物或其它鹽雜質存在的情況下(通常僅有少量，但經常被檢出)，可使用LH20 SEC步驟(2×95cm，去離子水，1.2mL/min，每瓶3.5min)完全去除它們。
二甲基亞甲藍試驗二甲基亞藍(DMB)試劑是通過將16mg的DMB溶解在1L包含3.04g甘氨酸，2.37g NaCl的去離子水中進行製備。加入0.1M HCl(95ml)調節pH至3.0。在室溫下將儲備溶液儲存於棕色瓶中。(該溶液在此條件下至少3個月內是穩定的)。
向96-孔微量滴定板的每孔中加入10μL的級分溶液。向所使用的每個孔中加入55μL的DMB儲備液。從藍色至粉紅色的瞬間顏色變化表明多電種類的存在，例如，硫酸化產物級分。
NIS糖基化的一般過程在加入1.3當量的NIS和1滴TfOH之前，將糖基受體(1當量)，硫糖苷供體(1.1當量)，500mg新近激活的3_分子篩粉末和10mL乾燥的DCM在-20°攪拌20min。加入400μL的Et3N之前在-20°持續攪拌直至通過TLC檢查反應完成(～1小時)。在矽膠上(真空)蒸發，經快速色譜得到糖基化產物。
Ugi四部分反應的一般過程將酸(1當量)，胺(1當量)，羰基化合物(1當量)和胩(1當量)在MeOH、MeOH-THF(各種比例)或CHCl3中的溶液轉入反應瓶中(終濃度0.1-0.5M)。當酸性組分為D-葡糖醛酸時，其以固體加入。在二酸，二胺，二醛或二胩的情況時，其量為0.5當量。將混合物在室溫或60℃下攪拌或振搖1小時至5天。通過TLC監控反應過程。將混合物蒸發，將殘留物經由快速色譜純化或在高真空下完全乾燥，隨後直接完全乙醯化並通過快速色譜純化。
羥基乙醯化的一般過程將相應的醇溶解在包含DMAP(0.42mol％)的DCM-吡啶(15∶1v/v，0.15M)中。加入醋酸酐(每羥基2當量)，將混合物在室溫o/n下攪拌。將混合物倒入冰凍的0.5M HCl中，使用CHCl3進行萃取。分離有機相，使用冷的0.5M HCl(x2)、鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)。將溶液過濾，蒸發。通過快速色譜(使用己烷-EtOAc進行梯度洗脫)將殘留物純化得到純化產物。
Zemplén脫乙醯基/脫苄基的一般過程使用在MeOH中的甲醇鈉(1.35M，0.2-0.6當量)溶液處理在無水MeOH中醋酸酯/苯甲酯溶液(0.1M)。將混合物在室溫下攪拌1-3小時(通過TLC監控)。加入酸性樹脂AG_-50W-X8(H+形式)調節pH至6-7，將混合物過濾，使用MeOH淋洗樹脂。將合併的濾液和淋洗液在真空中蒸發，徹底乾燥得到多元醇產物。
苄基醚通過氫解脫保護的一般程序向在MeOH或EtOH(2mL)中的苄基醚保護的化合物(0.03mmol)的溶液中加入5％的Pd/C或20％的炭載Pd(OH)2(30mg或過量)。將混合物裝入miniclave(Büchi AG，Uster/Switzerland)中，在氫氣氛下(50psi)攪拌2-10小時。可選地，混合物使用氫氣鼓泡1小時，然後在室溫1個大氣壓的氫氣下攪拌1-5天。通過TLC監控反應(EtOAc或MeCN-水10∶1)。將混合物過濾，使用MeOH，或EtOH淋洗。蒸發濾液並在高真空下乾燥，通過1H NMR進行檢查，冷凍乾燥，直接用於磺化。
羥基的甲基化將乾燥的多元醇在氬氣下溶解於無水DMF(0.04M)中，與NaH(在礦物油中60％的混懸液，每羥基1.2當量)在室溫下攪拌1小時。加入碘甲烷(每羥基1.2當量)，持續攪拌o/n。加入甲醇後，在二氧化矽上蒸發，通過快速色譜純化混合物。
Huisgen環加成的一般過程將硫酸化的糖疊氮化物溶解於水中(0.75M)，加入在叔丁醇中的乙炔溶液(0.9M，1當量)。向混合物中加入硫酸銅(II)溶液(在水中0.3M，5mol％)和抗壞血酸鈉溶液(1M，在水中，20mol％)。在室溫下將混合物在微型混合器上振搖過夜(o/n)，通過柱色譜(二氧化矽1×18cm，使用50∶2∶1，20∶2∶1至10∶2∶1的EtOAc-MeOH-H2O進行梯度洗脫)得到相應的三唑產物。
實施例1PG2038步驟a3，4，6-三-O-乙醯基-2-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯。
使用95mg(422μmol)NIS使2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯[17](150mg，322μmol)，3，4，6-三-O-乙醯基-2-O-苯甲基-1-硫-β-D-吡喃半乳糖苷甲酯[18](151mg，354μmol)以及200mg的3_分子篩經過一般的NIS糖基化過程。快速色譜(用20∶80至25∶75的EtOAc∶己烷進行梯度洗脫)得到274mg的部分脫乙醯的物質。向混合物中加入10mL的DCM，200μL的醋酸酐，200μL的Et3N和2mg的DMAP，在蒸發前將溶液攪拌1小時，經快速色譜(用25∶75至30∶70的EtOAc∶己烷進行梯度洗脫)得到180mg(66％)標題化合物，為無色玻璃狀物。1Hn.m.r.(400MHz，CDCl3)δ7.05-7.35(m，20H，4×Ph)，5.74(d，1H，J1，2＝4.0，H1II)，5.29(dd，1H，J3，4＝3.2，J4，5＝1.2，H4II)，5.23(dd，1H，J2，3＝10.8，H3II)，4.92(d，1H，Jgem＝12.0，PhCH2)，4.85(d，1H，Jgem＝10.8，PhCH2)，4.55-4.69(m，4H，PhCH2)，4.42(AB，1H，Jgem＝12.0，PhCH2)，4.40(AB，1H，PhCH2)，4.32(d，1H，J1，2＝7.6，H1I)，4.10(d t，1H，J5，6＝6.8，H5II)，3.88-3.96(m，H，H5I+H6I)，3.82(dd，1H，Jgem＝11.1，H6II)，3.70-3.76(m，4H，H2×H6I+H2II+H3I)，3.56(s，3H，OMe)，3.5-3.6(m，1H，H4I)，3.45(dd，1H，J2，3＝9.0，H2I)，2.02(s，3H，Ac)，1.93(s，3H，Ac)，1.88(s，3H，Ac)。13C n.m.r.(100MHz，CDCl3)δ170.17，170.06，169.87，138.82，138.20，138.13，137.68，128.33，128.25，128.19，128.04，127.61，127.57，127.49，127.46，127.01，126.39，104.42，97.12，84.49，82.26，74.46，74.27，73.69，73.31，73.28，73.02，69.47，69.17，68.35，66.60，61.62，56.96，20.69，20.63，20.58。
步驟b3，4，6-三-O-乙醯基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯。
將Pearlman′s催化劑(20mg)和20μL乙酸加到在10mL甲醇中的90mg(106μmol)的3，4，6-三-O-乙醯基-2-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯的溶液中。應用3次真空淨化的氫氣氛，將混懸液攪拌3天。過濾後，蒸發，與PhMe共蒸發，將殘留物殘渣經過快速色譜(用100∶0至100∶3的EtOAc∶MeH進行梯度洗脫)得到47mg(91％)的標題化合物。1Hn.m.r.(400MHz，CD3OD)δ5.39(br d，1H，J3，4＝3.0，H4II)，5.32(d，1H，J1，2＝3.8，H1II)，5.10(dd，1H，J2，3＝10.6，H3II)，4.38(br t，1H，J5，6＝6.8，H5II)，4.20(d，1H，J1，2＝7.8，H1I)，4.09(appd(ABX)，2H，J5，6＝6.5，H6II)，4.00(dd，1H，H2II)，3.92(dd，1H，J5，6A＝1.7，Jgem＝12.2，H6AI)，3.80(dd，1H，J5，6B＝4.8，H6BI)，3.62(dis t，1H，J2，3～3，4＝9.1，H3I)，3.56(部分obs t，1H，J3，4～4，5＝9.3，H4I)，3.53(s，3H，OMe)，3.42(ddd，1H，J4，5＝9.4，H5I)，3.22(dd，1H，J2，3＝9.1，H2I)，2.10(s，3H，AcO)，2.05(s，3H，AcO)，2.00(s，3H，AcO)。
步驟c甲基2-O-磺基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡萄糖苷，四鈉鹽(PG2038)將上述的二糖(32.2mg，0.667mmol)，經過常規的磺化和脫乙醯過程得到標題化合物，為白色泡沫狀物(4.0mg，7.8％，純度96％，CE7.18min)。1H NMR(D2O，400MHz)5.473(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，4.833(d，1H，J1I-2I＝2.8，H1I)，4.60(與水重疊，1H，H3I)，4.551(m，1H，H2I)，4.306(dd，1H，J2II-3II＝10.2，H2II)，4.17-4.06(m，4H，H4I，H5I和H6I)，3.902(d，1H，J3II-4II＝3.6，H4II)，3.867(dd，1H，H3II)，3.616(dd，1H，J6axII-6eqII＝12.0，J5II-6axII＝7.2，H6axII)，3.564(dd，1H，J5II-6eqII＝5.2，H6eqII)，3.363(dd，1H，H5II)，3.343(s，3H，CH3O)。
實施例2PG2046和PG2047步驟a2-疊氮基-3，4，6-三-O-苯甲醯基-2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖在氬氣氛下在活化的分子篩(300mg的3_粉末)存在的情況下將在1，2-DCE(5mL)中的3，4，6-三-O-乙醯基-2-疊氮基-2-脫氧-D-吡喃葡萄糖基-三氯亞氨基乙酸酯(acetimidate)[19](201mg，0.453mmol)和1，6-脫水-2-疊氮基-3-O-苯甲基-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖[20](84mg，0.302mmol)的溶液攪拌(室溫，30min)。在持續攪拌下(10min)將混合物冷卻(-20°)，滴入TBDMSOTf(21μL，0.091mmol)，維持攪拌(-20°，10min)。加入Et3N(100μL)，將混合物過濾並蒸發。將殘留物經過加水處理(aqueous workup)(EtOAc)，經快速色譜(10-40％的EtOAc/己烷)得到淡黃色的油狀物(130mg)。將殘留物共蒸發(2×10mL MeCN)，然後經過Zemplén脫乙醯的一般過程。將產物經過加水處理(aqueous workup)(EtOAc)得到無色的油狀物(98mg)。將殘留物共蒸發(2×10mL MeCN)。向在1，2-DCE(3mL)中的粗製產物(0.302mmol，最大)與吡啶(2mL)的溶液中加入BzCl(210μL，1.81mmol)，攪拌合併的混合物(室溫，o/n)。將混合物冷卻(0°)，在蒸發和共蒸發(甲苯)溶劑前，在持續攪拌下(0°→室溫，2min)加入MeOH(2mL)。將殘留物經過加水處理(aqueous workup)(EtOAc)，經快速色譜(10-30％的EtOAc/己烷)得到兩種化合物。
首先，標題化合物為無色泡沫狀物(101mg，46％，3個步驟)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ3.11(s，1H；H-2I)，3.41(dd，1H，J1，23.7，J2，310.7Hz；H-6I)，3.61(s，1H；H-3I)，3.39(s，1H；H-4I)，4.05(d，1H，J6，67.3Hz；H-6I)，4.41-4.49(m，2H；H-6II)，4.55，4.68(AB四重峰，JA，B11.9Hz；CH2Ph)，4.79(ddd，1H，J4，510.3，J5，62.9，5.9Hz；H-5II)，4.91(br d，1H，J5，65.5Hz；H-5I)，5.08(d，1H，J1，23.6Hz；H-1II)，5.51(dd，1H，J3，49.5，J4，510.2Hz，H-4II)，5.60(s，1H，；H-1I)，6.10(dd，1H，J2，310.7，J3，49.3Hz；H-3II)，7.29-7.55，7.89-8.03(2m，20H；ArH)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ58.74，61.47，63.30，64.84，69.19，69.49，70.52，73.17，74.62，78.12，79.57(11C；C-2I-6I，C2II-6II，CH2Ph)，100.71，101.16(2C；C-1I，C-1II)，128.10，128.42，128.57，128.61，128.64，128.81，128.88，129.15，129.86，129.90，130.06，130.17，133.43，133.53，133.74，137.48(Ar)，165.61，165.62，166.26(3C；C＝O)。
其次，2-疊氮基-3，4，6-三-O-苯甲醯基-2-脫氧-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖，為無色油狀物(27mg，12％，3個步驟)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.19(s，1H；H-2I)，3.74(dd，1H，J5，66.2，J6，67.1Hz；H-6I)，3.79-3.88(m，2H；H-2II，H-3I)，3.88(ddd，J4，59.2，J5，63.1，4.7Hz；H-5II)，3.95(br s，1H；H-4I)，4.10(d，1H，J6，67.3Hz；H-6I)，4.34(dd，1H；J5，64.9，J6，612.2Hz；H-6II)，4.50(dd，1H，J5，63.1，J6，612.3Hz，H-6II)，4.52，4.59(AB四重峰，JA，B12.0Hz；CH2Ph)，4.65(d，1H，J1，27.9Hz；H-1II)，4.69(br d，1H，J5，65.5Hz；H-5I)，5.44(t，1H，J2，3＝3，49.7Hz；H-3II)，5.49(br s，1H；H-1I)，5.51(t，1H，J3，4＝4，59.6Hz；H-4II)，7.23-7.50，7.84-7.96(2m，20H；ArH)。
步驟b2-脫氧-2-磺醯胺基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脫水-2-脫氧-2-磺醯胺基-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖，二鈉鹽(PG2046)在氬氣下將在2∶1MeOH∶EtOAc(7mL)中的2-疊氮基-3，4，6-三-O-苯甲醯基-2-脫氧-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脫水-2-疊氮基-2-脫氧-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷(127μmol)，Pearlman′s催化劑(11mg)，和甲酸銨(300mg)的混合物加熱到65°，直到TLC檢查反應完。將混合物冷卻至室溫，過濾(0.2μm)和蒸發。通過SPE(300mg C18 Waters cartridge，用5∶95的MeOH∶H2O平衡，用5∶95至100∶0的MeOH∶H2O進行梯度洗脫)將粗製的胺純化得到53mg二胺(58％)。沒有進行進一步純化，向二胺中加入DMF(5mL)，SO3·Me3N(41mg，295μmol)和NaHCO3(40mg，475μmol)中。將混合物加熱到60°1小時，然後冷卻至室溫，用冰和Na2CO3(飽和水溶液)使混合物淬滅。將混懸液在-18°o/n貯存，將樣品過濾。將濾液蒸發。加入水(1mL)和NaOH(250μL，1M)，將溶液攪拌過夜然後直接裝載到SEC柱上(一般過程)得到22mg標題化合物(三個步驟28％)。1H NMR(400MHz，D2O，溶劑抑制)δ7.35-7.21(m，5H，ArH)，5.43(br s，1H，H1I)，5.18(d，1H，J1-2＝3.6，HIII)，4.72-4.691(m，1H，H5I)，4.54-4.521(m，2H，ArCH2)，4.05(d，1H，Jgem＝7.9，H6AI)，3.85(br s，1H，H3I)，3.76-3.58(m，5H)，3.51(dd，1H，J2-3＝10.4，J3-4＝9.1，H3II)，3.34(t，1H，J3-4～4-5＝9.2，H4II)，3.23(brs，1H，H2I)，3.12(dd，1H，H2II)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ133.3，124.8，124.6，124.4，96.9，95.1，72.7，71.5，70.8，68.3，68.2，67.2，66.0，61.0，56.6，54.0，49.8。
步驟c2-脫氧-2-磺醯胺基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脫水-2-脫氧-2-磺醯胺基-β-D-吡喃葡萄糖苷，二鈉鹽(PG2047)將在純水中的2-脫氧-2-磺醯胺基-α-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-1，6-脫水-2-脫氧-2-磺醯胺基-3-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷，二鈉鹽(12.9mg，20.8μmol)和Pearlman′s催化劑(5mg)的混合物(2ml)於50psi H2下過夜。將混合物過濾，凍幹得到10.7mg(98％)的標題化合物。1H NMR(400MHz，D2O)δ5.47(br s，1H，H1I)，5.20(d，1H，J1-2＝3.5，H1II)，4.68(br d，1H，J5-4＝5.5，H5)，4.07(d，1H，Jgem＝7.6，H6AI)，3.98(br s，1H，H3I)，3.75-3.64(m，4H)，3.52(t，1H，J2-3～3-4＝9.3，H3II)，3.34(t，1H，J3-4～4-5＝9.3，H4II)，3.13(obs.dd2，1H，H2II)，3.11(br s，1H，H2I)。
實施例3PG2039和PG2037步驟a3，4-二-O-乙醯基-2，6-二-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯使用181mg(803μmol，1.3當量)的NIS，使2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(287mg；618μmol)，302mg(618μmol)的3，4-二-O-乙醯基-2，6-O-聯苄基-1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷乙酯[21]和700mg的3_分子篩經過一般的NIS糖基化過程。經快速色譜(2.5×20cm，用1∶5至1∶3的EtOAc∶己烷進行梯度洗脫)得到標題化合物，為無色樹膠狀物(176mg，32％)。1H NMR(400MHz，CDCl3，400MHz)7.40-7.12(m，25H，Ph)，5.818(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，5.481(d，1H，J4II-3II＝3.2，H4II)，5.309(dd，1H，J3II-2II＝10.8，J3II-4II＝3.2，H3II)，4.980(d，1H，Jgem＝11.6，a-PhCH2)，4.904(d，1H，Jgem＝11.2，b-PhCH2)，4.748(d，1H，Jgem＝11.6，a-PhCH2)，4.67-4.57(m，3H，b-PhCH2和c-PhCH2)，4.479(d，1H，Jgem＝12.8，d-PhCH2)，4.443(d，1H，Jgem＝12.8，d-PhCH2)，4.415(d，1H，Jgem＝11.6，e-PhCH2)，4.360(d，1H，J1I-2I＝8.0，H1I)，4.201(d，1H，Jgem＝12.6，e-PhCH2)，4.153(t，1H，J5II-6axII＝7.2，J5II-6eqII＝6.0，H5II)，4.072(t，1H，J4I-3I＝9.0，J4I-5I＝9.0，H4I)，3.858(dd，1H，J2II-3II＝10.8，J2II-1II＝3.6，H2II)，3.82-3.76(m，3H，H3I，H6axI和H6eqI)，3.597(s，3H，OMe)，3.62-3.57(m，1H，H5I)，3.507(t，1H，J2I-3I＝8.4，J2I-1I＝8.0，H2I)，3.347(dd，1H，J6eqII-6axII＝9.2，J6eqII-5II＝6.0，H6eqII)，3.291(dd，1H，J6axII-6eqII＝9.2，J6axII-5II＝7.2，H6axII)，1.958(s，3H，OAc)，1.930(s，3H，OAc)。13C NMR(100MHz，CDCl3，100MHz)169.94(CO)，169.78(CO)，138.88，138.35，138.24，137.73和137.64(5x ipso-Ph)，128.25，128.22，128.21，128.15，128.12，128.00，127.80，127.57，127.52，127.46，127.41，127.37，126.93，126.37，104.40，97.16，84.63，82.31，74.42，74.30，73.70，73.25，73.16，73.14，72.98，69.73，69.07，68.89，67.64，67.50，56.86，20.71，20.55。
步驟b3，4-二-O-乙醯基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯。
根據標準的脫苄基過程，將3，4-二-O-乙醯基-2，6-二-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(88mg，98.8μmol)脫保護得到標題化合物，為無色粉末(42mg，97％)。1H NMR(D2O，400MHz)5.394(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，5.294(d，1H，J4II-3II＝3.2，H4II)，4.953(dd，1H，J3II-2II＝10.4，J3II-4II＝3.2，H3II)，4.229(d，1H，J1I-2I＝8.4，H1I)，4.080(t，1H，J5II-6axII＝6.4，J5II-6eqII＝6.0，H5II)，3.965(dd，1H，J2II-3II＝10.4，J2II-1II＝3.6，H2II)，3.803(dd，1H，J6eqI-6eqI＝12.0，J6eqI-5I＝1.6，H6eqI)，3.67-3.59(m，2H，H6axI和H3I)，3.54-3.40(m，4H，H4I，H5I和H6II)，3.407(s，3H，OMe)，3.134(dd，1H，J2I-3I＝9.2，J2I-1I＝8.4，H2I)，2.012(s，3H，OAc)，1.909(s，3H，OAc)。13C NMR(D2O，100MHz)173.57，173.47，103.20，99.71，77.12，76.30，74.57，73.09，70.89，69.94，69.04，66.45，60.82，60.18，57.31，20.34，20.09。
步驟c2，6-二-O-磺基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯，五鈉鹽(PG2039)根據標準的磺化/脫乙醯過程，將42mg(95.4μmol)的3，4-二-O-乙醯基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯轉化為標題化合物，為白色粉末(14.8mg，18％，CE6.12min)。1H NMR(D2O，400MHz)5.404(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，4.756(d，1H，J1I-2I＝3.6，H1II)，4.60(與水重疊，1H，H3I)，4.448(dd，1H，J2I-3I＝3.2，H2I)，4.296(dd，1H，J2II-3II＝10.0，H2II)，4.23-4.00(m，7H，H6I，H5I，H6II，H4I和H5II)，3.958(dd，1H，J311-4II＝3.6，J4II-5II＝0.8，H4II)，3.930(dd，1H，H3II)，3.367(s，3H，CH3O)。
步驟d2，6-二-O-苯甲基-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯根據標準的脫乙醯和甲基化過程，將3，4-二-O-乙醯基-2，6-二-O-苯甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(72mg，80.8μmol)轉化為標題化合物，為無色樹膠狀物(62.7mg，93％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)7.35-7.08(m，25H，Ph)，5.717(d，1H，J1II-2II＝3.6，H1II)，4.856(d，1H，Jgem＝11.2，a-PhCH2)，4.843(d，1H，Jgem＝10.8，b-PhCH2)，4.695(d，2H，Jgem＝12.0，a-PhCH2和c-PhCH2)，4.631(d，1H，Jgem＝12.4，d-PhCH2)，4.571(d，1H，Jgem＝10.8，b-PhCH2)，4.500(d，1H，Jgem＝12.4，d-PhCH2)，4.450(d，1H，Jgem＝11.6，c-PhCH2)，4.433(d，1H，Jgem＝11.2，e-PhCH2)，4.359(d，1H，Jgem＝11.2，e-PhCH2)，4.303(d，1H，JII-2I＝7.6，H1I)，3.949(t，1H，J4I-3I＝9.0，J4I-5I＝9.0，H4I)，3.871(dd，1H，J5II-6axII＝7.2，J5II-6eqII＝6.4，H5II)，3.791(dd，1H，J2II-3II＝10.4，J2II-1II＝3.6，H2II)，3.77-3.68(m，4H，H4II，H3I，H6axI和H6eqI))，3.59-3.53(m，2H，H5I和H6II)，3.551(s，3H，OMe)，3.51-3.40(m，3H，H3II，H6II和H2I)，3.492(s，3H，OMe)，3.433(s，3H，OMe)。
步驟e3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯根據標準的脫苄基過程，將2，6-二-O-苯甲基-3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-苯甲基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(62.7mg，75.1μmol)脫保護得到標題化合物，為無色樹膠狀物(28mg，97％)。1H NMR(D2O，400MHz)5.232(d，1H，J1II-2II＝4.4，H1II)，4.217(d，1H，J1I-2I＝8.0，H1I)，3.83-3.75(m，3H，H4II，H5II和H6I)，3.682(dd，1H，J2II-3II＝10.4，J2II-1II＝4.4，H2II)，3.64-3.52(m，4H，H6I，H3II和H6II)，3.47-3.38(m，3H，H4I，H5I和H3II)，3.400(s，3H，OMe)，3.340(s，6H，2×OMe)，3.117(dd，1H，J2I-3I＝9.6，J2I-1I＝8.0，H2I)。13C NMR(D2O，100MHz)103.20，99.64，79.35，76.92，76.34，75.35，74.65，73.06，72.03，68.00，61.02，60.89，60.86，57.30，56.94。
步驟f3，4-二-O-甲基-2，6-二-O-磺基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-2，3，6-三-O-磺基-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯，五鈉鹽(PG2037)根據標準的磺化過程，由3，4-二-O-甲基-α-D-吡喃半乳糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(28mg，72.8μmol)得到標題化合物(3.2mg，4.9％)。1H NMR(400MHz，D2O)5.357(d，1H，J1II-2II＝3.2，H1II)，4.766(d，1H，J1I-2I＝3.6，H1I)，4.60(與水重疊，1H，H3I)，4.455(dd，1H，J2I-3I＝2.8，H2I)，4.304(dd，1H，J2II-3II＝10.0，H2II)，4.22-3.99(m，5H，H5I，H6I，H4I和H5II)，4.002(d，2H，J5II-6II＝6.8，H6II)，3.886(d，1H，J3II-4II＝3.2，H4II)，3.667(dd，1H，H3II)，3.398(s，3H，CH3O)，3.367(s，3H，CH3O)，3.356(s，3H，CH3O)。
實施例4PG2053和PG20424-O-烯丙基-2，3-二-O-磺基-α-L-鼠李糖苷甲酯，二鈉鹽(PG 2053)。
由2，3-O-異亞丙基-α-L-鼠李吡喃糖苷甲酯[22]通過一般的烷基化(與烯丙基溴)和脫保護過程，隨後通過一般的磺化過程得到標題化合物，為無色粉末。CE tm＝10.48min。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.19(d，3H，J5，66.4Hz；H-6)；3.26(s，3H；OMe)；3.29-3.40(m，1H；H-4)，3.59-3.67(m，1H；H-5)，4.00-4.05，4.18-4.22(2m，2H，OCH2)，4.41-4.42(m，1H；H-3)，4.63-4.64(m，2H；H-2)，4.83(s，1H；H-1)，5.07-5.21(m，2H；＝CH2)，5.76-5.88(m，1H；＝CH)。
當使用減少量(1當量)的SO3·三甲胺時，可專門獲得4-O-烯丙基-2-O-磺基-α-L-鼠李糖苷甲酯，鈉鹽(PG 2042)。CE tm＞25.00min。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.19(d，3H，J5，66.4Hz；H-6)，3.16(t，1H，J3，43.1，J4，59.7Hz；H-4)，3.25(s，3H；OMe)，3.54-3.58(m，1H；H-5)，3.76(dd，1H，J2，39.7Hz；H-3)，4.03-4.18(m，2H；OCH2)，4.34-4.35(m，1H；H-2)，4.80(s，1H；H-1)，5.08-5.22(m，2H；＝CH2)，5.78-5.88(m，1H；＝CH)。
實施例5PG20244-O-苯甲基-2，3-二-O-磺基-α-L-鼠李糖苷甲酯，二鈉鹽(PG2024)由2，3-O-異亞丙基-α-L-鼠李吡喃糖苷甲酯通過一般的烷基化(與苄基溴)和脫保護過程，隨後通過一般的磺化過程獲得標題化合物，為無色粉末。CE tm＝10.82min。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.00(d，3H，J5，66.8Hz；H-6)，3.23(s，3H；OMe)；3.78-3.80(m，1H；H-4)，3.88-3.94(m，1H；H-5)，4.41-4.43(m，1H；H-2)，4.52-4.56(m，2H；H-3)，4.54，4.78，(AB四重峰，JA，B12.0Hz；CH2Ph)，4.90(dd，1H，J1，21.2Hz；H-1)，7.20-7.36(m，5H；ArH)。
實施例6PG2054步驟a4-O-苯甲醯基-α-L-鼠李糖苷甲酯將在DCM(10mL)中的2，3-O-異亞丙基-α-L-鼠李吡喃糖苷甲酯(200mg，920μmol)，苯甲醯氯(193mg，1.38mmol)和Et3N(364μL，2.76mmol)的溶液攪拌過夜。用DCM(50mL)稀釋所得混懸液(Et3N·HCl沉澱物)，用NaHCO3(飽和水溶液)，水，然後用鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並蒸發。將殘留物溶解在50mL的1∶1的MeCN∶H2O中，加入p-TsOH(10mg)。將所得溶液攪拌直到反應完成(TLC，～4小時)，蒸發，經過快速色譜(1∶1的EtOAc∶己烷)得到165mg(經過兩個步驟，64％)的標題化合物，為無色固體。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.03-8.00(m，2H，Hortho)，7.55(tt，1H，JHp-Hm＝7.5，JHp-Ho＝1.3，Hpara)，7.43-7.39(m，2H，Hmeta)，5.09(dist，1H，J4-3～4-5＝9.3，H4)，4.73(br s，1H，H1)，4.01-3.97(m，2H，H2+H3)，3.91(dq，1H，J4-5＝9.7，J5，6＝6.4，H5)，3.53-3.46(br s，2H，OH)，3.38(s，3H，OMe)，1.25(d，3H，H6)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ167.1，133.3，129.8，129.5，128.3，100.6，75.7，70.8，70.1，65.7，55.0，17.4。
步驟b4-O-苯甲醯基-2，3-二-O-磺基-α-L-鼠李糖苷甲酯，二鈉鹽(PG2054)經由4-O-苯甲醯基-α-L-鼠李糖苷甲酯通過一般的磺化過程獲得標題化合物，為無色粉末。CE tm＝11.14min。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.14(d，3H，J5，66.3Hz；H-6)，3.33(s，3H；OMe)，3.99-4.07(m，1H；H-5)，4.66-4.73(m，2H；H-2，-3)，4.95(d，1H，J1，21.4Hz；H-1)，5.04(t，1H，J3，4＝4，59.6Hz；H-4)，7.35-7.41，7.53-7.55，7.92-7.93(3m，5H；Ph)。
實施例7PG2041步驟a4，6-O-苯亞甲基-1，2-二氫-D-葡萄烯糖。
在H2(1個大氣壓)下將在MeOH(15mL)中的三-O-乙醯基-D-葡萄烯糖(1.7g，6.25mmol)，AcOH(50μL)和Pd(OH)2/C(100mg)劇烈攪拌過夜。將混合物過濾，蒸發溶劑，然後將殘留物經過快速色譜(10-50％的EtOAc/己烷)得到三-O-乙醯基-1，2-二氫-D-葡萄烯糖，為無色油狀物。將殘留物共蒸發(2×10mL MeCN)，然後經過Zemplén脫乙醯基的一般過程得到1，2-二氫-D-葡萄烯糖，為無色油狀物(825mg，89％)。將殘留物共蒸發(2×10mL MeCN)。
向在DMF(5mL)中的1，2-二氫-D-葡萄烯糖(495mg，3.34mmol)和α，α-二甲氧基甲苯(753μL，5.01mmol)的溶液中加入p-TsOH.H2O(50mg)，攪拌合併的混合物(60°，1h)。加入Et3N(100μL)，將溶劑蒸發。將殘留物經過快速色譜(0-5％MeOH/CHCl3)得到標題化合物，為無色針狀物(503mg，64％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.72-2.01(m，2H；H-2)，3.27-3.33(m，1H；H-5)，3.41(dd，1H，J3，48.8，J5，69.1Hz；H-4)，3.49-3.56(m，1H；H-3)，3.67(t，1H，J5，6＝6，610.3Hz；H-6)，3.81-3.87，3.93-3.98(2m，2H；H-1)，4.25(dd，1H；J5，64.9Hz；H-6)，5，53(s，1H；CHPh)，7.23-7.52(m，5H，CHPh)。13C NMR(100MHz，CDCl3)δ33.47(C-2)；66.46，69.07，69.64，71.32(4C；C-1，-4，-5，-6)，84.14，(C-3)，102.16(CHPh)，126.43，128.55，129.34，137.50(4C；Ph)。
步驟b3-O-苯甲基-4，6-二-O-磺基-1，2-二氫-D-葡萄烯糖，二鈉鹽(PG2041)。
使4，6-O-苯亞甲基-1，2-二氫-D-葡萄烯糖經過烷基化(苄基溴)，脫保護和磺化的一般過程得到標題化合物，為無色粉末。CEtm＝15.40min。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ1.48-1.53，1.97-2.03(2m，2H；H-2)，3.30-3.71(m，1H；H-1)，3.52-3.57(m，1H；H-5)，3.60-3.66(m，1H；H-3)，3.78-3.83(m，1H；H-1)，3.97(dd，1H，J5，68.0，J6，611.4Hz；H-6)，3.98(t，1H，J3，4＝4，58.9Hz；H-4)，4.34(dd，1H，J5，62.3Hz；H-6)，4.52-4.67(m，2H；CH2Ph，7.21-7.36(m，5H；Ph)。
實施例8PG2030步驟a1，6-脫水-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖將對甲苯磺醯氯(790mg，4.14mmol)加到冷卻(0°)的在吡啶(10ml)中的3-O-甲基-D-吡喃葡萄糖(804mg，4.14mmol)的混懸液中，攪拌反應混合物(0°→室溫，1.5小時)。然後加入Ac2O(1.5mL，15mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(50mg)並持續攪拌(室溫，4小時)。然後將混合物冷卻(0°)，加入MeOH(3mL)，在溶劑蒸發以前繼續攪拌(10min)。將殘留的油狀物溶解(EtOAc)，經過處理得到甲苯磺酸酯，為淺黃色油狀物(1.93g)。將在EtOH(20mL)中的粗製甲苯磺酸酯(1.93g)和NaOH(1.0M，20mL，20mmol)的混合物加熱(80°，1小時)。用乙酸中和混合物，將溶劑蒸發，共蒸發(甲苯)。用吡啶(10mL)，Ac2O(5mL)和N，N二甲基氨基吡啶(50mg)處理粗製的殘留物，攪拌合併的混合物(室溫，o/n)。用冰水(10mL)處理混合物並在經過處理(EtOAc)前持續攪拌(室溫，3小時)。使殘留的油狀物經過快速色譜(20-50％的EtOAc/己烷)得到無法分離的2，4-二-O-乙醯基-1，6-脫水-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(a)和1，2，4-三-O-乙醯基-3-O-甲基-6-O-甲苯磺醯基-α-D-吡喃葡萄糖(b)的混合物(比例為3∶1)(466mg)，為淺黃色油狀物。通過觀察1H NMR波譜上的H-1和3-OMe信號的積分來計算該比例。部分1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.32(s，3H；OMe b)，3.45(s，3H；OMe a)；5.22(br s，1H；H-1b)，5.42(brs，1H；H-1a)。使兩種化合物的混合物(456mg)經過Zemplén脫乙醯基的一般方法，並使殘留物經過快速色譜(0-5％MeOH/EtOAc)得到標題化合物，為無色油狀物(162mg，33％，3個步驟)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ3.27-3.30(m，1H；H-3)，3.38(s，3H；OMe)，3.57-3.59(m，1H；H-2)，3.63-3.65(m，1H；H-4)，3.70(dd，1H，J5，6＝5.6，J6，6＝7.2Hz；H-6)，4.06(d，1H，J6，6＝7.2Hz；H-6)，4.48-4.51(m，1H；H-5)，4.39(br s，1H；H-1)。
步驟b1，6-脫水-4-O-苯甲基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖。
將在甲苯(18mL)中的1，6-脫水-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(155mg，0.88mmol)和Bu2SnO(241mg，0.97mmol)的混合物加熱回流(共沸除去水)，直到溶液為原來體積的一半。將混合物冷卻(80°)，加入BnBr(104μL，0.88mmol)和Bu4NBr(567mg，1.76mmol)並持續攪拌(o/n)。在溶劑蒸發前持續攪拌(10min)下用MeOH(2mL)和H2O(1mL)處理混合物。使殘餘物經過處理(EtOAc)和快速色譜(20-60％的EtOAc/己烷)得到兩種化合物。
首先，產生的標題化合物為無色油狀物(94mg，40％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.58(d，1H，J2，OH6.4Hz；OH)，3.32-3.43(m，5H；H-3，H-4，OMe)，3.52-3.57(m，1H；H-2)，3.68-3.72，4.01-4.04(2m，2H；H-6)，4.55-4.58(m，1H；H-5)，4.64(s，2H；CH2Ph)，5.39-5.40(m，1H；H-1)，7.28-7.36(m，5H；ArH)。
其次，產生的1，6-脫水-2-O-苯甲基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖為無色油狀物(91mg，39％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.90(brs，1H；OH)，3.31-3.34(m，4H；H-2，OMe)，3.36-3.38(m，1H；H-3)，3.58(br s，1H；H-4)；3.68(dd，1H；J5，66.0Hz，J6，67.2Hz；H-6)，4.08(dd，1H，J5，60.8Hz，J6，67.2Hz；H-6)，4.47-4.49(m，1H；H-5)，4.56，4.62(AB 四重峰，JA，B12.0Hz；CH2Ph)，5.40-5.41(m，1H；H-1)，7.26-7.36(m，5H；ArH)。
步驟c1，6-脫水-4-O-苯甲基-3-O-甲基-2-O-磺基-β-D-吡喃葡萄糖，鈉鹽(PG2030)根據一般過程，將1，6-脫水-4-O-苯甲基-3-O-甲基-β-D-吡喃葡萄糖(84mg，0.32mmol)磺化，在SEC之前經過快速色譜(50/2/1→10/2/1的EtOAc/MeOH/H2O)得到標題化合物，為淡黃色粉末(70mg，60％)；CE tm＝5.62min；1H NMR(400MHz，D2O)δ3.19(s，3H；OCH3)；3.43-3.45(m，1H；H-4)，3.52-3.53(m，1H；H-3)，3.57(dd，1H，J5，6＝5.9Hz，J6，6＝7.8Hz；H-6)，3.82(dd，1H，J5，6＝1.1Hz，J6，6＝7.8Hz；H-6)，3.97-3.99(m，1H；H-5)，4.59-4.61(m，3H；H-2，CH2Ph)，5.41(br s，1H；H-1)，7.22-7.34(m，5H；ArH)。
實施例9PG2012和PG2013步驟aN-苯甲基-N-(環己基乙醯氨基)-1，2，3，4-四-O-乙醯基-D-葡糖醛醯胺根據Ugi反應的一般過程，將D-葡萄糖醛酸(0.950g，4.89mmol)，以及以下三種試劑的溶液苄胺(在MeOH中2M，2.45mL，4.89mmol)，甲醛(在MeOH中2M，2.45mL，4.89mmol)和環己基胩(在MeOH中1M，4.89mL，4.89mmol)裝入反應器中，在室溫攪拌混合物19小時。減壓除去揮發物，在高真空下乾燥得到N-苯甲基-N-(環己基乙醯氨基)-D-葡糖醛醯胺，為黃色泡沫狀物。
根據乙醯化的一般過程，將上述粗製Ugi產物全乙醯化，在經過快速色譜(用2∶1至1∶1的己烷-EtOAc進行梯度洗脫)後得到標題化合物，為淺黃色泡沫狀物，1.929g，66％(兩個步驟，Rf＝0.37，1∶1的己烷-EtOAc)。由於存在端基異構體和旋轉異構體，1H NMR(CDCl3，400MHz)非常複雜。在將溫度升到55℃後，波譜也沒有簡化。但是，100℃在吡啶-d6，各組旋轉異構體在某種程度上融合成為更為簡化的結構，因此清楚地觀察到兩種端基異構體(α∶β比例＝69∶31)。1HNMR(CDCl3，400MHz，25℃)7.41-7.14(m，5H，Ph)，6.337(d，0.39H，J＝3.6)，6.300(d，0.29H，J＝3.6)，5.969(br d，0.52H，J＝8)，5.823(brd，0.09H，J＝8.4)，5.66-5.41(m，2.25H)，5.28-5.09(m，1.3H)，4.92-4.58(m，2.25H)，4.411(d，J＝10)和4.395(d，J＝14，0.55H)，4.271(d，0.11H，J＝9.6)，4.219(d，0.09H，J＝17.2)，4.125(d，0.17H，J＝14)，4.098(d，0.17H，J＝14.4)，3.994(d，J＝15.2)和3.963(d，J＝14.8，0.89H)，3.82-3.59(m，2.04H)，2.190，2.111，2.038，2.033，2.025，2.023，2.016，2.014，2.008，1.998，1.983，1.944和1.927(全部為單峰，12H，Ac)，1.89-1.55(m，5H，環己基-CH2)，1.41-0.83(m，5H，環己基-CH2)。1H NMR(CDCl3，400MHz，55℃)7.38-7.16(m，5H，Ph)，6.336(d，J＝3.2，)和6.153(d，J＝3.2，0.7H)，5.939(br d，0.6H，J＝6.8)，5.721(br d，0.2H，J＝7.2)，5.65-5.55(m，1.3H)，5.52-5.41(m，1H，)，5.28-5.10(m，1.4H)，4.85-4.58(m，2.4H)，4.48-4.40(m，0.6H)，4.318(d，0.1H，J＝9.2)，4.205(d，0.1H，J＝17.6)，4.02-3.93(m，0.9H)，3.84-3.62(m，2.2H)，2.179，2.090，2.021，2.012，2.001，1.989，1.983，1.975，1.968，1.959和1.935(全部為單峰，12H，Ac)，1.88-1.56(m，5H，環己基-CH2)，1.42-0.88(m，5H，環己基-CH2)。1H NMR(吡啶-d6，400MHz，δ7.22，100℃)只提供了典型的糖質子；剩餘的信號(除了乙酸酯單峰外)複雜並且表現為寬塊(broad lumps)。α-端基異構體，6.672(d，J＝3.6，glu-H1)，5.456(dd，J＝9.6，3.6，glu-H2)；β-端基異構體，6.206(d，J＝8.0，glu-H1)，5.741(t，J＝9.2，glu-H4或H5)，5.515(dd，J＝8.8，8.0，glu-H2)。
步驟bN-苯甲基-N-(環己基乙醯氨基)-1，2，3，4-四-O-磺基-α-D-葡糖醛醯胺，四鈉鹽(PG2012)和N-苯甲基-(環己基乙醯氨基)-1，2，3-三-O-磺基-α-D-葡糖醛醯胺，三鈉鹽(PG2013)根據脫乙醯的一般過程，將上述的四乙酸酯(0.441g，0.747mmol)脫乙醯基得到N-苯甲基-N-(環己基乙醯氨基)-D-葡糖醛醯胺，為淺黃色玻璃狀物(0.316g，100％)。
根據磺化的一般過程，將上述的四醇(0.257g，0.608mmol)磺化(使用三氧化硫吡啶複合物，60℃，19小時)。將殘留物與甲苯共蒸發，通過快速色譜[2.5×20cm，用EtOAc，MeCN，MeCN-Et3N(10∶1)，MeCN-Et3N-H2O(110∶2∶11)洗脫]進行純化。根據TLC和CE將級分分為兩個部分。將極性較小的部分通過快速色譜，LH20(x2)和離子交換色譜再次純化，凍幹後得到PG2013三硫酸鹽，為白色鬆散粉末(19.3mg，4.4％)。1H NMR(D2O，400MHz)兩種旋轉異構體比例為56∶44。主要的旋轉異構體，δ7.36-7.11(m，5H，Ph)，5.946(d，1H，J＝3.2，H1)，4.894(d，1H，J＝9.6，H5)，4.748(d，1H，J＝16，a-CH2)，4.685(d，1H，J＝16，a-CH2)，4.502(t，1H，J＝10.4，9.6，H3)，4.306(dd，1H，J＝9.6，3.6，H2)，4.005(t，1H，J＝9.6，8.8，H4)，3.869(s，2H，b-CH2)，3.42-3.32(m，1H，環己基-CHN)，1.64-1.36(m，5H，環己基-CH2)，1.20-0.92(m，5H，環己基-CH2)；次要的旋轉異構體，7.36-7.11(m，5H，Ph)，5.905(d，1H，J＝3.2，H1)，4.578(d，1H，J＝10，H5)，4.523(s，2H，c-CH2)，4.478(t，1H，J＝10.4，9.6，H3)，4.321(d，1H，J＝17.6，d-CH2)，4.281(dd，1H，J＝9.6，3.2，H2)，4.039(t，1H，J＝9.6，9.2，H4)，3.900(d，1H，J＝17.6，d-CH2)，3.42-3.32(m，1H，環己基-CHN)，1.64-1.36(m，5H，環己基-CH2)，1.20-0.92(m，5H，環己基-CH2)。13C NMR(D2O，100MHz，沒有參照)由於有兩種旋轉異構體各信號摺疊(double-up)，169.96(醯胺-CON)，169.75(醯胺-CON)，168.91(醯胺-CON)，168.85(醯胺-CON)，135.45(ipso-Ph)，135.20(ipso-Ph)，129.16，129.07，128.47，128.32，128.20和128.13(間-，鄰-和對-Ph)，95.67和95.65(glu-C1)，77.84和77.75(glu-C3)，73.76和73.71(glu-C2)，70.66和70.18(glu-C4)，69.23和68.70(glu-C5)，52.87(a-CH2)，51.12(c-CH2)，50.32(d-CH2)，50.02(b-CH2)，49.25和49.00(環己基-CHN)，31.89和31.86，25.08和25.05，24.47和24.38(環己基-CH2)。ES-LRMS(+ve，m/z)C21H27N2Na3O16S3required 728.02，found751(M+Na+)，729(M+H+)；ES-HRMS(+ve，m/z)M+Na+，C21H27N2Na4O16S3required 751.0113，found 750.1087；M+H+，C21H28N2Na3O16S3required729.0294，found 729.0242。
將極性部分通過LH20柱(x2)和離子交換柱純化，凍幹後得到PG2012四硫酸鹽，為灰白色粉末(7.6mg，1.5％)。1H NMR(D2O，400MHz)兩種旋轉異構體比例為70∶30。主要的旋轉異構體，δ7.34-7.16(m，5H，Ph)，5.954(d，1H，J＝3.6，H1)，5.235(d，1H，J＝9.6，H5)，4.904(d，1H，J＝15.6，a-CH2)，4.67-4.57(與水重疊，1H，H3)，4.536(t，1H，J＝9.6，8.8，H4)，4.466(d，1H，J＝15.6，a-CH2)，4.394(dd，1H，J＝9.8，3.4，H2)，3.927(d，1H，J＝16.8，b-CH2)，3.749(d，1H，J＝16.8，b-CH2)，3.30-3.20(m，1H，環己基-CHN)，1.65-1.35(m，5H，環己基-CH2)，1.18-0.92(m，5H，環己基-CH2)；次要的旋轉異構體，7.34-7.16(m，5H，Ph)，5.912(d，1H，J＝3.4，H1)，4.77-4.72(m，2H，H5和H3或H4)，4.689(d，1H，J＝15.2，c-CH2)，4.67-4.56(與水重疊，1H，H4或H3)，4.373(dd，1H，J＝9.8，3.4，H2)，4.256(d，1H，J＝18.4，d-CH2)，4.215(d，1H，J＝15.2，c-CH2)，3.936(d，1H，J＝18.4，d-CH2)，3.36-3.26(m，1H，環己基-CHN)，1.65-1.35(m，5H，環己基-CH2)，1.18-0.92(m，5H，環己基-CH2)。13C NMR(D2O，100MHz，沒有參照)主要的旋轉異構體，172.35(醯胺-CON)，171.69(醯胺-CON)，137.22(ipso-Ph)，131.71和131.58(間-和鄰-Ph)，131.11(對-Ph)，97.68(glu-C1)，78.08(glu-C4)，77.60(glu-C3)，76.43(glu-C2)，70.10(glu-C5)，55.81(a-CH2)，53.17(b-CH2)，51.77(環己基-CHN)，34.17(環己基-CH2)，27.56(環己基-CH2)，27.13(環己基-CH2)；次要的旋轉異構體(只顯示了典型的峰)，97.65(glu-C1)，78.22(glu-C4)，77.77(glu-C3)，76.33(glu-C2)，71.01(glu-C5)，53.26(d-CH2)，53.79(c-CH2)，52.10(環己基-CHN)，34.28(環己基-CH2)，27.52(環己基-CH2)，27.08(環己基-CH2)。ES-MS(+ve，m/z)C21H26N2Na4O19S4required 829.96，found 853(M+Na+)，831(M+H+)。ES-HRMS(+ve，m/z)M+Na+，C21H26N2Na5O19S4required852.9501，found 852.9334；M+H+，C21H27N2Na4O19S4required 830.9682，found 830.9635。
實施例10PG2064步驟a2-(N-乙醯基-N-環己基)氨基-N-(甲基2，3，4-三-O-苯甲基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖-6-基)乙醯胺根據Ugi反應的一般過程，將以下四種試劑的溶液乙酸(在MeOH中2M，60μL，119μmol)，環己胺(在MeOH中2M，60μL，119μmol)，甲醛(在MeOH中2M，60μL，119μmol)以及2，3，4-三-O-苯甲基-6-脫氧-6-異氰基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(在CHCl3中0.721M，150μL，108μmol)裝入4mL樣品瓶中，在60℃將混合物攪拌19小時。減壓下除去揮發物並且通過快速色譜進行純化(用4∶1至1∶4的己烷-EtOAc進行梯度洗脫)得到標題化合物，為無色樹膠狀物，42mg，60％(Rf＝0.49，EtOAc)。1H NMR(CDCl3，400MHz)兩種旋轉異構體比例為72∶28。δ7.38-7.26(m，15H，3×C6H5)，6.933(t，72％×1H，J＝4.4，主要旋轉異構體的NH)，6.357(t，28％×1H，J＝5.8，主要旋轉異構體的NH)，4.91-4.41(m，7H，糖-H1和3×PhCH2)，4.04-3.42(m，9H，糖-H2-6，NCH2CO和環己基-CH)，3.305(s，72％×3H，主要旋轉異構體的CH3O)，3.266(s，28％×3H，次要旋轉異構體的CH3O)，2.067(s，72％×3H，主要旋轉異構體的CH3O)，2.012(s，28％×3H，主要旋轉異構體的CH3O)，1.85-1.00(m，10H，環己基-CH2)。
步驟b2-(N-乙醯基-N-環己基)氨基-N-(甲基6-脫氧-2，3，4-三-O-磺基-α-D-吡喃甘露糖-6-基)乙醯胺，三鈉鹽(PG2064)根據苄基醚脫保護的一般過程，在50psi的氫氣氣氛下將在MeOH(2mL)中的上述三苄基醚(42mg，0.065mmol)，20％活性炭載鈀(22mg)的混合物攪拌10小時。經過一般處理得到為無色樹膠狀物的三醇中間體。根據磺化的一般過程，將三醇磺化(三氧化硫三甲胺複合物，60℃，19小時)，將粗製物蒸發。通過連續SEC(sequential SEC)(Bio Gel P-2，隨後用LH20)將殘留物純化。通過離子交換柱使得純化產物轉化為鈉鹽，凍幹後得到標題化合物，為白色鬆散的粉末(3.1mg，7.0％，兩個步驟)。1H NMR(D2O，內對照(int.ref.)丙酮為2.05，400MHz)兩種旋轉異構體比例為63∶37。δ4.844(s，1H，糖-H1)，4.678(s，1H，糖-H2)，4.51-4.45(m，1H，糖-H3)，4.240(t，37％×1H，J＝9.6，次要旋轉異構體的糖-H4)，4.214(t，63％×1H，J＝9.6，主要旋轉異構體的糖-H4)，3.980(s，37％×2H，次要旋轉異構體的COCH2N)，3.825(s，63％×2H，主要旋轉異構體的COCH2N)，3.78-3.59(m，3H，糖-H5，一個糖(one sugar)-H6和環己基-CH)，3.31-3.17(m，4H，一個糖-H6和CH3O[3.253，s，3H])，2.060(s，67％×3H，主要旋轉異構體的CH3CO)，1.900(s，33％×3H，次要旋轉異構體的CH3CO)，1.70-0.88(m，10H，環己基-CH2)。
實施例11PG2068步驟a
根據Ugi反應的一般過程，將琥珀酸單甲基酯(monomethylsuccinate)(15.7mg，0.119mmol)和以下三種試劑的溶液乙胺(在MeOH中2M，60μL，119μmol)，甲醛(在MeOH中2M，60μL，119μmol)以及2，3，4-三-O-苯甲基-6-脫氧-6-異氰基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(在CHCl3中0.721M，150μL，108μmol)裝入2mL樣品瓶中，在室溫將混合物攪拌19小時。減壓下除去揮發物並且通過快速色譜進行純化(用1∶1至1∶4的己烷-EtOAc，然後使用EtOAc進行梯度洗脫)得到純化產物，為無色樹膠狀物(46.8mg，65％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)兩種旋轉異構體比例為73∶27。δ7.38-7.25(m，15H，Ph)，6.598(t，73％×1H，J＝6，NH)，6.529(t，27％×1H，J＝6，NH)，4.93-4.61(m，7H，糖-H1和3xPhCH2)，4.14-3.24(m，16H，糖6×H，NCH2CO，2xCH3O[單峰，在3.660和3.301，73％；3.648和3.276，27％]和乙基-CH2)，2.70-2.42(m，4H，COCH2CH2CO)，1.138(t，73％×3H，J＝7，乙基-CH3)，1.014(t，27％×3H，J＝7，乙基-CH3)。13C(100MHz，CDCl3，δ77.0)主要的旋轉異構體，173.32，171.73，168.94，138.20，138.17，138.09，128.22，128.18，128.10，127.76，127.63，127.49，127.46，98.94，79.97，75.38，75.01，74.84，73.01，72.01，70.10，54.63，51.63，49.84，43.59，39.63，28.99，27.24，13.45。次要的旋轉異構體(只有沒有重疊的峰)，173.26，171.54，168.01，128.27，127.69，127.55，98.98，79.85，75.14，74.40，72.86，71.92，69.97，54.74，50.91，49.72，42.10，28.90，27.83，12.29。
步驟b(PG2068)根據苄基醚脫保護的一般過程，在50psi的氫氣氣氛下將在MeOH(3mL)中的上述的三苄基醚(46.8mg，0.0706mmol)，20％活性炭載鈀(30mg)的混合物攪拌2小時。經過一般處理得到為無色樹膠狀物的三醇中間體。根據磺化的一般過程，將三醇磺化(三氧化硫三甲胺複合物，60℃，19小時)。將殘留物溶解在1M NaOH(3mL，0.16M)中。將混合物在室溫攪拌過夜，減壓濃縮。通過連續SEC將殘留物純化(BioGel P-2，隨後用LH20)。經由通過離子交換柱使得純化產物轉化為鈉鹽，得到PG2068，為白色粉末(4.9mg，9.8％，兩個步驟)。1H NMR(D2O，內部參照丙酮在2.05，400MHz)兩種旋轉異構體比例為70∶30。δ4.86-4.84(m，1H，糖-H1)，4.69-4.67(m，1H，糖-H2)，4.50-4.46(m，1H，糖-H3)，4.28-4.19(m，1H，糖-H4)，4.072(s，30％×2H，次要旋轉異構體的COCH2N的2H)，3.987(d，35％×2H，J＝16.8，主要旋轉異構體COCH2N的1H)，3.815(d，35％×2H，J＝16.8，主要旋轉異構體COCH2N的1H)，3.79-3.69(m，2H，糖-H5和一個糖-H6)，3.44-3.18(m，6H，一個糖-H 6，乙基-CH2和CH3O[3.245，s，3H])，2.633(t，J＝6.8)和2.45-2.37(m，總共4H，COCH2CH2CO2)，1.054(t，70％×3H，J＝7.2，CH3O)，0.906(t，30％×3H，J＝7.2，CH3O)。
實施例12PG2075步驟a將3-氯代苯乙酸(223mg，1.307mmol)溶解在MeCN(3mL)中。加入氨溶液(28％，0.26mL，3.8mmol)。將混合物渦旋片刻，然後真空蒸發。將殘留物在MeCN(3mL)中混懸，過濾，然後用MeCN洗滌白色固體，凍幹得到3-氯代苯乙酸銨(0.195g，80％)。
根據Ugi反應的一般過程，將上述銨鹽(22.5mg，0.120mmol)和以下兩種試劑的溶液甲醛(在MeOH中2M，60μL，119μmol)以及2，3，4，6-四-O-苯甲基-α-D-吡喃甘露糖苷2-異氰基乙基酯(在CHCl3中0.762M，157μL，120μmol)裝入2mL樣品瓶中，在室溫將混合物攪拌19小時。減壓下除去揮發物並且通過快速色譜進行純化得到純化產物，為無色樹膠狀物(34.8mg，37％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.39-7.06(m，24H，4×C6H5和1×C6H4)，6.731(t，1H，J＝6.0，NH)，4.878(d，1H，J＝10.8，a-CH2)，4.844(d，1H，J＝2.0，糖-H1)，4.770(d，1H，J＝12.4，b-CH2)，4.723(d，1H，J＝12.4，b-CH2)，4.640(s，2H，c-CH2)，4.589(d，1H，J＝11.6，d-CH2)，4.535(d，1H，J＝11.6，d-CH2)，4.505(d，1H，J＝10.8，a-CH2)，4.446(d，1H，J＝14.8，e-CH2)，4.362(d，1H，J＝14.8，e-CH2)，3.90-3.51(m，12H)，3.38-3.29(m，1H)。13C(100MHz，CDCl3，δ77.0)169.67，166.81，138.27，138.11，137.70，135.16，134.31，129.82，129.40，128.34，128.31，128.01，127.85，127.78，127.70，127.68，127.60，127.53，127.46，98.90，79.96，75.08，75.04，74.71，73.58，72.73，72.19，72.13，69.78，68.49，63.17，40.25，39.27。
步驟b(PG2075)根據苄基醚脫保護的一般過程，在50psi的氫氣氣氛下將在MeOH(2mL)中的上述的四苄基醚(34.8mg，0.0439mmol)，20％活性炭載鈀(26mg)的混合物攪拌2小時。經過一般處理得到為無色樹膠狀物的四醇中間體。根據磺化的一般過程，將上述四醇磺化。通過SEC將殘留物純化(Bio-Gel P-2)。經由通過離子交換柱使得純化產物轉化為鈉鹽，凍幹後得到PG2075，為白色鬆散粉末(10.6mg，28％，兩個步驟)。1H NMR(D2O，內部參照丙酮在2.05，400MHz)δ7.30-7.11(m，4H，Ar)，5.00-4.97(m，1H，糖-H1)，4.72-4.28(m，3H，糖-H2，H3和H4)，4.21-3.30(m，11H，糖-H5，H6和4×CH2)。
實施例13PG2014步驟a根據Ugi反應的一般過程，將2-(苯甲基3，4，6-三-O-苯甲基-α-D-吡喃甘露糖苷-2-基)乙酸(50mg，0.0835mmol)和以下三種試劑的溶液苄胺(在MeOH中2M，41.8μL，0.0835mmol)，甲醛(在MeOH中2M，41.8μL，0.0835mmol)以及2，3，4，6-四-O-苯甲基-α-D-吡喃甘露糖苷2-異氰基乙基酯(在MeOH中0.415M，201.4μL，0.0835mmol)裝入2mL樣品瓶中，在室溫將混合物攪拌19小時。經過一般處理得到產物，為無色樹膠狀物(38.9mg，36％)。1H NMR(400MHz)在醯胺CO-NH單鍵周圍的兩種旋轉異構體比例為66∶34。δ7.40-7.05(m，45H，9×C6H5)，6.66(t，0.66H，J＝5.6，CONH-主要的旋轉異構體)和6.40(t，0.34H，J＝5.4，CONH-次要的旋轉異構體)，5.104(d，0.66H，J＝1.2，H1I-主要的旋轉異構體)和5.046(s，0.34H，H1I-次要的旋轉異構體)，4.86-4.20(m，21H)，3.97-3.48(m，16H)，3.36(q，0.66H，J＝5.6，主要的旋轉異構體)和3.26(q，0.34H，J＝5.6，次要的旋轉異構體)。
步驟b(PG2014)。
根據苄基醚脫保護的一般過程，在50psi的氫氣氣氛下將在EtOH(4mL)中的上述八苄基醚(35mg，0.0267mmol)，20％活性炭載鈀(10mg)的混合物攪拌2小時。經過一般處理得到為無色樹膠狀物的八醇(octol)中間體。根據磺化的一般過程，將上述辛醇磺化(三氧化硫三甲胺複合物，60℃，19小時)。通過SEC將殘留物純化(Bio-GelP-2)。經由通過離子交換柱使得純化產物轉化為鈉鹽，得到PG2014，為白色粉末(16.6mg，44％，兩個步驟)。1H NMR(D2O，400MHz，由於兩種旋轉異構體而複雜)δ7.32-7.14(m，5H，Ph)，5.80-5.66(m，0.5H)，5.44-5.39(m，0.5H)，5.04-4.96(m，1.5H)，4.80-4.20(m，9H，與水重疊)，4.18-3.78(m，7.5H)，3.76-3.46(m，1.5H)，3.42-2.98(m，3.5H)。
實施例14PG2016步驟a根據Ugi反應的一般過程，將反式-1，4-二氨基環己烷(6.3mg，0.055mmol)和以下三種試劑的溶液2-(甲基2，3，4-三-O-苯甲基α-D-吡喃甘露糖苷-6-基)乙酸(在MeOH中0.91M，121μL，0.11mmol)，甲醛(在MeOH中2M，55μL，0.11mmol)以及環己基胩(在MeOH中1M，110μL，0.11mmol)裝入2mL樣品瓶中，在室溫將混合物攪拌5天。減壓除去揮發物，通過快速色譜(用2∶1至1∶4的己烷-EtOAc進行梯度洗脫)得到產物，為無色樹膠狀物，33.0mg，43％(Rf＝0.24，DCM-MeOH95∶5或Rf＝0.48，MeCN-EtOAc 1∶1)。1H NMR(CDCl3，400MHz，由於兩種旋轉異構體而複雜)δ7.50-7.20(m，30H，Ph)，6.62(br s，1.1H)，6.48(br s，0.38H)，5.96(br d，0.26H，J＝8)，5.79(br d，0.26H，J＝10)，4.92-4.85(m，2H)，4.78-4.56(m，12H)，4.28-4.22(m，2.8H)，4.35-4.06(m，1.6H)，3.94-3.56(m，19.6H)，3.28(s，6H，OMe)，1.88-1.42(m，16H)，1.36-1.00(m，12H)。
步驟b.(PG2016)。
根據苄基醚脫保護的一般過程，在1個大氣壓的氫氣氣氛下將在MeOH(2.8mL)中的上述的六苄基醚(33mg，0.0235mmol)，和20％活性炭載鈀(65mg)的混合物攪拌5天。經一般處理得到為無色樹膠狀物的六醇中間體。根據磺化的一般過程，將上述六醇磺化。通過連續柱色譜法(在Bio-Gel P-2上的進行SEC，隨後通過離子交換柱)將殘留物純化得到PG2016，為白色粉末(12.2mg，35％)。1H NMR(D2O，400MHz)δ4.97-4.92(m，2H，man-H1)，4.77-4.75(m，2H，man-H2)，4.58-4.52(m，2H，man-H3)，4.46-4.08(m，6H，含有man-H4在4.46-4.36，和OCH2CO)，3.98-3.80(m，8H，man-H5，man-H6和NCH2CO)，3.80-3.32(m，6H，含有man-H6在3.80-3.64，和環己基-CH)，3.318(s，6H，OMe)，1.82-1.34(m，18H，環己基-CH2)，1.26-1.00(m，10H，環己基-CH2)。ES-MS(+ve，m/z)C40H62N4Na6O34S6required 1472.10，found1495(M+Na+)，1473(M+H+)。ES-HRMS(+ve，m/z)M+Na+，C40H62N4Na7O34S6required 1495.0853，found 1495.0957；M+H+，C40H63N4Na6O34S6required1473.1034，found 1473.1082。
實施例15PG2015步驟a根據Ugi反應的一般過程，將3，3-二甲基戊二酸(7.1mg，0.0443mmol)和以下三種試劑的溶液2，3，4，6-四-O-苯甲基-α-D-吡喃甘露糖苷3-氨基丙基酯(在MeOH中0.642M，138μL，0.0886mmol)，甲醛(在MeOH中2M，44.3μL，0.0886mmol)以及環己基胩(在MeOH中1M，88.6μL，0.0886mmol)裝入2mL樣品瓶中，在室溫將混合物攪拌5天。減壓除去揮發物，通過快速色譜(用2∶1至1∶4的己烷-EtOAc進行梯度洗脫)得到產物，為無色樹膠狀物，32.3mg，46％(Rf＝0.45，己烷-EtOAc 1∶3)。1H NMR(CDCl3，400MHz，由於兩種旋轉異構體而非常複雜)δ7.38-7.21(m，40H，Ph)，7.003(d，0.41H，J＝7.7)，6.930(br s，0.21H)，6.726(d，0.4H，J＝8.4)，6.597(d，0.73H，J＝8.8)，6.487(br s，0.25H)，4.85-4.78(m，4H)，4.76-4.59(m，10H)，4.54-4.45(m，4H)，4.00-3.62(m，20H)，3.46-3.14(m，6H)，2.52-2.22(m，4H)，1.90-1.52(m，15H)，1.34-1.00(m，15H)。
步驟b(PG2015)。
根據苄基醚脫保護的一般過程，在1個大氣壓的氫氣氣氛下將在MeOH(2.8mL)中的上述的六苄基醚(32.3mg，0.0202mmol)，20％活性炭載鈀(41mg)的混合物攪拌5天。經過一般處理得到生為無色樹膠狀物的八醇中間體。根據磺化的一般過程，將上述的辛醇磺化。通過SEC(在Bio-Gel P-2上)將殘留物純化得到PG2015，為白色粉末(12.6mg，37％)。1H NMR(D2O，400MHz)δ5.020(d，2H，J＝1.6，man-H1)，4.759(br s，2H，man-H2)，4.66-4.56(m，2H，man-H3，與水重疊)，4.46-4.41(m，2H，man-H6)，4.265(t，2H，J＝9.6，9.2，man-H4)，4.10-3.96(m，4H，man-H5和man-H6)，4.05-3.14(m，14H，NCH2CO，環己基-CH和NCH2CH2CH2O)，2.50-2.11(m，4H，CCH2CO)，1.84-1.42(m，14H，環己基-CH2和NCH2CH2CH2O)，1.24-0.93(m，16H，環己基-CH2和Me)。ES-MS(+ve，m/z)C41H93N11O37S7(7xSO3NH4)required 1556，found1578(M+Na+)，1556(M+H+)。ES-HRMS(+ve，m/z)M+H+C41H93N11O37S7required 1556.3857，found 1556.3783。
實施例16PG21552，6-二-O-苯甲基-3，4-二-O-磺基-β-D-吡喃半乳糖苷乙酯，二鈉鹽(PG2155)由2，6-二-O-苯甲基-3，4-二-O-磺基-β-D-吡喃半乳糖苷乙酯[23]通過一般的磺化過程獲得標題化合物，為無色粉末。1H NMR(400MHz，D2O)δ1.10(dd，3H；CH2CH3)；2.49-2.66(m，2H，CH2CH3)；3.59(dd，1H，J1，22，39.7Hz；H-2)；3.65(dd，1H，J5，6a3.3，J6a，6b11.0Hz；H-6a)；3.68(dd，1H，J5，6b4.0Hz；H-6b)；3.83(m，1H；H-5)；4.36(dd，1H，J3，43.0Hz；H-3)；4.46(s，2H；CH2Ph)；4.48(d，1H；H-1)；4.60，4.75(AB四重峰，J10.3Hz；CH2Ph)；4.85(dd，1H；J4，50.0Hz；H-4)；7.22-7.29，7.37-7.39(2m，10H；ArH)。
實施例17PG2163步驟a4-O-烯丙基-6-疊氮基-6-脫氧-2，3-二-O-異亞丙基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯用(±)-樟腦-10-磺酸(16mg，0.0709mmol，5mol％)處理在2，2-二甲氧基丙烷(4.7mL，0.3M)中的6-疊氮基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(311mg，1.419mmol)的溶液。將混合物在室溫攪拌1h。TLC顯示完全轉化為產物(Rf＝0.40，EtOAc-己烷＝17∶83)。通過加入飽和Na2CO3(飽和水溶液)使混合物鹼化，真空下蒸發。用EtOAc(30mL)萃取殘留物，用鹽水洗滌EtOAc溶液，乾燥(MgSO4)。過濾，蒸發得到樹膠狀物，將其和甲苯共蒸發一次。將最終的無色樹膠狀物溶解在無水DMF(3.5mL，0.4M)中，和NaH(在礦物油中60％的分散體，163mg，4.257mmol，3當量)攪拌1小時。加入烯丙基溴(360μL，4.257mmol，3當量)，將混合物在室溫攪拌另外6小時，用甲醇(1mL)處理，蒸發至幹。通過二氧化矽柱色譜(2.5×18cm，用1∶10至1∶6的EtOAc-己烷進行洗脫)將殘留物純化得到標題化合物，為無色樹膠狀物(0.281mg，經由兩個步驟66％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)5.85(m，1H，烯丙基-2′)，5.23(ddd，1H，J2-3′反式＝17.2，J3′-gem＝3.6，J1′-3′＝1.6，H3′反式)，5.17-5.13(m，1H，H3′順式)，4.89(s，1H，H1)，4.35(dddd，1H，J1′gem＝12.4，J1′-2′＝5.2，J＝1.6，H1′)，4.16(dd，1H，J2-3＝5.6，J3-4＝7.2，H3)，4.09(d，1H，H2)，4.05(dddd，1H，H1′)，3.67(ddd，1H，J4-5＝10.4，J5-6ax＝6.8，J5-6eq＝2.4，H5)，3.48(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，H6eq)，3.40(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，J5-6ax＝6.8，H6ax)，3.33(dd，1H，H5)，1.50(s，3H，Me)，1.30(s，3H，Me)。13C NMR(CDCl3，100MHz)134.4，117.1，109.2，98.0，78.2，76.2，75.6，71.5，68.0，54.9，51.6，27.8，26.1。
步驟b4-O-烯丙基-6-疊氮基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯將4-O-烯丙基-6-疊氮基-6-脫氧-2，3-二-O-異亞丙基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(56mg，0.187mmol)溶解在MeCN-MeOH-H2O(分別為3mL，3mL和0.2mL)中，用對甲苯磺酸一水合物(7mg，0.0374mmol，20mol％)進行處理。將混合物在室溫攪拌5h，加入三乙胺(0.4mL)。將混合物蒸發，通過柱色譜(二氧化矽1×18cm，用1∶6至2∶1的EtOAc-己烷進行洗脫)進行純化得到產物，為無色蠟狀固體(34.8mg，72％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)5.91(m，1H，烯丙基-H2′)，5.28(ddd，1H，J2′-3′反式＝16.8，J3′反式-3′順式＝3.0，J1′-3′＝1.6，烯丙基-H3′反式)，5.20(ddd，1H，J2′-3′順式＝10.0，J3′反式-3′順式＝3.0，J1′-3′＝1.6，烯丙基-H3′順式)，4.72(ddd，1H，J1-2＝2.0，H1)，4.28(dddd，1H，Jgem＝12.4，J1′-2′＝5.6，J＝1.6，烯丙基-1′)，4.13(dddd，1H，烯丙基-1′)，3.92(dd，1H，J2-3＝3.6，H2)，3.88(dd，1H，J3-4＝9.6，H3)，3.70(ddd，1H，J4-5＝9.6，J5-6ax＝5.6，J5-6eq＝2.8，H5)，3.54-3.44(m，3H，H4，H6ax和H6eq)，3.39(s，3H，MeO)，2.62(br s，2H，OH)。
步驟c4-O-烯丙基-6-疊氮基-2-O-苯甲基-6-脫氧-2，3-二-O-磺酸基(sulfonato)-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二鈉鹽(PG 2163)根據常規過程將4-O-烯丙基-6-疊氮基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯磺化得到標題化合物，為白色粉末，55mg(89％)。Rf＝0.20(EtOAc-MeOH-H2O＝10∶2∶1)。1H NMR(D2O，400MHz)5.88-5.76(m，1H，烯丙基-2′)，5.20(d，1H，J2′-3′反式＝17.2，烯丙基-3′反式)，5.12(d，1H，J2′-3′順式＝10.0，烯丙基-3′順式)，4.91(s，1H，H1)，4.65(brs，1H，J2-3＝3.2，H2)，4.48(dd，1H，J2-＝3.2，J3-4＝9.2，H3)，4.21(dd，1H，Jgem＝11.6，J1′-2′＝5.6，烯丙基-1′)，4.00(dd，1H，J1′-2′＝6.4，烯丙基-1′)，3.71-3.67(m，1H，H5)，3.58(dd，1H，J6eq-6ax＝13.6，J5-6eq＝2.0，H6eq)，3.58(dd，1H，J4-5＝9.6，H4)，3.46(dd，1H，J6eq-6ax＝13.6，J5-6ax＝5.6，H6ax)，3.30(s，3H，MeO)。13C NMR(D2O，100MHz，內MeOH為49.05ppm)133.9，119.2，98.4，76.1，75.3，74.2，73.1，70.7，55.4，50.8。
實施例18PG2160，PG2161和PG2173步驟a6-疊氮基-6-脫氧-2，3-二-O-苯亞基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯將6-疊氮基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(1.011g，4.61mmol)溶解在無水DMF(9mL)和乙腈(9mL)中。按順序加入苯甲醛二甲基乙縮醛(1.38mL，9.22mmol，2當量)和(±)-樟腦-10-磺酸(214mg，0.922mmol，20mol％)。在60℃(外部)將混合物在室內真空(housevacuum)下攪拌過夜，通過rotavap去除揮發性物質。將殘留物裝填到矽膠上，通過柱色譜進行純化(二氧化矽2.5×20cm，用10∶1，9∶1，7∶1，5∶1，4∶1，3∶1至2∶1的己烷-乙酸乙酯進行梯度洗脫)。將各級分合併成兩部分。極性小的部分(Rf＝0.55和0.51，己烷-EtOAc 3∶1)為4-乙縮醛的混合物，極性部分主要為4-OH產物。將混合物合併，蒸發。將殘留物重新溶解在二氯甲烷(50mL)中，與1M氯化銨溶液一起攪拌(50mL)。極性小的斑點逐漸消失，轉化為極性產物。但是在40min後轉化沒有進一步提高。因此將二氯甲烷相分離，與0.5M HCl溶液(50mL)攪拌另外20min。TLC顯示沒有進一步的變化。將DCM相分離，用鹽水-1M NaOH洗滌，乾燥(MgSO4)。將乾燥的DCM溶液過濾，蒸發，通過如上的二氧化矽矽柱將殘留物純化，得到標題化合物，為無色樹膠狀固體(0.543g，38％，Rf＝0.29，EtOAc-己烷＝1∶3)。1H NMR(CDCl3，400MHz)兩種苯亞甲基差向異構體的比例為1∶1。7.49-7.36(m，5H，C6H5)，6.126和5.902(2xs，1H，苯亞甲基-CH)，5.066和4.987(2xs，1H，糖-H1)，4.396(dd，0.5H，J＝6.4，5.6，糖-H3)，4.248(dd，0.5H，J＝6.4，6.0，糖-H3)，4.214(dd，0.5H，J＝6.0，糖-H2)，4.102(dd，0.5H，J＝4.8，糖-H2)，3.86-3.38(m，4H)，3.466和3.424(2xs，3H，CH3O)，2.984(br s，1H，OH)。13CNMR(CDCl3，100MHz)138.01，136.41，129.38，128.99，128.24，128.12，126.41，125.86，103.85，102.60，97.74，97.53，79.36，77.75，77.47，74.81，70.00，68.91，68.42，66.97，54.78，51.18和51.10。
步驟b6-疊氮基-3-O-苯甲基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯和6-疊氮基-2-O-苯甲基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯用氰基硼氫化鈉(589mg，9.37mmol，12當量)和分子篩3_(1g)處理在DMF(7.8ml，0.1M)中的6-疊氮基-6-脫氧-2，3-二-O-苯亞甲基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(240mg，0.781mmol)中的在溶液。將混合物在室溫攪拌20min，然後在70℃攪拌同時緩慢加入TFA(0.361mL，4.686mmol，6當量)。加完後，將混合物在70℃攪拌6小時。冷卻至0℃，通過加入固體Na2CO3使其鹼化。將冷的混合物過濾，用EtOAc洗滌濾餅。用飽和Na2CO3萃取濾液和洗滌液一次。蒸發得到樹膠狀物，通過柱色譜(二氧化矽柱2.5×18cm，用1∶4至1∶1的EtOAc-己烷進行洗脫)將其純化得到6-疊氮基-3-O-苯甲基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(無色樹膠狀物，64mg，26％，Rf＝0.45，EtOAc-己烷＝1∶1)；1HNMR(CDCl3，400MHz)7.41-7.32(m，5H，Ph)，4.78(d，1H，J1-2＝1.6，H1)，4.70(d，1H，Jgem＝12.0，CH2)，4.56(d，1H，CH2)，4.02(dd，1H，J2-3＝3.2，H2)，3.78(dd，1H，J3-4＝8.4，J4-5＝10.0，H4)，3.73(ddd，1H，J5-6ax＝6.0，J5-6eq＝3.2，H5)，3.64(dd，1H，H3)，3.52(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，H6eq)，3.47(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，J5-6ax＝6.0，H6ax)，3.40(s，3H，MeO)，2.21(br s，2H，2xOH)和6-疊氮基-2-O-苯甲基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(無色蠟狀固體，62mg，26％，Rf＝0.27，EtOAc-己烷＝1∶1)。1H NMR(CDCl3，400MHz)7.38-7.28(m，5H，Ph)，4.78(s，1H，H1)，4.71(d，1H，J＝11.6，CH2)，4.53(d，1H，J＝11.6，CH2)，3.75-3.61(m，4H，H2，H3，H4和H5)，3.53(dd，1H，J＝13.2，1.5，H6eq)，3.46-3.40(dm，1H，J＝13.2，H6ax)，3.38(s，3H，MeO)，2.83(br s，2H，2xOH)。
步驟c6-疊氮基-2-O-苯甲基-6-脫氧-2，3-二-O-磺酸基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二鈉鹽(PG2160)根據常規方法將6-疊氮基-2-O-苯甲基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯磺化得到標題化合物，為白色粉末，64mg，59％。1H NMR(D2O，400MHz)7.38-7.26(m，5H，Ph)，4.72(d，1H，Jgem＝12.0，CH2Ph)，4.59(d，1H，J1-2＝2.0，H1)，4.58(d，1H，CH2Ph)，4.49(d，1H，J2-3＝2.8，J3-4＝9.6，H3)，4.44(dd，1H，J4-5＝9.6，H4)，4.07(dd，1H，H2)，3.78(ddd，1H，J5-6ax＝5.6，J5-6eq＝2.4，H5)，3.62(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，H6eq)，3.51(dd，1H，J6ax-6eq＝13.2，J5-6ax＝5.6，H6ax)，3.22(s，3H，MeO)。
步驟d；6-疊氮基-3-O-苯甲基-6-脫氧-2，4-二-O-磺酸基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二鈉鹽(PG2161)根據常規方法將6-疊氮基-3-O-苯甲基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯(64mg)磺化得到標題化合物，為白色粉末，58mg，66％。1HNMR(D2O，400MHz)7.42-7.21(m，5H，Ph)，4.92(d，1H，J1-2＝2.4，H1)，4.67(d，1H，Jgem＝12.4，CH2Ph)，4.60(d，1H，CH2Ph)，4.56(dd，1H，J2-3＝3.2，H2)，4.35(dd，1H，J3-4＝9.6，J4-5＝9.6，H4)，3.80(dd，1H，H3)，3.75(ddd，1H，J5-6ax＝6.0，J5-6eq＝2.8，H5)，3.66(dd，1H，J6ax-6eq＝13.4，H6eq)，3.54(dd，1H，J6ax-6eq＝13.4，J5-6ax＝6.0，H6ax)，3.29(s，3H，MeO)。
步驟e6-[1′-(4-苯基)三唑基]-2-O-苯甲基-6-脫氧-2，3-二-O-磺酸基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二鈉鹽(PG2173)使用苯基乙炔使6-疊氮基-2-O-苯甲基-6-脫氧-2，3-二-O-磺酸基-α-D-吡喃甘露糖苷甲酯二鈉鹽經過Huisgen反應的一般過程得到標題化合物，為白色粉末6.8mg，67％，Rf＝0.34，EtOAc-MeOH-H2O＝10∶2∶1。1H NMR(D2O，400MHz)8.26(s，1H，三唑)，7.64-7.60(m，2H)，7.37-7.15(m，8H)，4.89(dd，1H，J＝14.4，2.8，H 3)，4.67(d，1H，J＝12.0，PhCH2)，4.57-4.39(m，5H，PhCH2，H1，H4和H6eq和H6ax)，4.04(dd，1H，J＝2.8，2.0，H2)，3.99(ddd，1H，J＝9.2，8.8，2.4，H5)，2.83(s，3H，MeO)。
實施例19PG21706-疊氮基-2，3-O-二磺酸基-6-脫氧-4-O-(1-萘基甲基)-α-D-吡喃甘露糖苷烯丙基酯二鈉鹽(包含10％的2-萘基甲基異構體)(PG2170)由6-疊氮基-6-脫氧-α-D-吡喃甘露糖苷烯丙酯起始與PG2163相似製備，得到標題化合物，為白色粉末87.5mg，87％，Rf＝0.28(主要)，0.22(次要)，EtOAc-MeOH-H2O＝10∶2∶1。1H NMR(D2O，400MHz)7.87(d，1H，J＝8.4，萘基)，7.65-7.54(m，2H，萘基)，7.33-7.19(m，4H，萘基)，5.68(ddt，1H，J烯丙基2′-3′反式＝22.0，J烯丙基2′-3′順式＝10.8，J烯丙基1′-2′＝6.0，烯丙基-2′)，5.23(AB四重峰，2H，Jgem＝12.0，萘基-CH2)，5.17-5.02(m，3H，烯丙基-3′和H1)，4.74(dd，1H，J1-2＝2.0，J2-3＝3.2，H2)，4.64(d，1H，J3-4＝9.6，H 3)，3.90(dd，1H，J烯丙基1′gem＝13.2，J＝6.0，烯丙基-1′)，3.81(dd，1H，烯丙基-1′)，3.64(t，1H，J4-5＝9.6，H4)，3.39(ddd，1H，J5-6eq＝2.0，J5-6ax＝5.2，H5)，2.78(dd，1H，J6eq-6aX＝13.6，H6eq)，2.68(dd，1H，J5-6ax＝5.2，J6eq-6ax＝13.6，H6ax)。2-萘基甲基衍生物次要異構體的典型信號4.84(AB四重峰，2H，Jgem＝11.2，萘基-CH2)，3.52(ddd，1H，J4-5＝10.0，J5-6eq＝2.4，J5-6ax＝6.0，H5)，3.07(dd，1H，J6eq-6ax＝13.6，H6eq)，2.96(dd，1H，J6eq-6ax＝13.6，J5-6ax＝6.0，H6ax)。次要異構體的來源是步驟a中使用的商購的1-和2-溴甲基萘9∶1的混合物。
對在上文實施例1至19中詳細描述的合成方法進行適當的修改能夠合成其他的化合物。這些其它的化合物包括在列舉本發明化合物生物學試驗結果的表中。
實施例20化合物的生物學試驗方法1.生長因子結合試驗使用基於表面等離子體諧振(SPR)的溶液親和力測定法測量配體對於生長因子的結合親和力。測定法的原理是固定在傳感晶片表面的肝素能夠辨別出在平衡的生長因子和配體的溶液中的游離的和結合的生長因子。當注射該溶液時，隨著SPR反應的增強，檢測出結合至固定的肝素的游離的生長因子，由此而測定其濃度。作為配體濃度函數的游離生長因子濃度的減少可用於計算解離常數Kd。重要的是要注意結合至生長因子的配體只有當相互作用包括肝素結合部位時才可被檢出，因而消除了評價與蛋白質其它部位非特異性結合的可能性。假定所有蛋白質∶配體的相互作用的化學計量為1∶1。
已經記載了通過將生物素化的BSA-肝素固定在抗生物素蛋白鏈菌素塗敷的傳感晶片上製備肝素-塗敷的傳感晶片[24]。還可使用己二酸二醯肼或1，4-二氨基丁烷通過醛偶合將肝素固定。對於各Kd的測量，需製備包含固定濃度的蛋白質和不同濃度配體的緩衝溶液。在HBS-EP緩衝液中(10mM HEPES，pH7.4，150mM NaCl，3.0mM EDTA和0.005％(v/v)聚山梨醇酯20)測量結合至FGF-1和VEGF的配體，而在包含0.3M NaCl的HBS-EP緩衝液中測量當結合至FGF-2的配體[24]。注射前，將樣品保持在4℃以使蛋白質的穩定性最佳。對於各測定混合物，以5-40μL/min注射50-200μL的溶液，測量相對的結合靈敏度。所有的表面結合試驗均在25℃下進行。通過以40μL/min注射40μL的4M NaCl，隨後以40μL/min注射40μL的緩衝液使表面再生。
使用BIAevaluation軟體(BIAcore)分析Sensorgram數據。從試驗sensorgram減去背景sensorgram以得到特異性結合的曲線，隨後將所有曲線的基線調節至0。可使用以下的方程將每次注射的相對結合靈敏度換算為游離蛋白質的濃度 其中r是相對結合靈敏度和rm是最大結合靈敏度。
假定注射前溶液中建立的結合平衡的化學計量為1∶1。因此，對於該平衡，
其中P對應於生長因子蛋白質，L是配體，P·L是蛋白質配體的複合物，平衡方程為Kd=[P][L][PL]]]>且結合方程[24]可表示為 使用結合方程時，給定的Kd值是與[P]相對於[L]總計的曲線相一致的值。其中Kd值測量兩次，取兩次測量值的平均值。已經證明與這些生長因子牢固結合的GAG模擬物引起了體內的生物學反應[24]。
2.抗病毒試驗如Nyberg等所述[25]，在抑制病毒傳染性和細胞-至-細胞間的傳播的兩項試驗中測試了所選擇的化合物對抗兩種類型的單純性皰疹病毒(HSV)，即，HSV-1和HSV-2。使用在6-孔簇板(cluster plates)培養的非洲綠猴腎細胞(GMK AH1)[26]的單層培養細胞。使用的病毒株是單純性皰疹病毒1型(HSV-1)KOS321株[27]和HSV-2333株[28]。
在兩項試驗中，化合物以200μM進行測定。
(i)在HSV傳染性試驗中，將化合物與病毒混合，在室溫下培養10min，然後將混合物加入細胞中，僅保持細胞1小時以使(或沒有使)病毒粘附於/進入細胞中。因此該試驗反映了所討論的化合物是否有能力與病毒微粒結合，並且阻斷其粘附於/進入細胞中。抑制作用表現為病毒斑數量的減少。
(ii)下一個試驗，稱為HSV傳播試驗，依靠在病毒粘附/進入步驟後向細胞中加入化合物。該試驗反映了所研究的化合物是否有能力抑制病毒從感染細胞至非感染細胞的傳播(細胞-至-細胞間的傳播)，和另外該化合物是否有能力進入細胞和抑制病毒複製。在病毒感染性試驗中化合物缺乏活性但是在病毒傳播試驗中具有某些活性提示化合物通過進入細胞和抑制病毒複製的步驟發揮作用。抑制表現為病毒斑尺寸的減少。
結果(參見表5)以對照的％即，以在化合物存在的情況下相對於模擬治療對照組(沒有用化合物)獲得的病毒斑的數量(傳染性試驗)或尺寸(傳播試驗)來表示。
結果前述部分描述的試驗結果在表1至5中列出。
表1


表2














表3







表4



表5抗病毒試驗結果


表1至4中所列結果表明本發明包括的寬範圍的化合物對於GAG-結合生長因子具有強親和力，因而可用作它們活性的調節劑。表5中的結果表明化合物確實具有體內活性。
前述實施方案僅僅是本發明原理的例證，各種修改和變化對本領域那些技術人員來說很容易想到。可採用各種方法和其它實施方案來實踐和實施本發明。還應該理解本文中使用的術語是用於說明，而不應該被認為是限制。
本文中使用的術語「包含(comprise)」及其該術語的變型例如「包含(comprises)」或「包含(comprising)」指包括一種指定的完整物或若干指定的完整物但是不排除任何其它的完整物或若干任何其它的完整物，除非在上下文或用法上需要該術語的排除性解釋。
不認為在本說明書中引用的出版物的任何參考文獻其公開的內容在澳大利亞構成通常的常識。
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權利要求
1.下式的化合物 其中n是0至2的整數；Z是N，N(O)，O，S，S(O)，S(O)2，P，P(O)，P(O)2，Si，Si(O)，或Si(O)2；X各自獨立的是C，C(O)，N，N(O)，O，S，S(O)，S(O)2，P，P(O)，P(O)2，Si，Si(O)，或Si(O)2或是鍵；和R1至R6各自獨立的是鍵或選自基團氫；滷素；直鏈的，環狀的，支鏈的，取代的，雜環的，雜原子取代的或未取代的烷基，鏈烯基，炔基，芳基，或雜芳基；磷醯基例如磷酸酯，硫代磷酸酯-O-P(S)(OH)2；磷酸酯-O-P(O)(OR)2；硫代磷酸酯-O-P(S)(OR)2；膦酸酯-O-P(O)OHR；硫代膦酸酯-O-P(S)OHR；取代的膦酸酯-O-P(O)OR1R2；取代的硫代膦酸酯-O-P(S)OR1R2；-O-P(S)(OH)(SH)；和環磷酸酯；其它含磷的化合物例如亞磷醯胺-O-P(OR)-NR1R2；和氨基磷酸酯-O-P(O)(OR)-NR1R2；硫基團例如-O-S(O)(OH)，-SH，-SR，-S(→O)-R，S(O)2R，RO-S(O)2-，-O-SO2NH2，-O-SO2R1R2或磺醯胺-NHSO2NH2；氨基例如-NHR，-NR1R2，-NHAc，-NHCOR，-NH-O-COR，-NHSO3，-NHSO2R，-N(SO2R)2，和/或脒基例如-NH-C(＝NH)NH2和/或脲基例如-NH-CO-NR1R2或硫脲基例如-H-C(S)-NH2；結構I的另一個單元，通過任意位置連接，其中Z，X和R1至R6如上所定義；或基於下式基團的亞結構 其中Y是鍵或選自基團直鏈的，環狀的，支鏈的，取代的，雜環的，雜原子取代或未取代的烷基；直鏈的，環狀的，支鏈的，取代的，雜環的，雜原子取代或未取代的醯基；和芳基，取代的芳基，雜芳基；和R7至R11各自獨立地是至少一個根據式I的結構，或根據式II的結構；條件是當Z是O，X是O或鍵時，R1至R5都不是H或CH2OH；或當Z是N並且X是O或鍵時，R1至R6都不是H。
2.根據權利要求1的化合物，其中所述化合物是如上文定義的PG2024，PG2037，PG2046，PG2155。
3.根據權利要求1的化合物，其中所述化合物是說明書表1-4中的任一種化合物。
4.用於預防或治療哺乳動物患者的由血管生成，轉移，炎症，凝血，血栓形成，和/或微生物感染引起的疾病的藥物或獸醫學組合物，其包含至少一種根據權利要求1的化合物和對於所述的至少一種化合物而言藥學上或獸醫學上可接受的載體或稀釋劑。
5.根據權利要求4的組合物，其進一步包括藥學上或獸醫學上可接受的賦形劑，緩衝劑，穩定劑，等滲調節劑，防腐劑或抗氧劑。
6.根據權利要求4的組合物，其中所述化合物在其中以酯，游離酸或鹼，水合物或前藥的形式存在。
7.根據權利要求1的化合物在製備用於預防或治療哺乳動物患者的由血管生成，轉移，炎症，凝血，血栓形成和/或微生物感染引起的疾病的藥物中的用途。
8.根據權利要求7的用途，其中所述哺乳動物患者為人類患者。
9.用於預防或治療哺乳動物患者的由血管生成，轉移，炎症，凝血，血栓形成，和/或微生物感染引起的疾病的方法，該方法包含對患者施用有效量的至少一種根據權利要求1的化合物，或包含所述至少一種化合物的組合物。
10.根據權利要求9的方法，其中所述哺乳動物患者為人類患者。
11.根據權利要求9的方法，其中所述由血管生成引起的疾病是增生性視網膜病或實體瘤生長產生的血管生成。
12.根據權利要求9的方法，其中所述由炎症引起的疾病是類風溼性關節炎，多發性硬化症，炎性腸病，同種異體移植物排斥或慢性哮喘。
13.根據權利要求9的方法，其中所述由凝血和/或血栓形成引起的疾病是深部靜脈血栓形成，肺栓塞，血栓性中風，周圍動脈血栓形成，不穩定心絞痛或心肌梗塞。
14.根據權利要求9的方法，其中所述由病毒感染引起的疾病是單純性皰疹。
全文摘要
本發明涉及用於模擬GAG
文檔編號C07H15/18GK1906203SQ200480040751
公開日2007年1月31日 申請日期2004年12月21日 優先權日2003年12月23日
發明者R·H·唐, V·費爾羅, I·比瑟維, S·克奇蘭, J·K·法爾威瑟, E·T·哈蒙德, T·卡洛麗, 李彩萍, 劉立功 申請人:普羅吉恩工業有限公司