奧林巴斯BX43全系報價及選購辦法
2024-11-20 04:22:10
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一、實驗目的(北京索宏恆業科技中心)
1、了解普通光學顯微鏡的構造、基本原理、維護和保養的方法。
2、掌握普通光學顯微鏡的正確使用方法。
1、鏡座:是移動顯微鏡的把手,其作用是支撐整個顯微鏡。有的顯微鏡的鏡座內還裝有反光鏡和光源組。
2、鏡臂:是移動顯微鏡的把手,它支撐和固定鏡筒、載物臺及調焦裝置。直筒顯微鏡的鏡臂與鏡座連接處有活動關節,可按需要將鏡臂調節至適當傾斜度。
3、鏡筒:是顯微鏡上方的空心圓筒,其內噴以無光黑漆(避免光線亂反射),上端套接目鏡,下端與物鏡轉換器連接。鏡筒有單筒和雙筒兩種。單筒可分為直立式和傾斜式兩種;雙筒都是傾斜式的。雙筒鏡筒有調距裝置,可調節兩鏡筒之間的寬度,其中的一個鏡筒上還裝有視度調節。鏡筒上緣到物鏡轉換器螺旋下端的距離稱為鏡筒長度或機械長度。調節式鏡筒附有刻度,一般可調範圍為155-250毫米;固定式的為160 或170 毫米。
4、物鏡轉換器:連接於鏡筒的下端,其上有3-4 個圓孔,可順序安裝不同倍數的物鏡,使用時??據需要轉動轉換器來更換觀察用的物鏡。
5、載物臺:亦稱工作檯,固定在鏡臂上,方形或圓形,中央有一通光孔,檯面上裝有推進器和??簧??,可推動和固定標本。有的顯微鏡在載物臺兩邊或一邊(或在推進器上面,或在載物臺下面)裝有兩個移動手輪,轉動移動手輪可使載物臺前後左右移動,便於觀察標本的任一視野。有的顯微鏡在載物臺的縱向和橫向上裝有遊標尺,可測定標本的大小,也可用來對被檢視野作標記,以便下次觀察時再檢查該視野。ZXCI普通光學顯微鏡的標本移動器的橫向移動範圍為60 毫米,縱向移動範圍為25 毫米,遊標格值0.1 毫米。
6、調焦裝置:安裝在鏡臂的兩側,與鏡筒或載物臺連接。調焦裝置包括粗動調焦手輪和微動調焦手輪,轉動調焦手輪可使鏡筒或載物臺上下移動,以調節焦距,使標本與物鏡的距離等於物鏡的工作距離。ZXCI普通光學顯微鏡的粗微動調焦範圍為15 毫米,微動調焦格值為0.002 毫米。
1.目鏡;2.鏡筒;3.鏡臂;4.玻片??;5.遊標卡尺;6.粗準焦螺旋;7. 細準焦螺旋;
8.底座;9.光源;10.虹彩光圈;11.聚光器;12.載物臺;13.物鏡;14.轉換器
1、目鏡:也稱接目鏡,安裝在鏡筒的上端。目鏡的作用是把物鏡放大的實像進一步擴大。目鏡由上下兩組透鏡組成,上面的叫接目透鏡,下面的叫會聚透鏡。上下透鏡之間裝有一個光闌。光闌的大小決定視野的大小。目鏡的光闌上還可以放置測微目尺。顯微鏡通常配備有10倍、16 倍等幾種目鏡。
2、物鏡:也稱接物鏡,安裝在物鏡轉換器上,物鏡的作用是把標本作第一次放大。??據需要時的條件不同,可以把物鏡分為乾燥物鏡(包括低倍物鏡和高倍物鏡)和油浸物鏡。乾燥物鏡在使用時,標本片與物鏡之間的介質是空氣。乾燥物鏡按放大倍數還可以分為低倍物鏡、中倍物鏡和高倍物鏡。一般把10倍以下的物鏡叫低倍物鏡,把20 倍的物鏡叫中倍物鏡,40-45 倍或60倍的物鏡叫高倍物鏡。這些物鏡上標有5×、10×、20×、40×、45×、60×。油浸物鏡是物鏡中放大倍數最高的鏡頭(90×或100×),使用油鏡時,在標本上加一滴鏡油作為介質。國產顯微鏡的油鏡常標有「油」字,國外產品則常用「oil」(oil Immersion)或「HI」(HemcyeneousImmersion)字樣,以供識別。物鏡上通常標有放大倍數、數值孔徑(亦稱鏡口率)、工作距離等主要參數。
3、聚光器:也叫集光器,由聚光鏡和可變光闌組成。聚光鏡由一片或數片透鏡組成,其作用相當於凸透鏡,起聚光的作用,以增強射入物鏡的光線。可變光闌也叫光圈,位於聚光鏡的下方,由十幾片金屬薄片組成,中心部呈圓孔。推動可變光闌的把手可以任意調節孔徑的大小,其作用是通過調節光強度,使聚光鏡的數值孔徑和物鏡的數值孔徑相一致。可變光闌開得越大,則數值孔徑越大;反之,則數值孔徑越小。
4、反光鏡:一般裝在聚光器下方的鏡座上,可以在水平和..直方向任意旋轉。它的一面是平面鏡,另一面是凹面鏡,其作用是使光源發出的光或自然光射向聚光鏡。光強時用平面鏡,光弱時用凹面鏡。有的顯微鏡的人工光源安裝在鏡座內,其反光鏡也固定在鏡座內。
由單透鏡構成的放大鏡和由幾..透鏡組成的實體顯微鏡(解剖鏡)稱單式顯微鏡生物學教學及科研所用的光學顯微鏡一般是複式顯微鏡。
由外界入射的光線經反光鏡反射向上,或由內光源發射的光線經集光鏡向上,再經聚光鏡會聚在被檢標本上,使標本得到足夠的照明,由標本反射或折射出的光線經物鏡進入使光軸與水平面傾斜45度角的稜鏡,在目鏡的焦平面上,即在目鏡的視場光闌處,成放大的側光實像,該實像再經目鏡的接目透鏡放大成虛像,所以人們看到的是虛像(圖1-l-2)。
被檢物體經顯微鏡的物鏡和目鏡放大後的總放大倍數是物鏡的放大倍數和目鏡放大倍數的乘積。如用放大40 倍的物鏡和放大10 倍的目鏡的總放大倍數是400 倍。
3.解析度
物鏡前面發光點發射的光線進入物鏡的角度稱開口角度。透鏡的放大率與開口角度成正比,與焦距成反比。數值口徑(又稱開口率numerical aperture簡寫為NA)是光線投射到物鏡上的最大開口角度一半的正弦,乘上標本與物鏡間介質的折射率的乘積。
NA=n×Sinθ
NA 為數值口徑;n 是介質折射率;θ為最大開口角度的半數。
由於介質為空氣時n=1,最大值只能到90 度(實際上不可能達到90
度),Sin90=1,所以乾燥系下物鏡的數值口徑都小於l。使用油鏡時,物鏡與標本間的介質為香柏油(n=1.515)或液體石蠟(n=1.52),不僅能增加照明度,更重要的是增大數值口徑,目前技術下最大的數值口徑為1.4。
評價一臺顯微鏡的質量優劣,不僅要看其放大倍數,更重要的是看其解析度。解析度是指顯微鏡能夠辨別發光的兩個點或兩細線間最小距離的能力。該最小的距離稱為鑑別限度(R):
R=λ/2nSinθ=λ/2NA
R 為鑑別限度;λ為光的波長。
日光的波長λ=0.5607μm≈0.6μm,如果用NA=1.4 的物鏡,則
R=0.6/2×1.4=0.22μm
4.工作距離
工作距離是指觀察標本最清晰時,物鏡透鏡的下表面與標本之間(無蓋玻片時)或與蓋玻片之間的距離。物鏡的放大倍數越大,其工作距離越短,油鏡的工作距離最短、約為0.2mm,所以使用油鏡時,要求蓋玻片的厚度為0.17mm。雖然不同放大倍數的物鏡工作距離不同,但生產廠家已進行校正,使不同放大倍數物鏡轉換時,都能觀察到標本,只需進行細調焦便可使物象清晰。
E×O=1000×NA
據上式可知,在與物鏡的組合中,目鏡有效的放大倍數是有限的,過大的目鏡放大倍數並不能提高顯微鏡的解析度。如用90×,NA 為1.4的物鏡,目鏡有效的最大倍數是15×。
相差顯微鏡與普通顯微鏡本相同,只是在普通顯微鏡上附加光闌和相板等相差濾光裝1、環狀光闌:是由環狀圓孔構成的光闌,大小不同的環狀光闌成一轉盤,安裝於聚光鏡下面。更換放大率不同的物鏡時,要同時更換與其適應的光闌。
2、相板:裝於物鏡的後焦平面,有推遲直射光和衍射光相位,以及吸收光線收變亮度的作用。帶有相板的物鏡,稱為相差物鏡。
3、合軸調整望遠鏡:為使環狀光闌的中心與物鏡的光軸完全在一直線上,必須拔出目鏡,裝上特製的低倍望遠鏡,使相板的暗環與環狀光闌的明環合軸。
其使用方法是在普通光學顯微鏡上換上相差聚光器和相差物鏡,將用水封載的玻片標本放在載物臺上,轉動相聚光器,使與物鏡的開口率或放大倍數相一致,鏡檢見物像。取下目鏡,換上合軸調整望遠鏡,伸縮望遠鏡筒,使看清物鏡相板上暗環和環狀光闌上的亮環;移動彩虹光圈,使暗環和亮環圓心重合;升降聚光器,使兩環完全重合,即在亮環內外側看到暗的邊緣。取下望遠鏡,換上補償目鏡進行鏡檢。鏡檢時只能以微動螺旋調焦而不能轉動聚光器,否則需重新進行合軸調整。更換物鏡時也要重新進行合軸調整,然後才能觀察。相差顯微術需用水作封載劑並加蓋玻片。載玻片和蓋玻片厚度分別為1.0-1.2、0.17-0.18毫米,清潔無損。
(一)儀器和其他物品
顯微鏡的使用方法。
(二)光源
顯微鏡不能採用直射陽光。晴天可用近窗的散射光作光源。也可用日光燈作為光源。而專為顯微鏡照明而製造的聚絲電燈是較好的光源。
在接通電源後,取下目鏡,直接向鏡筒內觀察,並調節聚光鏡上的孔徑光闌,使其孔徑與視野恰好一樣大或略小於視野,其目的是使入射光展開的角度與物鏡的數值口徑(開口率NA)相一致,既可充分發揮該物鏡的分辨力,又能把超過該物鏡可能接受的多餘光擋住,否則能產生幹擾.影響清晰度。所以,原則上使用不同的物鏡時應相應調節孔徑光闌。放回目鏡後,通過調節聚光器上的視??光闌或調節照明度控制鈕,選擇非常好的的照明效果。
1.標本放置
2.調焦
轉動粗調節螺旋,升高鏡臺(或下降鏡筒)、使低倍物鏡的前端接近載片,用左眼在目鏡上觀察,並轉動粗調節螺旋,使鏡臺下降(或鏡筒上升),可看到物像,然後轉動細調節螺旋,使物假清晰。
3.換高倍鏡
用低倍鏡看到物像後,轉動標本移動器上的螺旋,選擇合適的視野,並把要觀察的部位置於視野的中央,轉動物鏡轉換器把高倍鏡置鏡筒下方。顯微鏡在設計製造時,都是共焦點的,即低倍鏡對焦後,轉換高倍鏡時一般都能對準焦點,能看到物像,只需轉動細準焦螺旋便可使物像清晰。通過調節集光鏡上的視??光闌或照明度控制鈕使獲得非常好的照明。
由於細菌個體微小,需要用油鏡進行觀察。
1.滴加鏡油
轉動粗調節螺旋,使鏡臺下降(或使鏡筒上升) 在染色標本處滴加1-2 滴液體石蠟或香柏油。
2.轉換油鏡
轉動物鏡轉換器,把油鏡置鏡筒下方。
3.調焦
轉動粗調節螺旋,使鏡臺上升(或鏡筒下降),讓鏡頭的前端浸入鏡油中。操作時要從側面仔細觀察,只能讓鏡頭浸入鏡油中緊貼著標本而避免讓鏡頭撞擊載玻片,導致玻片和鏡頭損??。然後在目鏡下進行觀察,並緩慢??轉動細準焦螺旋使鏡臺下降(或使鏡筒上升)即可看到清晰的物像。
轉動細準焦螺旋使鏡臺下降(或使鏡筒上升)時,若油鏡已離開油滴,必須重新進行上述調節操作。不得邊用左眼在目鏡上觀察,邊轉動細準焦螺旋使鏡臺上升(或鏡筒下降)使鏡頭前端浸入油滴中,這樣易使鏡頭撞擊載玻片,損??標本和鏡頭。
4.調節孔徑光闌和視??光闌
把孔徑光闌開到最大,使與油鏡的數值口徑相??配,通過調節視??光闌和照明度控制鈕選擇合適的照明。
轉動粗調節螺旋,使鏡臺下降(或使鏡筒上升),取出染色標本玻片,然後先用擦鏡紙接去油鏡上的香柏油,再用擦鏡紙沾少量二甲苯(不能用酒精)擦去沾在油鏡上的鏡油,最後用擦鏡紙擦淨二甲苯及鏡油。用液體石蠟作鏡油時,可以只用擦鏡紙即可擦淨,不必用(或僅用極少量)二甲苯。把鏡頭轉成「八」字形,套上鏡罩後放入顯微鏡櫃中。
顯微鏡是貴重精密的光學儀器,正確的使用、維護與保養,不但觀察物體清晰還可延長顯微鏡的使用壽命。
Ⅰ防潮:顯微鏡應放置在通風乾燥,灰塵少,不受陽光直接曝曬的??方。不使用時有機玻璃或塑料布防塵罩罩起來。也可套上布罩後放入顯微鏡箱內或顯微鏡櫃內。最好還在鏡箱內放一袋乾燥劑(最常用的是變色矽膠,乾燥的矽膠呈藍色,吸潮後變為淡紅色,淡紅色矽膠烘乾呈藍色後,可繼續使用)。
Ⅱ防塵:顯微鏡觀察室內應保持清潔,儘量避免塵??。目鏡和物鏡如有塵汙應用擦鏡紙擦淨。最好用塑膠袋罩上並放入鏡箱。
Ⅲ防腐蝕:顯微鏡不要與揮發性藥品及酸、鹼類藥品接觸,以免受腐蝕。
Ⅳ防熱:顯微鏡不要放在日光曝曬,也不要放在靠近火爐、電爐或暖氣片的地方。
Ⅱ防震:從顯微鏡箱或櫃內取出或放入顯微鏡時,應一手提鏡劈,另一手託鏡座,讓顯微鏡直立,防止目鏡從鏡筒中脫落。
Ⅵ保持清潔:顯微鏡的目鏡、物鏡、聚光鏡和反光鏡等光學部件必須保持清潔,防止長黴。鏡檢時通過轉動目鏡、物鏡及調整焦距等措施判斷灰塵或汙髒所在的部位,如附有灰塵,則先用洗耳球??去灰塵,或用擦鏡紙輕輕擦去。若有汙髒,用擦鏡紙或脫脂棉球沾無水乙醚
7 份和無水乙醇3 份的混合液輕輕擦拭。然後用擦鏡紙擦乾。顯微鏡的金屬油漆部件和塑料部件,可用軟布沾中性洗滌劑進行擦拭,不要使用有機溶劑。