博落回總生物鹼在血吸蟲病防治上的應用的製作方法
2023-12-09 22:29:36 5
專利名稱：博落回總生物鹼在血吸蟲病防治上的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及從博落回植物中得到的博落回總生物鹼及其鹽應用於殺滅釘螺、螺卵、日本血吸蟲尾蚴及血吸蟲病防治。
背景技術：
血吸蟲病(Schisosomiasis)是由血吸蟲的成蟲寄生於人體所引起的地方性疾病，主要流行於亞、非、拉美的73個國家，患病人數約2億左右。人類血吸蟲分為日本血吸蟲(S·japonicum)、埃及血吸蟲(S·haematobium)、曼氏血吸蟲(S·mansoni)與間插血吸蟲(S·intetcalatum)四種。日本血吸蟲病分布於中國、日本、菲律賓、印尼、泰國等亞洲地區和國家；曼氏血吸蟲病分布於亞洲、中東、印度等地區；間插血吸蟲分布於中非西部、薩伊、喀麥隆等國家。我國流行的只是日本血吸蟲(簡稱血吸蟲病)。血吸蟲病是危害人民身體健康最重要的寄生蟲病。
日本血吸蟲寄生在人或宿主動物的血管內，所產蟲卵由糞便排出，在水中孵化出毛蚴，感染中間宿主釘螺，在釘螺體內發育成熟後大量逸放出尾蚴，尾蚴鑽入人或動物宿主，又發育成為成蟲，交配產卵，引起病害。其中，可感染並傳播日本血吸蟲的動物宿主有牛、豬、羊等40多種哺乳動物。日本血吸蟲是由日本學者於1904年首先鑑定，並命名為日本血吸蟲。
血吸蟲病致病機理血吸蟲病是一種免疫病。血吸蟲尾蚴入侵人體後在人體內發育為成蟲，寄生在人體的門靜脈及腸繫膜靜脈內，以人的血液等為營養，供其生長、發育和繁殖。大量營養物質的流失會影響人體的生長發育，嚴重的導致侏儒症。成蟲交配後產卵，一部分蟲卵逆流進入腸壁。卵內毛蚴分泌可溶性蟲卵抗原，致敏T淋巴細胞。蟲卵的反覆沉積和寄主機體免疫力的增強，使腸壁組織的破壞與增生同時存在，造成纖維結締組織增生，導致腸壁增厚，形成蟲卵肉芽腫甚至癌腫。另一部分蟲卵隨血液流到肝臟，致使嗜酸性白細胞增多，引起肝膿瘍，進而破壞肝臟，嚴重的會出現肝腹水、肝硬化，進而導致患者死亡。
近年來，我國血吸蟲病流行範圍有所擴大，血防工作形勢比較嚴峻。突出表現在血吸蟲病感染人數增多，局部地區出現急性感染暴發疫情；部分地區疫情死灰復燃，疫區範圍明顯擴大並向城市蔓延；釘螺大面積擴散，人畜感染的危險增加。近幾年報告病人數呈上升趨勢。其中，急性感染人數明顯增加，2002年比2001年增加59％；2003年又比2002年增加22％，並發生了30餘起急性血吸蟲病暴發疫情。
博落回(Macleaya cordata(Willd.)R.Br.)，又名號筒草、號筒杆、泡桐杆、勃勒回、山大筒、黃薄荷、黃婆娘、三錢三、野麻子、吹火筒，是罌粟科博落回屬多年生高大草本，最早記載博落回的本草文獻為《本草拾遺》。現統一命名為博落回，廣泛用於醫藥、生物農藥、獸醫獸藥、精細化工產品原料。
博落回為多年生高大草本，高1～2.5m，全體帶有白粉，折斷後有黃汁流出。根粗大，橘紅色。莖圓柱形，直立，中空，綠色，有時帶紅紫色。單葉互生，闊卵形，裂片有不規則波狀齒，上面綠色光滑，下面白色，具密細毛。花白色，蒴果下垂，倒卵狀長橢圓形，扁平，紅色。種子4～6粒。花期6～7月，果期8～11月。生於山坡，丘陵或低山草地，林邊，路旁等處。廣乏分布長江流域中、下遊各省，植物資源豐富。
博落回總生物鹼中主要含有血根鹼(Sanguinarine)、白屈菜紅鹼(Chelerythrine)、博落回鹼(Bocconine)、博落回寧鹼(Bocconoline)、甲氧基白屈菜紅鹼(Chelilutine)、二氫血根鹼(dihydrosanguinarine)、二氫白屈菜紅鹼(Dihydrochelerythrine)等苯並菲啶型生物鹼及原阿片鹼(Protopine)、α-別隱品鹼(α-Allocryptopine)、β-別隱品鹼(β-Allocryptopine)等原託品型生物鹼和Norsanguinarine、Oxysanguinarine、Homochelidonine、Coptisine、Berberine、Chelidonine、Chelirubine等原生物鹼目前，已有US4517172、US4590061、US4683133等美國專利涉及將血根提取物、博落回提取物等用於牙菌斑顯示劑及牙周病等口腔疾病的治療。另外，美國專利US4145412及US4689216則描述了含血根提取物、博落回提取物或其有效成分應用於牙膏的情況。日本專利JP62185026描述了博落回提取物及其類似物用於治療皮膚瘙癢的方法；JP62093237則描述了博落回用於治療髮癬菌病(Trichophytosis)的方法；JP63141916、JP63072617則是將博落回應用於頭髮的滋養方面。國內目前也有一些使用博落回或其提取物的專利，在醫藥方面的應用主要涉及以下一些方向。CN1470513和CN1457780公開了將博落回應用於抗癌方向的方法；CN1425460及CN1199640涉及將博落回應用於皮膚護理方面；CN1065394涉及將博回應用於漱口水；CN1060215則將博落回應用於治療肝炎。博落回總生物鹼中的血根鹼氯化物和白屈菜紅鹼氯化物，已在美國環保署獲得登記，登記的主要活性成分為氯化血根鹼和氯化白屈菜紅鹼，登記類型為殺菌劑(Fungicide)。國內博落回植物農藥也已獲得登記，登記的有效成分為血根鹼，登記類型為殺蟲劑/殺菌劑。
血吸蟲病是嚴重危害人類身體健康的疾病。釘螺是血吸蟲病傳播中不可缺少的環節，滅螺能有效地減少血吸蟲的傳播。目前，滅螺方法大致有三種人工滅螺，化學製劑及生物滅螺。人工滅螺費工費時費用高，對人、魚、畜等有毒害，並極易造成環境汙染。
但目前國內外尚無以博落回總生物鹼及其鹽應用於殺滅釘螺、螺卵、日本血吸蟲尾蚴及血吸蟲病防治的相關報導和專利申報。
發明內容
本發明的目的在於提出一種在低濃度下就能安全高效殺滅釘螺、螺卵的作用，能殺滅日本血吸蟲尾蚴和血吸蟲病防治，又不汙染環境、無公害的博落回總生物鹼的應用。
雖然植物性殺螺劑的研究已日益得到關注，50年代以來國內外對多種植物的殺螺作用進行了研究潮。國內主要研究過的植物有商陸、茶皂素茶子餅、鬧洋花、射幹知母、重樓王不留行等，其主要成分為皂甙。皂甙殺螺效果良好，但對魚類和其它非靶生物毒性大，且提取含量不恆定，因而限制了這些植物的發展和應用。
本發明的發明人經研究發現博落回總生物鹼具有很好的，高效的殺滅釘螺、螺卵的作用，能殺滅日本血吸蟲尾蚴和血吸蟲。
博落回總生物鹼是從博落回植物果莢提取或全草提取或榨汁得到。
因而，發明人提供了一種博落回總生物鹼及其鹽，在殺滅釘螺、螺卵、日本血吸蟲尾蚴、血吸蟲的應用。
本發明指的博落回總生物鹼的鹽是無機酸鹽或有機酸鹽。
博落回總生物鹼雖然對殺滅釘螺、螺卵、日本血吸蟲尾蚴、血吸蟲有明顯的生物活性，但其在水中溶解性很低，而且易發生變化，因此，以鹽形式存在既能保持其穩定性，而與有機酸或無機酸成鹽增加在水中的溶解性，有利於血吸蟲的防治。
本發明所指的博落回總生物鹼無機酸鹽是指採用鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫氟酸、硼酸、氫溴酸、鎢酸、亞磷酸及其他無機酸，從博落回植物中提取或與博落回總生物鹼鹼反應得到的無機酸鹽。
本發明所指的博落回總生物鹼有機酸鹽是指採用苯甲酸、水楊酸、草酸、酒石酸、蘋果酸、枸椽酸、咖啡酸及其他有機酸，從博落回植物中提取或與博落回總生物鹼鹼反應得到的有機酸鹽。
其應用方式為博落回總生物鹼或博落回總生物鹼鹽加藥劑學相應的輔料製成的各種劑型，應用於殺滅釘螺、螺卵、日本血吸蟲尾蚴從而起到預防血吸蟲病的發生，應用於人畜體內驅血吸蟲達到人畜血吸蟲病的治療作用。
所述的劑型為粉劑、散劑、片劑、膠囊劑或注射劑等。
為了更好理解本發明實質，下面以更具體的試驗說明。
試驗本發明提出的博落回總生物鹼的滅螺、滅螺卵、殺滅血吸蟲尾蚴作用。為方便比較，所有用於滅螺、滅螺卵、殺滅血吸蟲尾蚴試驗的供試品的含量均為60％，以博落回總生物鹼的重量計。
1材料1.1博落回總生物鹼(批號060218，長沙世唯科技有限公司提供)，試驗前製備成200mg/L(以提取物量計)濃度，再用倍比稀釋法分別配成不同濃度。
1.2釘螺試驗前2～3d從嶽陽君山及湘江中遊傅家洲撿拾釘螺置實驗室飼養，選活成螺進行試驗。釘螺為肋殼釘螺。
1.3尾蚴由湖南省血吸蟲病防治所提供陽性釘螺，試驗當日逸放日本血吸蟲尾蚴。
1.4小白鼠昆明種。由中南大學湘雅醫學院動物實驗中心提供。鼠重20～22g，雌雄各半。
一、滅螺試驗方法將博落回總生物鹼配置成不同濃度的藥液各2000ml，每500ml中投放裝有50隻活螺的尼龍袋1隻，分別浸泡24、48、72、96h，取出後去氯水洗淨、晾乾，3d後用水測及敲擊法判斷釘螺死活。設清水對照。各濃度組均在20℃、25℃、30℃不同溫度下進行試驗。
結果在不同溫度(20℃、25℃、30℃)和不同濃度下，博落回總生物鹼溶液殺螺效果不同。用SPSS軟體經卡方檢驗20℃～25℃1.25mg/L濃度浸泡24、48h，殺螺效果與對照組有顯著差異；30℃0.3125mg/l濃度及以上各組均與對照組有顯著差異(P＜0.05)。用多元線性逐步回歸方法進行統計學分析，得出回歸方程Y-5.655×consis(濃度)+4.214×Tm(溫度)+0.664×Tc(時間)一120.404。說明殺螺效果與濃度、溫度及浸泡時間有關，見表一。
表一、不同溫度下博落回總生物鹼釘螺結果
二、滅螺卵試驗方法選2d卵齡，泥皮完整的釘螺卵，計數100隻放入100ml燒杯(或直徑7cm平皿)中，分別加入不同濃度的藥液50ml(或20ml)，浸泡24、48、72h後，傾去藥液，清洗3次後，加去氯水50ml(平皿20ml)，逐日觀察各組幼螺孵出數。設氯硝柳胺藥物及清水對照組。記錄每日氣溫，2～3d換水一次，觀察30d，計數各組幼螺孵出總數。未孵出的螺卵進行解剖，觀察卵胚發育情況。
結果用SPSS軟體經卡方檢驗，除12.5mg/l浸泡24、48h幼螺孵出率與對照組無差異外，其餘各組與對照組均有顯著性差異(P＜0.01)，見表二。
表二、博落回總生物鹼殺螺卵結果
注未卵出的螺卵，鏡下解剖觀察均為解體的卵胚三、殺滅血吸蟲尾蚴試驗方法一玻片法實驗當日取陽性釘螺逸放尾蚴。取不同濃度的博落回總生物鹼溶液100ul分置於載玻片上，每片挑取活尾蚴100條左右，解剖鏡下觀察1、3、5、10、15、30、45、60分鐘尾蚴存活情況。以解剖針觸及尾蚴，不活動者判為死亡。計數死亡數，計算死亡率。設清水對照。
方法二動物感染試驗分別取各種濃度的藥液100ul於載玻片上，挑入日本血吸蟲尾蚴(40±1)條於藥液中，放置30分鐘後貼於已去毛的小自鼠腹部，感染15分鐘。設清水對照，每組小鼠13～15隻。30d後解剖小鼠檢蟲，計數血吸蟲數，計算發育率及保護率。
結果一玻片法尾蚴接觸藥物60min，2.5mg/L濃度尾蚴死亡率為97.71％；5mg/L死亡率為100％。隨著濃度增高，尾蚴100％死亡時間縮短，10mg/L死亡時間為45min；20mg/L為15min；50mg/L、100mg/L時3min內尾蚴全部死亡。
結果二感染動物效果用SPSS軟體經卡方檢驗。除0.625mg/L濃度的防護率與對照組比較無差異外，其餘各組與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.01)，見表三。
表三、博落回總生物鹼殺螺卵結果
注*對照組為發育率結論(1)博落回總生物鹼有較好的殺釘螺作用在1.25mg/L以上濃度，30℃浸泡48h釘螺死亡率77％～97％；浸泡72～96h釘螺死亡率均為100％。5mg/L 25℃48h浸泡釘螺死亡率82％；72～96h釘螺死亡率100％。10mg/L，20℃浸泡48～72h釘螺死亡率39％～61％；25℃釘螺死亡率91～100％；30℃死亡率97％～100％。說明隨著溫度增高，殺螺效果增加，殺螺有效濃度減低。浸泡時間延長，殺螺效果增加。殺螺適宜溫度在25℃～30℃，浸泡時間72h以上。(2)有好的殺螺卵作用10mg/l浸泡72h螺卵100％不能孵出。5mg/l浸泡72h螺卵孵出率0～10％。2.5mg/L浸泡72h，螺卵孵出率僅11％。(3)殺尾蚴效果好尾蚴接觸5mg/l溶液60min100％死亡，對小鼠感染日本血吸蟲尾蚴的防護率達82.36％～94.55％。
具體實施例方式
實施例1取博落回果莢原藥材，揀去雜質，稱取20kg，加入用硫酸調節pH值2-3的酸水提取二次，每次3小時，用量分別為8倍量、6倍量。固液分離，濾液用氫氧化鈉調節pH值至11，靜置24小時，沉澱過濾，乾燥，得不低於15％博落回總生物鹼。
實施例2取實施例1所得博落回總生物鹼，溶於90％乙醇中，攪拌下加入硫酸，靜置析晶，精製，乾燥，即得不低於60％博落回總生物鹼硫酸鹽，用水溶性澱粉定量調節即得到60％博落回總生物鹼硫酸鹽粉劑。
取上述粉劑按試驗例方法進行殺釘螺、滅螺卵、殺滅血吸蟲尾蚴試驗。
殺釘螺試驗在濃度為5.0mg/L，溫度為25℃，浸泡48～72h，釘螺死亡率99-100％。
滅螺卵試驗在濃度為5mg/L，浸泡72h，螺卵孵出率為0-5％。
殺滅血吸蟲尾蚴試驗尾蚴接觸5mg/l溶液60分鐘100％死亡實施例3取實施例1所得博落回總生物鹼，溶於90％乙醇中，攪拌下加入硼酸，靜置析晶，精製，乾燥，即得不低於85％博落回總生物鹼硼酸鹽，用水溶性澱粉定量調節即得到85％博落回總生物鹼硼酸鹽粉劑。
取上述粉劑按試驗例方法進行殺釘螺、滅螺卵、殺滅血吸蟲尾蚴試驗。
殺釘螺試驗在濃度為2.5mg/L，溫度為25℃，浸泡72～96h，釘螺死亡率99-100％。
滅螺卵試驗在濃度為5mg/L，浸泡72h，螺卵孵出率為0-4％。
殺滅血吸蟲尾蚴試驗尾蚴接觸5mg/l溶液60分鐘100％死亡實施例4取實施例1所得博落回總生物鹼，溶於90％乙醇中，攪拌下加入水楊酸，靜置析晶，精製，乾燥，即得不低於20％博落回總生物鹼水楊酸鹽，用水溶性澱粉定量調節即得到20％博落回總生物鹼水楊酸鹽粉劑。
取上述粉劑按試驗例方法進行殺釘螺、滅螺卵、殺滅血吸蟲尾蚴試驗。
殺釘螺試驗在濃度為2.5mg/L，溫度為25℃，浸泡72～96h，釘螺死亡率95-100％。
滅螺卵試驗在濃度為5mg/L，浸泡72h，螺卵孵出率為0-3％。
殺滅血吸蟲尾蚴試驗尾蚴接觸5mg/l溶液60分鐘100％死亡實施例5取實施例1所得博落回總生物鹼，溶於90％乙醇中，攪拌下加入酒石酸，靜置析晶，精製，乾燥，即得不低於30％博落回總生物鹼酒石酸鹽，用水溶性澱粉定量調節即得到15％博落回總生物鹼酒石酸鹽粉劑。
取上述粉劑按試驗例方法進行殺釘螺、滅螺卵、殺滅血吸蟲尾蚴試驗。
殺釘螺試驗在濃度為2.5mg/L，溫度為25℃，浸泡72～96h，釘螺死亡率98-100％。
滅螺卵試驗在濃度為5mg/L，浸泡72h，螺卵孵出率為0-5％。
殺滅血吸蟲尾蚴試驗尾蚴接觸5mg/l溶液60分鐘100％死亡實施例6取實施例1所得博落回總生物鹼，溶於90％乙醇中，攪拌下加入枸椽酸，靜置析晶，精製，乾燥，即得不低於25％博落回總生物鹼枸椽酸鹽，用水溶性澱粉定量調節即得到10％博落回總生物鹼枸椽酸鹽粉劑。
取上述粉劑按試驗例方法進行殺釘螺、滅螺卵、殺滅血吸蟲尾蚴試驗。
殺釘螺試驗在濃度為2.5mg/L，溫度為25℃，浸泡72～96h，釘螺死亡率97-100％。
滅螺卵試驗在濃度為5mg/L，浸泡72h，螺卵孵出率為0-4％。
殺滅血吸蟲尾蚴試驗尾蚴接觸5mg/l溶液60分鐘100％死亡實施例7取花前期新鮮博落回全草藥材，揀去雜質，稱取200kg榨汁，過濾，濾液吸入濃縮器中進行減壓濃縮(5-6波美)，經管式離心機離心，再進行減壓濃縮到(10-12波美)，將濃縮放入真空乾燥箱中乾燥，乾粉經粉碎機粉碎，旋震篩過60～80目篩，收集細粉，混合、包裝得2％博落回總生物鹼。
2％博落回總生物鹼按試驗例方法進行殺釘螺、滅螺卵、殺滅血吸蟲尾蚴試驗。
殺釘螺試驗在濃度為2.5mg/L，溫度為25℃，浸泡72～96h，釘螺死亡率98-100％。
滅螺卵試驗在濃度為5mg/L，浸泡72h，螺卵孵出率為0-6％。
殺滅血吸蟲尾蚴試驗尾蚴接觸5mg/l溶液60分鐘100％死亡實施例8
取博落回根原藥材，揀去雜質，稱取20kg，加入用硫酸調節pH值2-3的酸水提取二次，每次3小時，用量分別為8倍量、6倍量。固液分離，濾液用氫氧化鈉調節pH值至11，靜置24小時，沉澱過濾，乾燥，得不低於10％博落回總生物鹼。
取上述博落回總生物鹼，溶於90％乙醇中，攪拌下加入硫酸，靜置析晶，精製，乾燥，即得不低於40％博落回總生物鹼硫酸鹽，用水溶性澱粉定量調節即得到40％博落回總生物鹼硫酸鹽粉劑。
取上述粉劑按試驗例方法進行殺釘螺、滅螺卵、殺滅血吸蟲尾蚴試驗。
殺釘螺試驗在濃度為2.5mg/L，溫度為25℃，浸泡72～96h，釘螺死亡率96-100％。
滅螺卵試驗在濃度為5mg/L，浸泡72h，螺卵孵出率為0-4％。
殺滅血吸蟲尾蚴試驗尾蚴接觸5mg/l溶液60分鐘100％死亡。
權利要求
1.博落回總生物鹼在血吸蟲病防治上的應用，其特徵在於博落回總生物鹼應用於殺滅釘螺、螺卵、日本血吸蟲尾蚴及血吸蟲病防治。
2.根據權利要求1所述的博落回總生物鹼在血吸蟲病防治上的應用，其特徵在於博落回總生物鹼是從博落回植物果莢提取或全草提取或榨汁得到。
3.根據權利要求1所述的博落回總生物鹼在血吸蟲病防治上的應用，其特徵在於其應用方式是由博落回總生物鹼以博落回總生物鹼鹽的形式應用。
4.根據權利要求3所述的博落回總生物鹼鹽，其特徵在於博落回總生物鹼鹽為無機酸鹽或有機酸鹽。
5.根據權利要求4所述的博落回總生物鹼無機酸鹽，其特徵在於無機酸鹽中的無機酸為鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫氟酸、硼酸、氫溴酸、鎢酸或亞磷酸。
6.根據權利要求4所述的博落回總生物鹼有機酸鹽，其特徵在於有機酸鹽中的有機酸為苯甲酸、水楊酸、草酸、酒石酸、蘋果酸、枸椽酸、咖啡酸。
7.根據權利要求1所述的博落回總生物鹼在血吸蟲病防治上的應用，其特徵在於其應用方式為博落回總生物鹼或博落回總生物鹼鹽加藥劑學相應的輔料製成的各種劑型，應用於殺滅釘螺、螺卵、日本血吸蟲尾蚴從而起到預防血吸蟲病的發生，應用於人畜體內驅血吸蟲達到人畜血吸蟲病的治療作用。
8.根據權利要求7所述各種劑型，其特徵在於劑型為粉劑、散劑、片劑、膠囊劑、注射劑等。
全文摘要
博落回總生物鹼在血吸蟲病防治上的應用，本發明將博落回總生物鹼應用於殺滅釘螺、螺卵、日本血吸蟲尾蚴及血吸蟲病防治。發明人發現博落回總生物鹼在低濃度下就能安全高效殺滅釘螺、螺卵的作用，能殺滅日本血吸蟲尾蚴和血吸蟲病防治，又不汙染環境、無公害。
文檔編號A61P33/00GK1957990SQ20061003171
公開日2007年5月9日 申請日期2006年5月25日 優先權日2006年5月25日
發明者曾建國 申請人:長沙世唯科技有限公司