用於視網膜及CNS基因療法的AAV載體的製作方法

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本申請要求2014年5月2日提交的美國臨時申請序號61/988,131和2015年2月10日提交的美國臨時申請序號62/114,575的優先權權益，其各自通過提述以其整體併入本文。ASCII文本文件上的序列表的提交ASCII文本文件上的如下提交的內容通過提述以其整體併入本文：計算機可讀形式(CRF)的序列表(文件名：159792010440SEQLIST.txt，記錄日期：2015年4月29日，大小：85KB)。發明領域本發明涉及變體重組腺相關病毒(rAAV)載體，其用於改進對眼部和中樞神經系統的遞送；例如用於改進的視網膜基因治療和改進的CNS基因治療。發明概述視網膜退化性疾病對於腺相關載體(AAV)介導的基因治療是很有前景的焦點。AAV載體能介導視網膜中的長期基因表達和引發最小免疫響應，使得這些載體對於向眼睛的基因遞送而言成為了吸引人的選擇。視網膜是眼睛的後部的光敏感性組織，其由多種細胞類型(包括感光細胞、視網膜色素上皮細胞和視網膜神經節細胞)組成。AAV基因治療載體的靶細胞類型和載體遞送途逕取決於疾病指徵。例如，年齡相關性黃斑變性的I期臨床試驗採用載體的玻璃體內(intravitreally)遞送以實現視網膜神經節細胞的轉導，而用於治療患有Leber氏先天性黑矇2型(一種形式的視網膜色素變性)的患者的一項最近的臨床試驗使用RPE65基因的視網膜下遞送以轉導視網膜色素上皮細胞。鑑於這樣的效用，需要開發用於改進AAV至眼部遞送的新的藥劑和方法。基於腺相關病毒(AAV)的載體也已成為用於神經基因治療的優選載體系統，在多個臨床試驗中具有優異的安全記錄((Kaplitt,M.G等(2007)Lancet369:2097-2105；Eberling,J.L等(2008)Neurology70:1980-1983；Fiandaca,M.S等(2009)Neuroimage.47Suppl2:T27-35)。然而，神經系統病症的有效治療已經在很大程度上受到與將AAV載體遞送至受影響的細胞群體相關的問題的阻礙。此遞送問題對於涉及中樞神經系統(CNS)的病症是特別成問題的。因此，進一步需要增強對CNS的AAV遞送。在一些方面中，本發明提供用於將異源核酸遞送至個體的眼部的方法，其包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒施用於個體的視網膜下，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代降低rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％，約至少25％，約至少50％，約至少75％，或約至少100％。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代增加rAAV顆粒對眼部或CNS中細胞的轉導效率。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代增加rAAV顆粒對眼部或CNS中細胞的轉導效率，例如與包含野生型AAV衣殼蛋白的參考rAAV衣殼相比增加約至少10％，約至少25％，約至少50％，約至少75％，或約至少100％。在一些實施方案中，所述眼部的細胞是視網膜細胞、感光細胞、視網膜色素上皮細胞、雙極細胞、水平細胞、無長突細胞、Muller細胞和/或神經節細胞。在一些實施方案中，所述CNS的細胞是少突膠質細胞(oligodendrocyte)、星形膠質細胞(astrocyte)、神經元(neuron)、腦實質細胞(brainparenchymacell)、小膠質細胞(microglialcell)、室管膜細胞(ependemalcell)，和/或浦肯野細胞(Purkinjecell)。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置484、487、527、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，編號基於包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R532處的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在進一步的實施方案中，所述AAV衣殼包含胺基酸取代R585A和R588A，編號基於AAV-2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533、586或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528或533處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用帶正電荷的胺基酸殘基取代疏水性胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528或533處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個胺基酸取代包括R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1、AAV6或AAV9衣殼，且其中所述一個或多個胺基酸取代位於位置485、488、528、533、586和/或589處，編號基於AAV1、AAV6或AAV9的VP1編號；和/或其中所述rAAV顆粒包含AAV8或AAVrh10衣殼，且其中所述一個或多個胺基酸取代位於位置487、490、535、588和/或591處，編號基於AAV8或AAVrh10的VP1編號。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置，編號基於AAV2的VP1編號；和rAAV載體，其包含編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經營養因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進一步的實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內皮他汀(Endostatin)、血管他汀(Angiostatin)、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進一步的實施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置，編號基於AAV2的VP1編號；和編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸，其中所述異源核酸處於在視網膜中表達的啟動子序列的控制下。在一些實施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適於所述治療性多肽或治療性核酸在一個或多個視網膜細胞類型中表達的啟動子。在一些實施方案中，所述視網膜細胞是感光細胞、視網膜色素上皮細胞、雙極細胞、水平細胞、無長突細胞、Muller細胞和/或神經節細胞。在一些實施方案中，所述啟動子為視紫紅激酶(RK)啟動子、視蛋白啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子、雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如，降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置，編號基於AAV2的VP1編號；和異源核酸，用於將所述異源核酸遞送至個體的視網膜。在一些實施方案中，所述個體是人。在一些實施方案中，所述異源核酸用於治療選自下組的眼部病症：常染色體隱性重度早髮型視網膜變性(autosomalrecessivesevereearly-onsetretinaldegeneration)(Leber氏先天性黑矇(Leber’scongenitalamaurosis))、先天性全色盲、斯塔加特氏病(Stargardt’sdisease)、貝斯特氏病(Best’sdisease)、Doyne氏病(Doyne’sdisease)、錐體營養不良(conedystrophy)、視網膜色素變性(retinitispigmentosa)、X連鎖視網膜劈裂症(X-linkedretinoschisis)、Usher氏症候群(Usher’ssyndrome)、年齡相關性黃斑變性、萎縮性年齡相關性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網膜病(proliferativediabeticretinopathy)(PDR)、囊樣黃斑水腫(cystoidmacularoedema)、中心性漿液性視網膜病(centralserousretinopathy)、視網膜脫落、眼內炎、青光眼和後葡萄膜炎。在一些方面中，本發明提供在將rAAV顆粒視網膜下遞送至個體的眼部後與用包含野生型衣殼的rAAV轉導細胞相比改進細胞的rAAV轉導的方法，該方法包括在AAV衣殼蛋白中併入一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含所述異源核酸和至少一個AAV末端重複。在其他方面中，本發明提供在將rAAV顆粒視網膜下遞送至個體的眼部後改進異源核酸的表達的方法，所述方法包括在AAV衣殼蛋白中併入一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含所述異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些實施方案中，具有改進的轉導和/或改進的異源核酸表達的rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或約至少100％。在一些實施方案中，具有改進的轉導和/或改進的異源核酸表達的rAAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置484、487、527、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在進一步的實施方案中，所述AAV衣殼包含胺基酸取代R585A和R588A，編號基於AAV-2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在一些實施方案中，具有改進的轉導和/或改進的異源核酸表達的rAAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533、586或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528或533處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用帶正電荷的胺基酸殘基取代疏水性胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實施方案中，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528或533處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個胺基酸取代包括R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，具有改進的轉導和/或改進的異源核酸表達的rAAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號；和rAAV載體，其包含編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經營養因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進一步的實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進一步的實施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體。在一些實施方案中，具有改進的轉導和/或改進的異源核酸表達的rAAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、532、585或588的一個或多個位置，編號基於AAV2的VP1編號；和編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸，所述異源核酸處於在視網膜中表達的啟動子序列的控制下。在一些實施方案中，其中所述異源核酸可操作地連接至適於所述治療性多肽或治療性核酸在一個或多個視網膜細胞類型中表達的啟動子。在一些實施方案中，所述視網膜細胞是感光細胞、視網膜色素上皮細胞和/或神經節細胞。在一些實施方案中，所述啟動子是視紫紅激酶(RK)啟動子、視蛋白啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子、雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子。在一些實施方案中，具有改進的轉導和/或改進的異源核酸表達的rAAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置，編號基於AAV2的VP1編號；和異源核酸，用於將所述異源核酸遞送至個體的視網膜。在一些實施方案中，所述個體是人。在一些實施方案中，所述異源核酸用於治療選自下組的眼部病症：常染色體隱性重度早髮型視網膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養不良、視網膜色素變性、X連鎖視網膜劈裂症、Usher氏症候群、年齡相關性黃斑變性、萎縮性年齡相關性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網膜病、視網膜脫落、眼內炎、青光眼和後葡萄膜炎。在一些方面，本發明提供治療個體(例如人)中的眼部病症的方法，其包括將包含rAAV顆粒的組合物遞送至個體的視網膜，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，所述方法包括視網膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用於治療個體(例如人)中的眼部病症，其中所述rAAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置484、487、527、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在進一步的實施方案中，所述AAV衣殼包含胺基酸取代R585A和R588A，編號基於AAV-2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼、或AAVrh10衣殼。在一些實施方案中，所述方法包括視網膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用於治療個體(例如人)中的眼部病症，其中所述rAAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533、586或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528或533處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用帶正電荷的胺基酸殘基取代疏水性胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實施方案中，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528或533處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個胺基酸取代包括R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述方法包括視網膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用於治療個體(例如人)中的眼部病症；和包含一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經營養因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進一步的實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進一步的實施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體。在一些實施方案中，所述方法包括視網膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用於治療個體(例如人)中的眼部病症；和包含一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置，編號基於AAV2的VP1編號，其中所述異源核酸處於在視網膜中表達的啟動子序列的控制下。在一些實施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適於所述治療性多肽或治療性核酸在一個或多個視網膜細胞類型中表達的啟動子。在一些實施方案中，所述視網膜細胞是感光細胞、視網膜色素上皮細胞和/或神經節細胞。在一些實施方案中，所述啟動子是視紫紅激酶(RK)啟動子、視蛋白啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子、雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子。在一些實施方案中，所述方法包括視網膜下遞送包含編碼異源核酸的rAAV載體的rAAV顆粒，其用於治療個體(例如人)中的眼部病症；和包含一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置，編號基於AAV2的VP1編號，其中所述眼部病症選自下列組成群組：常染色體隱性重度早髮型視網膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養不良、視網膜色素變性、X連鎖視網膜劈裂症、Usher氏症候群、年齡相關性黃斑變性、萎縮性年齡相關性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網膜病、視網膜脫落、眼內炎、青光眼和後葡萄膜炎。在一些實施方案中，所述方法包括視網膜下遞送包含rAAV顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含編碼異源核酸的rAAV載體，其用於治療個體(例如人)中的眼部病症；和包含一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述組合物中顆粒的濃度為約1x106DRP/ml至約1x1014DRP/ml。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒的組合物對於治療個體的視覺功能是有效的。在一些實施方案中，視覺功能通過微視野檢查法、暗適應視野檢查法、視覺活動性評估、視敏度、ERG或閱讀評估來評價。在一些實施方案中，所述方法導致個體的視覺功能的改進。在一些實施方案中，所述方法導致預防由於眼部病症的進展所致的人的視覺功能衰退或是減緩所述衰退的進展。在一些方面，本發明提供用於將載體視網膜下遞送至個體的眼的系統，其包含a)含有有效量的rAAV顆粒的組合物，其中i)所述rAAV顆粒的衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和ii)所述載體包含編碼治療性多肽或治療性RNA的異源核酸和至少一個AAV末端重複；和b)用於視網膜遞送所述rAAV的裝置。在一些實施方案中，所述裝置包含細孔套管和注射器，其中所述細孔套管為27至45號(gauge)。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒的組合物容納於注射器內。在一些實施方案中，所述套管附接於注射器。在一些實施方案中，所述組合物中顆粒的濃度為約1x106DRP/ml至約1x1014DRP/ml。在一些實施方案中，所述系統的rAAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的AAV2衣殼，所述胺基酸取代改變HSPG結合(例如降低或去除結合)。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代增加rAAV顆粒對眼部或CNS中細胞的轉導效率。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代增加rAAV顆粒對眼或CNS中細胞的轉導效率，例如與包含野生型AAV衣殼蛋白的參考rAAV衣殼相比增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，眼的細胞是視網膜細胞、感光細胞、視網膜色素上皮細胞、雙極細胞、水平細胞、無長突細胞、Muller細胞和/或神經節細胞。在一些實施方案中，所述CNS的細胞是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述系統的rAAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的AAV2衣殼，所述胺基酸取代改變HSPG結合(例如降低或去除結合)。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置484、487、527、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在進一步的實施方案中，所述AAV衣殼包括胺基酸取代R585A和R588A，編號基於AAV-2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在一些實施方案中，所述系統的rAAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的AAV2衣殼，所述胺基酸取代改變HSPG結合(例如降低或去除結合)。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置485、488、528、533、586或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用帶正電荷的胺基酸殘基取代疏水性胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實施方案中，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個胺基酸取代包括R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述系統的rAAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變HSPG結合(例如降低或去除結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號；和包含異源核酸的rAAV載體。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經營養因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進一步的實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進一步的實施方案中，所述治療性核酸是siRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體。在一些實施方案中，所述系統的rAAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變HSPG結合(例如降低或去除結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號；和包含異源核酸的rAAV載體，其中所述異源核酸處於在視網膜中表達的啟動子序列的控制下。在一些實施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適於所述治療性多肽或治療性核酸在一個或多個視網膜細胞類型中表達的啟動子。在一些實施方案中，所述視網膜細胞是感光細胞、視網膜色素上皮細胞和/或神經節細胞。在一些實施方案中，所述啟動子是視紫紅激酶(RK)啟動子、視蛋白啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子、雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子。在一些實施方案中，所述系統的rAAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變HSPG結合(例如降低或去除結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號；和包含異源核酸的rAAV載體，其用於將所述異源核酸遞送至個體的視網膜。在一些實施方案中，所述個體是人。在一些實施方案中，所述異源核酸用於治療選自下組的眼部病症：常染色體隱性重度早髮型視網膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養不良、視網膜色素變性、X連鎖視網膜劈裂症、Usher氏症候群、年齡相關性黃斑變性、萎縮性年齡相關性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網膜病、視網膜脫落、眼內炎、青光眼和後葡萄膜炎。在一些方面，本發明提供用於將異源核酸遞送至個體的中樞神經系統(CNS)的方法，其包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒施用於個體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些方面，本發明提供一種與用包含野生型衣殼的rAAV轉導細胞相比改進對個體的中樞神經系統(CNS)中細胞的rAAV轉導的方法，該方法包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒施用於所述個體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在進一步的方面，本發明提供一種改進異源核酸在個體的中樞神經系統(CNS)中表達的方法，所述方法包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒施用於所述個體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在更進一步的方面中，本發明提供一種治療個體的中樞神經系統(CNS)的病症的方法，其包括將有效量的包含rAAV顆粒的組合物施用於所述個體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸以增加的表達水平表達，所述增加是與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒的異源核酸的表達水平相比。在一些實施方案中，將所述核酸的表達增加至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒導致與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒相比降低的神經性炎症(neuroinflammation)。在一些實施方案中，將神經性炎症減少至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合相比，所述一個或多個胺基酸取代降低rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，與包含參考衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合相比，所述一個或多個胺基酸取代將rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或約至少100％。在一些實施方案中，參考rAAV衣殼包含野生型rAAV衣殼或衣殼蛋白。在一些實施方案中，參考rAAV衣殼包含缺乏一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼或衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代增加rAAV顆粒對眼或CNS中細胞的轉導效率。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將rAAV顆粒對眼或CNS中細胞的轉導效率增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或約至少100％，例如與包含野生型AAV衣殼蛋白的參考rAAV衣殼相比。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述施用包含直接脊髓注射和/或腦內施用。在一些實施方案中，所述腦內施用位於選自下組的部位：大腦、髓質、腦橋(pons)、小腦、顱內腔、圍繞腦的腦膜、硬腦膜(duramater)、蛛網膜(arachnoidmater)、軟腦膜(piamater)、圍繞腦的蛛網膜下腔的腦脊液(CSF)、小腦的深部小腦核、大腦的腦室系統、蛛網膜下腔、紋狀體(striatum)、皮層、隔膜(septum)、丘腦、下丘腦和腦的實質(parenchymaofthebrain)。在一些實施方案中，所述施用是腦室內注射入至少一個大腦側腦室。在一些實施方案中，所述施用是鞘內注射於頸(cervical)、胸和/或腰部中。在一些實施方案中，所述施用是紋狀體內注射。在一些實施方案中，所述施用是丘腦內注射。在一些實施方案中，所述施用是(腦)實質內注射。在一些實施方案中，所述施用包含直接脊髓注射、顱內和/或腦內施用。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒在單一部位施用。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述rAAV顆粒通過立體定向遞送(stereotacticdelivery)來遞送。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒通過對流增強遞送(convectionenhanceddelivery)來遞送。在一些實施方案中，使用CED遞送系統來施用所述rAAV顆粒。在一些實施方案中，CED遞送系統包含套管和/或泵。在一些實施方案中，所述套管是抗回流套管或階梯式套管。在一些實施方案中，泵是手動泵。在一些實施方案中，泵是滲透泵。在一些實施方案中，泵是輸液泵。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述硫酸乙醯肝素蛋白聚糖在CNS的一種或多種細胞上表達。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述硫酸乙醯肝素蛋白聚糖在神經元上表達。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸在CNS的一種或多種細胞中表達。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述異源核酸在神經元中表達。在一些實施方案中，所述異源核酸僅在神經元中表達。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於448、451、484、487、527、532、585和/或588處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置484、487、527、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R347、R350、K390、K395、R448、R451、R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包含R347A、R350A、K390A、K395A、R448A、R451A、R484A、R487A、K527A、K532A、R585A和/或R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含胺基酸取代R585A和R588A，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含胺基酸取代K532A，編號基於AAV2的VP1。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置485、488、528、533、586或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用帶正電荷的胺基酸殘基取代疏水性胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實施方案中，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個胺基酸取代包括R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼CNS相關的基因。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：酶、神經營養因子、在患有CNS相關的病症的個體中缺乏或突變的多肽、抗氧化劑、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子、α-突觸核蛋白、酸性β-葡糖苷酶(GBA)、β-半乳糖苷酶-1(GLB1)、艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶(IDS)、半乳糖基神經醯胺酶(GALC)、甘露糖苷酶、α-D-甘露糖苷酶(MAN2B1)、β-甘露糖苷酶(MANBA)、假芳基硫酸酯酶A(ARSA)、N-乙醯葡糖胺-1-磷酸轉移酶(GNPTAB)、酸性鞘磷脂酶(ASM)、尼曼-皮克C蛋白(NPC1)、酸性α-1,4-葡糖苷酶(GAA)、己糖胺酶β亞基、HEXB、N-磺基葡糖胺磺基水解酶(MPS3A)、N-α-乙醯葡糖胺酶(NAGLU)、肝素乙醯-CoA、α-葡糖胺酶N-乙醯轉移酶(MPS3C)、N-乙醯葡糖胺-6-硫酸酯酶(GNS)、α-N-乙醯半乳糖胺酶(NAGA)、β-葡糖醛酸酶(GUSB)、己糖胺酶α亞基(HEXA)、亨廷頓蛋白(HTT)、溶酶體酸性脂肪酶(LIPA)、天冬氨醯葡糖胺酶、α-半乳糖苷酶A、棕櫚醯蛋白硫酯酶、三肽基肽酶、溶酶體跨膜蛋白、半胱氨酸轉運蛋白、酸性神經醯胺酶、酸性α-L-巖藻糖苷酶、組織蛋白酶A、α-L-艾杜糖醛酸糖苷酶、芳基硫酸酯酶B、芳基硫酸酯酶A、N-乙醯半乳糖胺-6-硫酸酯、酸性β-半乳糖苷酶或α-神經醯胺酶。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：神經元細胞凋亡抑制蛋白(NAIP)、神經生長因子(NGF)、神經膠質來源的生長因子(GDNF)、腦源性生長因子(BDNF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、酪氨酸羥化酶(TH)、GTP環化水解酶(GTPCH)、胺基酸脫羧酶(AADC)、抗氧化劑，抗血管生成多肽、抗炎多肽，和天冬氨酸醯基酶(aspartoacylase,ASPA)。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在一些實施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實施方案中，所述異源核酸處於在CNS的一種或多種細胞中表達的啟動子序列的控制下。在一些實施方案中，所述異源核酸處於選自下組的啟動子序列的控制下：巨細胞病毒(CMV)立即早期啟動子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動子，猿猴病毒40(SV40)啟動子，CK6啟動子，甲狀腺素轉運蛋白啟動子(TTR)，TK啟動子，四環素響應性啟動子(TRE)，HBV啟動子，hAAT啟動子，LSP啟動子，嵌合肝特異性啟動子(LSP)，E2F啟動子，端粒酶(hTERT)啟動子；巨細胞病毒增強子/雞β-肌動蛋白/兔β球蛋白啟動子(CAG)啟動子，延伸因子1-α啟動子(EF1-α)啟動子，人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動子，雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子，逆轉錄病毒勞氏肉瘤病毒(RSV)LTR啟動子，二氫葉酸還原酶啟動子，和13-肌動蛋白啟動子。在一些實施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適於治療性多肽或治療性核酸在CNS的一種或多種細胞中表達的啟動子。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞包含腦的一種或多種細胞。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述腦細胞是神經元。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體。在一些實施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內鹼基對。在一些實施方案中，所述第一核酸序列和第二核酸序列通過突變的AAVITR連接，其中所述突變的AAVITR包含D區的缺失並包含末端解析序列的突變。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述個體是人。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸編碼用於治療CNS的病症的治療性多肽或治療性核酸。在一些實施方案中，所述CNS的病症為溶酶體貯積病(LSD)、亨廷頓氏病、癲癇、帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、中風、皮質基底節變性(CBD)、皮質基底神經節變性(CBGD)、額顳葉痴呆(FTD)、多系統萎縮症(MSA)、進行性核上麻痺(PSP)或腦癌。在一些實施方案中，所述病症為選自下組的溶酶體貯積病：天冬氨醯葡糖胺尿症(Aspartylglusoaminuria)、法布裡病(Fabry)、嬰兒巴藤病(CNL1)、經典嬰兒後期巴藤病(CNL2)、幼年巴藤病(CNL3)、巴藤病形式CNL4、巴藤病形式CNL5、巴藤病形式CNL6、巴藤病形式CNL7、巴藤病形式CNL8、胱氨酸貯積症、法伯氏病、巖藻糖苷貯積症、半乳糖苷貯積症(Galactosidosialidosis)、戈謝病(Gaucherdisease)1型、戈謝病2型、戈謝病3型、GM1神經節苷脂貯積症、亨特病(Hunterdisease)、克拉伯病(Krabbedisease)、α甘露糖苷貯積症、β甘露糖苷貯積症、馬-拉病(Maroteaux-Lamy)、異染性腦白質營養不良症、穆爾丘病(Morquio)A、穆爾丘病B、粘脂貯積病II/III、尼曼-皮克病(Niemann-Pick)A、尼曼-皮克病B、尼曼-皮克病C、蓬佩病(Pompedisease)、桑德霍夫病(Sandhoffdisease)、聖菲利柏氏症(Sanfillipo)A、聖菲利柏氏症B、聖菲利柏氏症C、聖菲利柏氏症D、辛德勒病(Schindlerdisease)、辛德勒-神崎病(Schindler-Kanzaki)、涎酸貯積症、史萊氏症(Slydisease)、泰-薩二氏病(Tay-Sachsdisease)和沃爾曼病(Wolmandisease)。在一些實施方案中，所述CNS的病症是亨廷頓氏病或帕金森氏病。在一些方面，本發明提供在個體中治療亨廷頓氏病的方法，其包括將有效量的包含重組腺相關病毒(rAAV)顆粒的組合物施用於個體的紋狀體，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實施方案中，所述治療性多肽是亨廷頓蛋白多肽或其片段。在一些實施方案中，所述亨廷頓蛋白多肽或其片段是功能性亨廷頓蛋白多肽或其功能片段。在一些實施方案中，所述治療性核酸包含針對亨廷頓蛋白的RNAi。在一些實施方案中，所述RNAi是miRNA。在一些方面，本發明提供治療個體中的帕金森氏病的方法，其包括將有效量的包含重組腺相關病毒(rAAV)顆粒的組合物施用於個體的紋狀體，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實施方案中，所述治療性多肽是TH、GTPCII、GDNF、BDNF和/或AADC；或其片段。在一些實施方案中，所述治療性多肽是AADC或其片段。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸以增加的表達水平表達，所述增加是與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒的異源核酸的表達水平相比。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒導致與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒相比降低的神經性炎症。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合相比，所述一個或多個胺基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或、約至少100％。在一些實施方案中，與包含參考衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合相比，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，參考rAAV衣殼包含野生型rAAV衣殼或衣殼蛋白。在一些實施方案中，參考rAAV衣殼包含缺乏一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼或衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述rAAV顆粒通過立體定向遞送來遞送。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒通過對流增強遞送來遞送。在一些實施方案中，使用CED遞送系統來施用所述rAAV顆粒。在一些實施方案中，所述套管是抗回流套管或階梯式套管。在一些實施方案中，所述CED遞送系統包含套管和/或泵。在一些實施方案中，使用CED遞送系統施用所述rAAV顆粒。在一些實施方案中，所述泵是手動泵。在一些實施方案中，所述泵是滲透泵。在一些實施方案中，所述泵是輸液泵。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述硫酸乙醯肝素蛋白聚糖在CNS的一種或多種細胞上表達。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述硫酸乙醯肝素蛋白聚糖在神經元上表達。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸在CNS的一種或多種細胞中表達。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述異源核酸在神經元中表達。在一些實施方案中，所述異源核酸僅(exclusively)在神經元中表達。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置484、487、527、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R347、R350、K390、K395、R448、R451、R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括R347A、R350A、K390A、K395A、R448A、R451A、R484A、R487A、K527A、K532A、R585A和/或R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包括胺基酸取代R585A和R588A，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包括胺基酸取代K532A，編號基於AAV2的VP1。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代在位置485、488、528、533、586或589，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528或533處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用帶正電荷的胺基酸殘基取代疏水性胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實施方案中，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個胺基酸取代包括R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼、或AAVrh10衣殼。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸處於在CNS的一種或多種細胞中表達的啟動子序列的控制下。在一些實施方案中，所述異源核酸處於選自下組的啟動子序列的控制下：巨細胞病毒(CMV)立即早期啟動子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動子，猿猴病毒40(SV40)啟動子，CK6啟動子，甲狀腺素轉運蛋白啟動子(TTR)，TK啟動子，四環素響應性啟動子(TRE)，HBV啟動子，hAAT啟動子，LSP啟動子，嵌合肝特異性啟動子(LSP)，E2F啟動子，端粒酶(hTERT)啟動子；巨細胞病毒增強子/雞β-肌動蛋白/兔β球蛋白啟動子(CAG)啟動子，延伸因子1-α啟動子(EF1-α)啟動子，人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動子，雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子，逆轉錄病毒勞氏肉瘤病毒(RSV)LTR啟動子，二氫葉酸還原酶啟動子，和13-肌動蛋白啟動子。在一些實施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適於治療性多肽或治療性核酸在CNS的一種或多種細胞中表達的啟動子。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞包含腦的一種或多種細胞。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述腦細胞是神經元。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體。在一些實施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內鹼基對。在一些實施方案中，所述第一核酸序列和第二核酸序列通過突變的AAVITR連接，其中所述突變的AAVITR包含D區的缺失並包含末端解析序列的突變。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述個體是人。在一些方面，本發明提供用於任何上述具體實施方案的試劑盒，其包含重組腺相關病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些方面，本發明提供用於將異源核酸遞送至個體的中樞神經系統(CNS)的試劑盒，其包含含有重組腺相關病毒(rAAV)顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些方面，本發明提供用於治療個體中的中樞神經系統(CNS)病症的試劑盒，其包含含有重組腺相關病毒(rAAV)顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和b)rAAV載體，其包含用於治療CNS病症的異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述CNS病症是亨廷頓氏病。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實施方案中，所述治療性多肽是亨廷頓蛋白多肽或其片段。在一些實施方案中，所述亨廷頓蛋白多肽或其片段是功能性亨廷頓蛋白多肽或其功能片段。在一些實施方案中，所述治療性核酸包含針對亨廷頓蛋白的RNAi。在一些實施方案中，所述RNAi是miRNA。在一些實施方案中，所述CNS病症是帕金森氏病。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實施方案中，所述治療性多肽是TH、GTPCII、GDNF、BDNF和/或AADC；或其片段。在一些實施方案中，所述治療性多肽是AADC或其片段。在一些方面，本發明提供重組腺相關病毒(rAAV)顆粒，其用於在任何上述實施方案中使用。在一些方面，本發明提供重組腺相關病毒(rAAV)顆粒，其用於將異源核酸遞送至個體的中樞神經系統(CNS)，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些方面，本發明提供重組腺相關病毒(rAAV)顆粒，其用於治療個體的中樞神經系統(CNS)的病症，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些方面，本發明提供用於治療個體中的亨廷頓氏病的重組腺相關病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複，其中所述rAAV顆粒經配製用於遞送至紋狀體。在一些方面，本發明提供用於治療個體中的帕金森氏病的重組腺相關病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複，其中所述rAAV顆粒經配製用於遞送至紋狀體。在一些方面，本發明提供用於治療個體中的亨廷頓氏病的重組腺相關病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複，其中所述rAAV顆粒經配製用於單一部位遞送(例如至個體的CNS)。在一些方面，本發明提供用於治療個體中的帕金森氏病的重組腺相關病毒(rAAV)顆粒，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複，其中所述rAAV顆粒經配製用於單一部位遞送(例如至個體的CNS)。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸以增加的表達水平表達，所述增加是與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒的異源核酸的表達水平相比。在一些實施方案中，與包含含有參考衣殼的rAAV衣殼的rAAV顆粒相比，所述rAAV顆粒導致降低的神經性炎症。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，與包含參考rAAV衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合相比，所述一個或多個胺基酸取代降低所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％或約至少100％。在一些實施方案中，與包含參考衣殼的rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合相比，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，參考rAAV衣殼包含野生型rAAV衣殼或衣殼蛋白。在一些實施方案中，參考rAAV衣殼包含缺乏一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼或衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述硫酸乙醯肝素蛋白聚糖在CNS的一種或多種細胞上表達。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞為是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述硫酸乙醯肝素蛋白聚糖在神經元上表達。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸在CNS的一種或多種細胞中表達。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述異源核酸在神經元中表達。在一些實施方案中，所述異源核酸僅在神經元中表達。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置484、487、527、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R347、R350、K390、K395、R448、R451、R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:2、4和/或6具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包含R347A、R350A、K390A、K395A、R448A、R451A、R484A、R487A、K527A、K532A、R585A和/或R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R484和R487處或位置R585和R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包括胺基酸取代R585A和R588A，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包括胺基酸取代K532A，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼或AAVrh10衣殼。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置485、488、528、533、586或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用帶正電荷的胺基酸殘基取代疏水性胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸殘基。在一些實施方案中，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於AAVrh8R的VP1，所述AAVrh8R包含SEQIDNO:9的胺基酸序列。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括位置R485、R488、R533或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:11的rAAV衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含一個或多個rAAV衣殼蛋白，所述rAAV衣殼蛋白與SEQIDNO:11具有至少約90％，至少約91％，至少約92％，至少約93％，至少約94％，至少約95％，至少約96％，至少約97％，至少約98％，至少約99％，或100％序列同一性。在一些實施方案中，所述一個胺基酸取代包括R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述異源核酸處於在CNS的一種或多種細胞中表達的啟動子序列的控制下。在一些實施方案中，所述異源核酸處於選自下組的啟動子序列的控制下：巨細胞病毒(CMV)立即早期啟動子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動子，猿猴病毒40(SV40)啟動子，CK6啟動子，甲狀腺素轉運蛋白啟動子(TTR)，TK啟動子，四環素響應性啟動子(TRE)，HBV啟動子，hAAT啟動子，LSP啟動子，嵌合肝特異性啟動子(LSP)，E2F啟動子，端粒酶(hTERT)啟動子；巨細胞病毒增強子/雞β-肌動蛋白/兔β球蛋白啟動子(CAG)啟動子，延伸因子1-α啟動子(EF1-α)啟動子，人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動子，雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子，逆轉錄病毒勞氏肉瘤病毒(RSV)LTR啟動子，二氫葉酸還原酶啟動子，和13-肌動蛋白啟動子。在一些實施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適於治療性多肽或治療性核酸在CNS的一種或多種細胞中表達的啟動子。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞包含腦的一種或多種細胞。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞是少突膠質細胞、星形膠質細胞、神經元、腦實質細胞、小膠質細胞、室管膜細胞，和/或浦肯野細胞。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體。在一些實施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內鹼基對。在一些實施方案中，所述第一核酸序列和第二核酸序列通過突變的AAVITR連接，其中所述突變的AAVITR包含D區的缺失並包含末端解析序列的突變。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述個體是人。在上述方面和實施方案的一些實施方案中，所述rAAV顆粒在組合物中。在一些實施方案中，所述組合物包含緩衝液和/或藥學上可接受的賦形劑。在一些實施方案中，所述試劑盒或rAAV顆粒進一步包含用於將所述rAAV顆粒的組合物遞送至CNS的說明書。在一些實施方案中，所述試劑盒或rAAV顆粒進一步包含用於將所述rAAV顆粒的組合物遞送至紋狀體的說明書。在一些方面，本發明提供包含AAVrh8R衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAVrh8R衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，其中與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代增加所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合，或其中所述一個或多個胺基酸取代位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，所述胺基酸取代位於位置586處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括位置A586處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括A586R或A586K取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:10的rAAV衣殼蛋白。在一些方面，本發明提供增加包含AAVrh8R衣殼蛋白的rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合的方法，其包括將一個或多個胺基酸取代引入衣殼蛋白，其中與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代增加所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，所述胺基酸取代位於位置586處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括位置A586處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述胺基酸取代包括A586R或A586K取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:10的rAAV衣殼蛋白。在一些方面，本發明提供用於將異源核酸遞送至個體的視網膜的方法，其包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒玻璃體內施用於個體，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些方面，本發明提供在將rAAV顆粒經玻璃體內遞送至個體眼部後與用包含野生型衣殼的rAAV轉導細胞相比改進細胞的rAAV轉導的方法，所述方法包括將一個或多個胺基酸取代併入AAV衣殼蛋白中，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些方面，本發明提供在將rAAV顆粒玻璃體內遞送至個體眼部後改進異源核酸的表達的方法，所述方法包括將一個或多個胺基酸取代併入AAV衣殼蛋白中，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些方面，本發明提供治療個體中的眼部病症的方法，其包括將包含rAAV顆粒的組合物玻璃體內遞送至個體的視網膜，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些方面，本發明提供用於將載體玻璃體內遞送至個體眼部的系統，其包含a)含有有效量的rAAV顆粒的組合物，其中i)所述rAAV顆粒的衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，和ii)載體，其包含編碼治療性多肽或治療性RNA的異源核酸和至少一個AAV末端重複；和b)用於玻璃體內遞送所述rAAV的裝置。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAVrh8R、AAV1、AAV6、AAV8、AAV9或AAVrh10血清型衣殼。在一些方面，本發明提供用於治療眼部病症的試劑盒，其包含a)含有rAAV顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含i)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處或在對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號，和ii)rAAV載體，其包含用於治療眼部病症的異源核酸和至少一個AAV反向末端重複；和b)適於玻璃體內施用的藥物賦形劑。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAVrh8R、AAV1、AAV6、AAV8、AAV9或AAVrh10衣殼。在一些方面，本發明提供包含AAV1衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV1衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，其中與包含野生型AAV1衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細胞的轉導效率，或其中所述一個或多個胺基酸取代位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些方面，本發明提供包含AAV6衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV6衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，其中與包含野生型AAV6衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細胞的轉導效率，或其中所述一個或多個胺基酸取代位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些方面，本發明提供包含AAV8衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV8衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，其中與包含野生型AAV8衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細胞的轉導效率，或其中所述一個或多個胺基酸取代位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些方面，本發明提供包含AAV9衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV9衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，其中與包含野生型AAV9衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細胞的轉導效率，或其中所述一個或多個胺基酸取代位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些方面，本發明提供包含AAVrh10衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAVrh10衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，其中與包含野生型AAVrh10衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代增加所述rAAV顆粒至眼中細胞的轉導效率，或其中所述一個或多個胺基酸取代位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些方面，本發明提供包含AAV3衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV3衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼、或AAVrh10衣殼。在一些實施方案中，所述轉導效率增加至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代增加所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒對於眼部或中樞神經系統中的細胞的轉導效率增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，眼的細胞是視網膜細胞、感光細胞、視網膜色素上皮細胞、雙極細胞、水平細胞、無長突細胞、Muller細胞和/或神經節細胞。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，所述帶正電荷的胺基酸殘基代替疏水性胺基酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用精氨酸或賴氨酸殘基取代丙氨酸、絲氨酸、穀氨醯胺或蘇氨酸殘基。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置586和/或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置A586和/或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括A586R或A586K取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括T589R或T589K取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型1(AAV1)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置586和/或589處，編號基於AAV1的VP1編號。在一些實施方案中，所述AAV1的VP1包含SEQIDNO:12的胺基酸序列。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置S586和/或T589處的取代，編號基於AAV1的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括S586R或S586K取代，編號基於AAV1的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括T589R或T589K取代，編號基於AAV1的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型6(AAV6)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置586和/或589處，編號基於AAV6的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:13的胺基酸序列的AAV6的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置S586和/或T589處的取代，編號基於AAV6的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括S586R取代，編號基於AAV6的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括T589R或T589K取代，編號基於AAV6的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型8(AAV8)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代在位置588和/或591，編號基於AAV8的VP1編號。在一些實施方案中，所述AAV8的VP1包含SEQIDNO:14的胺基酸序列。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置Q588和/或T591處的取代，編號基於AAV8的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括Q588R或Q588K取代，編號基於AAV8的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包含T591R取代，編號基於AAV8的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型9(AAV9)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置586和/或589處，編號基於AAV9的VP1編號。在一些實施方案中，所述AAV9的VP1包含SEQIDNO:15的胺基酸序列。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置S586和/或A589處的取代，編號基於AAV9的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括S586R或S586K取代，編號基於AAV9的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括A589R或A589K取代，編號基於AAV9的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型rh10(AAVrh10)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置588和/或591處，編號基於AAVrh10的VP1編號。在一些實施方案中，所述AAVrh10的VP1包含SEQIDNO:16的胺基酸序列。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置Q588和/或A591處的取代，編號基於AAVrh10的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括Q588R或Q588K取代，編號基於AAVrh10的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括A591R或A591K取代，編號基於AAVrh10的VP1。在一些實施方案中，本發明提供包含AAV3衣殼蛋白的rAAV顆粒，其中所述AAV3衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒對於眼或中樞神經系統中細胞的轉導效率增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV6衣殼、AAV8衣殼、AAVrh8R衣殼、AAV9衣殼、或AAVrh10衣殼。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：抗氧化劑、神經營養因子、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。在進一步的實施方案中，所述異源核酸編碼選自下組的多肽：Prph2、RPE65、AIPL1、GUCY2D、LCA5、CRX、CEP290、MYO7a、Clarin、ABCA4、RDH12、IMPDH1、CRB1、LRAT、NMNAT1、TULP1、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3、GNAT2、GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO、BCL2、BCL-X、NFκB、內皮他汀、血管他汀、sFlt、sPDGF-R、IL10、抗-IL17、sIL17R、IL1-ra、抗-TGFβ、sTNF-RI、sTNF-RII和IL4。在其他實施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在進一步的實施方案中，所述治療性核酸是siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。在一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含含有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變與HSPG的結合(例如降低或去除與HSPG的結合)或位於對應於胺基酸484、487、527、532、585或588的一個或多個位置處，編號基於AAV2的VP1編號；和編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸，其中所述異源核酸處於在視網膜中表達的啟動子序列的控制下。在一些實施方案中，其中所述異源核酸可操作地連接至適於所述治療性多肽或治療性核酸在一個或多個視網膜細胞類型中表達的啟動子。在一些實施方案中，所述視網膜細胞是感光細胞、視網膜色素上皮細胞、雙極細胞、水平細胞、無長突細胞、Muller細胞和/或神經節細胞。在一些實施方案中，所述啟動子是視紫紅激酶(RK)啟動子、視蛋白啟動子、巨細胞病毒(CMV)啟動子、雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子。在一些實施方案中，所述個體是人。在一些實施方案中，所述異源核酸用於治療選自下組的眼部病症：常染色體隱性重度早髮型視網膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養不良、視網膜色素變性、X連鎖視網膜劈裂症、Usher氏症候群、年齡相關性黃斑變性、萎縮性年齡相關性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網膜病、視網膜脫落、眼內炎、青光眼和後葡萄膜炎。在一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體。在一些實施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內鹼基對。在一些實施方案中，所述第一核酸序列和第二核酸序列通過突變的AAVITR連接，其中所述突變的AAVITR包含D區的缺失並包含末端解析序列的突變。在一些實施方案中，所述個體是人。在一些實施方案中，與包含野生型AAVrh8R衣殼蛋白的AAV顆粒相比，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒對於眼或中樞神經系統中的細胞的轉導效率增加約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。本文引用的所有參考文獻(包括專利申請和出版物)通過提述以其整體併入。附圖簡述圖1表示硫酸乙醯肝素蛋白聚糖結合中涉及的衣殼殘基和引入以生成AAV2HBKO突變體的突變。編號基於VP1胺基酸序列。圖2顯示與野生型AAV2顆粒(AAV2CBA-sFLT02)相比，用HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2HBKOCBA-sFLT02)觀察到的培養物中293細胞的轉導的減少。通過在用野生型或HBKO突變體AAV2顆粒(其攜帶有使用CBA啟動子來驅動Flt表達的載體)注射後48小時測量細胞培養基中存在的可溶性Flt(sFLT)的量來測定轉導。圖3顯示與野生型AAV2顆粒(AAV2CBA-GFP)相比，用HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2HBKOCBA-GFP)觀察到的培養物中293和Hela細胞的轉導的減少。通過在用野生型或HBKO突變體AAV2顆粒(其攜帶有使用CBA啟動子來驅動EGFP表達的載體)的注射後48小時取得的細胞的螢光成像來測定轉導。圖4A和4B顯示玻璃體內(圖4A)或視網膜下(圖4B)注射野生型AAV2或HBKO突變體AAV2顆粒後所觀察到的轉導。通過用編碼Flt的載體轉導後的可溶性Flt(sFLT)的表達來測定轉導。對於每個實驗指示了注射的載體基因組的數目(108或109vg)。圖5顯示在玻璃體內注射後HBKO突變體AAV2顆粒未能轉導小鼠眼。給予小鼠玻璃體內注射的野生型(AAV2CBA-GFP)或HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2HBKOCBA-GFP)(其攜帶使用CBA啟動子來驅動EGFP表達的載體)，並通過螢光顯微術將切片進行顯像。圖6顯示在視網膜下注射後HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2CBAHBKO)與野生型顆粒(AAV2CBA)相比引起轉導的顯著增加。通過在用AAV2顆粒(其攜帶由使用CBA啟動子來驅動Flt表達的載體)注射後可溶性Flt(sFLT)的表達來測定轉導。指示注射的載體基因組的數目(108或109vg)。圖7顯示與野生型顆粒(AAV2CBA-GFP)相比，HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2HBKOCBA-GFP)在視網膜下注射後引起感光細胞的轉導的顯著增加(如標記的)。通過在用AAV2顆粒(其攜帶有使用CBA啟動子來驅動EGFP表達載體)轉導後GFP表達的螢光成像來測量轉導。圖8顯示與野生型顆粒(AAV2RK)相比，HBKO突變體AAV2顆粒(AAV2RKHBKO)在視網膜下注射後引起感光物的轉導的顯著增加。通過在用AAV2顆粒(其攜帶有使用視紫紅激酶(RK)啟動子來驅動Flt表達的載體)注射後可溶性Flt(sFLT)的表達來測定轉導。指示注射的載體基因組的數目(108或109vg)。圖9A和9B顯示與野生型小鼠中的AAV2-EGFP(圖9B)相比，在紋狀體內注射AAV2HBKO-EGFP(圖9A)後30天小鼠腦中EGFP的表達。在每個圖面中，EGFP的表達通過CBA啟動子驅動，並使用螢光顯微術來顯現。圖10A和10B顯示與YAC128HD小鼠中的AAV1-miRNA-Htt-GFP(圖10B)相比，在紋狀體內注射AAV2HBKO-miRNA-Htt-GFP(圖10A)後30天小鼠腦中GFP的表達。所述miRNA-Htt-GFP載體意指表達靶向人Htt的人工miRNA和GFP報告蛋白的構建體。在每個圖面中，GFP的表達通過CBA啟動子驅動，並使用螢光顯微術以三個不同的放大倍數(4X、10X和20X，如標記的)來顯現。圖11A顯示與未處理的對照相比，注射AAV1-miRNA-Htt和AAV2HBKO-miRNA-Htt後30天紋狀體小鼠腦穿孔物(brainpunches)中人HTTmRNA水平的qPCR分析。圖11B顯示與未處理的對照相比，注射AAV1-miRNA-Htt和AAV2HBKO-miRNA-Htt後30天皮質小鼠腦穿孔物中人Htt蛋白水平的Western印跡分析。圖12A-12C顯示與未處理的對照(圖12A)相比，用AAV2HBKO-miRNA-Htt-GFP(圖12B)或AAV1-miRNA-Htt-GFP(圖12C)注射後30天YAC128小鼠紋狀體中Iba1的表達。圖13A-13C顯示與未處理的對照(圖13A)相比，用AAV2HBKO-miRNA-Htt-GFP(圖13B)或AAV1-miRNA-Htt-GFP(圖13C)注射後30天YAC128小鼠紋狀體中GFP的表達。圖14比較了AAV2和AAVrh8R衣殼之間的硫酸乙醯肝素蛋白聚糖結合中涉及的衣殼殘基。編號基於VP1胺基酸序列。圖15顯示AAV2和AAVrh8R在負責AAV2的乙醯肝素結合的殘基處的胺基酸比對。圈出了AAVrh8R精氨酸衣殼修飾的位置。圖16A顯示與野生型AAVrh8R相比，由AAVrh8RA586R突變體表現出的HeLa細胞的改進的體外轉導。通過用AAVrh8R或AAVrh8R精氨酸修飾的載體感染後48小時培養基中的sFLT02來監測轉導。圖16B顯示與野生型AAVrh8R相比，由AAVrh8RR533A突變體表現出的HeLaRC32細胞的減少的體外轉導。通過用AAVrh8R或AAVrh8R精氨酸修飾的載體感染後48小時培養基中的sFLT02來監測轉導。圖17A-17D顯示與野生型AAVrh8R相比，由AAVrh8RA586R和R533A突變體表現出的體外轉導水平。AAVrh8RA586R突變體(圖17B)顯示與野生型AAVrh8R(圖17A)相比NS1細胞的增加的體外轉導。AAVrh8RR533A突變體(圖17D)顯示與野生型AAVrh8R(圖17C)相比HeLa細胞的減少的體外轉導。通過用AAVrh8R或AAVrh8R精氨酸修飾的載體感染後48小時細胞中的EGFP表達來監測轉導。圖18A和18B顯示由AAVrh8RA586R和R533A突變體表現出的C57Bl6小鼠中視網膜下轉導的水平。(圖18A)AAVrh8RA586R突變體顯示與野生型AAVrh8R相比減少的視網膜下轉導。還測試了AAV2載體。(圖18B)AAVrh8RR533A突變體顯示與野生型AAVrh8R和未處理的小鼠(mice)相比增加的視網膜下轉導。通過視網膜下施用AAVrh8R或AAVrh8R精氨酸修飾的載體後30天C57Bl6小鼠的視網膜裂解物(lysate)中的sFLT02來監測轉導。圖19顯示玻璃體內施用AAV2、AAVrh8R或AAVrh8R-A586R載體後30天C57Bl6小鼠的視網膜裂解物中的sFLT02的水平。圖20顯示AAV2的負責乙醯肝素結合的殘基處與AAVrh8R、AAV1、AAV6、AAV8、AAV9和AAVrh10的胺基酸比對。發明詳述如本申請中所述，發明人令人驚奇地發現：rAAV顆粒中對應於胺基酸484、487、532、585和/或588(編號基於AAV2的VP1編號)的修飾證明了施用於受試者的眼或CNS後增加的細胞轉導。不願受任何理論束縛，認為這些rAAV顆粒具有降低的或去除的與HSPG的結合或在衣殼上具有修飾的電荷，使得所述rAAV顆粒的施用導致受試者的眼或CNS中的細胞轉導增加。因此，本發明提供用於將異源核酸遞送至個體的眼或CNS的方法，其包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒施用於個體的眼或CNS，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些實施方案中，所述胺基酸取代導致降低的或去除的與HSPG的結合。在一些方面，本發明提供用於將異源核酸遞送個體眼部的方法，其包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒施用於個體的視網膜下，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些方面，本發明提供在將rAAV顆粒視網膜下遞送至個體眼部後與用包含野生型衣殼的rAAV轉導細胞相比改進細胞的rAAV轉導的方法，所述方法包括在AAV衣殼蛋白中併入一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些實施方案中，所述胺基酸取代導致降低的或去除的與HSPG的結合。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。在一些方面，本發明提供在將rAAV顆粒視網膜下遞送至個體的眼部後改進異源核酸的表達的方法，所述方法包括在AAV衣殼蛋白中併入一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含所述異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些實施方案中，所述胺基酸取代導致降低的或去除的與HSPG的結合。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。在一些方面，本發明提供在將rAAV顆粒視網膜下遞送至個體眼部後改進異源核酸的表達的方法，所述方法包括在AAV衣殼蛋白中併入一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處；其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼蛋白和rAAV載體，所述rAAV載體包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。所述改進是與包含野生型衣殼的rAAV顆粒相比的轉導。在一些實施方案中，所述胺基酸取代導致降低的或去除的與HSPG的結合。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2衣殼的R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。在一些方面，本發明提供治療個體中的眼部病症的方法，其包括將包含有效量的rAAV顆粒的組合物遞送至個體的視網膜，其中所述rAAV顆粒包含a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些實施方案中，所述胺基酸取代導致降低的或去除的與HSPG的結合。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。本發明還提供用於將載體視網膜下遞送至個體眼部的系統，其包含a)含有有效量的rAAV顆粒的組合物，其中i)所述rAAV顆粒的衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，且ii)所述載體包含編碼治療性多肽或治療性RNA的異源核酸和至少一個AAV末端重複；和b)用於視網膜遞送所述rAAV的裝置。在一些實施方案中，所述胺基酸取代導致降低的或去除的與HSPG的結合。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。在一些方面，本發明還提供用於將異源核酸遞送至個體的中樞神經系統(CNS)的方法，其包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒施用於個體的CNS。所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和(b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。這些方法表現出在將rAAV顆粒遞送至個體的CNS後改進的異源核酸表達和/或細胞的rAAV轉導，例如與用包含野生型衣殼的rAAV轉導細胞相比的改進。而且，本發明的方法能夠感染特定的細胞(例如神經元)同時仍實現普遍的和穩固的轉導效率。所述rAAV顆粒和方法適用於治療CNS病症，所述CNS病症包括但不限於亨廷頓氏病。在一些實施方案中，所述胺基酸取代導致降低的或去除的與HSPG的結合。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含rAAV2的R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1(SEQIDNO:1)。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含衣殼，所述衣殼包含AAVrh8R的A586R和/或R533A取代，編號基於AAVrh8R的VP1(SEQIDNO:9)。本發明還提供含有rAAV顆粒或含rAAV顆粒的組合物的試劑盒，所述rAAV顆粒具有(a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和(b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。這些試劑盒可用於將異源核酸遞送至個體的眼部或CNS，以及用於治療個體中的眼部或CNS病症(例如治療視網膜病或亨廷頓氏病)。I.一般技術本領域的技術人員一般地充分理解並使用常規方法通常地採用本申請所描述或引用的技術和步驟，例如，如下文獻中描述的廣泛利用的方法：MolecularCloning:ALaboratoryManual(Sambrook等，第4版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,2012)；CurrentProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubel等編,2003)；MethodsinEnzymology系列(AcademicPress,Inc.)；PCR2:APracticalApproach(M.J.MacPherson,B.D.HamesandG.R.Taylor編,1995)；Antibodies,ALaboratoryManual(Harlow和Lane,編,1988)；CultureofAnimalCells:AManualofBasicTechniqueandSpecializedApplications(R.I.Freshney,第六版,J.WileyandSons,2010)；OligonucleotideSynthesis(M.J.Gait編,1984)；MethodsinMolecularBiology,HumanaPress；CellBiology:ALaboratoryNotebook(J.E.Cellis編,AcademicPress,1998)；IntroductiontoCellandTissueCulture(J.P.Mather和P.E.Roberts,PlenumPress,1998)；CellandTissueCulture:LaboratoryProcedures(A.Doyle,J.B.Griffiths,及D.G.Newell,編,J.WileyandSons,1993-8)；HandbookofExperimentalImmunology(D.M.Weir和C.C.Blackwell編,1996)；GeneTransferVectorsforMammalianCells(J.M.Miller和M.P.Calos編,1987)；PCR:ThePolymeraseChainReaction,(Mullis等編,1994)；CurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coligan等編,1991)；ShortProtocolsinMolecularBiology(Ausubel等編,J.WileyandSons,2002)；Immunobiology(C.A.Janeway等,2004)；Antibodies(P.Finch,1997)；Antibodies:APracticalApproach(D.Catty編,IRLPress,1988-1989)；MonoclonalAntibodies:APracticalApproach(P.Shepherd和C.Dean編,OxfordUniversityPress,2000)；UsingAntibodies:ALaboratoryManual(E.Harlow和D.Lane,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1999)；TheAntibodies(M.ZanettiandJ.D.Capra編,HarwoodAcademicPublishers,1995)；和Cancer:PrinciplesandPracticeofOncology(V.T.DeVita等編,J.B.LippincottCompany,2011)。II.定義如本文所用的，「載體」意指重組質粒或病毒，其包含待體外或體內遞送入宿主細胞的核酸。如本文所用的術語「多核苷酸」或「核酸」意指聚合物形式的任何長度的核苷酸(核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸)。因此，此術語包括但不限於單鏈、雙鏈或多鏈DNA或RNA、基因組DNA、cDNA、DNA-RNA雜交體或包含嘌呤和嘧啶鹼基的聚合物，或其他天然的、化學或生物化學修飾的、非天然的或衍生化的核苷酸鹼基。多核苷酸的主鏈可以包含糖和磷酸基團(如常見於RNA或DNA中的)，或修飾的或取代的糖或磷酸基團。或者，多核苷酸的骨架可以包含合成的亞基如氨基磷酸酯(phosphoramidate)的聚合物，並由此可以是寡脫氧核苷氨基磷酸酯(P-NH2)或混合的氨基磷酸酯-磷酸二酯(phosphoramidate-phosphodiester)寡聚物。此外，雙鏈多核苷酸能夠從化學合成的單鏈多核苷酸產物通過合成互補鏈並在適當的條件下退火所述鏈，或者通過使用DNA聚合酶以適當的引物從頭合成互補鏈來獲得。術語「多肽」和「蛋白質」可互換地使用，以意指胺基酸殘基的聚合物，並且不限於最小長度。所述胺基酸殘基的聚合物可以含有天然或非天然胺基酸殘基，其包括但不限於肽、寡肽、胺基酸殘基的二聚體、三聚體和多聚體。所述定義涵蓋全長蛋白質和其片段二者。所述術語還包括多肽的表達後修飾，例如糖基化、唾液酸化、乙醯化、磷酸化等。此外，就本發明而言，「多肽」意指這樣的蛋白質，其包括對天然序列的修飾，如缺失、添加和取代(通常在性質上是保守的)，只要所述蛋白質維持所需的活性。這些修飾可以是故意的，如通過定點誘變(site-directedmutagenesis)，或可以是意外的，如通過產生所述蛋白質的宿主的突變或由於PCR擴增的錯誤得到的。「重組病毒載體」意指包含一個或多個異源序列(即非病毒來源的核酸序列)的重組多核苷酸載體。在重組AAV載體的情況中，重組核酸側翼有至少一個反向末端重複序列(ITR)。在一些實施方案中，重組核酸側翼有兩個ITR。「重組AAV載體(rAAV載體)」意指多核苷酸載體，其包含一個或多個異源序列(即非AAV來源的核酸序列)，其側翼有至少一個AAV末端反向重複序列(ITR)。所述rAAV載體當存在於已用合適的輔助病毒感染(或者正在表達合適的輔助功能的)且正在表達AAVrep和cap基因產物(即AAVRep和Cap蛋白質)的宿主細胞中時可複製並包裝入感染性病毒顆粒。當將rAAV載體整合入較大的多核苷酸(例如整合入染色體中或於另一載體，如用於克隆或轉染的質粒中)時，則該rAAV載體可稱為「原載體(pro-vector)」，其能夠通過在AAV包裝功能和合適的輔助功能的存在下複製和衣殼化而被「拯救」。rAAV載體可以是多種形式中的任一種，包括但不限於質粒、線性人工染色體、與脂質複合、包囊於脂質粒內和在病毒顆粒(例如AAV顆粒)中衣殼化。可將rAAV載體包裝入AAV病毒衣殼以生成「重組腺相關病毒顆粒(rAAV顆粒)」。「rAAV病毒」或「rAAV病毒顆粒」意指由至少一個AAV衣殼蛋白和衣殼化的rAAV載體基因組組成的病毒顆粒。「異源」意指源自與其比較的或引入或整合入的實體的其餘部分在基因型上截然不同的實體。例如，通過基因工程技術引入不同細胞類型的多核苷酸是異源多核苷酸(而且在表達時能夠編碼異源多肽)。類似地，併入病毒載體的細胞序列(例如基因或其部分)是相對於所述載體的異源核苷酸序列。術語「轉基因」意指引入細胞並能夠被轉錄成RNA且任選地在適當條件下翻譯和/或表達的多核苷酸。在一些方面，它賦予它所引入的細胞以期望的性質或以其他方式產生期望的治療或診斷結果。在另一個方面，它可以被轉錄為介導RNA幹擾的分子，如miRNA、siRNA或shRNA。如涉及病毒效價使用的術語「基因組顆粒(gp)」、「基因組等同物」或「基因組拷貝」意指含有重組AAVDNA基因組的病毒體的數目，而無論感染性或功能性。特定載體製備物中的基因組顆粒的數目能夠通過如本文實施例中，或例如Clark等(1999)Hum.GeneTher.,10:1031-1039；Veldwijk等(2002)Mol.Ther.,6:272-278中所述的步驟來測量。如本申請使用的術語「載體基因組(vg)」可指一個或多個多核苷酸，其包含載體(例如病毒載體)的一組多核苷酸序列。載體基因組可衣殼化於病毒顆粒中。取決於特定的病毒載體，載體基因組可包含單鏈DNA、雙鏈DNA或單鏈RNA或雙鏈RNA。載體基因組可包含與特定病毒載體相關聯的內源序列和/或通過重組技術插入特定病毒載體的任何異源序列。例如，重組AAV載體基因組可包含至少一個ITR序列，其位於啟動子、填充片段(stuffer)、目的序列(例如RNAi)和多聚腺苷酸化序列的側翼。完全的載體基因組可包含載體的多核苷酸序列的完全組。在一些實施方案中，病毒載體的核酸效價可以vg/mL來測量。適於測量此效價的方法是本領域已知的(例如定量PCR)。如涉及病毒效價而使用的術語「感染單位(iu)」、「感染性顆粒」或「複製單位」指如通過感染性中心測定法(也稱為複製中心測定法，如例如McLaughlin等(1988)J.Virol.,62:1963-1973中所述)測量的感染性的且有複製能力的重組AAV載體顆粒的數目。如涉及病毒效價使用的術語「轉導單位(tu)」意指如功能測定法(如本文實施例中或例如Xiao等(1997)Exp.Neurobiol.,144:113-124中；或Fisher等(1996)J.Virol.,70:520-532(LFU測定法)中描述的)中測得的導致功能性轉基因產物產生的感染性重組AAV載體顆粒的數目。「反向末端重複」或「ITR」序列是本領域中充分理解的術語並意指見於病毒基因組末端的處於反方向的相對短的序列。本領域中充分理解的術語「AAV反向末端重複(ITR)」序列是大約145-核苷酸的序列，其存在於天然單鏈AAV基因組的兩個末端。ITR的最外側的125個核苷酸能夠以兩個可選方向的任一個存在，這導致不同AAV基因組之間的異質性和單個AAV基因組的兩個末端之間的異質性。最外側的125個核苷酸也含有自身互補性的幾個較短區域(定名為A、A'、B、B'、C、C'和D區)，其允許在ITR的此部分內發生鏈內鹼基配對。「末端解析序列」或「trs」是AAVITR的D區中的序列，其在病毒DNA複製過程中被AAVrep蛋白切割。突變體末端解析序列難以被(refractoryto)AAVrep蛋白的切割。AAV的「輔助病毒」意指允許AAV(其是缺陷性細小病毒(defectiveparvovirus))被宿主細胞複製並包裝的病毒。已鑑定出多個這樣的輔助病毒，包括腺病毒、皰疹病毒和痘病毒如牛痘。腺病毒涵蓋多個不同的亞組，儘管C亞組的腺病毒5型(Ad5)是最通常使用的。人、非人哺乳動物和禽來源的多種腺病毒是已知的，並可由保藏機構如ATCC得到。還可由保藏機構如ATCC得到的皰疹家族的病毒包括例如單純皰疹病毒(HSV)、Epstein-Barr病毒(EBV)、巨細胞病毒(CMV)和假狂犬病病毒(PRV)。相對於參考多肽或核酸序列的「百分比(％)序列同一性」定義為在比對序列並引入空位(如果需要)以實現最大百分比序列同一性而不考慮任何保守取代作為序列同一性的部分後，候選序列中與參考多肽或核酸序列中的胺基酸殘基或核苷酸相同的胺基酸殘基或核苷酸的百分比。意在確定百分比胺基酸或核酸序列同一性的比對能夠以本領域技術範圍內的多種方式實現，例如，使用公眾可獲得的計算機軟體程序，例如CurrentProtocolsinMolecularBiology(Ausubel等編，1987),增刊30，7.7.18節，表7.7.1中所述的那些，並包括BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體。比對程序的一個實例是ALIGNPlus(ScientificandEducationalSoftware,Pennsylvania)。本領域的技術人員能夠確定測量比對的適當的參數，其包括實現參與比較的序列在全長上的最大對齊所需要的任何算法。就本文的目的而言，給定胺基酸序列A對、與或針對給定胺基酸序列B的％胺基酸序列同一性(或者其可描述為對、與或針對給定胺基酸序列B具有或包含一定％胺基酸序列同一性的給定胺基酸序列A)計算如下：100乘以分數X/Y，其中X是該程序的A和B比對中由序列比對程序計分為相同匹配的胺基酸殘基的數目，而其中Y是B中胺基酸殘基的總數。可理解的是其中胺基酸序列A的長度不等於胺基酸序列B的長度，A對B的％胺基酸序列同一性不等於B對A的％胺基酸序列同一性。就本文的目的而言，給定核酸序列C對、與或針對給定核酸序列D的％核酸序列同一性(或者其可描述為對、與或針對給定核酸序列D具有或包含一定％核酸序列同一性的給定核酸序列C)計算如下：100乘以分數W/Z，其中W是該程序的C和D比對中由序列比對程序計分為相同匹配的核苷酸的數目，而其中Z是D中核苷酸的總數。可理解的是其中核酸序列C的長度不等於核酸序列D的長度，C對D的％核酸序列同一性不等於D對C的％核酸序列同一性。「分離的」分子(例如核酸或蛋白質)或細胞意指其已被鑑定和分離和/或從其天然環境的組分回收。「有效量」是足以實現有益或期望的結果，包括臨床結果(例如症狀改善，達到臨床終點等)的量。有效量可以在一次或多次施用中施用。就疾病狀態而言，有效量是足以改善疾病、穩定疾病、或延遲疾病進展的量。「個體」或「受試者」是哺乳動物。哺乳動物包括但不限於馴養動物(例如，牛，羊，貓，狗，和馬)，靈長類動物(例如，人和非人靈長類動物如猴)，兔，和嚙齒類動物(例如小鼠和大鼠)。在一些實施方案中，所述個體或受試者是人。如本文所用的，「治療」是用於獲得有益的或期望的臨床結果的方法。對於本發明的目的，有益的或期望的臨床結果包括但不限於症狀的減輕，疾病程度的降低，穩定的(例如不惡化的)疾病狀態，防止疾病的擴散(例如轉移)，疾病進展的延遲或減緩，疾病狀態的改善或減輕，和緩解(無論部分或全部)，無論其是可檢測或不可檢測的。「治療」也能意味著與不接受治療的預期存活期相比延長的存活期。如本文所用的，術語「預防性治療」指這樣的治療，在所述治療中個體已知患有或疑似患有病症或處於患上病症的風險但未表現出病症的症狀或表現出最少症狀。經歷預防性治療的個體可在症狀發作前得到治療。如本文所用的，「治療」劑(例如治療性多肽、核酸或轉基因)是一種藥劑，其提供有益的或期望的臨床結果，如上述的示例性臨床結果。如此，治療劑可用於如上所述的治療。如本文所用的術語「中央視網膜」指外黃斑(outermacula)和/或內黃斑(innermacula)和/或凹(fovea)。如本文所用的術語「中央視網膜細胞類型」意指中央視網膜的細胞類型，如例如RPE和感光細胞。術語「黃斑」意指靈長類中中央視網膜中的區，其含有與外周視網膜相比更高相對濃度的感光細胞，特別是視杆細胞和視錐細胞。如本文所用的術語「外黃斑」還可稱為「外周黃斑」。如本文所用的術語「內黃斑」還可稱為「中央黃斑」。術語「凹」意指靈長類的中央視網膜中的小區，直徑約等於或小於0.5mm，其含有與外周視網膜和黃斑相比更高相對濃度的感光細胞，特別是視錐細胞。如本文所用的術語「視網膜下空間」意指視網膜中感光細胞和視網膜色素上皮細胞之間的部位。視網膜下空間可以是潛在的空間，如在流體的任何視網膜下注射之前。視網膜下空間還可含有注射入潛在空間的流體。在此情況中，所述流體「與視網膜下空間接觸」。「與視網膜下空間接觸」的細胞包括毗連視網膜下空間邊界的細胞，如RPE和感光細胞。如本文所用的術語「泡(bleb)」意指眼的視網膜下空間內的流體空間。本發明的泡可通過如下產生：將流體單次注射入單個空間，將一種或多種流體多次注射入相同空間，或多次注射入多個空間，其在復位時產生用於對視網膜下空間的期望的部分實現治療效果的總流體空間(totalfluidspace)。「視紫紅激酶(RK)啟動子」意指源自視紫紅激酶基因(例如人RK，以GenBankEntrezGeneID6011表示)的多核苷酸序列，其驅動視杆和視錐感光細胞以及視網膜細胞系如WERIRb-1中特異性的表達。如本文所用的，「視紫紅激酶啟動子」可指整個啟動子序列或足以驅動光感受器特異性表達的所述啟動子的片段，如Khani,S.C.等(2007)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.48(9):3954-61和Young,J.E.等(2003)Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.44(9):4076-85中所述的序列。在一些實施方案中，RK啟動子跨越-112至+180(相對於轉錄起始位點)。「雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子」意指源自雞β-肌動蛋白基因(例如原雞β-肌動蛋白，由GenBankEntrezGeneID396526表示)的多核苷酸序列。如本文所用的，「雞β-肌動蛋白啟動子」可指這樣的啟動子，所述啟動子含有巨細胞病毒(CMV)早期增強子元件、雞β-肌動蛋白基因的啟動子和第一外顯子和內含子，和兔β-球蛋白基因的剪接受體，如Miyazaki,J.等(1989)Gene79(2):269-77中所述的序列。如本文所用的，術語「CAG啟動子」可互換使用。如本文所用的，術語「CMV早期增強子/雞β-肌動蛋白(CAG)啟動子」可互換使用。本申請提及值或參數的「約」包括(並描述)針對該值或參數本身的實施方案。例如，提及「約X」的描述包括「X」的描述。如本文所用的，物品的單數形式「一個/一種」、「所述」和「所述」包括複數指稱，除非另有說明。可理解的是，本申請所述本發明的方面和實施方案包括「包含」、「由...組成」和/或「基本上由...組成」方面和實施方案。III.病毒顆粒本領域已知硫酸乙醯肝素蛋白聚糖(HSPG)充當AAV2顆粒的細胞受體(Summerford,C.和Samulski,R.J.(1998)J.Virol.72(2):1438-45)。AAV2顆粒和細胞膜處的HSPG之間的結合用於將顆粒附接至細胞。其他細胞表面蛋白如成纖維細胞生長因子受體和αvβ5整聯蛋白也可促進細胞感染。在結合之後，AAV2顆粒可通過包括受體介導的胞吞作用的機制經由網格蛋白包覆小窩(clathrin-coatedpit)進入細胞。AAV2顆粒可在內體酸化(endosomalacidification)後從細胞內小泡釋放。這允許AAV2顆粒行進至核周區然後至細胞核。還已知AAV3顆粒結合乙醯肝素(Rabinowitz,J.E.等(2002)J.Virol.76(2)：791-801)。眼部病症的基因治療程序需要將載體局部遞送至眼中的細胞(例如視網膜的細胞)。可作為這些疾病中的治療靶標的細胞可包括尤其是眼部的一種或多種細胞(例如感光物、眼神經元等)。本發明的方法和試劑盒基於、至少部分基於如下發現：特定的rAAV衣殼(例如包含rAAV衣殼蛋白的那些，所述衣殼蛋白在與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置包含一個或多個胺基酸取代)允許在眼部細胞中廣布的載體分布。如此，這些衣殼可以特別有利地用於將異源核酸遞送至個體的眼部、改進在將rAAV顆粒遞送至個體眼部後細胞的rAAV轉導、改進將rAAV顆粒遞送至個體眼部後異源核酸的表達和/或使用rAAV顆粒治療個體的眼部病症。同樣地，CNS的病症的基因治療程序需要將載體局部遞送至CNS中的細胞。可作為這些疾病中的治療靶標的細胞可包括尤其是腦的一種或多種細胞(例如神經元)。本發明的方法和試劑盒基於、至少部分基於如下發現：特定的rAAV衣殼(例如包含rAAV衣殼蛋白的那些，所述衣殼蛋白在與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處包含一個或多個胺基酸取代)允許在CNS的細胞中廣布的載體分布。如此，這些衣殼可特別有利地用於將異源核酸遞送至個體的中樞神經系統(CNS)、改進將rAAV顆粒遞送至個體的CNS後細胞的rAAV轉導、改進將rAAV顆粒遞送至個體的CNS後異源核酸的表達和/或使用rAAV顆粒治療個體的CNS的病症。AAV(例如AAV2、AAVrh8R等)的衣殼已知包括三種衣殼蛋白：VP1、VP2和VP3。這些蛋白質含有顯著量的重疊胺基酸序列和獨特的N-末端序列。AAV2衣殼包括通過二十面體對稱排布的60個亞基(Xie,Q.等(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.99(16):10405-10)。已發現VP1、VP2和VP3以1:1:10比例存在。已知AAV2衣殼蛋白和HSPG之間的結合經由鹼性AAV2衣殼蛋白殘基和帶負電的糖胺聚糖殘基之間的靜電相互作用發生(Opie,SR等，(2003)J.Virol.77:6995-7006；Kern,A等，(2003)J.Virol.77:11072-11081)。這些相互作用中涉及的特定衣殼殘基包括R484、R487、K532、R585和R588。已顯示這些殘基中的突變可降低AAV2與Hela細胞和乙醯肝素自身的結合(Opie,SR等，(2003)J.Virol.77:6995-7006；Kern,A等，(2003)J.Virol.77:11072-11081；WO2004/027019A2、美國專利No.7,629,322)。此外，不願受理論束縛，認為位於一個或多個對應於胺基酸484、487、532、585或588的殘基(編號基於AAV2的VP1編號)處的胺基酸取代可調節不結合HSPG的AAV衣殼類型的轉導特性，或可不依賴於其對HSPG的結合能力而調節AAV衣殼類型的轉導特性。本發明的一些方面涉及將異源核酸遞送至個體的眼部或中樞神經系統(CNS)，其包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒施用於個體的眼部或CNS。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含含有rAAV衣殼蛋白的rAAV衣殼，所述衣殼蛋白在與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置包含一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼。如本申請中所述，在衣殼蛋白中在與HSPG相互作用的殘基處或在對應於胺基酸484、487、532、585或588的一個或多個殘基(編號基於AAV2的VP1編號)處具有突變的rAAV顆粒顯示出有利的性質，如增強的表達和/或降低的神經性炎症。因此，在一些實施方案中，遞送後由rAAV載體編碼的異源核酸以增加的表達水平表達，所述增加是與包含含有參考rAAV衣殼蛋白(例如野生型rAAV衣殼蛋白)的rAAV衣殼的rAAV顆粒的異源核酸的表達水平相比。在一些實施方案中，核酸的表達增加至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。在一些實施方案中，遞送後所述rAAV顆粒引起與包含參考rAAV衣殼蛋白(例如野生型rAAV衣殼蛋白)的rAAV顆粒相比降低的神經性炎症。在一些實施方案中，將神經性炎症減少至少約10％，至少約25％，至少約50％，至少約75％，或至少約100％。合適的參考rAAV衣殼蛋白可包括任何這樣的衣殼蛋白，所述衣殼蛋白在與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置缺乏一個或多個胺基酸取代(參考衣殼可由此含有一個或多個「背景」取代，其不改變與HSPG的結合)。在一些實施方案中，本發明提供用於將異源核酸遞送至個體眼部的方法，其包括將重組腺相關病毒(rAAV)顆粒施用於個體的視網膜下空間，其中所述rAAV顆粒包含a)包含rAAV衣殼蛋白的rAAV衣殼，所述rAAV衣殼蛋白含有一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含AAV血清型2(AAV2)衣殼。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAV2的VP1、VP2和/或VP3的任一項的胺基酸殘基的取代，其中所述氨基取代改變rAAV顆粒與HSPG的相互作用(例如降低或去除與HSPG的結合)。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP1AAV2的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP2AAV2的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP3AAV2的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAV2的VP1、VP2和VP3的組合的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAV2的VP1、VP2和/或VP3的任一者的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是SEQIDNO:1、3和/或5的衣殼蛋白的任一者的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含SEQIDNO：2、4和/或6的衣殼蛋白。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含AAV血清型3(AAV3)衣殼。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAV3的VP1、VP2和/或VP3的任一項的胺基酸殘基的取代，其中所述氨基取代改變所述rAAV顆粒與HSPG的相互作用(例如降低或去除與HSPG的結合)。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP1AAV3的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP2AAV3的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP3AAV3的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAV3的VP1、VP2和VP3的組合的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAV3的VP1、VP2和/或VP3的任一者的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是對應於SEQIDNO:7的衣殼蛋白的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼，例如，如U.S.PGPub.No.20090317417中所述。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和/或VP3的任一者的胺基酸殘基的取代，其中所述氨基取代改變所述rAAV顆粒與HSPG的相互作用(例如降低或去除與HSPG的結合)。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP1AAVrh8R的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP2AAVrh8R的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP3AAVrh8R的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和VP3的組合的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和/或VP3的任一者的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是由SEQIDNO:9例示的衣殼蛋白的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含SEQIDNO:10和/或11的衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少25％、約至少50％、約至少75％、或約至少100％。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低約至少10％、約至少15％、約至少20％、約至少25％、約至少30％、約至少35％、約至少40％、約至少45％、約至少50％、約至少55％、約至少60％、約至少65％、約至少70％、約至少75％、約至少80％、約至少85％、約至少90％、約至少95％，或約至少100％(與包含野生型衣殼的rAAV顆粒的結合相比)。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代將所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合降低下述任一者：約10％至約100％、約20％至約100％、約30％至約100％、約40％至約100％、約50％至約100％、約60％至約100％、約70％至約100％、約80％至約100％、約90％至約100％、約10％至約90％、約20％至約90％、約30％至約90％、約40％至約90％、約50％至約90％、約60％至約90％、約70％至約90％、約80％至約90％、約10％至約80％、約20％至約80％、約30％至約80％、約40％至約80％、約50％至約80％、約60％至約80％、約70％至約80％、約10％至約70％、約20％至約70％、約30％至約70％、約40％至約70％、約50％至約70％、約60％至約70％、約10％至約60％、約20％至約60％、約30％至約60％、約40％至約60％、約50％至約60％、約10％至約50％、約20％至約50％、約30％至約50％、約40％至約50％、約10％至約40％、約20％至約40％、約30％至約40％、約10％至約30％、約20％至約30％或約10％至約20％(與包含野生型衣殼的rAAV顆粒的結合相比)。在一些實施方案中，與野生型rAAV顆粒的結合相比，所述一個或多個胺基酸取代導致沒有可檢測的rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。測量AAV顆粒與HSPG的結合的手段是本領域已知的；例如結合至硫酸乙醯肝素色譜介質或結合至已知在其表面表達HSPG的細胞。例如，參見Opie,SR等，(2003)J.Virol.77:6995-7006和Kern,A等，(2003)J.Virol.77：11072-11081。在一些實施方案中，本發明提供rAAV顆粒用於視網膜下遞送治療性核酸，其中所述rAAV顆粒包含衣殼蛋白的一個或多個胺基酸取代，其降低或去除所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合，其中所述一個或多個胺基酸取代位於位置484、487、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV2的VP1的位置484、487、532、585或588處。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV2的VP2的位置484、487、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV2的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV2的VP1、AAV2的VP2和/或AAV2的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，rAAV2的VP1包含SEQIDNO:1的胺基酸序列。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV3的VP1的位置484、487、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV3的VP2的位置484、487、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV3的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1處。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV3的VP1、AAV3的VP2和/或AAV3的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，rAAV2的VP1包含SEQIDNO:1的胺基酸序列。在一些實施方案中，本發明的AAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代位於位置485、488、528、533、586或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基取代帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用疏水性胺基酸殘基取代所述帶正電荷的胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用帶正電荷的胺基酸殘基取代疏水性胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置R533和/或A586處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在進一步的實施方案中，所述AAV衣殼包含胺基酸取代A586R和/或R533A，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:10和/或11的rAAV衣殼蛋白。在本發明的一些具體實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用不帶正電荷的胺基酸殘基(例如不含有帶正電荷的側鏈的胺基酸)取代帶正電荷的胺基酸殘基(例如具有帶正電荷的側鏈的胺基酸)。帶正電荷的胺基酸包括精氨酸、組氨酸和賴氨酸。不帶正電荷的胺基酸殘基的實例包括帶負電的胺基酸(天冬氨酸和穀氨酸)、具有不帶電荷的極性側鏈的胺基酸(絲氨酸、蘇氨酸、天冬醯胺和穀氨醯胺)、具有疏水側鏈的胺基酸(丙氨酸、纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸)、甘氨酸、半胱氨酸和脯氨酸。在一些實施方案中，AAV衣殼的一個或多個帶正電荷的胺基酸殘基用疏水性胺基酸殘基取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括精氨酸或賴氨酸殘基的取代。在進一步的實施方案中，一個或多個胺基酸取代包含用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在其他實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用帶正電荷的胺基酸殘基取代不帶正電荷的胺基酸殘基。在一些實施方案中，用帶正電荷的胺基酸殘基取代疏水性胺基酸殘基。在進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括丙氨酸殘基的取代。在更進一步的實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括用丙氨酸殘基取代精氨酸或賴氨酸殘基。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括在VP1、VP2和/或VP3的位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括在AAV2的VP1、VP2和/或VP3的位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括在AAV2的VP1、VP2和/或VP3的位置R484、R487、K527、K532和/或R588處的取代，編號基於SEQIDNO:1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括AAV2的VP1、VP2和/或VP3的R484A、R487A、R585A和/或R588A取代的一個或多個，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位於AAV3的VP1、VP2和/或VP3的位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括AAV3的VP1、VP2和/或VP3的R484A、R487A、R585A和/或R588A取代的一個或多個，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:2、4和/或6的rAAV衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括在VP1、VP2和/或VP3的位置R485、R488、R533、A586和/或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括在VP1、VP2和/或VP3的位置R485、R488、R533、A586和/或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1，編號基於SEQIDNO:9。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括AAV2的VP1、VP2和/或VP3的R533A和/或A586R取代的一個或多個，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含SEQIDNO:10和/或11的rAAV衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述AAV衣殼在與HSPG相互作用的一個或多個位置處包含一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中，所述AAV衣殼在降低或去除與HSPG的結合的一個或多個位置處包含一個或多個胺基酸取代。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含一、二、三、四、五、六、七、八、九或十個胺基酸取代，其降低或去除與HSPG的結合。在一些實施方案中，所述AAV衣殼具有一、二、三、四、五、六、七、八、九或十個胺基酸取代，其降低或去除與HSPG的結合。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含位於位置R484和R487處的取代，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼具有位置R484和R487處的取代，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含位置R585和R588處的取代，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼具有位置R585和R588處的取代，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含取代R484A和R487A，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼具有取代R484A和R487A，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含取代R585A和R588A，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼具有取代R585A和R588A，編號基於rAAV2的VP1。已知硫酸乙醯肝素蛋白聚糖(HSPG)在遍及身體的多個組織中表達，並在細胞外基質、細胞黏附和細胞信號傳輸中起重要的作用。在一些實施方案中，所述硫酸乙醯肝素蛋白聚糖在CNS的一種或多種細胞上表達。在一些實施方案中，所述CNS的一種或多種細胞是神經元。在一些實施方案中，本發明提供rAAV顆粒用於治療性核酸的CNS遞送，其中所述rAAV顆粒包含衣殼蛋白的一個或多個胺基酸取代，其降低或去除所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置347、350、390、395、448、451、484、487、527、532、585和/或588處，編號基於AAV2的VP1。如本文所用的，「編號基於AAV2的VP1」指所述衣殼蛋白的胺基酸對應於AAV2的VP1的所述胺基酸。例如，如果一個或多個胺基酸取代位於位置347、350、390、395、448、451、484、487、527、532、585和/或588處，編號基於AAV2的VP1，則所述一個或多個胺基酸取代位於所述衣殼蛋白對應於AAV2的VP1的胺基酸347、350、390、395、448、451、484、487、527、532、585和/或588的胺基酸處。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置R347、R350、K390、K395、R448、R451、R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV2的位置484、487、532、585或588處。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於AAV2的VP1、AAV2的VP2和/或AAV2的VP3的位置484、487、532、585或588處，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV2的VP1(例如rAAV2)包含SEQIDNO:1的胺基酸序列。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含位置R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含SEQIDNO:2、4和/或6的衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含位置R484和R487或R585和R588處的取代，編號基於rAAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含R484A和R487A取代或R585A和R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含胺基酸取代R585A和R588A，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述AAV衣殼包含胺基酸取代K532A，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括R347A、R350A、K390A、K395A、R448A、R451A、R484A、R487A、K527A、K532A、R585A和/或R588A取代，編號基於AAV2的VP1。在一些實施方案中，本發明提供rAAV顆粒用於治療性核酸的CNS遞送，其中所述rAAV顆粒包含衣殼蛋白的一個或多個胺基酸取代，其降低或去除所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼，例如，如U.S.PGPub.No.20090317417中所述。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和/或VP3的任一項的胺基酸殘基的取代，其中所述氨基取代改變所述rAAV顆粒與HSPG的相互作用(例如降低或去除與HSPG的結合)。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP1AAVrh8R的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP2AAVrh8R的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代是VP3AAVrh8R的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和VP3的組合的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是AAVrh8R的VP1、VP2和/或VP3的任一者的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，一個或多個胺基酸取代是由SEQIDNO:9例示的衣殼蛋白的胺基酸殘基的取代。在一些實施方案中，本發明的rAAV顆粒包含SEQIDNO:10和/或11的衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型rh8R(AAVrh8R)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置586和/或589處，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述編號基於包含SEQIDNO:9的胺基酸序列的AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置A586和/或T589處的取代，編號基於AAVrh8R的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括A586R取代，編號基於AAVrh8R的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括T589R或T589K取代，編號基於AAVrh8R的VP1。如上文所討論的，不願受理論束縛，認為位於對應於胺基酸484、487、532、585或588的一個或多個殘基處的胺基酸取代(編號基於AAV2的VP1編號)可調節不結合HSPG的AAV衣殼類型的轉導特性，或可不依賴於其結合HSPG的能力而調節AAV衣殼類型的轉導性質。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包含對應於圖20中所示的胺基酸的一個或多個胺基酸。例如，在一些實施方案中，在對應於胺基酸585和/或588(編號基於AAV2的VP1)的位置處的一個或多個胺基酸被精氨酸殘基替代(例如AAV1或AAV6的S586和/或T589；AAV9的S586和/或A589；AAVrh8R的A586和/或T589；AAV8的Q588和/或T591；和AAVrh10的Q588和/或A591)。這些修飾的衣殼可用於尤其是改善靶向視網膜的玻璃體內轉導。在其他實施方案中，在對應於胺基酸484、487、527和/或532(編號基於AAV2的VP1)的位置處的一個或多個胺基酸(例如精氨酸或賴氨酸)被不帶正電荷的胺基酸如丙氨酸替代(例如AAV1或AAV6的R485、R488、K528和/或K533；AAV9或AAVrh8R的R485、R488、K528和/或R533；和AAV8或AAVrh10的R487、R490、K530和/或R535)。這些修飾的衣殼可用於尤其是改善視網膜下或CNS轉導。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型1(AAV1)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置586和/或589處，編號基於AAV1的VP1編號。在一些實施方案中，所述AAV1的VP1包含SEQIDNO:12的胺基酸序列。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置S586和/或T589處的取代，編號基於AAV1的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括S586R或S586K取代，編號基於AAV1的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括T589R取代，編號基於AAV1的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型6(AAV6)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置586和/或589處，編號基於AAV6的VP1編號。在一些實施方案中，編號基於包含SEQIDNO:13的胺基酸序列的AAV6的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置S586和/或T589處的取代，編號基於AAV6的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括S586R或S586K取代，編號基於AAV6的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括T589R取代，編號基於AAV6的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型8(AAV8)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置588和/或591處，編號基於AAV8的VP1編號。在一些實施方案中，編號基於包含SEQIDNO:14的胺基酸序列的AAV8的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置Q588和/或T591處的取代，編號基於AAV8的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括Q588R或Q588K取代，編號基於AAV8的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括T591R取代，編號基於AAV8的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型9(AAV9)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置586和/或589處，編號基於AAV9的VP1編號。在一些實施方案中，編號基於包含SEQIDNO:15的胺基酸序列的AAV9的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置S586和/或A589處的取代，編號基於AAV9的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括S586R或S586K取代，編號基於AAV9的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括A589R或A589K取代，編號基於AAV9的VP1。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含AAV血清型rh10(AAVrh10)衣殼。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代位於位置588和/或591處，編號基於AAVrh10的VP1編號。在一些實施方案中，編號基於包含SEQIDNO:16的胺基酸序列的AAVrh10的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括位置Q588和/或A591處的取代，編號基於AAVrh10的VP1編號。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括Q588R或Q588K取代，編號基於AAVrh10的VP1。在一些實施方案中，所述一個或多個胺基酸取代包括A591R取代，編號基於AAVrh10的VP1。IV.治療方法用於視網膜疾病如LCA、視網膜色素變性和與年齡相關的黃斑退化性改變的基因治療程序需要將載體局部遞送至視網膜中的細胞。在這些疾病中作為治療靶標的細胞是視網膜中的感光細胞或感覺神經性視網膜下的(underlyingtheneurosensoryretina)RPE的細胞。將基因治療載體遞送至這些細胞需要注射入視網膜和RPE之間的視網膜下空間中。在一些實施方案中，本發明提供將rAAV基因治療載體遞送至視網膜的細胞的方法，其中所述rAAV載體衣殼化於AAV衣殼中，所述AAV衣殼包含與HSPG相互作用的一個或多個胺基酸殘基的取代。在一些方面，本發明提供治療個體的CNS的病症的方法，其包括將包含rAAV顆粒的組合物遞送至個體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和(b)rAAV載體，其包括所述異源核酸和至少一個AAV末端重複。此外，本申請所述的用於將異源核酸遞送至個體的中樞神經系統(CNS)的方法、在將rAAV顆粒遞送至個體的CNS後改進細胞的rAAV轉導的方法和在將rAAV顆粒遞送至個體的CNS後改進異源核酸的表達的方法可用於遞送例如異源核酸，如編碼治療性多肽或治療性核酸的異源核酸。這些方法可用於尤其是治療CNS的病症。在一些實施方案中，所述個體是人。治療載體本發明提供眼部病症的基因治療的方法，其中將包含治療載體的rAAV顆粒遞送至個體的視網膜。視網膜的細胞的改進的轉導可通過將rAAV載體在rAAV衣殼(例如rAAV2、rAAVrh8R等顆粒)中衣殼化來實現，其中衣殼的與HSPG相互作用的一個或多個胺基酸被取代從而降低或去除所述rAAV顆粒與HSPG的結合。所述載體可包含編碼多肽(例如治療性或診斷性多肽)的異源核酸和/或治療性核酸。編碼治療性或診斷性多肽和/或治療性核酸的核酸能夠使用本領域已知的方法用標準的合成和重組方法來生成。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼診斷性多肽。編碼治療性多肽的核酸的非限制性實例包括：用於替換已知引起視網膜疾病的缺失或突變基因的核酸，例如Prph2、RPE65、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3和GNAT2。編碼治療性多肽的核酸的其他非限制性實例包括編碼神經營養因子(如GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO)、抗凋亡基因(如BCL2、BCL-X、NFκB)、抗血管生成因子(如內皮他汀、血管他汀、sFlt)和抗炎因子(如IL10、IL1-ra、TGFβ、IL4)的那些。用於眼部病症的其他治療性多肽包括但不限於Myo7a、ABCA4、REP1、GUCY2D、PDE6C、RS1、RPGRIP、Lpcat1、AIPL1、RDH12、CHM。在一些實施方案中，編碼的多肽是多肽的人變體。本發明的核酸可編碼多肽，所述多肽是細胞內蛋白質、錨定於細胞膜中、保持在細胞內，或由用本發明的載體轉導的細胞分泌。對於由接受載體的細胞分泌的多肽；所述多肽可以是可溶的(即不附接於細胞)。例如，可溶的多肽缺乏跨膜區並從細胞分泌。鑑定並移除編碼跨膜域的核酸序列的技術是本領域已知的。可根據本發明施用的載體還包括包含核酸的載體，所述核酸編碼RNA(例如RNAi、核酶、miRNA、siRNA、反義RNA)，所述RNA在從載體的核酸轉錄時可通過幹擾與本發明的疾病狀態相關的異常或過量蛋白翻譯或轉錄來治療眼部病症。例如，本發明的核酸可編碼RNA，所述RNA通過對編碼所述異常和/或過量蛋白的mRNA的高度特異性清除或減少來治療疾病。治療性RNA序列包括RNAi、小抑制RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)和/或核酶(如錘頭核酶和髮夾核酶)，其可通過對編碼所述異常和/或過量蛋白質的mRNA的高度特異性清除或減少來治療疾病，所述蛋白質如遺傳的視網膜退化的多種形式中存在的那些。可通過治療性RNA序列治療的眼部病症的非限制性實例包括，例如常染色體顯性視網膜色素變性(ADRP)和糖尿病視網膜病變。可用於本發明的治療性RNA序列和編碼這些序列的核酸的實例包括例如，美國專利號6,225,291中所述的那些，其公開內容通過提述以其整體併入本文。在一些實施方案中，所述治療性RNA序列是miR-708。在一些實施方案中，miR-708與編碼野生型視紫紅質的核酸組合使用，作為相同rAAV載體的一部分或者作為另一rAAV載體的一部分。在一些實施方案中，編碼所述野生型視紫紅質的核酸缺乏位於視紫紅質基因的3』非翻譯區中的miR-708靶序列。編碼miR-708和/或視紫紅質的rAAV載體由美國臨時專利申請序號No.61/969,027提供，其通過提述以其整體併入本文。本發明的一些方面涉及rAAV顆粒(例如治療載體)的用途，所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和(b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽或治療性核酸。如本文所用的，治療性核酸可表達本發明的任何治療性核酸或編碼本發明的治療性多肽的任何核酸。例如，可使用治療性核酸以改善病症的症狀、防止或延遲病症的進展和/或提供對病症(例如本申請所述的病症)的治療。CNS的細胞的改進的轉導可通過將rAAV載體在rAAV衣殼(例如rAAV2、rAAVrh8R等)中衣殼化來實現，其中所述衣殼的與HSPG相互作用的一個或多個胺基酸被取代，從而降低或去除所述rAAV顆粒與HSPG的結合。所述載體可包含編碼多肽(例如治療性或診斷性多肽)和/或治療性核酸的異源核酸。編碼治療性或診斷性多肽和/或治療性核酸的核酸可使用本領域已知的方法使用標準的合成和重組方法生成。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼診斷性多肽。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼CNS相關的基因。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性核酸。在一些實施方案中，治療性核酸可包括而不限於siRNA、shRNA、RNAi、miRNA、反義RNA、核酶或脫氧核酶。如此，治療性核酸可編碼RNA，所述RNA在從所述載體的核酸轉錄時可通過幹擾與本發明的病症相關的異常或過量蛋白轉錄或翻譯來治療本發明的病症(例如CNS的病症)。例如，本發明的核酸可編碼RNA，所述RNA通過對編碼所述異常和/或過量蛋白的mRNA的高度特異性消除或減少來治療病症。治療性RNA序列包括RNAi、小抑制RNA(siRNA)、微RNA(miRNA)和/或核酶(如錘頭核酶和髮夾核酶)，其可通過對編碼所述異常和/或過量蛋白的mRNA的高度特異性消除或減少來治療病症。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼治療性多肽。例如，治療性多肽可提供多肽和/或酶活性，其在細胞或生物體中不存在或以降低的水平存在。或者，治療性多肽可提供多肽和/或酶活性，其間接地抵消了細胞或生物體中的不平衡。例如，用於涉及由代謝酶或活性的缺乏而引起的代謝物的積累的病症的治療性多肽可提供丟失的代謝酶或活性，或其可提供導致代謝物減少的供選擇的代謝酶或活性。例如，還可用治療性多肽通過充當顯性負性(dominant-negative)多肽來降低多肽的活性(例如過表達的、被功能獲得型突變激活的、或其活性被以其他方式誤調節的(misregulated))。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼選自如下的多肽：酶、神經營養因子、在患CNS相關病症的個體中缺乏或突變的多肽、抗氧化劑、抗凋亡因子、抗血管生成因子和抗炎因子。此類多肽可用於通過如下來治療CNS的病症：例如提供在CNS的病症中減少、不存在或誤調節的多肽和/或酶活性，改善CNS病症的病因和/或症狀，和/或減輕由CNS病症引起的對CNS的損害(例如細胞凋亡、炎症或其他形式的細胞死亡)。編碼治療性多肽的核酸的非限制性實例包括：用於替換已知引起CNS的病症的缺失或突變基因的核酸，例如Prph2、RPE65、MERTK、RPGR、RP2、RPGRIP、CNGA3、CNGB3和GNAT2。編碼治療性多肽的核酸的其他非限制性實例包括編碼如下的那些：神經營養因子(如GDNF、CNTF、FGF2、PEDF、EPO)、抗凋亡基因(如BCL2、BCL-X、NFκB)、抗血管生成因子(如內皮他汀、血管他汀、sFlt)和抗炎因子(如IL10、IL1-ra、TGFβ、IL4)。用於CNS病症的其他治療性多肽包括但不限於Myo7a、ABCA4、REP1、GUCY2D、PDE6C、RS1、RPGRIP、Lpcat1、AIPL1、RDH12、CHM。在一些實施方案中，編碼的多肽是所述多肽的人變體。在一些實施方案中，所述異源核酸編碼神經元細胞凋亡抑制蛋白(NAIP)、神經生長因子(NGF)、神經膠質來源的生長因子(GDNF)、腦源性生長因子(BDNF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、酪氨酸羥化酶(TH)、GTP環化水解酶(GTPCH)、胺基酸脫羧酶(AADC)、抗氧化劑、抗血管生成多肽、抗炎多肽和天冬氨酸醯基酶(ASPA)。抗氧化劑的實例包括而不限於SOD1；SOD2；過氧化氫酶；Sirtuins1、3、4或5；NRF2；PGC1a；GCL(催化亞基)；GCL(修飾亞基)；脂聯素(adiponectin)；穀胱甘肽過氧化物酶1；和神經球蛋白(neuroglobin)。抗血管生成多肽的實例包括而不限於血管他汀、內皮他汀、PEDF、可溶性VEGF受體和可溶性PDGF受體。抗炎多肽的實例包括而不限於IL-10、可溶性IL17R、可溶性TNF-R、TNF-R-Ig、IL-1抑制劑和IL18抑制劑。可用於治療CNS的病症的這些類型的其他例示性多肽在下文提供。本發明的核酸可編碼多肽，所述多肽是細胞內蛋白、錨定於細胞膜中、保持在細胞內，或由用本發明的載體轉導的細胞分泌。對於由接受載體的細胞分泌的多肽；所述多肽可為可溶的(即不附接於細胞)。例如，可溶的多肽缺乏跨膜區並從細胞分泌。鑑定並移除編碼跨膜域的核酸序列的技術是本領域已知的。在一些實施方案中，所述異源核酸可操作地連接至啟動子。例示性的啟動子包括但不限於巨細胞病毒(CMV)立即早期啟動子、RSVLTR、MoMLVLTR、磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動子、猿猴病毒40(SV40)啟動子、CK6啟動子、甲狀腺素轉運蛋白啟動子(TTR)、TK啟動子、四環素響應性啟動子(TRE)、HBV啟動子、hAAT啟動子、LSP啟動子、嵌合肝特異性啟動子(LSP)、E2F啟動子、端粒酶(hTERT)啟動子；巨細胞病毒增強子/雞β-肌動蛋白/兔β球蛋白啟動子(CAG啟動子；Niwa等，Gene,1991,108(2):193-9)、延伸因子1-α啟動子(EF1-α)啟動子(Kim等，Gene,1990,91(2)：217-23和Guo等，GeneTher.,1996,3(9):802-10)。在一些實施方案中，所述啟動子包含人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動子或與雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子連接的巨細胞病毒增強子。所述啟動子可以是組成型、誘導型或阻抑型啟動子。在一些實施方案中，本發明提供重組載體，其包含編碼本發明的異源轉基因的核酸，所述核酸可操作地連接至CBA啟動子。例示性的啟動子和描述可見於例如U.S.PGPub.20140335054中。組成型啟動子的實例包括而不限於逆轉錄病毒勞氏肉瘤病毒(RSV)LTR啟動子(任選地與RSV增強子一起)、巨細胞病毒(CMV)啟動子(任選地與CMV增強子一起)[參見例如Boshart等，Cell,41:521-530(1985)]、SV40啟動子、二氫葉酸還原酶啟動子、13-肌動蛋白啟動子、磷酸甘油激酶(PGK)啟動子和EF1a啟動子[Invitrogen]。誘導型啟動子允許調節基因表達並能夠經由如下來調節：外源供給的化合物，環境因子如溫度，或特定生理狀態的存在，例如急性期、細胞的特定分化狀態或僅在正在複製的細胞中。誘導型啟動子和誘導型系統可由多種商業來源得到，包括而不限於Invitrogen、Clontech和Ariad。本領域技術人員已描述並能夠容易地選擇許多其他系統。由外源供給的啟動子調節的誘導型啟動子的實例包括鋅誘導的羊金屬硫蛋白(MT)啟動子、地塞米松(Dex)誘導型小鼠乳腺腫瘤病毒(MMTV)啟動子、T7聚合酶啟動子系統(WO98/10088)；昆蟲蛻皮激素啟動子(No等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:3346-3351(1996))、四環素阻遏系統(Gossen等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:5547-5551(1992))、四環素誘導系統(Gossen等，Science,268:1766-1769(1995)，另見Harvey等，Curr.Opin.Chem.Biol.,2:512-518(1998))、RU486-誘導系統(Wang等，Nat.Biotech.,15:239-243(1997)和Wang等，GeneTher.,4:432-441(1997))和雷帕黴素-誘導系統(Magari等，J.Clin.Invest.,100:2865-2872(1997))。可用於此語境的其他類型的誘導性啟動子是由特定的生理狀態(例如溫度、急性期、細胞的特定分化狀態或僅在正在複製的細胞中)調節的那些。在另一個具體實施方案中，對轉基因使用天然啟動子或其片段。當轉基因的表達應模擬天然表達是所需的時，可使用所述天然啟動子。當轉基因的表達必須暫時地或進行性地、或以組織特異性方式、或響應於特定的轉錄刺激物而受調節時，可使用所述天然啟動子。在進一步的實施方案中，還可使用其他天然表達調控組件，如增強子組件、多腺苷酸化位點或Kozak共有序列以模擬天然表達。在一些實施方案中，調控序列賦予組織特異性基因表達能力。在一些情況中，所述組織特異性調控序列結合組織特異性轉錄因子，其以組織特異性方式誘導轉錄。所述組織特異性調控序列(例如啟動子、增強子等)是本領域熟知的。例示的組織特異性調控序列包括但不限於如下組織特異性啟動子：神經元的如神經元-特異性烯醇化酶(NSE)啟動子(Andersen等，Cell.Mol.Neurobiol.,13:503-15(1993))、神經絲輕鏈基因啟動子(Piccioli等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:5611-5(1991))和神經元-特異性vgf基因啟動子(Piccioli等，Neurons,15:373-84(1995))。在一些實施方案中，所述組織特異性啟動子是選自如下的基因的啟動子：神經元核(NeuN)、膠質纖維酸性蛋白(GFAP)、腺瘤性結腸息肉病(APC)和離子化鈣結合銜接分子1(Iba-1)。其他適當的組織特異性啟動子對於技術人員會是顯而易見的。在一些實施方案中，所述啟動子是雞β-肌動蛋白啟動子。在一些實施方案中，所述異源核酸處於在CNS的一種或多種細胞中表達的啟動子序列的控制下。本領域已知上文列出的許多啟動子序列(例如CBA啟動子)在CNS的一種或多種細胞中表達。在一些實施方案中，所述啟動子序列可在生物體中遍在地表達，且因而可在CNS的一種或多種細胞中通過其向CNS的遞送來表達。在其他實施方案中，可使用在CNS或一種或多種CNS細胞的亞組中特異性表達的啟動子序列。在一些實施方案中，所述異源核酸可操作地連接至適於治療性多肽或治療性核酸在CNS的一種或多種細胞中表達的啟動子。如此，在一些實施方案中，本發明的治療性多肽或治療性核酸可用於治療CNS的病症。在一些實施方案中，所述啟動子在腦細胞中表達所述異源核酸。腦細胞可指本領域已知的任何腦細胞，包括而不限於神經元(如感覺神經元、運動神經元、中間神經元、多巴胺能神經元、中型多棘神經元、膽鹼能神經元、GABA能神經元、錐體神經元等)、神經膠質細胞(如小膠質細胞、大膠質細胞、星形膠質細胞、少突膠質細胞、室管膜細胞、放射狀膠質細胞等)、腦實質細胞、小膠質細胞，室管膜細胞和/或浦肯野細胞。在一些實施方案中，所述啟動子在神經元中表達所述異源核酸。在一些實施方案中，所述異源核酸僅在神經元中表達(例如在神經元中表達而不在CNS的其他細胞如膠質細胞中表達)。在一些方面，本發明提供rAAV載體用於在哺乳動物中預防或治療一個或多個基因缺陷(例如遺傳的基因缺陷、體細胞基因改變等)，如例如導致受試者中多肽缺乏或多肽過量的基因缺陷的方法，或用於在受試者中治療缺陷或降低缺陷的嚴重性或程度的方法，所述受試者顯示出與細胞和組織中所述多肽的缺陷相聯繫的CNS相關病症。在一些實施方案中，方法涉及將編碼一個或多個治療性肽、多肽、功能性RNA、抑制核酸、shRNA、微RNA、反義核苷酸等的rAAV載體於藥學上可接受的載體中施用於受試者，其施用的量和時間足以在患有或疑似患有CNS相關病症的受試者中治療所述病症。rAAV載體可包含轉基因、編碼蛋白或功能性RNA的核酸，其調節或治療CNS相關病症。如下是與CNS相關病症相關的基因的非限制性的列表：神經元細胞凋亡抑制蛋白(NAIP)、神經生長因子(NGF)、神經膠質來源的生長因子(GDNF)、腦源性生長因子(BDNF)、睫狀神經營養因子(CNTF)、酪氨酸羥化酶(TH)、GTP環化水解酶(GTPCH)、天冬氨酸醯基酶(ASPA)、超氧化物歧化酶(SOD1)、抗氧化劑，抗血管生成多肽、抗炎多肽，和胺基酸脫羧酶(AADC)。例如，在帕金森氏病的治療中有用的轉基因編碼TH，其是多巴胺的合成中的限速酶。在帕金森氏病的治療中還可使用編碼GTPCII的轉基因，其生成TII輔因子四氫生物蝶呤。還可用編碼GDNF或BDNF或AADC的轉基因來治療帕金森氏病，所述轉基因促進L-Dopa至DA的轉化。對於ALS的治療而言，有用的轉基因可編碼：GDNF、BDNF或CNTF。同樣對於ALS的治療而言，有用的轉基因可編碼功能性RNA，例如shRNA、miRNA，其抑制SOD1的表達。對於缺血的治療，有用的轉基因可編碼NAIP或NGF。編碼β-葡糖醛酸糖苷酶(GUS)的轉基因可用於治療一些溶酶體貯積症(例如粘多糖病類型VII(MPSVII))。編碼前藥激活基因(例如HSV-胸苷激酶，其將更昔洛韋(ganciclovir)轉化為破壞DNA合成並導致細胞死亡的毒性核苷酸)的轉基因可用於治療一些癌症，例如，當與所述前藥組合施用時。編碼內源性阿片樣物質(opioid)如β-內啡肽的轉基因可用於治療疼痛。抗氧化劑的實例包括而不限於SOD1；SOD2；過氧化氫酶；Sirtuins1、3、4或5；NRF2；PGC1a；GCL(催化亞基)；GCL(修飾亞基)；脂聯素；穀胱甘肽過氧化物酶1；和神經球蛋白。抗血管生成多肽的實例包括而不限於血管他汀、內皮他汀、PEDF、可溶性VEGF受體和可溶性PDGF受體。抗炎多肽的實例包括而不限於IL-10、可溶性IL17R、可溶性TNF-R、TNF-R-Ig、IL-1抑制劑和IL18抑制劑。可用於本發明的rAAV載體的轉基因的其他實例對於技術人員是顯而易見的(參見例如CostantiniLC，等，GeneTherapy(2000)7,93-109)。在一些實施方案中，所述治療性多肽或治療性核酸用於治療CNS的病症。不願受理論束縛，認為治療性多肽或治療性核酸可用於減少或消除多肽的表達和/或活性，所述多肽的功能獲得已與病症相關，或用於增強多肽的表達和/或活性以補足與病症相關的缺陷(例如其表達顯示出相似或相關活性的基因中的突變)。可通過本發明的治療性多肽或治療性核酸治療的本發明的病症的非限制性實例(對於每種病症，可被靶向或供給的例示性基因提供於括號中)包括中風(例如半胱天冬酶-3、Beclin1、Ask1、PAR1、HIF1α、PUMA和/或Fukuda,A.M.和Badaut,J.(2013)Genes(Basel)4:435-456中所述的任何基因)、亨廷頓氏病(突變體HTT)、癲癇(例如，SCN1A、NMDAR、ADK和/或Boison,D.(2010)Epilepsia51:1659-1668中所述的任何基因)、帕金森氏病(α-突觸核蛋白)、LouGehrig氏病(亦稱為肌萎縮側索硬化；SOD1)、阿爾茨海默氏病(tau，澱粉樣前體蛋白質)、皮質基底變性或CBD(tau)、皮質基底神經節變性或CBGD(tau)、額顳葉痴呆或FTD(tau)、進行性核上麻痺或PSP(tau)、多系統萎縮或MSA(α-突觸核蛋白)、腦的癌症(例如腦癌中涉及的突變或過表達的癌基因)，和溶酶體貯積病(LSD)。本發明的病症可包括涉及大面積的皮質，例如多於一個的皮質功能區域、多於一個的皮質葉(lobe)和/或整個皮質。本發明的病症的其他非限制性實例可由本發明的治療性多肽或治療性核酸治療，其包括外傷性腦損傷、酶功能障礙病症，精神病症(包括創傷後應激症候群)、神經退化性疾病和認知病症(包括痴呆症、自閉症和抑鬱症)。酶功能障礙病症包括而不限於腦白質營養不良(包括Canavan氏病)和下述的任何溶酶體貯積病。在一些實施方案中，所述治療性多肽或治療性核酸用於治療溶酶體貯積病。如本領域中通常已知的，溶酶體貯積病是罕見的、特徵為溶酶體功能缺陷的遺傳性代謝病症。所述病症常常由正常的粘多糖、糖蛋白和/或脂質代謝所需的酶的缺乏引起，導致溶酶體儲存的細胞材料的病理學積累。可用本發明的治療性多肽或治療性核酸治療的本發明的溶酶體貯積病的非限制性實例(對於每種病症可被靶向或提供的例示性基因提供於括號中)包括戈謝病2型或3型(酸性β-葡糖苷酶，GBA)、GM1神經節苷脂貯積症(β-半乳糖苷酶-1，GLB1)、亨特病(艾杜糖醛酸-2-硫酸酯酶，IDS)、克拉伯病(半乳糖基神經醯胺酶，GALC)、甘露糖苷貯積症(甘露糖苷酶，如α-D-甘露糖苷酶，MAN2B1)、β甘露糖苷貯積症(β-甘露糖苷酶，MANBA)、異染性腦白質營養不良症(假芳基硫酸酯酶A，ARSA)、粘脂病II/III疾病(N-乙醯葡糖胺-1-磷酸轉移酶，GNPTAB)、尼曼-皮克病A(酸性鞘磷脂酶，ASM)、尼曼-皮克病C(尼曼-皮克C蛋白質，NPC1)、蓬佩病(酸性α-1,4-葡糖苷酶，GAA)、桑德霍夫病(己糖胺酶β亞基，HEXB)、聖菲利柏氏症A(N-磺基葡糖胺磺基水解酶(N-sulfoglucosaminesulfohydrolase)，MPS3A)、聖菲利柏氏症B(N-α-乙醯葡糖胺酶，NAGLU)、聖菲利柏氏症C(肝素乙醯CoA:α-葡糖胺酶N-乙醯轉移酶，MPS3C)、聖菲利柏氏症D(N-乙醯葡糖胺-6-硫酸酯酶，GNS)、辛德勒病(α-N-乙醯半乳糖胺酶，NAGA)、史萊氏症(β-葡糖醛酸糖苷酶，GUSB)、泰-薩二氏病(己糖胺酶α亞基，HEXA)和沃爾曼病(溶酶體酸性脂肪酶，LIPA)。其他的溶酶體貯積症以及與每個疾病相關的缺陷的酶列於下表1中。在一些實施方案中，下表中所列的疾病通過本發明的治療性多肽或治療性核酸治療，其補足或以其他方式補償相應的酶缺陷。表1.溶酶體貯積症及相關的缺陷型酶亨廷頓氏病疾病(其中載體可能是有利的)的一個實例是亨廷頓氏病(HD)，其由編碼突變體亨廷頓蛋白(mHTT)中擴展的聚穀氨醯胺(polyQ)重複的CAG重複擴展突變引起。HD對於基於DNA和RNA的治療是有吸引力的靶標，因為它是由單個等位基因的突變引起的常染色體顯性疾病。AAV載體可為核酸治療劑提供理想的遞送系統並允許這些亨廷頓蛋白降低分子在腦中的持久和連續表達。如本申請中所述，顱內施用具有rAAV衣殼蛋白的rAAV顆粒(例如治療性載體)產生了普遍的神經元轉導，所述rAAV衣殼蛋白含有一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。因此，本發明的方法提供了使用本申請所述的重組病毒顆粒將異源核酸遞送至中樞神經系統用於治療亨廷頓氏病的方法。在一些實施方案中，本發明提供方法和組合物用於治療個體中的亨廷頓氏病，其包括向哺乳動物施用本發明的藥物組合物(例如包含本發明的變體病毒顆粒的藥物組合物)。在一些方面，本發明提供用於抑制htt在患有亨廷頓氏病的哺乳動物中的表達的方法和組合物，其包括向所述個體施用本發明的藥物組合物(例如包含本發明的變體病毒顆粒的藥物組合物)。在一些方面，本發明提供用於抑制htt在患有亨廷頓氏病的個體的細胞中的累積的方法和組合物，其包括向所述個體施用本發明的藥物組合物(例如包含本發明的變體病毒顆粒的藥物組合物)。在一些方面，本發明提供用於改善個體中的HD症狀的方法和組合物，其包括向個體的CNS施用有效量的重組病毒顆粒，其包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，其中所述rAAV顆粒包含編碼RNAi的載體，所述RNAi抑制HTT在個體中的表達和/或積累。在一些實施方案中，HD的症狀包括但不限於舞蹈病(chorea)、僵直(rigidity)、無法控制的身體動作、肌肉失控、缺乏協調、躁動、眼部運動減緩、姿態異常、不穩(instability)、共濟失調步態(ataxicgait)、異常的表情、言語障礙、咀嚼和/或吞咽困難、睡眠障礙、癲癇發作、痴呆、認知缺陷(例如關於規劃、抽象思維、靈活性、規則獲取、人際關係敏感、自我控制、注意力、學習、記憶的能力減退)、抑鬱、焦慮、人格改變、侵略、強制行為、強迫行為、性慾亢進、精神病、情感淡漠(apathy)、煩躁、自殺的念頭、減重、肌肉萎縮、心臟衰竭、糖耐量降低、睪丸萎縮和骨質疏鬆。在一些方面，本發明提供預防HD或延遲HD的進展的方法。常染色體顯性HD是一種能夠進行基因分型的遺傳疾病。例如，HTT中的CAG重複的數目可通過基於PCR的重複大小分析(repeatsizing)來確定。這種類型的診斷可以通過直接檢測幼年或成年(例如連同臨床症狀的呈現)、產前篩查或產前排除測試(例如通過絨毛取樣或羊膜穿刺術)或胚胎的植入前篩選而在生命的任何階段進行。此外，HD可以通過腦成像、尋找尾狀核(caudatenuclei)和/或核殼(putamen)的收縮和/或腦室擴大來進行診斷。這些症狀，與HD家族史和/或臨床症狀組合，可指示HD。用於確定的HD症狀改善的手段是本領域已知的。例如，統一亨廷頓氏病評定量表(UHDRS)可用於評估運動功能、認知功能、行為異常度和功能的能力(參見例如HuntingtonStudyGroup(1996)MovementDisorder11:136-42)。該量表經開發而為疾病病理多個方面提供統一的、全面的測試，併入來自測試的因素，所述測試如HD活動和日常生活量表、馬斯登和奎因氏舞蹈病嚴重性量表、肢體殘疾和獨立性量表、HD運動評定量表(HDMRS)、HD功能的能力量表(HDFCS)和定量的神經學檢查(QNE)。用於確定HD症狀的改善的其他測試可包括而不限於蒙特婁認知評估(MontrealCognitiveAssessment)、腦成像(例如，MRI)，類別流暢性測試(CategoryFluencyTest)、連線測試(TrailMakingTest)、地圖搜索(MapSearch)、斯特魯字閱讀測試(StroopWordReadingTest)，加快輕觸任務(SpeededTappingTask)和符號數字模式測試(SymbolDigitModalitiesTest)。在本發明的一些方面中，所述方法和組合物用於治療患有HD的人。如上所述，HD以常染色體顯性方式遺傳並由HTT基因中的CAG重複擴展引起。青少年發病HD最經常從父系方繼承。亨廷頓病-樣表型也與其它遺傳基因座相關，如HDL1、PRNP、HDL2、HDL3和HDL4。認為其它遺傳基因座可修飾HD症狀的表現，包括GRIN2A、GRIN2B、MSX1、GRIK2和APOE基因中的突變。rAAV組合物在一些方面，本發明提供包含任何本文所述的rAAV顆粒的組合物。通常，用於本發明的方法和系統的組合物包含有效量的rAAV顆粒，其包含編碼多肽和/或RNA的rAAV載體，任選地在藥學上可接受的賦形劑中。所述病毒顆粒包含AAV衣殼(例如AAV2或AAVrh8R衣殼)，其中與HSPG相互作用的一個或多個胺基酸被取代從而減少或去除rAAV顆粒與HSPG的結合。如本領域中熟知的，藥學上可接受的賦形劑是相對惰性的物質，其促進藥理學有效物質的施用並可作為液體溶液或懸浮物、作為乳劑、或作為使用前適於溶解或懸浮於液體中的固體形式提供。例如，賦形劑可給予形式或稠度，或充當稀釋劑。合適的賦形劑包括但不限於穩定劑、潤溼劑和乳化劑、用於改變滲透性的鹽、包囊劑、pH緩衝物質和緩衝液。所述賦形劑包括適於直接遞送至眼的任何藥劑，其可被施用而無過度的毒性。藥學上可接受的賦形劑包括但不限於山梨醇，多種TWEEN化合物中的任一種，和液體，如水、鹽水、甘油和乙醇。藥學上可接受的鹽可包含在其中，例如，無機酸鹽如氫氯化物、氫溴化物、磷酸鹽、硫酸鹽等；和有機酸的鹽如乙酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽等。藥學上可接受的賦形劑的全面討論可在REMINGTON』SPHARMACEUTICALSCIENCES(MackPub.Co.,N.J.1991)中獲得。通常，這些組合物經配製用於通過視網膜下注射施用。因此，這些組合物可與藥學上可接受的運載體如鹽水、林格氏(Ringer’s)平衡鹽溶液(pH7.4)等組合。雖然並非必需的，所述組合物可任選地以適於施用精確量的單位劑量形式供給。視網膜下遞送rAAV的方法視網膜下遞送的方法是本領域已知的。例如參見WO2009/105690，其通過提述併入本文。簡單地，用於將rAAV顆粒(例如rAAV2、rAAVrh8R等顆粒)遞送至黃斑和凹的視網膜下的一般方法可通過如下簡單概要來說明。此實施例僅僅意欲說明所述方法的某些特徵，而並非意在限制。通常，可將所述rAAV載體以眼內(視網膜下)注射的組合物的形式在使用手術顯微鏡的直接觀察下遞送。在一些實施方案中，所述載體在rAAV顆粒中衣殼化，其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼，所述rAAV衣殼包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用(例如抑制或去除HSPG結合)的一個或多個位置處；和rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。此步驟可涉及玻璃體切割術，然後使用精細套管通過一個或多個小視網膜切口將rAAV載體懸浮物注射入視網膜下空間。簡言之，可以在適當位置縫合輸注套管以通過在整個操作中輸注(例如，鹽水)維持正常的球體積。使用適當孔尺寸的套管(例如20至27號)進行玻璃體切割，其中移出的玻璃體凝膠的所述體積通過輸注來自輸注套管的鹽水或其他等滲溶液替代。有利的進行玻璃體切割術，是因為(1)去除它的皮質(玻璃樣後膜)促進通過所述套管的視網膜滲透；(2)其去除和用流體(例如鹽水)替換創造了空間以容納載體的眼內注射，和(3)其的受控去除降低了視網膜撕裂和計劃外的視網膜脫落的可能性。在一些實施方案中，通過利用適當孔徑(例如27-45號)的套管將所述rAAV組合物直接注射入中央視網膜外的視網膜下空間，因而在視網膜下空間創建泡(bleb)。在其他實施方案中，在視網膜下注射rAAV組合物之前將小體積(例如約0.1至約0.5ml)的適當的流體(如鹽水或林格氏溶液)視網膜下注射入中央視網膜外的視網膜下空間。此種初始的進入視網膜下空間的注射建立了視網膜下空間內的初始流體泡，引起在初始泡的位置處的局部視網膜脫落。此初始流體泡能夠促進將rAAV組合物靶向遞送至視網膜下空間(通過在rAAV遞送前限定注射平面(planeofinjection)，並使可能的rAAV施用進入脈絡膜和rAAV注射或回流入玻璃體腔的可能性最小化。在一些實施方案中，可以進一步用流體注射該初始流體泡，所述流體包含一個或多個的rAAV組合物和/或一種或多種另外的治療劑，這通過將這些流體用相同或其他的細孔套管直接施用於初始流體泡來進行。所述rAAV組合物和/或初始小體積流體的眼內施用可使用附接於注射器的細孔套管(例如27-45號)來進行。在一些實施方案中，此注射器的柱塞可由機械化的設備(如通過腳踏踏板的壓力)驅動。所述細孔套管穿過鞏膜前進，穿過玻璃體腔並根據被靶向的視網膜的區域(但在中央視網膜外)進入視網膜處於每個受試者中預先確定的位點。在直接目測下，用自密封非膨脹性視網膜切開術將載體懸浮物機械注入感覺神經性視網膜，引起局部的視網膜脫落。如上所述，可將所述rAAV組合物直接注射入創建中央視網膜外泡的視網膜下空間或者可將所述載體注射入中央視網膜外的初始泡，引起其膨脹(並使視網膜脫落的區域擴展)。在一些實施方案中，注射rAAV組合物然後將另一流體注射入所述泡。不願受理論束縛，視網膜下注射的速率和位置可導致局部化剪切力，其能夠損害黃斑、凹和/或下方的RPE細胞。所述視網膜下注射可以以這樣的速率進行，所述速率使剪切力最小化或避免剪切力。在一些實施方案中，所述rAAV組合物在約15-17分鐘注射。在一些實施方案中，所述載體在約17-20分鐘注射。在一些實施方案中，所述rAAV組合物在約20-22分鐘注射。在一些實施方案中，所述rAAV組合物以約35至約65μl/分鐘的速率注射。在一些實施方案中，所述rAAV組合物以約35μl/分鐘的速率注射。在一些實施方案中，所述rAAV組合物以約40μl/分鐘的速率注射。在一些實施方案中，所述rAAV組合物以約45μl/分鐘的速率注射。在一些實施方案中，所述rAAV組合物以約50μl/分鐘的速率注射。在一些實施方案中，所述rAAV組合物以約55μl/分鐘的速率注射。在一些實施方案中，所述rAAV組合物以約60μl/分鐘的速率注射。在一些實施方案中，所述rAAV組合物以約65μl/分鐘的速率注射。本領域的普通技術人員會認識到，泡的注射的速率和時間可取決於：例如產生足夠的視網膜脫落以接近中央視網膜的細胞所需的泡的大小或rAAV組合物的體積、用於遞送所述rAAV組合物的套管的大小和安全地維持本發明的套管的位置的能力。在本發明的一些具體實施方案中，注射至視網膜的視網膜下空間的組合物的體積是大於約1μl、2μl、3μl、4μl、5μl、6μl、7μl、8μl、9μl、10μl、15μl、20μl、25μl、50μl、75μl、100μl、200μl、300μl、400μl、500μl、600μl、700μl、800μl、900μl、或1mL的任一項，或其之間的任何量。在一些實施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用於眼部(例如通過視網膜下和/或玻璃體內施用)，所述病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，所述病毒顆粒還包含編碼異源核酸的載體。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為至少約5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、10×1012、11×1012、15×1012、20×1012、25×1012、30×1012、或50×1012基因組拷貝/mL的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為約5×1012至6×1012、6×1012至7×1012、7×1012至8×1012、8×1012至9×1012、9×1012至10×1012、10×1012至11×1012、11×1012至15×1012、15×1012至20×1012、20×1012至25×1012、25×1012至30×1012、30×1012至50×1012、或50×1012至100×1012基因組拷貝/mL的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為約5×1012至10×1012、10×1012至25×1012、或25×1012至50×1012基因組拷貝/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為至少約5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、10×109、11×109、15×109、20×109、25×109、30×109或50×109轉導單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為約5×109至6×109、6×109至7×109、7×109至8×109、8×109至9×109、9×109至10×109、10×109至11×109、11×109至15×109、15×109至20×109、20×109至25×109、25×109至30×109、30×109至50×109或50×109至100×109轉導單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為約5×109至10×109、10×109至15×109、15×109至25×109、或25×109至50×109轉導單位/mL中的任何。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為至少約5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、10×1010、11×1010、15×1010、20×1010、25×1010、30×1010、40×1010、或50×1010感染單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為至少約5×1010至6×1010、6×1010至7×1010、7×1010至8×1010、8×1010至9×1010、9×1010至10×1010、10×1010至11×1010、11×1010至15×1010、15×1010至20×1010、20×1010至25×1010、25×1010至30×1010、30×1010至40×1010、40×1010至50×1010、或50×1010至100×1010感染單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為至少約5×1010至10×1010、10×1010至15×1010、15×1010至25×1010、或25×1010至50×1010感染單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用於個體(例如人)的眼部(例如通過視網膜下和/或玻璃體內施用)，所述病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，施用於所述個體的病毒顆粒的劑量為至少約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項。在一些實施方案中，施用於所述個體的病毒顆粒的劑量為約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項。可以產生一個或多個(例如2、3或更多個)泡。通常，由本發明的系統和方法產生泡的總體積不能超過眼睛的流體體積，例如在典型的人受試者中為約4ml。每個單獨泡的總體積可為至少約0.3ml，或至少約0.5ml，以促進足夠尺寸的視網膜脫落以暴露中央視網膜的細胞類型並產生對於最佳操縱有足夠依賴性的泡。本領域的普通技術人員會理解，在根據本發明的系統和方法產生泡時必須維持適當的眼內壓以避免對眼結構的損壞。每個個體泡的大小可以是例如約0.5至約1.2ml，約0.8至約1.2ml，約0.9至約1.2ml，約0.9至約1.0ml，約1.0至約2.0ml，約1.0至約3.0ml。因此，在一個實例中，為了注射總共3ml的rAAV組合物懸浮液，可建立每個約1ml的3個泡。組合中所有泡的總體積可以是例如約0.5至約3.0ml，約0.8至約3.0ml，約0.9至約3.0ml，約1.0至約3.0ml，約0.5至約1.5ml，約0.5至約1.2ml，約0.9至約3.0ml，約0.9至約2.0ml，約0.9至約1.0ml。為了安全地和有效地轉導泡的原始位置的邊緣以外的靶視網膜(例如中央視網膜)區域，可操縱泡以將泡復位位於轉導的目標區域。泡的操縱可通過泡的依賴性而發生，所述依賴性由泡的體積、含有泡的眼的復位、用含有一個或多個泡的眼睛對人的頭部的復位和/或通過流體空氣交換而產生。這與中央視網膜特別相關，因為此區域通常通過視網膜下注射而抵抗剝離。在一些實施方案中，用流體-空氣交換來復位位泡；來自輸注套管的流體暫時由空氣置換，例如由空氣吹到視網膜的表面上。隨著空氣的體積從視網膜的表面置換玻璃體腔流體，玻璃體腔中的流體可流出套管。暫時缺乏來自玻璃體腔流體的壓力使泡移動並受重力作用吸引至眼的從屬部分。通過適當定位眼球，視網膜下rAAV組合物的泡被操縱以影響到鄰近區域(例如黃斑和/或凹)。在一些情況中，所述泡的質量足以導致其受重力作用吸引，即使沒有使用流體-空氣交換。可通過改變受試者的頭部位置以進一步促進泡移動至所需位置從而促進所述泡受重力作用吸引至眼的所需位置。一旦實現泡的所需配置，流體返回到玻璃體腔。該流體是適當的流體，例如新鮮的鹽水。通常，視網膜下rAAV組合物可留在原位而無需對視網膜切開進行視網膜填充(retinotomy)且無需眼內填充(intraoculartamponade)，而視網膜會自發在約48小時內重新附接。通過安全而有效地用包含治療性多肽或RNA序列的載體轉導眼細胞(例如黃斑和/或凹的RPE和/或感光細胞)，本發明的方法可用於治療個體；例如患有眼部病症的人，其中轉導的細胞產生足以治療所述眼部病症的量的治療性多肽或RNA序列。在一些實施方案中，眼細胞的轉導可通過使用包含AAV衣殼蛋白的rAAV顆粒(例如rAAV2、rAAVrh8R等顆粒)來改進，所述AAV衣殼蛋白包含胺基酸的一個或多個取代，所述胺基酸與HSPG相互作用(例如抑制或去除與HSPG的結合)。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒顯示出與HSPG的降低的結合；例如降低大於約10％、25％、50％、75％、100％或其間的任何數目。在一些實施方案中，rAAV與HSPG的結合降低約5％至約100％，約10％至約50％，約10％至約30％，約25％至約75％，約25％至約50％或約30％至約50％。取決於治療的目的，施用有效量的rAAV(在一些實施方案中為顆粒的形式)。例如當低百分比的轉導能實現所需的治療效果時，則治療的目的通常在於滿足或超過此轉導水平。在一些情況中，此轉導水平可通過僅轉導約1至5％的靶細胞來達到，在一些實施方案中為所需的組織類型的至少約20％的細胞，在一些實施方案中為至少約50％，在一些實施方案中為至少約80％，在一些實施方案中為至少約95％，在一些實施方案中為所需的組織類型的至少約99％的細胞。如上文所討論的，rAAV衣殼的與HSPG相互作用的一個或多個胺基酸的取代改進rAAV轉導。作為指導，每次注射施用的顆粒的數目通常為約1x106至約1x1014顆粒，約1x107至1x1013顆粒、約1x109至1x1012顆粒或約1x1011顆粒。所述rAAV組合物可通過在同一步驟過程中或間隔數天、數周、數月或數年的一次或多次視網膜下注射來施用。在一些實施方案中，多個載體可用於治療人。在一些實施方案中，對視網膜施用有效量的rAAV病毒顆粒轉導施用位點或其附近的感光細胞，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的胺基酸的一個或多個取代。在一些實施方案中，轉導了多於約5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或100％的任一項的感光細胞。在一些實施方案中，轉導了約5％至約100％、約10％至約50％、約10％至約30％、約25％至約75％、約25％至約50％、或約30％至約50％的感光細胞。鑑定由AAV病毒顆粒轉導的感光細胞的方法是本領域已知的，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的胺基酸的一個或多個取代；例如免疫組化或使用標記物，如增強的綠色螢光蛋白可用於檢測病毒顆粒的轉導，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的胺基酸的一個或多個取代。在本發明的一些實施方案中，所述方法包括將有效量的rAAV病毒顆粒施用於哺乳動物的視網膜下(例如視網膜下空間)用於治療患眼部病症的個體(例如患眼部病症的人)，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的胺基酸的一個或多個取代。在一些實施方案中，將所述組合物注射至視網膜下中的一個或多個位置以允許在感光細胞中表達異源核酸。在一些實施方案中，將所述組合物注射入視網膜下的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十個或多於十個位置的任一項中。在一些實施方案中，將所述rAAV病毒顆粒同時或序貫施用於多於一個位置，所述病毒顆粒包含rAAV衣殼，其具有與HSPG相互作用的胺基酸的一個或多個取代。在一些實施方案中，rAAV病毒顆粒的多次注射間隔不多於一小時、兩小時、三小時、四小時、五小時、六小時、九小時、十二小時或24小時。玻璃體內注射的方法用於玻璃體內注射的一般方法可通過如下簡要概述來說明。此實例僅意在說明本方法的一些特徵，而不意在進行限制。用於玻璃體內注射的步驟是本領域已知的(參見例如Peyman,G.A等.(2009)Retina29(7):875-912和Fagan,X.J和Al-Qureshi,S.(2013)Clin.Experiment.Ophthalmol.41(5):500-7)。簡言之，玻璃體內注射的受試者可準備進行瞳孔擴張、眼的消毒和施用麻醉的步驟。本領域已知的任何合適的散瞳劑均可用於瞳孔擴張。可在治療前證實充分散瞳。滅菌可通過消毒的眼治療例如含碘溶液如聚維酮碘實現。還可用類似的方案來清潔眼瞼、睫毛和附近的任何其他組織(例如皮膚)。可以任何適當的濃度來使用任何合適的麻醉劑，如利多卡因或丙美卡因。麻醉劑可通過本領域已知的任何方法施用，包括但不限於局部滴劑(drop)、凝膠(gel)或膠狀物(jelly)，和結膜下施用麻醉劑。在注射前，可將滅菌的眼瞼窺器用於清除(clear)所述區域的睫毛。注射的位點可用注射器標記。注射的位點可基於患者的晶狀體(lens)來選擇。例如，注射位點可距離人工晶狀體眼或無晶狀體眼患者中的(角膜)緣(limbus)3-3.5mm，和距有晶狀體眼患者中的(角膜)緣3.5-4mm。所述患者可看向注射位點相反的方向。在一些實施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用於眼部(例如通過視網膜下和/或玻璃體內施用)，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代且包含編碼異源核酸的載體，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是至少約5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、10×1012、11×1012、15×1012、20×1012、25×1012、30×1012、或50×1012基因組拷貝/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是約5×1012至6×1012、6×1012至7×1012、7×1012至8×1012、8×1012至9×1012、9×1012至10×1012、10×1012至11×1012、11×1012至15×1012、15×1012至20×1012、20×1012至25×1012、25×1012至30×1012、30×1012至50×1012、或50×1012至100×1012基因組拷貝/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是約5×1012至10×1012、10×1012至25×1012、或25×1012至50×1012基因組拷貝/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是至少約5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、10×109、11×109、15×109、20×109、25×109、30×109、或50×109轉導單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是約5×109至6×109、6×109至7×109、7×109至8×109、8×109至9×109、9×109至10×109、10×109至11×109、11×109至15×109、15×109至20×109、20×109至25×109、25×109至30×109、30×109至50×109或50×109至100×109轉導單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是約5×109至10×109、10×109至15×109、15×109至25×109、或25×109至50×109轉導單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為至少約5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、10×1010、11×1010、15×1010、20×1010、25×1010、30×1010、40×1010、或50×1010感染單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是至少約5×1010至6×1010、6×1010至7×1010、7×1010至8×1010、8×1010至9×1010、9×1010至10×1010、10×1010至11×1010、11×1010至15×1010、15×1010至20×1010、20×1010至25×1010、25×1010至30×1010、30×1010至40×1010、40×1010至50×1010、或50×1010至100×1010感染單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為至少約5×1010至10×1010、10×1010至15×1010、15×1010至25×1010、或25×1010至50×1010感染單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用於個體(例如人)的眼(例如經由視網膜下和/或玻璃體內施用)，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，施用於所述個體的病毒顆粒的劑量為至少約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項。在一些實施方案中，施用於所述個體的病毒顆粒的劑量為約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項。在注射過程中，可將針垂直插入鞏膜並指向眼的中央。可插入針使得尖端結束於玻璃體而非視網膜下空間。可使用本領域已知用於注射的任何合適的體積。注射後，可用滅菌劑如抗生素處理眼。還可衝洗眼以去除過量的滅菌劑。視網膜的結構和測定rAAV遞送的有效性的手段已知視網膜含有多層。視網膜中的細胞層可包括內界膜、神經纖維、神經節細胞、內網、內核、外網、外核、外界膜、感光細胞和視網膜色素上皮層。最接近玻璃體的層是內界膜。此層可含有Müller細胞，其為一類神經膠質細胞。神經纖維層可含有來自形成視神經的神經節細胞的軸突。神經節細胞層可包括神經節細胞和無長突細胞。內網層可含有神經節和無長突細胞的樹突之間的突觸和雙極細胞的軸突。內核層可含有無長突、雙極和水平細胞的細胞核。外網層可含有水平細胞樹突和感光細胞突起物(projections)之間的突觸。外核層可含有感光細胞體。外部或外界膜可包括Müller細胞頂突過程中和這些過程與感光細胞內段之間的細胞聯繫，如黏附連接和橋粒。感光細胞層也稱為視杆細胞和視錐細胞和Jacob膜層，其可含有感光細胞，包括視杆細胞和視錐細胞。視網膜層距玻璃體最遠的是視網膜色素上皮(RPE)，其可包括含有色素顆粒的六角形的上皮細胞的層。還已知視網膜含有許多不同的細胞類型。視網膜神經元可包括感光細胞、雙極細胞、神經節細胞、無長突細胞和水平細胞。感光細胞是對光敏感的。它們可感受光並通過將信號通過雙極細胞和神經節細胞傳遞至視神經來響應。感光細胞可包括視杆細胞(其一般在低光條件下感受光)和視錐細胞(其一般感受顏色和更明亮的光感)。雙極細胞可接收來自感光細胞和無長突細胞或神經節細胞上的突觸的輸入。神經節細胞可接收來自無長突細胞或水平細胞的信息，而且它們的軸突形成視神經。水平細胞可整合來自多個感光細胞的輸入並有助於調節至光水平。無長突細胞是中間神經元，其幫助調節雙極細胞並將輸入提供至神經節細胞。神經膠質視網膜的細胞可包括Müller細胞、星形膠質細胞和小膠質細胞。通過視網膜下或玻璃體內注射的rAAV遞送效果可通過如本文所述的幾個標準監測。例如，使用本發明的方法在受試者中處理後，可通過一個或多個臨床參數(包括本文所述的那些)來評估受試者的例如在疾病狀態的一個或多個跡象或症狀的改善和/或穩定和/或進展延遲。所述測試的實例是本領域已知的，且包括客觀和主觀(例如受試者報告的)量度。例如，為了測量治療對受試者的視覺功能的有效性，可以評價如下的一項或多項：受試者的主觀視覺質量或改進的中央視覺功能(例如受試者流暢閱讀和識別面孔的能力的改進)，受試者的視覺活動性(例如通行迷宮所需的時間減少)，視敏度/視力(例如，受試者的logMAR評分的改進)，微視野檢查(例如受試者的dB評分的改進)，暗適應視野檢查(例如受試者的dB評分的改進)，精細矩陣映像(例如受試者的dB評分的改進)，Goldmann視野檢查(例如減少的盲點區域(即盲區)的大小和解析較小目標的能力的改進)，閃爍的敏感性(例如Hertz的改進)，自發螢光，和電生理學測量(例如ERG的改進)。在一些實施方案中，通過受試者的視覺活動性測量視覺功能。在一些實施方案中，通過受試者的視敏度/視力測量視覺功能。在一些實施方案中，通過微視野檢查測量視覺功能。在一些實施方案中，通過暗適應視野檢查測量視覺功能。在一些實施方案中，通過ERG測量視覺功能。在一些實施方案中，通過受試者的主觀視覺質量測量視覺功能。在導致進展的退化性視覺功能的疾病的情況下，在早期治療受試者不僅可導致減慢或停止疾病進展，它也可以改善或防止由於後天弱視導致的視覺功能損失。弱視可為兩類。在非人靈長類動物和小貓的研究中，它們從出生直到幾個月齡保持在完全黑暗中，所述動物即使後續暴露於光也成為功能上不可逆的失明，儘管有由視網膜發送的功能信號。此失明的發生是因為神經連接和對皮層的「教育」由於刺激停止而從出生開始就在發育上停止。這個功能是否能恢復是未知的。在視網膜退化疾病的情況下，正常的視覺皮層迴路最初是「學習的」或發育上適當的，直至退化產生的顯著功能障礙的點。在功能障礙的眼的信號傳導中視覺刺激的損失產生「獲得的」或「習得的」功能障礙(「後天弱視」)，導致大腦無法解釋信號，或「使用」該眼。在「後天弱視」的這些情況中未知的是，作為弱視眼的基因治療的結果，改進的來自視網膜的信號傳導除了使疾病狀態穩定或減慢其進展之外，是否可導致更多正常功能的獲得。在一些實施方案中，治療的人小於30歲。在一些實施方案中，治療的人小於20歲。在一些實施方案中，治療的人小於18歲。在一些實施方案中，治療的人小於15歲。在一些實施方案中，治療的人小於14歲。在一些實施方案中，治療的人小於13歲。在一些實施方案中，治療的人小於12歲。在一些實施方案中，治療的人小於10歲。在一些實施方案中，治療的人小於8歲。在一些實施方案中，治療的人小於6歲。在一些眼部病症中，存在「哺育細胞」現象，其中一類細胞的功能的改進可改進另一類細胞的功能。例如，通過本發明的rAAV轉導中央視網膜的RPE可以改進視杆細胞的功能，而視杆細胞功能的改進又導致視錐細胞功能的改進。因此，對一個細胞類型的治療可導致另一個細胞類型中功能的改進。特定的rAAV載體和組合物的選擇取決於許多不同的因素，包括但不限於個體人的病史和被治療的病況及個體特徵。這些特徵的評價和適當的治療方案的設計最終是處方醫師的責任。在一些實施方案中，待治療的人患有遺傳的眼部病症但還未顯示出臨床的跡象或症狀。在一些實施方案中，待治療的人患有眼部病症。在一些實施方案中，待治療的人顯示出眼部病症的一個或多個跡象或症狀。可通過本發明的系統和方法治療的眼部病症的非限制性實例包括：常染色體隱性重度早髮型視網膜變性(Leber氏先天性黑矇)、先天性全色盲、斯塔加特氏病、貝斯特氏病、Doyne氏病、錐體營養不良、視網膜色素變性、X連鎖視網膜劈裂症、Usher氏症候群、年齡相關性黃斑變性、萎縮性年齡相關性黃斑變性、新生血管性AMD、糖尿病性黃斑病變、增生性糖尿病性視網膜病(PDR)、囊樣黃斑水腫、中心性漿液性視網膜病、視網膜脫落、眼內炎、青光眼、後葡萄膜炎、無脈絡膜症(choroideremia)，和Leber遺傳性視神經病變。本發明的組合物(例如用於視網膜下或玻璃體內遞送AAV病毒顆粒，所述AAV病毒顆粒包含AAV衣殼，所述AAV衣殼具有胺基酸的一個或多個取代，所述胺基酸與HSPG相互作用或位於對應於胺基酸484、487、532、585或588的一個或多個位置)可單獨或與用於治療眼部病症的一種或多種另外的治療劑組合使用。序貫施用之間的間隔可以至少(或可替換地少於)數分鐘、數小時或數天為單位。在一些實施方案中，一種或多種另外的治療劑可施用於視網膜下或玻璃體(例如通過玻璃體內施用)。另外的治療劑的非限制性實例包括多肽神經營養因子(例如GDNF、CNTF、BDNF、FGF2、PEDF、EPO)，多肽抗血管生成因子(例如sFlt、血管他汀、內皮他汀)，抗血管生成核酸(例如siRNA、miRNA、核酶)，例如針對VEGF的抗血管生成核酸，抗血管生成嗎啉代(morpholinos)，例如針對VEGF的抗血管生成嗎啉代，抗血管生成抗體和/或抗體片段(例如Fab片段)，例如針對VEGF的抗血管生成抗體和/或抗體片段。用於CNS遞送的方法在一些實施方案中，施用有效量的本發明的重組病毒顆粒(例如AAV2、AAVrh8R顆粒等)轉導施用位點處或附近的神經元(例如紋狀體神經元，如棘神經元)，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於硫酸乙醯肝素蛋白聚糖與相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，轉導了多於約5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或100％任一項的神經元。在一些實施方案中，轉導了約5％至約100％，約10％至約50％，約10％至約30％，約25％至約75％，約25％至約50％，或約30％至約50％的神經元。鑑定通過表達異源核酸的重組病毒顆粒轉導的神經元的方法是本領域已知的；例如，可使用免疫組化、RNA檢測(例如qPCR、Northern印跡、RNA-seq、原位雜交等)或使用共表達的標記物如增強的綠色螢光蛋白來檢測表達。在本發明的一些實施方案中，所述方法包括將有效量的本發明的重組病毒顆粒施用於哺乳動物的腦，用於治療哺乳動物(例如人)，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，將所述組合物注射至腦的一個或多個位置以允許本發明的異源核酸在至少神經元中表達。在一些實施方案中，將所述組合物注射入腦中的一、二、三、四、五、六、七、八、九、十或多於十個位置中的任一項。在一些實施方案中，將所述組合物注射入紋狀體。在一些實施方案中，將所述組合物注射入背側紋狀體。在一些實施方案中，將所述組合物注射入殼核(putamen)。在一些實施方案中，將所述組合物注射入尾狀核(caudatenucleus)。在一些實施方案中，將所述組合物注射入殼核並注射入尾狀核。在一些實施方案中，將所述重組病毒顆粒通過立體定位注射施用於個體的CNS(例如紋狀體)，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，將所述重組病毒顆粒通過對流增強遞送(CED)施用於個體的CNS(例如CED至紋狀體)，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。所述rAAV顆粒的施用可通過多種途徑進行。在一些實施方案中，所述施用包括直接脊髓注射和/或腦內施用。在一些實施方案中，所述施用處於選自如下的部位：大腦、髓質、腦橋、小腦、顱內腔、圍繞大腦的腦膜、硬腦膜、蛛網膜、軟腦膜、圍繞腦的蛛網膜下腔的腦脊液(CSF)、小腦的深部小腦核、大腦的腦室系統、蛛網膜下腔、紋狀體、皮層、隔膜、丘腦、下丘腦和腦的實質。在一些實施方案中，所述施用包括腦室內注射入至少一個大腦側腦室。在一些實施方案中，所述施用包括鞘內注射到頸、胸和/或腰部中。在一些實施方案中，所述施用包括紋狀體內注射。在一些實施方案中，所述施用包括丘腦內注射。適於這些施用途徑的多種技術和設備在本文中描述，例如，CED和/或立體定位注射。在一些實施方案中，將所述重組病毒顆粒施用於腦的一個半球，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，將所述重組病毒顆粒施用於腦的兩個半球。在一些實施方案中，將所述重組病毒顆粒同時或順序施用於多於一個位置，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，重組病毒顆粒的多次注射間隔不多於一小時、兩小時、三小時、四小時、五小時、六小時、九小時、十二小時或24小時。在一些實施方案中，本發明提供用於治療患有CNS的病症的人的方法，其通過施用有效量的本發明的藥物組合物來治療CNS的病症，所述藥物組合物包含重組病毒顆粒，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，所述藥物組合物包含一個或多個藥學上可接受的賦形劑。通常，可遞送約1μL至約1mL的本發明的組合物(例如約100μL至約500μL的組合物)。在本發明的一些實施方案中，注射至紋狀體的重組病毒顆粒的體積是約或多於約1μl、2μl、3μl、4μl、5μl、6μl、7μl、8μl、9μl、10μl、15μl、20μl、25μl、50μl、75μl、100μl、200μl、300μl、400μl、500μl、600μl、700μl、800μl、900μl或1mL中的任一項，或其間的任何量，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，將第一體積的重組病毒顆粒注射入腦的第一區，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，且將第二體積的變體rAAV顆粒注射入腦的第二區。例如在一些實施方案中，將第一體積的變體rAAV顆粒注射入尾狀核，且將第二體積的所述組合物注射入殼核。在一些實施方案中，將1X體積的變體rAAV顆粒注射入尾狀核，且將1.5X、2X、2.5X、3X、3.5X或4X體積的所述組合物注射入殼核，其中X是約或多於約1μl、2μl、3μl、4μl、5μl、6μl、7μl、8μl、9μl、10μl、15μl、20μl、25μl、50μl、75μl、100μl、200μl、300μl、400μl、500μl、600μl、700μl、800μl、900μl或1mL中的任一項，或其間任何量的體積。本發明的組合物(例如本發明的重組病毒顆粒，其包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處)可單獨或與用於治療CNS的病症(例如HD)的一種或多種額外治療劑組合使用。順序施用之間的間隔可以至少(或可替換地少於)數分鐘、數小時或數天為單位。在一些實施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用於CNS，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代且包含編碼異源核酸的載體，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是至少約5×1012、6×1012、7×1012、8×1012、9×1012、10×1012、11×1012、15×1012、20×1012、25×1012、30×1012、或50×1012基因組拷貝/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是約5×1012至6×1012、6×1012至7×1012、7×1012至8×1012、8×1012至9×1012、9×1012至10×1012、10×1012至11×1012、11×1012至15×1012、15×1012至20×1012、20×1012至25×1012、25×1012至30×1012、30×1012至50×1012、或50×1012至100×1012基因組拷貝/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是約5×1012至10×1012、10×1012至25×1012、或25×1012至50×1012基因組拷貝/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價為至少約5×109、6×109、7×109、8×109、9×109、10×109、11×109、15×109、20×109、25×109、30×109、或50×109轉導單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是約5×109至6×109、6×109至7×109、7×109至8×109、8×109至9×109、9×109至10×109、10×109至11×109、11×109至15×109、15×109至20×109、20×109至25×109、25×109至30×109、30×109至50×109或50×109至100×109轉導單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是約5×109至10×109、10×109至15×109、15×109至25×109、或25×109至50×109轉導單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是至少約5×1010、6×1010、7×1010、8×1010、9×1010、10×1010、11×1010、15×1010、20×1010、25×1010、30×1010、40×1010、或50×1010感染單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是至少約5×1010至6×1010、6×1010至7×1010、7×1010至8×1010、8×1010至9×1010、9×1010至10×1010、10×1010至11×1010、11×1010至15×1010、15×1010至20×1010、20×1010至25×1010、25×1010至30×1010、30×1010至40×1010、40×1010至50×1010、或50×1010至100×1010感染單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述組合物的病毒效價是至少約5×1010至10×1010、10×1010至15×1010、15×1010至25×1010、或25×1010至50×1010感染單位/mL中的任一項。在一些實施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用於個體(例如人)的CNS，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，施用於個體的病毒顆粒的劑量是至少約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項。在一些實施方案中，施用於個體的病毒顆粒的劑量是約1×108至約1×1013基因組拷貝/kg體重中的任一項。在一些實施方案中，所述方法包括將有效量的重組病毒顆粒施用於個體(例如人)的CNS，所述重組病毒顆粒包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，施用於個體的病毒顆粒的總量是至少約1×109至約1×1014基因組拷貝中的任一項。在一些實施方案中，施用於個體的病毒顆粒的總量是約1×109至約1×1014基因組拷貝中的任一項。V.表達構建體在一些方面，本發明提供通過視網膜下遞送包含異源核酸的rAAV載體從而將所述異源核酸遞送至眼部的方法，且其中所述rAAV載體在rAAV衣殼(例如rAAV2衣殼、rAAVrh8R衣殼等)中衣殼化，所述rAAV衣殼包含與HSPG相互作用的胺基酸的一個或多個取代。在一些方面，本發明提供治療個體的CNS的病症的方法，其包括將包含rAAV顆粒的組合物遞送至個體的CNS，其中所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和(b)rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個AAV末端重複。在一些實施方案中，所述異源核酸(例如轉基因)可操作地連接至啟動子。例示性的啟動子包括但不限於巨細胞病毒(CMV)立即早期啟動子，RSVLTR，MoMLVLTR，磷酸甘油酸激酶-1(PGK)啟動子，猿猴病毒40(SV40)啟動子和CK6啟動子，甲狀腺素轉運蛋白啟動子(TTR)，TK啟動子，四環素響應性啟動子(TRE)，HBV啟動子，hAAT啟動子，LSP啟動子，嵌合肝特異性啟動子(LSP)，E2F啟動子，端粒酶(hTERT)啟動子；巨細胞病毒增強子/雞β-肌動蛋白/兔β球蛋白啟動子(CAG啟動子；Niwa等，Gene,1991,108(2):193-9)和延伸因子1-α啟動子(EF1-α)啟動子(Kim等，Gene,1990,91(2):217-23和Guo等，GeneTher.,1996,3(9):802-10)。在一些實施方案中，所述啟動子包含人β-葡糖醛酸糖苷酶啟動子或與雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子連接的巨細胞病毒增強子。所述啟動子可以是組成型、誘導型或阻抑型啟動子。在一些實施方案中，所述啟動子能夠在眼的細胞中表達所述異源核酸。在一些實施方案中，所述啟動子能夠在感光細胞或RPE中表達所述異源核酸。在具體實施方案中，所述啟動子是視紫紅激酶(RK)啟動子；例如人RK啟動子。在一些實施方案中，所述啟動子是視蛋白啟動子；例如人視蛋白啟動子或小鼠視蛋白啟動子。本發明涵蓋重組病毒基因組用於引入一個或多個編碼治療性多肽和/或核酸的核酸序列的用途，用於包裝入包含與HSPG相互作用的胺基酸的一個或多個取代的rAAV病毒顆粒。所述重組病毒基因組可包括建立所述治療性多肽和/或核酸的表達的任何元件，例如啟動子、ITR、核糖體結合元件、終止子、增強子、選擇標記物、內含子、多聚A信號(polyAsignal)和/或複製起點。在一些實施方案中，所述rAAV載體是自身互補的rAAV載體，例如包含重組自身互補的(術語「自身互補的」在本文中可互換使用)基因組的rAAV載體。具有自身互補的基因組的AAV病毒顆粒和使用自身互補的AAV基因組的方法描述於美國專利號6,596,535；7,125,717；7,465,583；7,785,888；7,790,154；7,846,729；8,093,054；和8,361,457；以及WangZ.等，(2003)GeneTher10:2105-2111中，其各自通過提述以其整體併入本文。包含自身互補的基因組的rAAV憑藉其部分互補序列(例如轉基因的互補的編碼和非編碼鏈)會迅速地形成雙鏈DNA分子。在一些實施方案中，所述載體包含編碼所述異源核酸的第一核酸序列和編碼該核酸的互補體的第二核酸序列，其中所述第一核酸序列能與第二核酸序列沿其全長或長度的大部分形成鏈內鹼基對。在一些實施方案中，所述第一異源核酸序列和所述第二異源核酸序列經由突變的ITR(例如右側(right)ITR)連接。在一些實施方案中，所述ITR包含多核苷酸序列5』-CACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCG–3』(SEQIDNO:8)。所述突變的ITR包含D區的缺失並包含末端解析序列。結果，在AAV病毒基因組的複製中，所述rep蛋白質不會在突變的ITR處切割病毒基因組，並由此，可以5'至3'順序將包含如下的重組病毒基因組包裝在病毒衣殼中：AAVITR、包含調節序列的第一異源多核苷酸序列、突變的AAVITR、與第一異源多核苷酸方向相反的第二異源多核苷酸和第三AAVITR。VI.病毒顆粒和產生病毒顆粒的方法rAAV病毒顆粒在一些方面，本發明提供通過視網膜下遞送包含異源核酸的rAAV載體而將所述異源核酸遞送至眼部的方法，且其中所述rAAV載體在rAAV衣殼(例如rAAV2、rAAVrh8R等)中衣殼化，所述rAAV衣殼包含與HSPG相互作用的胺基酸的一個或多個取代。在一些方面，本發明提供涉及將rAAV顆粒遞送至個體的CNS的方法和試劑盒。在一些實施方案中，所述rAAV顆粒包含rAAV載體。在一些實施方案中，所述病毒顆粒是包含核酸的重組AAV顆粒，所述核酸包含側翼有一個或兩個AAV末端反向重複(ITR)的異源轉基因。所述核酸在AAV顆粒中衣殼化。所述AAV顆粒還包含衣殼蛋白。在一些實施方案中，所述核酸包含目的編碼序列(例如異源轉基因)，其以轉錄的方向可操作地連接組分，調控序列(包括轉錄起始和終止序列)，由此形成表達盒。所述表達盒在5'和3'端側翼有至少一個功能性AAVITR序列。「功能性AAVITR序列」是指ITR序列發揮所意欲的功能，用於AAV病毒體的拯救、複製和包裝。參見Davidson等，PNAS,2000,97(7)3428-32；Passini等，J.Virol.,2003,77(12):7034-40；和Pechan等，GeneTher.,2009,16:10-16，其全部通過提述以其整體併入本文。為了實施本發明的一些方面，所述重組載體至少包含對於衣殼化和用於rAAV感染的物理結構所必需的全部AAV序列。用於在本發明中使用的載體的AAVITR不需要具有野生型核苷酸序列(例如，如Kotin,Hum.GeneTher.,1994,5:793-801中所述)，並可通過核苷酸的插入、缺失或取代而改變，或者所述AAVITR可源自數種AAV血清型的任一項。目前已知AAV的多於40個血清型，而且繼續在對新的血清型和現存的血清型的變體進行鑑定。參見Gao等，PNAS,2002,99(18):11854-6；Gao等，PNAS,2003,100(10):6081-6；和Bossis等，J.Virol.,2003,77(12):6799-810。任何AAV血清型的使用都視為在本發明的範圍內。在一些實施方案中，rAAV載體是源自AAV血清型的載體，其包括而不限於，AAVITR為AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11、AAV12、AAV2R471A、AAVDJ、山羊AAV、牛AAV或小鼠AAVITR等。在一些實施方案中，所述AAV中的核酸包含AAVITR的ITR，其為AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11、AAV12、AAV2R471A、AAVDJ、山羊AAV、牛AAV或小鼠AAV等。在一些實施方案中，所述AAV中的核酸包含AAV2ITR。如上文所述，所述rAAV顆粒可進一步包含含有rAAV衣殼蛋白的衣殼，所述rAAV衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，載體可包括填充核酸。在一些實施方案中，所述填充核酸可編碼綠色螢光蛋白。在一些實施方案中，所述填充核酸可位於啟動子和編碼所述RNAi的核酸之間。不同的AAV血清型用於優化特定靶細胞的轉導或用於靶向特定靶組織(例如CNS組織)內特定的細胞類型。rAAV顆粒可包含相同血清型或混合的血清型的病毒蛋白質和病毒核酸。例如在一些實施方案中，rAAV顆粒可包含本發明的AAV2衣殼蛋白和至少一個AAV2ITR，或其可包含AAV2衣殼蛋白和至少一個AAV1ITR。用於產生rAAV顆粒的AAV血清型的任何組合在本文中提供，如同各組合已明確地敘述於本文中那樣。在一些實施方案中，本發明提供包含本發明的AAV2衣殼的rAAV顆粒。在一些實施方案中，本發明提供包含本發明的AAVrh8R衣殼的rAAV顆粒。AAV顆粒的產生本領域已知許多方法用於生產rAAV載體，包括轉染、穩定的細胞系的生產，和感染性雜交病毒生產系統，其包括腺病毒-AAV雜交體、皰疹病毒-AAV雜交體(Conway,JE等，(1997)J.Virology71(11):8780-8789)和杆狀病毒-AAV雜交體。用於產生rAAV病毒顆粒的rAAV生產培養物都需要：1)合適的宿主細胞，包括例如源自人的細胞系如HeLa細胞、A549或293細胞，或源自昆蟲的細胞系如SF-9(對於杆狀病毒生產系統的情況而言)；2)合適的輔助病毒功能，其由野生型或突變體腺病毒(如溫度敏感的腺病毒)、皰疹病毒、杆狀病毒或提供輔助功能的質粒構建體提供；3)AAVrep和cap基因和基因產物；4)轉基因(如治療性轉基因)，其側翼有至少一個AAVITR序列；和5)合適的培養基和培養基組分，以支持rAAV生產。本領域中已知的合適培養基可用於產生rAAV載體。這些培養基包括而不限於由HycloneLaboratories和JRH生產的培養基，包括改良的Eagle培養基(MEM)，Dulbecco改良的Eagle培養基(DMEM)中，定製的配製物如美國專利No.6,566,118中所述的那些，和如美國專利No.6,723,551中所述的SF-900IISFM培養基，其各自通過提述以其整體併入本文，特別是關於用於產生重組AAV載體的定製的培養基配製物。所述rAAV顆粒能夠使用本領域中已知的方法來產生。參見例如美國專利No.6,566,118；6,989,264和6,995,006。在本發明的實施中，用於產生rAAV顆粒的宿主細胞包括哺乳動物細胞、昆蟲細胞、植物細胞、微生物和酵母。宿主細胞也可以是包裝細胞，其中所述AAVrep和cap基因被穩定地保持在宿主細胞或生產者細胞中，其中所述AAV載體基因組被穩定地保持。例示性的包裝和生產者細胞源自293、A549或HeLa細胞。使用本領域已知的標準技術純化和配製AAV載體。在一些實施方案中，rAAV顆粒可通過三重轉染方法來生產，如示例性三重轉染方法在下文提供。簡言之，可將含有rep基因和衣殼基因的質粒以及輔助腺病毒質粒轉染(例如使用磷酸鈣法)入細胞系(例如HEK-293細胞)中，並可收集和任選地純化病毒。在一些實施方案中，rAAV顆粒可通過生產者細胞系方法產生，如下文提供的示例性的生產者細胞系方法(另見(Martin等，(2013)HumanGeneTherapyMethods24:253-269中引用的)。簡言之，細胞系(例如HeLa細胞系)可用含有rep基因、衣殼基因和啟動子-轉基因序列的質粒穩定地轉染。可篩選細胞系以選擇引導克隆用於rAAV生產，然後可將其擴展到生產生物反應器並用作為輔助者的腺病毒(例如野生型腺病毒)來感染以啟動rAAV生產。隨後可收穫病毒，可以將腺病毒滅活(例如通過加熱)和/或去除，且可純化所述rAAV顆粒。在一些方面，提供了用於產生如本文公開的任何rAAV顆粒的方法，其包括：(a)在產生rAAV顆粒的條件下培養宿主細胞，其中所述宿主細胞包含(i)一個或多個AAV包裝基因，其中每個AAV包裝基因編碼AAV複製和/或衣殼化蛋白；(ii)rAAV原-載體，其包含編碼如本文所述的治療性多肽和/或核酸的核酸，所述核酸側翼有至少一個AAVITR，和(iii)AAV輔助功能；和(b)回收由宿主細胞產生的rAAV顆粒。在一些實施方案中，所述至少一個AAVITR是選自下組的AAVITR：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAVrh8、AAVrh8R、AAV9、AAV10、AAVrh10、AAV11、AAV12、AAV2R471A、AAVDJ、山羊AAV、牛AAV或小鼠AAV等。在一些實施方案中，所述衣殼化蛋白包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處。在一些實施方案中，所述衣殼化蛋白是AAV2衣殼化蛋白。在一些實施方案中，所述衣殼化蛋白是AAVrh8R衣殼化蛋白。本發明的合適的rAAV生產培養基可以0.5％-20％(v/v或w/v)的水平補充血清或血清來源的重組蛋白質。或是如本領域已知的，rAAV載體可在無血清條件下產生，其也可稱為無動物來源產品的培養基。本領域的普通技術人員可理解，經設計以支持rAAV載體產生的商用或定製培養基也可以補充有本領域已知的一個或多個細胞培養組分，包括但不限於葡萄糖、維生素、胺基酸和或生長因子，以增加生產培養物中rAAV的效價(titer)。rAAV生產培養物可以在適於所使用的特定宿主細胞的多種條件(在寬的溫度範圍，進行不同的時間長度等)下生長。如本領域已知的，rAAV生產培養包括附接依賴性培養，其可在合適的附接依賴性容器如，例如，滾瓶、中空纖維濾器、微載體和填充床或流化床生物反應器中進行培養。rAAV載體生產培養物還可包括適應懸浮液的宿主細胞如HeLa細胞、293和SF-9細胞，其可以多種方式，包括例如旋轉瓶、攪拌罐生物反應器和一次性系統如Wave袋系統進行培養。本發明的rAAV載體顆粒可從rAAV生產培養物通過裂解所述生產培養物的宿主細胞或通過從生產培養物收穫用過的培養基來收穫，只要將細胞在本領域中已知的條件下培養以引起rAAV顆粒從完整細胞釋放入培養基，如更充分地於美國專利No.6,566,118中所描述的)。裂解細胞的合適方法也是本領域中已知的且包括例如多個凍/融循環、聲處理、微流化，和用化學品(如洗滌劑和/或蛋白酶)處理。在進一步的實施方案中，純化所述rAAV顆粒。如本文所用的術語「純化」包括製備缺少了至少一些其它組分的rAAV顆粒，所述其它組分還可能存在於天然存在的或由其起始製備的rAAV顆粒中。因此，例如，分離的rAAV顆粒可使用純化技術從來源混合物(如培養裂解物或生產培養物上清液)將其富集來製備。富集可以多種方式測量，如，例如通過存在於溶液中的脫氧核酶抗性顆粒(DRP)或基因組拷貝(gc)的比例，或通過感染性來測量，或其可相對於來源混合物中存在的第二、潛在的幹擾物質而測量，所述幹擾物質如汙染物，包括生產培養汙染物或過程中的汙染物，包括輔助病毒，培養基組分等。在一些實施方案中，將所述rAAV生產培養收穫物澄清以除去宿主細胞碎片。在一些實施方案中，生產培養收穫物通過一系列的深度過濾器(包括，例如，等級(grade)DOHCMilliporeMillistak+HCPod過濾器、等級A1HCMilliporeMillistak+HCPod過濾器，和0.2μm過濾器OpticapXL1OMilliporeExpressSHC親水膜過濾器)通過過濾澄清。澄清也可以通過多種本領域已知的其它標準技術來實現，如離心或通過本領域中已知的0.2μm或更大孔尺寸的任何醋酸纖維素濾膜過濾。在一些實施方案中，將所述rAAV生產培養收穫物進一步用處理以消化所述生產培養物中存在任何高分子量DNA。在一些實施方案中，所述消化在本領域已知的標準條件下進行，包括例如終濃度為1-2.5單位/ml的在環境至37℃的溫度進行30分鐘至數小時的時段。可使用一個或多個如下純化步驟來分離或純化rAAV顆粒：平衡離心；穿過(flow-through)陰離子交換過濾；用於濃縮所述rAAV顆粒的切向流過濾(TFF)；通過磷灰石色譜進行的rAAV捕獲；輔助病毒的熱滅活；通過疏水相互作用色譜的rAAV捕獲；通過大小排阻色譜(SEC)的緩衝液交換；納米過濾；和通過陰離子交換色譜、陽離子交換色譜或親和色譜的rAAV捕獲。這些步驟可以單獨、以多種組合，或以不同的順序使用。在一些實施方案中，所述方法包括以如下所述的順序的所有步驟。純化rAAV顆粒的方法見於，例如，Xiao等，(1998)JournalofVirology72:2224-2232；美國專利號6,989,264和8,137,948；和WO2010/148143中。本申請還提供了包含rAAV顆粒和藥學上可接受的載體的藥物組合物，所述rAAV顆粒包含編碼治療性多肽和/或治療性核酸的異源核酸，其中所述rAAV顆粒包含rAAV衣殼，所述rAAV衣殼包含與HSPG相互作用的胺基酸的一個或多個取代。所述藥物組合物可適於本文所述的任何施用方式；例如經通過視網膜下施用。在一些實施方案中，包含本文所述的rAAV和藥學上可接受的載體的藥物組合物適於施用於人。此類載體是本領域熟知的(參見例如Remington'sPharmaceuticalSciences，第15版，第1035-1038和1570-1580頁)。在一些實施方案中，包含本申請所述的rAAV和藥學上可接受的載體的藥物組合物適於眼部注射。所述藥學上可接受的載體可以是無菌液體，如水和油，包括石油、動物、植物或合成來源的那些，如花生油、大豆油、礦物油等。鹽水溶液和含水右旋糖、聚乙二醇(PEG)和甘油溶液也可用作液體載體，特別是用於可注射溶液。所述藥物組合物可進一步包含另外的成分，例如防腐劑、緩衝液、等滲劑、抗氧化劑和穩定劑、非離子型潤溼或澄清劑，增粘劑等。本文所述的藥物組合物可以包裝於單個單位劑量或多劑量形式中。所述組合物通常配製為無菌和基本上等滲的溶液。VII.系統和試劑盒如本文所述的rAAV組合物可包含於經設計在本文所述的本發明的方法之一中使用的系統之內。視網膜下遞送在一些實施方案中，本發明提供用於將載體視網膜下遞送至個體的眼部的系統，其包含a)包含有效量的rAAV顆粒的組合物，其中i)所述rAAV顆粒的衣殼蛋白包含一個或多個胺基酸取代，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，且ii)所述載體包含編碼治療性多肽或治療性RNA的異源核酸和至少一個AAV末端重複；和b)用於視網膜遞送所述rAAV的裝置。通常，所述系統包含細孔套管(其中所述套管為27至45號)、一個或多個注射器(例如1、2、3、4或更多)和適用於本發明的方法的一種或多種流體(例如1、2、3、4或更多)。所述細孔套管適於將載體懸浮物和/或待注射的其他流體視網膜下注射入視網膜下空間。在一些實施方案中，所述套管為27至45號。在一些實施方案中，所述細孔套管為35-41號。在一些實施方案中，所述細孔套管為40或41號。在一些實施方案中，所述細孔套管為41-號。所述套管可以是任何合適的套管類型，例如，套管或套管。所述注射器可以是任何合適的注射器，條件是它能夠連接於用於遞送流體的套管。在一些實施方案中，所述注射器是系統注射器。在一些實施方案中，所述系統具有一個注射器。在一些實施方案中，所述系統具有兩個注射器。在一些實施方案中，所述系統具有三個注射器。在一些實施方案中，所述系統具有四個或更多個注射器。所述系統可進一步包含自動化的注射泵，其可通過例如踏板啟動。適用於本發明的方法的流體包括本申請所述的那些，例如各自包含有效量的本文所述的一個或多個載體的一種或多種流體，用於產生起始泡的一種或多種流體(例如鹽水或其他適當的流體)，和包含一個或多個治療劑的一種或多種流體。適用於在本發明的方法中使用的流體包括本申請所述的那些，例如各包含有效量的本文所述的一個或多個載體的一種或多種流體，用於產生起始泡的一種或多種流體(例如鹽水或其他適當的流體)，和包含一個或多個治療劑的一種或多種流體。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大於約0.8ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為至少約0.9ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為至少約1.0ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為至少約1.5ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為至少約2.0ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大於約0.8至約3.0ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大於約0.8至約2.5ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大於約0.8至約2.0ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大於約0.8至約1.5ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為大於約0.8至約1.0ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約3.0ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約2.5ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約2.0ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約1.5ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約0.9至約1.0ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約1.0至約3.0ml。在一些實施方案中，包含有效量的載體的流體的體積為約1.0至約2.0ml。用於產生起始泡的流體可以是例如約0.1至約0.5ml。在一些實施方案中，系統中所有流體的總體積是約0.5至約3.0ml。在一些實施方案中，所述系統包含單一流體(例如包含有效量的載體的流體)。在一些實施方案中，所述系統包含2種流體。在一些實施方案中，所述系統包含3種流體。在一些實施方案中，所述系統包含4種或更多種流體。本發明的系統可進一步包裝入試劑盒中，其中所述試劑盒可進一步包含使用說明。在一些實施方案中，所述試劑盒進一步包含用於視網膜下遞送rAAV顆粒的組合物的裝置。在一些實施方案中，所述使用說明包括根據本申請所述方法之一的說明。在一些實施方案中，所述使用說明包括用於視網膜下遞送rAAV顆粒的說明，所述rAAV顆粒包含具有一個或多個胺基酸取代的衣殼，所述胺基酸取代改變、降低或去除所述rAAV顆粒與HSPG的結合。CNS遞送本發明提供用於將異源核酸遞送至個體的CNS的試劑盒，其包含含有rAAV顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和(b)rAAV載體，其包含異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。本文進一步提供用於治療個體中的CNS病症的試劑盒，其包含含有rAAV顆粒的組合物，其中所述rAAV顆粒包含(a)rAAV衣殼，其包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處，和(b)rAAV載體，其包含用於治療CNS病症的異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。所述試劑盒可包含本發明的任何rAAV顆粒或rAAV顆粒組合物。例如，所述試劑盒可包括具有rAAV衣殼的rAAV顆粒，所述rAAV衣殼包含含有一個或多個胺基酸取代的rAAV衣殼蛋白，所述胺基酸取代位於與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖相互作用的一個或多個位置處(例如降低所述rAAV顆粒與硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合的一個或多個胺基酸取代，如位於R484、R487、K527、K532、R585和/或R588處的取代，編號基於AAV2的VP1)；和rAAV載體，其包含所述異源核酸和至少一個AAV反向末端重複。在一些實施方案中，所述試劑盒進一步包含用於所述rAAV顆粒的組合物的CNS遞送的裝置。用於CNS遞送(例如用於遞送包含rAAV顆粒的組合物)的裝置是本領域已知的並可利用泵(例如滲透泵和/或輸液泵，如下所述)和注射裝置(例如導管、套管等)。任選地，成像技術可用於指導注射裝置和/或監測輸注物(例如包含rAAV顆粒的組合物)的遞送。CNS遞送可包括通過立體定位注射或通過對流增強遞送(CED)的遞送。可將所述注射裝置插入受試者中的CNS組織。本領域的技術人員能夠確定用於將注射裝置定位於靶CNS組織中的合適的坐標。在一些實施方案中，定位通過例如由受試者的腦的CT和/或MRI成像獲得的解剖圖譜來完成，以將注射裝置引導至靶CNS組織。在一些實施方案中，可進行遞送的術中磁共振成像(iMRI)和/或實時成像。在一些實施方案中，該裝置用於通過本發明的方法將rAAV顆粒施用於哺乳動物。本領域已知iMRI作為在手術過程中用於患者的基於MRI的成像的技術，這有助於證實成功的手術過程(例如將rAAV顆粒遞送至CNS)和降低損傷組織的其它部分的風險(對於進一步的描述，參見例如Fiandaca等，(2009)Neuroimage47Suppl.2:T27-35)。在一些實施方案中，追蹤劑(例如MRI造影增強劑)可與輸注物(例如包括rAAV顆粒的組合物)共遞送以提供輸注物的組織分布的實時監測。參見例如Fiandaca等,(2009)Neuroimage47Suppl.2:T27-35；U.S.PGPub2007/0259031；和美國專利No.7,922,999。使用追蹤劑可以通知遞送的停止。本領域已知的其他追蹤和成像手段技術也可用於追蹤輸注物分布。在一些實施方案中，rAAV顆粒可以通過標準的立體定位(術語「立體定向」在本文中可互換使用)注射使用本領域中已知的用於遞送rAAV顆粒的裝置和方法來施用。通常，這些方法可以使用注射裝置，用於將靶向遞送組織的區域轉換成一系列坐標(例如沿側(latero-lateral)，背腹(dorso-ventral)，和尾(rostro-caudal)軸的參數)的規劃系統，和根據計劃的坐標用於立體定位的裝置(例如立體定位裝置，任選地包括探頭和用於將頭固定在與坐標系對齊的位置的結構)。可用於MRI引導手術和/或立體定向注射的系統的非限制性例子是系統(MRIInterventions,Memphis,TN)。用於將rAAV顆粒遞送至CNS的另一個例示性和非限制性方法是對流增強遞送(CED)。如本文所用的，術語「對流增強遞送(CED)」可意指將治療劑通過輸注以這樣的速率遞送至CNS，在所述速率中靜水壓力導致對流分布。在一些實施方案中，輸注以大於0.5μL/分鐘的速率完成。然而，可使用任何合適的流速使得顱內壓保持在合適的水平從而不會傷害腦組織。例如，可通過使用合適的導管或套管(例如分步設計無回流(step-designreflux-free)套管)通過將套管的尖端定位於至少靠近靶CNS組織(例如將尖端插入CNS組織)來完成CED。定位套管後，將其連接至泵，所述泵將治療劑經由套管尖端遞送至靶CNS組織。可在輸注過程中保持來自套管尖端的壓力梯度。在一些實施方案中，可通過追蹤劑來監測輸注，所述追蹤劑是可由成像方法如術中MRI(iMRI)或另外的實時MRI技術來檢測的。CED是基於在組織間流體的靜水壓力得到克服的壓力下將輸注物(例如含有rAAV顆粒的組合物)泵送入CNS。這使得所述輸注物與CNS血管周(perivasculature)接觸，其被用作泵以將所述輸注物通過對流來分布並增強其遞送的程度(參見例如Hadaczek等，(2006)Hum.GeneTher.17:291-302；Bankiewicz等，(2000)Exp.Neurol.164:2-14；Sanftner,LM等，(2005)Exp.Neurol.164:2-14；Forsayeth,JR等，(2006)Mol.Ther.14(4):571-577；美國專利No.6,953,575；美國專利申請公開號2002/0141980；美國專利申請公開號2007/0259031；和WO2010/088560)。在一些實施方案中，用於對流增強遞送的裝置包含滲透泵和/或輸液泵。滲透泵和/或輸液泵是商業上可得到的(例如獲取自Corp.,HamiltonCorp.,ALZAInc.於PaloAlto,CA)。泵系統可以是可植入的。示例性的泵系統可見於例如，美國專利No.7,351,239；7,341,577；6,042,579；5,735,815；和4,692,147中。用於CED的示例性裝置，包括抗回流和階梯式套管，可見於WO99/61066和WO2006/042090中，其在此通過提述以其整體併入。在一些實施方案中，用於對流增強遞送的裝置包含抗回流套管(例如無回流分步設計套管)。抗回流套管的進一步描述和例示可見於例如Krauze等，MethodsEnzymol.465:349-362；U.S.PGPub2006/0135945；U.S.PGPub2007/0088295；和PCT/US08/64011中。在一些實施方案中，僅使用一個套管。在其他實施方案中，使用多於一個套管。在一些實施方案中，用於對流增強遞送的裝置包含與泵連接的抗回流套管，所述泵產生足夠的壓力以引起輸注物以受控的速率通過套管流至靶組織。可使用任何合適的流速使得顱內壓保持在合適的水平從而不會傷害腦組織。在一些實施方案中，輸注物的滲透通過使用促進劑而進一步擴大。促進劑能夠進一步促進輸注物遞送至靶組織(例如CNS靶組織)。促進劑的非限制性實例是低分子量肝素(參見例如美國專利No.7,922,999)。在一些實施方案中，所述試劑盒進一步包含用於所述rAAV顆粒的組合物的CNS遞送的說明書。本申請所述的試劑盒可進一步包括由商業和用戶立場出發所需的其他材料，包括其他緩衝液、稀釋劑、濾器、針頭、注射器和具有用於實施本文所述的任何方法的說明的包裝插頁。還可包括合適的包裝材料且其可以是本領域已知的任何包裝材料，例如小瓶(如密封小瓶)、容器、安瓿、瓶、罐、柔性包裝(例如密封的Mylar或塑料包)等。這些製造物品可進一步加以滅菌和/或密封。在一些實施方案中，所述試劑盒包含使用本文所述的任何方法和/或rAAV顆粒治療本文所述的CNS的病症的說明書。所述試劑盒可包括適於注射入個體的CNS的藥學上可接受的載體，和如下的一種或多種：緩衝液、稀釋劑、濾器、針頭、注射器和具有用於實施注射入個體的CNS的說明的包裝說明書。賦形劑在涉及視網膜下和/或CNS遞送的一些具體實施方案中，所述試劑盒進一步含有緩衝液和/或藥學上可接受的賦形劑。如本領域中熟知的，藥學上可接受的賦形劑是相對惰性的物質，其促進藥理學有效物質的施用並可作為液體溶液或懸浮物、作為乳劑或作為適於在使用前溶解或懸浮於液體中的固體形式來提供。例如，賦形劑可給予形式或稠度(consistency)或充當稀釋劑。合適的賦形劑包括但不限於穩定劑、潤溼劑或乳化劑、用於改變滲透壓的鹽、包囊劑、pH緩衝物質和緩衝液。所述賦形劑包括任何適於直接遞送至眼的藥劑，其可被施用而無過度的毒性。藥學上可接受的賦形劑包括但不限於山梨糖醇、任何多種TWEEN化合物，和液體如水、鹽水、甘油和乙醇。藥學上可接受的鹽可包含於其中，例如無機酸鹽如氫氯化物、氫溴化物、磷酸鹽、硫酸鹽等；和有機酸的鹽如乙酸鹽、丙酸鹽、丙二酸鹽、苯甲酸鹽等。藥學上可接受的賦形劑的全面討論可在REMINGTON』SPHARMACEUTICALSCIENCES(MackPub.Co.,N.J.1991)中獲得。在涉及視網膜下和/或CNS遞送的一些實施方案中，藥學上可接受的賦形劑可包括藥學上可接受的載劑。所述藥學上可接受的載劑可以是滅菌的液體，如水和油，包括石油、動物、植物或合成來源的那些，如花生油、大豆油、礦物油等。鹽水溶液和含水右旋糖、聚乙二醇(PEG)和甘油溶液也可用作液體載體，特別是用於可注射溶液。還可使用額外的成分，例如防腐劑、緩衝液、等滲劑、抗氧化劑和穩定劑、非離子型潤溼或澄清劑，增粘劑等。本文所述的試劑盒可以單個單位劑量或多劑量形式包裝。所述試劑盒的內容物通常配製為無菌和基本上等滲的溶液。實施例通過參考如下實施例可更加充分地理解本發明。然而，它們不應被解釋為限制本發明的範圍。可理解的是本申請所述的實施例和具體實施方案僅出於說明目的，而且在其啟示下的多種修飾或變化會被本領域的技術人員認識到並包括在本申請的精神和範圍以及所附權利要求的範圍之內。實施例1：HSPG結合所需的精氨酸殘基的突變在培養的細胞系中降低AAV2-介導的轉導AAV2基因治療載體目前用於眼適應症的臨床試驗。這些載體可經玻璃體內施用途徑遞送，其在小鼠和非人靈長類中導致視網膜神經節細胞和Müller細胞的轉導，或是經視網膜下施用途徑遞送，其靶向視網膜色素上皮細胞和感光細胞。不同血清型的AAV使用不同的細胞表面受體和共受體用於感染。已知AAV2的初級細胞表面受體是硫酸乙醯肝素蛋白聚糖(HSPG)(Summerford,C.和Samulski,R.J.(1998)J.Virol.72(2):1438-45)。理解AAV2轉導視網膜的機制對於進一步開發AAV基因治療載體是重要的。為了研究HSPG結合在視網膜的AAV2轉導中的作用，用衣殼蛋白生成了AAV2載體，所述衣殼蛋白在已知用於HSPG結合所需的精氨酸殘基中攜帶突變(AAV2HBKO)。這些載體導致與野生型AAV2相比對293和HeLa細胞在培養物中顯著降低的轉導。令人驚訝地，視網膜下遞送至小鼠眼部的AAV2HBKO載體導致轉導與野生型AAV2相比的2-log增加。然而，當玻璃體內遞送AAV2HBKO載體時，沒有明顯的轉導。這些結果指示在AAV2顆粒的視網膜下注射後，相對於玻璃體內注射，HSPG結合所需的胺基酸中的突變對於轉導效率具有相反的作用。方法構建AAV2精氨酸突變體質粒使用QuikchangeLightning多重定點誘變試劑盒(AgilentTechnologies)將所述AAV2rep/cap質粒pIM45BD進行突變。設計PCR突變引物以引入精氨酸585和588至丙氨酸的變化。通過測序證實陽性突變體。生成rAAV載體使用pIM45BD或pIM45BDR585A/R588Arep/cap質粒和pAdHelper通過293細胞的三重轉染產生表達增強的綠色螢光蛋白(EGFP)或可溶的VEGF受體雜交體(sFLT02)的重組AAV載體。轉基因處於雞β-肌動蛋白(CBA)或人視紫紅激酶啟動子(RK)的控制下。體外轉導測定法將293或HeLa細胞鋪板入24孔板(1-2x105個細胞/孔)。鋪板後24小時，以1x103vg/細胞(+)Ad5ts149感染細胞。感染後48小時測量轉導效率，所述測量通過EGFP螢光或通過ELISA以定量培養基中的sFLT02(通過R&DSystems的人可溶性VEGFR1ELISA)來進行。動物購買由JacksonLaboratories(BarHarbor,ME)獲得的成年C57BL/6小鼠並維持在Genzyme的動物飼養室(vivarium)中。在研究期間使所述動物自由接觸食物和水。所有步驟在由動物保護和利用委員會(InstitutionalAnimalCareandUseCommittee)批准的規程下進行。玻璃體內注射使用經由鼻錐(nosecone)遞送至動物的運載於800mL/分鐘的氧氣中的3.5％異氟醚來誘導並保持麻木(torpor)。使用裝配有33號斜式針頭(beveledneedle)的Hamilton注射器(HamiltonCo.,Reno,NV)將一微升的測試物品注入玻璃狀液(vitreoushumor)。引導針頭在(角膜)緣(limbus)的大約2mm下通過鞏膜並小心地前進至玻璃體腔以避免接觸晶狀體。將測試物品在1-2秒的時間遞送。注射後，將針頭保持在原位約五秒然後抽出。允許動物從麻醉恢復然後回到它的籠。視網膜下注射局部施用託吡卡胺(Tropicamide)(Alcon,FortWorth,TX)誘導瞳孔散大和睫狀肌麻痺。使用經鼻錐遞送至動物的運載於800mL/分鐘的氧氣中的3.5％異氟醚來誘導並保持麻木。使用環頭鉗(ringtippedforceps)(WorldPrecisionInstruments,Sarasota,FL)固定眼，且使用30號針頭將試點切口置於(角膜)緣下大約2mm的鞏膜上。通過切口導入33號鈍尖針頭並向後進針直到尖端穿透後視網膜神經上皮層(posteriorneurosensoryretina)。將一微升的測試物品在1秒遞送。將針頭保持在原位約五秒然後抽出。允許動物從麻醉恢復然後回到它的籠。EGFP的組織學使用落射螢光顯微鏡(epifluorescencemicroscope)在福馬林固定的石蠟包埋處理的眼上觀察到原始EGFP信號。結果如圖1中所描繪，已顯示五個衣殼殘基對於AAV2與HSPG的結合是關鍵的。構建AAV2突變體，其攜帶這些殘基中的兩個胺基酸取代：R585A和R588A(編號基於VP1胺基酸序列)。此突變體稱為HBKO，測試其在培養物中轉導細胞的能力。使人細胞系在培養物中生長並用野生型或HBKO突變體AAV2顆粒轉導。為了測量轉導效率，將兩種類型的AAV2顆粒的病毒基因組進行修飾以包含使用遍在CBA啟動子的轉基因從而驅動可溶性Flt(人VEGF受體1)表達。轉導後48小時，使用基於ELISA的免疫測定法定量產生的Flt的量來測量轉導效率。圖2證明HBKO突變體顯示出在培養物中轉導人293細胞的能力大大降低。使用相等數目的AAV2顆粒和293細胞，所述HBKO突變體相比於野生型顯示轉導效率降低99.6％。為了在多種人細胞系中測量此效果，如上所述轉導了293和Hela細胞。對於這些測定法，修飾所述載體以從CBA啟動子表達EGFP而不是Flt。圖3顯示野生型AAV2能夠轉導兩種細胞系，如通過EGFP螢光所測量的。相比之下，HBKO突變體在兩種細胞系的轉導中具有引人注目的降低。這些結果證實HBKO突變體在培養物中轉導人胚腎和宮頸癌細胞系的能力急劇降低。實施例2：玻璃體內注射後對比視網膜下注射後，用於HSPG結合所需的精氨酸殘基的突變對於的AAV2-介導的轉導具有相反的作用在小鼠中測試了玻璃體內和視網膜下注射後HBKO突變體AAV2顆粒轉導眼細胞的能力。圖4A和4B比較了玻璃體內或視網膜下注射後野生型和HBKOAAV2顆粒的轉導效率。對於這些實驗，通過測量用攜帶轉基因的AAV2顆粒轉導後可溶性Flt(sFLT)的表達而測定轉導效率，所述轉基因使用遍在CBA啟動子以驅動Flt的表達。使用玻璃體內注射，HBKO突變體顯示出轉導細胞的能力大大降低(圖4A)。令人驚訝地，HBKO突變體顯示了在視網膜下注射後轉導增強(圖4B)。當注射的AAV2載體基因組的量變化10倍(108和109vg，如標記的)時，此增加可始終觀察到。這些結果與在培養的細胞系中和在玻璃體內注射後觀察到的那些形成對比。這些數據指向HSPG結合能力在介導通過不同類型的眼內注射轉導不同眼細胞類型和視網膜層中的重要性。為了使視網膜細胞的轉導可視化，使用攜帶由普遍CBA啟動子表達EGFP的轉基因的野生型或HBKO突變體AAV2顆粒。如圖5中所示，野生型AAV2顆粒在玻璃體內注射後能夠轉導視網膜，如通過GFP螢光所證明的那樣。然而，AAV2HBKO突變體顆粒在玻璃體內注射後未顯示出可檢測的GFP螢光。這些結果與圖4A中存在的相一致。圖6定量了視網膜下注射後野生型(AAV2CBA)和HBKO突變體(AAV2CBAHBKO)AAV2顆粒的轉導效率。為了測量轉導，兩種AAV2顆粒具有載體基因組，其包含使用普遍CBA啟動子表達Flt的轉基因。將兩種量的載體基因組用於注射，如圖6中指示。這些結果證實圖4B中所示的觀察結果，並證明令人驚訝的發現，即突變用於HSPG結合所需的殘基增加了在視網膜下注射後AAV2轉導細胞的能力。為了使轉導可視化，使用攜帶由普遍CBA啟動子表達EGFP的轉基因的野生型或HBKO突變體AAV2顆粒。如圖7中所示，視網膜中的GFP螢光在用HBKO突變體AAV2顆粒轉導後與野生型相比得到增強。因為已知視網膜下注射靶向具有感光細胞的細胞層，研究了HBKO突變體AAV2顆粒轉導感光細胞的能力。在眼中，已知視紫紅激酶(RK)啟動子特異性地驅動感光細胞如視杆細胞和視錐細胞中的表達(Khani,S.C.等Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.48(9):3954-61)。因此，生成了具有載體基因組的野生型和HBKO突變體AAV2顆粒，所述基因組攜帶使用RK啟動子驅動Flt的表達的轉基因。如圖8所示，HBKO突變體AAV2顆粒在視網膜下注射後與野生型相比顯示出感光細胞的轉導的增強。此觀察結果在用10倍不同量的載體基因組(108和109vg，如標記的)注射後始終觀察到。這些結果證明了令人驚訝的結果，即突變用於HSPG結合所需的殘基增強了視網膜下注射後AAV2顆粒轉導視網膜感光細胞的能力。這些殘基的突變代表了增強用於AAV2-介導的基因治療的感光細胞轉導的潛在方式。AAV是單鏈、無包膜的DNA病毒，其是細小病毒家族的成員。AAV的不同血清型包括AAV1、AAV2、AAV4、AAV5、AAV6等顯示出不同的組織分布概貌。這些AAV衣殼的不同的組織向性使基於AAV的載體用於肝、骨骼肌、腦、視網膜、心和脊髓的體外和體內的普遍的基因轉移應用成為可能(Wu,Z.，等，(2006)MolecularTherapy,14:316-327)。病毒對宿主細胞的附接需要病毒衣殼與細胞受體分子的特異性相互作用。先前已顯示AAV2衣殼使用硫酸乙醯肝素蛋白聚糖(HSPG)、V5整聯蛋白和人成纖維細胞生長因子受體1作為初級和次級受體以介導基於AAV2的基因治療載體的細胞進入(Summerford,C.和R.J.Samulski(1998)J.Virology,72:1438-1445；Summerford,C.等，(1999)Nat.Medicine,5:78-82；Qing,K.等，(1999)Nat.Medicine,5:71-77)。AAV2衣殼蛋白的突變分析已顯示一組鹼性胺基酸，即精氨酸R484、R487、R585、R588和賴氨酸K532有助於AAV2載體的乙醯肝素結合和對細胞的體外轉導和體內肝轉導。這些胺基酸殘基中的突變導致基於AAV2的載體通過靜脈內施用途徑的肝轉導大大降低和心及骨骼肌基因轉移的增加(Kern,A.等，(2003)J.Virology,77:11072-11081；Muller,O.J.等，(2006)CardiovascularResearch,70:70-78)。研究了這些鹼性胺基酸對於AAV2載體通過載體施用的玻璃體內途徑和視網膜下途徑兩者在視網膜中的轉導的作用。R585和R588的突變顯著地消除了HEK293細胞和Hela細胞的體外轉導(圖2和3)。DalkaraD等，((2009)MolecularTherapy,17:2096-2102)表明玻璃體內遞送的AAV2載體由於與視網膜的內界膜中富含的硫酸乙醯肝素蛋白聚糖的結合而未能穿透入外視網膜。如本實施例所示，在玻璃體內遞送後，R585/R588突變的載體與野生型AAV2載體相比轉導內視網膜的能力較差(圖4A和5)，這表明與HSPG的結合對於視網膜的玻璃體內轉導是重要的。視網膜下遞送基於AAV2的載體主要導致視網膜色素上皮(RPE)轉導和一些感光細胞轉導。令人驚訝地，發現R585/R588突變的載體轉導外視網膜為野生型AAV2載體的至少10倍(圖4B、6和7)。使用感光細胞特異性視紫紅激酶啟動子(RK)，感光細胞中的轉基因表達以AAV2R585/R588突變體載體顯著增加(圖8)。這些基於AAV2衣殼上的鹼性胺基酸殘基中的突變的載體會高度有益於外視網膜特別是感光細胞的轉導，用於治療多種視網膜病症。實施例3：紋狀體內AAV2HBKO載體遞送後普遍的GFP表達通過引入至AAV2衣殼的定點突變，生成了不能結合肝素的AAV2HBKO突變體載體。使用單一紋狀體內注射在野生型小鼠和HD小鼠模型(YAC128)二者中評價了此HBKO載體的轉導概貌。方法AAV2精氨酸突變體質粒的構建使用QuikchangeLightning多重定點突變試劑盒(AgilentTechnologies)突變了AAV2rep/cap質粒pIM45BD。設計PCR突變引物以在殘基585和588引入精氨酸至丙氨酸的變化。通過測序證實了陽性突變體。AAV載體的產生通過人胚腎癌瘤293細胞(HEK-293)的三重轉染(使用磷酸鈣)產生重組AAV載體，如先前所述(Xiao等(1998)J.Virol.72:2224-2232)。簡言之，使用了含有來自血清型2的rep基因和來自血清型1或2的衣殼基因的質粒連同輔助腺病毒質粒(Stratagene,PaloAlto,CA)。轉基因處於雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子的控制下。轉染後72小時收集病毒並如先前所述進行柱純化(Xiao等(1998)J.Virol.72:2224-2232)。動物使用由Genzyme(建新)，賽諾菲公司(SanofiCompany)(衛生和人類服務部(DepartmentofHealthandHumanServices),NIHPublication86-23)的動物保護和利用委員會(InstitutionalAnimalCareandUseCommittee)批准的規程進行所有步驟。使用的小鼠包括YAC128小鼠(在純FVB/NJ背景上攜帶全長人突變體HTT轉基因及128CAG重複的酵母人工染色體)和野生型FVB/NJ同窩小鼠(Slow等(2003)Hum.Mol.Genet.12:1555-1567；VanRaamsdonk等(2005)Hum.Mol.Genet.14:3823-3835)。YAC128小鼠和FVB/NJ同窩小鼠二者從位於CharlesRiverLaboratories的Genzyme群落獲得。小鼠維持在12小時光/暗循環，食物和水可任取(adlibitum)。所述行為測試在動物的光循環期間(在上午8時-下午4時的時間)進行。所有實驗的N-值示於下表2和3中。表2.用表達GFP的AAV顆粒處理的野生型小鼠(實驗1)處理n-值(WT小鼠)劑量(DRPs)AAV2HBKO-CBA-GFP66x109AAV2-CBA-GFP66x109表3.用表達HttmiRNA和GFP的AAV顆粒處理的YAC128小鼠(實驗2)處理n-值(YAC128小鼠)劑量(DRPs)AAV2HBKO-CBA-miRNA-Htt-GFP86x109AAV1-CBA-miRNA-Htt-GFP81.5x1010未處理的8N/A手術步驟用3％異氟醚將動物麻醉並置於立體定位架。顱內注射如先前所述進行(Stanek等(2014)Hum.GeneTher.25:461-474))。簡言之，使用10μlHamilton注射器以0.5μl/分鐘的速率將3μl的重組病毒載體注入紋狀體(AP,+0.50；ML,±2.00；DV,-2.5從前囟和硬腦膜；門牙棒(incisorbar),0.0)。完成輸注後將針在原處保留1分鐘。手術前一小時和手術後24小時，對該小鼠經皮下施用酮洛芬(ketoprofen)(5mg/kg)用於止痛。動物灌注和組織收集用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)通過心臟灌注小鼠以除去所有血液。對於實驗1，將腦沿冠狀面切割，後固定於4％多聚甲醛，然後是30％蔗糖。使用低溫恆溫器切割20-μm冠狀切片。對於實驗2，沿中線矢狀切割腦，並將左半球進行後固定於4％多聚甲醛然後是30％蔗糖，然後使用低溫恆溫器切片成20-μm切片。使用小鼠腦模具(matrix)(HarvardApparatus,Holliston,MA)將右半球(用於生化測定法)沿冠狀軸線切割，並使用3mm的活檢穿孔器解剖紋狀體和皮質區。然後將腦組織在液氮中速凍並儲存在-80℃直至使用。定量實時PCR(TaqMan)通過定量實時RT-PCR測量RNA水平。紋狀體穿孔物用於所有RT-PCR分析。使用QIAGENRNeasyMini試劑盒提取總RNA，然後根據製造商的說明使用RT-PCRMasterMix試劑盒(AppliedBiosystems)反轉錄和擴增。進行TaqMan定量RT-PCR反應並在7500實時PCR系統(AppliedBiosystems)上進行分析。HTTmRNA的表達水平標準化至次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶1(HPRT1)mRNA水平。使用小鼠腦cDNA的5倍連續稀釋物生成標準曲線。每個樣品一式兩份運行。通過使用標準曲線或ΔΔCT方法並標準化至HPRT1mRNA水平來確定相對基因表達。對於人HTT的檢測，使用如下引物：5』CTCCGTCCGGTAGACATGCT3』和5』CCATTTTGAGGGTTCTGATTTCC3』。對於小鼠HTT的檢測，使用如下引物：5』TGCTACACCTGACAGCGAGTCT3』和5』ATCCCTTGCGGATCCTATCA3』。Western印跡通過Western印跡分析測量蛋白質水平。皮質穿孔物用於所有Western印跡分析。將組織(以T-Per裂解緩衝液(Pierce)中的50mg/ml的終濃度並含有完全蛋白酶抑制劑混合物(Roche))勻漿。將勻漿物通過在4℃以10,000×g離心6分鐘澄清。通過使用BSA測定法(Pierce)測量蛋白質濃度。將二十至三十微克的勻漿物在3-8％NovexTris-乙酸凝膠上解析和然後轉移至硝酸纖維素膜。將膜用小鼠抗亨廷頓蛋白單克隆抗體(Mab2166；1:2,000稀釋，Millipore)和兔多克隆抗β-微管蛋白抗體(1:750稀釋，SantaCruzBiotechnology)探測。然後將膜與紅外第二抗體(1:20,000稀釋，Rockland)溫育，並使用Odyssey(LI-CORBiosciences)通過定量螢光使所述蛋白質可視化。為了控制加載量差異，將Htt蛋白質標準化至β微管蛋白並表示為未處理的或鹽水處理的動物的百分比。分子量標記物用於驗證蛋白質的身份。免疫組化將冷凍腦切片用兔抗GFAP抗體染色以染色星形膠質細胞(1:2,500；DAKO,Glostrup,Germany)，或用抗Iba1抗體染色以使小膠質細胞(1:500；WAKOChemicalsUSA,Richmond,VA)可視化。所用的二級抗體是綴合有FITC或Cy3的驢抗物種特異性抗體。使用NikonEclipseE800螢光顯微鏡(Nikon,Melville,NY)使切片可視化。統計學將平均值用於統計學分析。數據表示為平均值±SEM。對於使用兩組的研究，用Student’st-檢驗進行統計學比較。對於超過兩個組的比較，使用單因素方差分析(one-wayANOVA)，然後是Tukey多重比較事後檢驗(PrismGraphPad)。將p<0.05視為統計學上顯著的差異。結果如上所述，在實驗1中將AAV2-eGFP和AAV2HBKO-GFP載體注入野生型小鼠(表2)。注射後30天處死所有動物。螢光顯微術揭示AAV2和AAV2HBKO載體二者驅動GFP轉基因在轉導的神經元中的表達(圖9A和9B)。GFP表達受限於AAV2的注射路徑(track)，其具有最小的超過注射部位的擴展(圖9B)。然而，當與傳統AAV2相比時，AAV2HBKO驅動更穩固而廣泛的GFP表達，具有在遠超注射位點觀察到的表達(圖9A)。這些結果證明了使用AAV2HBKO載體遞送至CNS的轉基因的穩固而普遍的表達。實施例4：比較在紋狀體內注射入YAC128小鼠腦後AAV2HBKO-和AAV1-介導的GFP表達如上所述，在實驗2中將AAV2HBKO和AAV1血清型載體注入YAC128小鼠(表3)。這些載體驅動靶向人HTT和GFP報告蛋白的人工miRNA的表達。AAV1和AAV2HBKO載體兩者在注射入紋狀體後30天顯示出穩固的GFP分布(圖10A和10B)。然而，GFP表達的圖樣在兩種載體血清型之間似乎明顯不同。GFP的AAV1表達(圖10A)比AAV2HBKOGFP表達(圖10B)更不調和(patchy)且較不均一。載體轉導在AAV2HBKO腦中看起來僅是神經元的，相比於AAV1血清型其轉導神經元和神經膠質細胞(主要是星形膠質細胞)兩者。這些結果證明當與傳統AAV1相比時AAV2HBKO顯示出非常不同的表達和轉導概貌。實施例5：AAV2HBKO-miRNA-Htt注射入YAC128小鼠導致HTTmRNA的減少接下來，評估了AAV1和AAV2HBKO載體血清型在YAC128小鼠紋狀體中表達使HTT表達沉默的miRNA的能力。成年YAC128小鼠接受了雙側紋狀體內注射AAV2/1-miRNA-Htt或AAV2HBKO-miRNA-Htt，並在處理後30天分析腦。在用AAV2/1-miRNA-Htt和AAV2HBKO-miRNA-Htt注射的小鼠中突變體人HTTmRNA的紋狀體水平與未處理的對照相比顯著降低(圖11A)。皮質腦穿孔物的Western印跡分析在兩個治療組中都顯示出趨向Htt降低的趨勢；然而，未處理的對照樣品中的變異性使得數據未到達統計學顯著性(圖11B)。這些結果證明了使用AAV1和AAV2HBKO載體通過RNAi進行基因敲低的功效。實施例6：AAV2HBKO-miRNAHtt注射入YAC128小鼠不引起神經性炎症為確定AAV的注射是否帶來神經性炎症，在處理後30天檢查了神經炎性標誌物膠質纖維酸性蛋白質(GFAP，星形膠質細胞的標記物)和Iba1(小膠質細胞的標誌物)的水平。在AAV2HKO處理後與未處理的腦相比，未觀察到Iba1水平的顯著增加(參考圖12A和12B)。然而AAV2/1處理確實導致Iba1水平在注射位點的增加(圖12C)，這之前已觀察到。在注射後30天任何處理的腦中與未處理的對照相比未觀察到GFAP水平的顯著增加(圖13A-13C)。這些結果說明，當與AAV1血清型相比，AAV2HBKO能夠驅動定向於人HTT的miRNA的表達並在缺乏小膠質細胞活化的情況下產生HTT減少(reduction)。結論當前AAV載體血清型在單一位點施用後顯示腦中有限的分布(例如，Christine,C.W.等(2009)Neurology73:1662-1669；Mandel,R.J.(2010)Curr.Opin.Mol.Ther.12:240-247)。如在本文中詳細討論的，發明人已發現，具有與細胞表面的硫酸乙醯肝素蛋白聚糖(HSPG)的降低的結合的AAV載體的施用增強了CNS中的AAV轉導。這些結果證明具有修飾的HSPG結合的AAV用於CNS基因治療的用途，其中廣泛的載體分布是期望的。而且，發明人還發現HSPG結合降低的AAV2載體呈現理想的安全概貌(因為它們僅靶向神經元)，同時實現普遍而穩固的轉導效率。因此所述載體可用於需要來自(腦)實質內遞送的普遍的神經元轉導的CNS適應症。實施例7：AAVrh8R和AAVrh8R突變體載體的體外和視網膜下轉導方法AAVrh8R精氨酸修飾的質粒的構建使用QuikchangeLightning多重定點誘變試劑盒(AgilentTechnologies)突變了AAVrh8Rrep/cap質粒。設計PCR誘變引物以引入丙氨酸586至精氨酸(AAVrh8R-A586R)或精氨酸533至丙氨酸(AAVrh8R-R533A)的變化。通過測序證實了陽性突變體。rAAV載體的生成使用pAAVrh8R、pAAVrh8R-A586R或pAAVrh8R-R533Arep/cap質粒和pAdHelper通過293細胞的三重轉染產生了表達增強的綠色螢光蛋白(EGFP)或可溶的VEGF受體雜交體(sFLT02)的重組AAV載體。轉基因處於雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子的控制下。體外轉導測定法將HeLa、HeLaRC32或NS1細胞鋪板入24孔板(1-2x105個細胞/孔)。鋪板後24小時，以1x104vg/細胞-1x105vg/細胞(+)Ad5ts149感染細胞。感染後48小時通過EGFP螢光或通過ELISA以定量培養基中的sFLT02(R&DSystems的人可溶性VEGFR1ELISA)來測量轉導效率。動物購買由JacksonLaboratories(BarHarbor,ME)獲得的成年C57BL/6小鼠並維持在動物飼養室中。在研究期間使所述動物自由接觸食物和水。所有步驟在由動物保護和利用委員會批准的規程下進行。視網膜下注射局部施用託吡卡胺(Alcon,FortWorth,TX)誘導瞳孔散大和睫狀肌麻痺。使用經由鼻錐遞送至動物的800mL/分鐘的氧氣中運載的3.5％異氟醚誘導並保持麻木。使用環頭鉗(WorldPrecisionInstruments,Sarasota,FL)固定眼，且使用30號針頭將試點切口置於(角膜)緣下大約2mm的鞏膜上。通過切口導入33號鈍尖針頭並向後進針直到尖端穿透後視網膜神經上皮層。將一微升的測試物品在1秒遞送。將針頭保持在原位約五秒然後抽出。允許動物從麻醉恢復然後回到它的籠。視網膜裂解物中sFLT02的定量通過R&DSystems使用人可溶性VEGFR1ELISA試劑盒測量小鼠視網膜裂解物中的sFLT02。結果為了研究衣殼表面精氨酸殘基在視網膜的AAVrh8轉導中的作用，生成了具有衣殼蛋白的AAVrh8載體，所述衣殼蛋白攜帶有對應於涉及HSPG結合的AAV2精氨酸的殘基中的突變。圖14比較了對於AAV2與HSPG的結合關鍵的五個衣殼殘基與AAVrh8R中的對應殘基。如圖15中所示，構建了兩個AAVrh8R突變體，其每一個攜帶這些殘基中的胺基酸取代：A586R和R533A(編號基於VP1胺基酸序列)。為了評估將精氨酸殘基添加至AAVrh8R衣殼對於體外轉導的作用，用AAVrh8R-sFLT02或在位置A586添加有精氨酸(AAVrh8RA586R)的修飾的AAVrh8R-A586R-sFLT02載體來感染HeLa細胞，二者均以1x104DRP/細胞進行。感染後48小時，通過測量細胞培養基中的sFLT02而評估轉導效率。AAVrh8R-A586R呈現出與未修飾的AAVrh8R相比數倍高的轉導(圖16A)。為了評價去除衣殼精氨酸對體外轉導的作用，以AAVrh8R或AAVrh8R-R533A載體(均以1x104DRP/細胞)感染HeLaRC32細胞。當與AAVrh8R相比時，AAVrh8R-R533A具有顯著降低的轉導(圖16B)。使用EGFP表達作為轉導效率的量度進行了類似的實驗。AAVrh8R-A586R-EGFP與AAVrh8R相比呈現基本上改進的NS1細胞的轉導(將圖17B與圖17A相比)。反之，AAVrh8R-R533A-EGFP載體與AAVrh8R相比對於HeLa細胞具有降低的轉導(將圖17D與圖17C相比)。這些實驗共同表明將精氨酸添加至AAVrh8R衣殼改進AAVrh8R體外轉導，而從AAVrh8R衣殼去除精氨酸則削弱體外轉導。這些結果證明AAVrh8R的體外轉導被衣殼上的精氨酸殘基強烈地影響。為了確定精氨酸對於AAVrh8R視網膜下轉導的作用，以1x108DRP的由CBA啟動子表達sFLT02的AAVrh8R、AAVrh8R-A586R或AAVrh8R-R533A注射C57Bl6小鼠。載體施用後30天將小鼠處死，並在視網膜裂解物中測量sFLT02。與AAVrh8R相比，小鼠視網膜的AAVrh8R-A586R轉導大幅降低，而且實際上與AAV2相當，其在此相同的位置R585也具有精氨酸(圖18A)。與AAVrh8R相比，小鼠視網膜的AAVrh8R-R533A轉導得到改進(圖18B)。這些數據凸顯衣殼精氨酸對於AAVrh8R的視網膜下轉導的影響並表明通過從AAVrh8R衣殼去除精氨酸改進了視網膜下轉導。這些結果證明AAVrh8R的視網膜下轉導被衣殼上的精氨酸殘基強烈的影響。實施例8：通過在位置586處添加精氨酸改進了AAVrh8R的玻璃體內轉導方法玻璃體內注射使用經鼻錐遞送至動物的運載於800mL/分鐘的氧氣中的3.5％異氟醚來誘導並保持麻木。使用裝配有33號斜式針頭的Hamilton注射器(HamiltonCo.,Reno,NV)將一微升的測試物品注入玻璃狀液。引導針頭在(角膜)緣(limbus)下大約2mm通過鞏膜並小心地前進至玻璃體腔以避免接觸晶狀體。將測試物品在1-2秒的時間遞送。注射後，將針頭保持在原位約五秒然後抽出。允許動物從麻醉恢復然後回到它的籠。視網膜裂解物中sFLT02的定量使用R&DSystems的人可溶性VEGFR1ELISA試劑盒測量了小鼠視網膜裂解物中的sFLT02。結果為了評價將精氨酸添加至AAV衣殼對於玻璃體內轉導的作用，用1x109DRP的AAV2、AAVrh8R或AAVrh8R-A586R注射C57Bl6小鼠，各自攜帶由CBA啟動子表達sFLT02的構建體。載體施用30天後將小鼠處死，並在視網膜裂解物中測量sFLT02。與AAVrh8R相比，小鼠視網膜的AAVrh8R-A586R轉導得到改進，而且實際上與AAV2相當，其在此相同的位置R585也具有精氨酸(圖19)。此數據指示可通過將精氨酸添加至AAV衣殼而改進視網膜的玻璃體內轉導。基於這些結果和AAV衣殼間的序列同源性(圖20)，由攜帶AAV1、AAV6、AAV8、AAV9和AAVrh10衣殼的AAV顆粒的視網膜的玻璃體內轉導可類似地改善視網膜轉導。序列除另行說明外，所有多肽序列以N-末端至C-末端呈示。除另行說明外，所有核酸序列以5』至3』呈示。AAV2VP1胺基酸序列MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:1)AAV2VP1HBKO胺基酸序列MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQAGNAQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:2)AAV2VP2胺基酸序列MAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:3)AAV2VP2HBKO胺基酸序列MAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQAGNAQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:4)AAV2VP3胺基酸序列MATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL(SEQIDNO:5)AAV2VP3HBKO胺基酸序列MATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEY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