用於製備免疫佐劑的化合物的製作方法

2023-11-11 16:12:57 2

專利名稱：：用於製備免疫佐劑的化合物的製作方法用於製備免疫佐劑的化合物
背景技術：
已證明疫苗通常是用來預防傳染病的成功的方法。一般情況下，其是成本有效的，並且不會誘導靶病原體的抗生素抗性或影響存在於宿主中的正常菌群。在很多情況中，例如當誘導抗病毒免疫時，疫苗可預防沒有可行的治癒性或改善性治療方法的疾病。疫苗通過激活免疫系統以引起對藥劑或抗原的應答而起作用，通常部分。一旦免疫系統對所述生物體而言已是"待發的，，或"激活的"，那麼之後使免疫系統暴露於作為傳染性病原的該生物體產生快速且強烈的免疫應答，所述免疫應答在病原能夠在宿主生物體中繁殖和感染足夠的細胞以引起病症之前石皮壞病原。用來激活免疫系統的藥劑或抗原可以是處於較弱傳染性狀態的完整生物體，稱為減毒生物體，或者在某些情況下是生物體的組分例如代表生物體的各種結構組分的碳水化合物、蛋白質或肽。在許多情況下，為了刺激免疫系統足以使疫苗有效，即賦予免疫性，有必要增強對存在於疫苗中的抗原的免疫應答。許多蛋白質和大多數肽以及碳水化合物抗原單獨施用不會引起足以賦予免疫性的抗體應答。需免疫系統。為此，已經設計了固定抗原並刺激免疫應答的添加劑(佐劑)。最著名的佐劑，弗氏完全佐劑，由在油/水乳狀液中的分枝桿菌的混合物組成。弗氏佐劑通過兩種方式起作用第一種，通過提高細胞和體液介導免疫，第二種，通過阻止抗原激發的迅速分散("儲存效應")。然而，由於對該物質的頻繁的中毒的生理和免疫反應，弗氏佐劑不能用於人類。另一類已經表現出具有免疫激活作用或佐劑活性的分子是內毒素，也稱為脂多糖(LPS)。LPS通過誘發"先天的"免疫應答，即已演變為使得生物體能夠識別內毒素(和入侵細菌，其中內毒素是入侵細菌的組成部分)的應答，來刺激免疫系統，而不需要預先與生物體接觸。雖然LPS毒性太大而不能作為可行的佐劑，但是在結構上與內毒素相關的分子例如單磷醯脂質A("MPL")正在臨床試驗上進行作為佐劑的測試。已證實LPS和MPL都是人toll樣受體-4(TLR-4)。然而，目前唯一被FDA認可的用於人類的佐劑是鋁鹽(明礬)，其用來通過抗原的沉澱"儲存"抗原。明礬也刺激對抗原的免疫應答。因此，為了刺激免疫系統以產生比抗原單獨或與明礬一起注射時所觀察到的更強的對於抗原的抗體應答，需要開發用於製備可與抗原共施用的化合物的合成方法。一方面，本發明提供一種用於合成具有如下結構的TLR-4受體激動劑E6020的方法formulaseeoriginaldocumentpage10另一方面，本發明包括用於合成E6020的任何立體異構體的方法。因此，在此提供用於製備具有如下結構的化合物的合成中間體當與抗原例如疫苗共施用於細菌性和病毒性疾病時，這些化合物可用作免疫佐劑。本發明還提供可用於製備E6020及其立體異構體的合成中間體。
發明內容圖1描述晶體ER-8016158的結構。圖2是沿著a軸的晶胞堆積圖，其示出在ER-806158晶體內氬鍵結合的最好的圖，虛線。圖3描述晶體ER-806158的粉末X射線衍射(PXRD)圖。圖4表示晶體ER-806158的DSC溫鐠圖。圖5表示晶體ER-806158的紅外光鐠。定義根據本發明並如本文所使用的，用下面的含義定義下列術語，除非另有明確說明。團的定義:對本發明來說，、根據元素周期表，CAS版本，HandbookofChemistryandPhysics,75thEd.,封面內頁，確定化學元素，並且通常如其中所述限定特定的官能團。此外，在"OrganicChemistry",ThomasSorrell,UniversityScienceBooks,Sausalito:1999中，描述了有機化學的普遍原理以及特定官能部分和反應性，其全部內容通過引用併入本文。另外，本領域的技術人員應該理解，在此所描述的合成方法使用多種保護基。就在此所用的術語"保護基"而言，指的是特定官能部分例如O、S、P或N被臨時封鎖，使得反應可選擇性地在多官能化合物中的另外的反應活性部位進行。在優選實施方案中，保護基以良好的產率選擇性地反應，以得到對所設計的反應穩定的保護的底物；必須通過易於得到的、優選為無毒且不攻擊其它官能團的試劑來選擇性地脫除保護基；保護基形成可容易分離的衍生物(更優選沒有產生新的立體中心)；並且保護基具有最小的附加的官能度，以避免更多的反應位點。如在此所詳述的，可以使用氧、硫、氮、磷和碳保護基。例如，在某些實施方案中，如在此所詳述的，使用某些示例性的氧保護基。這些氧保護基包括但不限於甲醚、取代的甲醚(例如，MOM(甲氧基甲醚)、MTM(甲硫基曱醚)、BOM(千氧基甲醚)、PMBM(對甲氧基節氧基甲醚)，等等)、取代的乙醚、取代的節醚、矽醚(例如，TMS(三甲基矽醚)、TES(三乙基矽醚)、TIPS(三異丙基矽醚)、TBDMS(叔丁基二甲基矽醚)、三千基矽醚、TBDPS(叔丁基二苯基矽醚))、酯(例如，甲酸酯、乙酸酯、苯甲酸酯(Bz)、三氟乙酸酯、二氯乙酸酯，等等)、碳酸酯、環狀縮醛和縮酮。用於亞磷酸酯氧和磷酸酯氧的保護基包括例如，諸如曱基、乙基、異丙基、叔丁基、環己基、l-金剛烷基和2-三甲基曱矽烷基丙-2-烯基的烷基磷酸酯/亞磷酸酯；諸如乙烯基和烯丙基的烯基磷酸酯/亞磷酸酯；諸如2-氰乙基、2-氰基-l,l-二甲基乙基、2-(三甲基甲矽烷基)乙基、2-(4-硝基苯基)乙基、2-(苯磺醯基)乙基和2-(苯甲磺醯基)乙基的2-取代的乙基磷酸酯/亞磷酸酯；諸如2，2，2-三氯乙基、2,2，2-三氯-l,l-二曱基乙基、2,2,2-三溴乙基、2,3-二溴丙基的滷乙基磷酸酯/亞磷酸酯；諸如節基、4-硝基節基、4-氯節基、l-氧橋-4-甲氧基-2-吡啶甲基、芴基-9-甲基、5-苯並異嚅唑基亞甲基、(C6Hs)2C-的苄基磷酸酯/亞磷酸酯；和諸如苯基、4-硝基苯基和4-氯苯基的苯基磷酸酯/亞磷酸酯；以及諸如三曱基甲矽烷基的曱矽烷基磷酸酯/亞磷酸酯。在某些其它的示例性的實施方案中，使用氮保護基。這些氮保護基可以是一價或二價保護基，例如但不限於氨基甲酸酯(包括甲基、乙基和取代的氨基甲酸乙酯(例如，Troc),等等)、醯胺、環狀醯亞胺衍生物、N-烷基和N-芳基胺、亞胺衍生物和烯胺衍生物等。胺保護基例如千氧基羰基(Cbz)、叔丁氧基羰基(Boc)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)、2,2，2-三氯乙氧基羰基(TROC)、三甲基曱矽烷基(TMS)-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基或(C6Hs)2C—二苯基亞甲基)也可被提及。某些其它示例性的保護基在此詳述，然而，應該理解本發明並不限於這些保護基；相反地，利用上述標準可以很容易地確定並在本發明中使用多種另外的等價保護基。此外，在"ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis"第三版Greene,T.W.和Wuts,P.G"Eds"JohnWiley&Sons,NewYork:1999中描述了多種保護基，其全部內容在此通過參考併入。應該理解，在此描述的化合物可以被任意數量的取代基或官能部分取代。一般地，術語"取代的"，無論其前面是否加上術語"任選地"，和包含在本發明的式中的取代基，是指給定結構中的氫基被特定的取代基代替。當任意給定結構中的多於一個位置可被選自特定基團的多於一個取代基取代時，在每個位置處的取代基可以相同或不同。如在此所用的，術語"取代的"意指包括所有可允許的有機化合物的取代基。在一個廣泛的方面中，所述可允許的取代基包括有機化合物的無環和環狀的、帶支鏈和不帶支鏈的、碳環和雜環的、芳香和非芳香的、碳和雜原子取代基。就本發明而言，雜原子例如氮可以具有滿足所述雜原子化合價的在此所述的有機化合物的氫取代基和/或任何可允許的取代基。此外，本發明並不以任何方式被有機化合物的可允許的取代基所限制。取代基的組合和本發明預見到的變化優選為導致形成用於治療和預防例如通常如上所述的疾病的穩定化合物的那些。取代基的實例包括但不限於卣取代基，例如F、Cl、Br或I;羥基；d~C6的烷氧基，例如-003、-OCH2CH3或-OCH(CH3)2;QC6的囟烷基，例如-CFp-CH2CF3或國CHCl2;d~C6的烷硫基；氨基；單和二烷基氨基；-N02;-CN;硫酸酯基等。另外方案說明。優選地，在此所用的術語"穩定的，，是指化合物具有足以允許製備的穩定性並使化合物的完整性保持足夠長的時間以進行檢測且優選保持足夠長的時間以用於在此詳述的目的。如在此所用的，術語"烷基"包括直鏈的和帶支鏈的烷基。類似的規定用於其它一般性術語，例如"烯基"、"炔基"等。此外，如在此所用的，術語"烷基"、烯基"、"炔基"等包括取代的和未取代的基團。在某些實施方案中，如在此所用的，"低級烷基"用來表示具有1~6個碳原子的那些烷基(環狀的、無環的、取代的、未取代的、帶支鏈的或不帶支鏈的)。在其它實施方案中，優選Cw、C2.4、Cw或C3—6的烷基或烯基。在某些實施方案中，在本發明中所用的烷基、烯基和炔基包含用於烷基的1~20個脂肪族碳原子和用於烯基和炔基的2~20個碳原子。在某些其它實施方案中，在本發明中所用的烷基、烯基和炔基包含1~15個脂肪族碳原子。在另一些實施方案中，在本發明中所用的烷基、烯基和炔基包含1~8個脂肪族碳原子。在又一些實施方案中，在本發明中所用的烷基、烯基和炔基包含1~6個脂肪族碳原子。在另一些實施方案中，在本發明中所用的烷基、烯基和炔基包含1~4個碳原子。因此示例性的脂肪族基團包括但不限於例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、烯丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、仲戊基、異戊基、叔戊基、正己基、仲己基部分等，其又可以帶有一個或多個取代基。烯基包括但不限於例如乙烯基、丙烯基、丁烯基、l-甲基-2-丁烯-l-基等。有代表性的炔基包括但不限於乙炔基、2-丙炔基(炔丙基)、l-丙炔基等。如在此所用的，術語"脂環的"是指結合脂肪族和環狀化合物的特性的化合物，包括但不限於環狀的或多環的脂肪烴和橋環烷基化合物，其任選地被一個或多個官能團取代。如本領域技術人員所理解的，"脂環的，，在此意欲包括但不限於環烷基、環烯基和環炔基部分，其任選地被一個或多個官能團取代。因此，示例性的脂環基團包括但不限於例如環丙基、-CHr環丙基、環丁基、-CHr環丁基、環戊基、-12-環戊基-11、環己基、-CHr環己基、環己烯基乙基、環己基乙基、降水片基部分等，其又可以帶有一個或多個取代基。在此所用的術語"烷氧基"(或"烷基氧基，，)或"硫代烷基"是指如先前所限定的烷基或環烷基通過氧原子或通過硫原子連接到母分子部分。在某些實施方案中，烷基或環烷基包含1~20個脂肪族或脂環族碳原子。在某些其它實施方案中，烷基或環烷基包含1~10個脂肪族或脂環族碳原子。在另一些實施方案中，在本發明中所用的烷基、烯基和炔基包含1~8個脂肪族或脂環族碳原子。在又一些實施方案中，烷基包含1~6個脂肪族或脂環族碳原子。在另一些實施方案中，烷基包含1~4個脂肪族或脂環族碳原子。烷氧基的實例包括但不限於甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、新戊氧基和正己氧基。硫代烷基的實例包括但不限於曱硫基、乙硫基、丙硫基、異丙硫基、正丁硫基等。術語"烷氨基"是指具有-NHR，結構的基團，其中R，是在此所限定的烷基或環烷基。術語"二烷氨基"是指具有-N(R，)2結構的基團，其中存在的每個R，獨立地是在此所限定的烷基或環烷基。術語"氨基烷基"是指具有NH2R，-結構的基團，其中R，是在此所限定的烷基或環烷基。在某些實施方案中，烷基包含1~20個脂肪族或脂環族碳原子。在某些其它實施方案中，烷基或環烷基包含1~10個脂肪族或脂環族碳原子。在另一些實施方案中，在本發明中所用的烷基、烯基和炔基包含1~8個脂肪族或脂環族碳原子。在又一些實施方案中，烷基或環烷基包含1-6個脂肪族或脂環族碳原子。在另一些實施方案中，烷基或環烷基包舍1~4個脂肪族或脂環族碳原子。烷氨基的實例包括但不限於甲氨基、乙氨基、異丙氨基等。通常，在此所用的術語"芳基"和"雜芳基，，是指穩定的優選具有3~14個碳原子的單或多環、雜環、多環和多雜環的不飽和部分，其每一個可以被取代或不被取代。還應該理解，如在此所限定的芳基和雜芳基部分可以通過烷基或雜烷基部分連接，並因此還包括-(烷基)芳基、-(雜烷基)芳基、-(雜烷基)芳基和-(雜烷基)雜芳基部分。因此，如在此所用的，術語"芳基或雜芳基"和"芳基、雜芳基、-(烷基)芳基、-(雜烷基)芳基-(雜烷基)芳基和-(雜烷基)雜芳基"是可互換的。取代基包括但不限於任意的先前提及的取代基，即取代脂肪部分或在此公開的其它部分的取代基，其結果是形成穩定的化合物。在本發明的某些實施方案中，"芳基"是指具有一個或兩個芳環的單或雙環碳環體系，包括但不限於苯基、萘基、四氫萘基、茚滿基、茚基等。在本發明的某些實施方案中，在此所用的術語"雜芳基"是指具有五到十個環原子的環狀芳基，其中一個環原子選自S、O和N;零、一或兩個環原子是另外的獨立地選自S、O和N的雜原子；並且剩下的環原子是碳，所述基團通過任意的環原子連接到分子的其餘部分，例如吡啶基、吡嗪基、嘧咬基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、漆唑基、喁哇基、異嚅唑基、瘞二哇基、5惡二唑基、瘞吩基、咬喃基、奮啉基、異會^k基等。應該理解，芳基和雜芳基(包括二環芳基)可以是未取代的或取代的，其中取代包括獨立地用任意的一個或多個通常如上所述的取代基替代其上的一個或多個氫原子。通常可用的取代基的另外的實例通過在此所述的實施例中所示的特定實施方案說明。在此所用的術語"環烷基，，具體是指具有3~7個、優選3~10個碳原子的基團。合適的環烷基包括但不限於環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基等，其與其它脂環、雜脂環或雜環部分一樣，可任選地被一個或多個通常如上所述的取代基取代。類似的規則適用於其它一般性術語，例如"環烯基"、"環炔基"等。此外，應該理解如上和在此所述的任何的脂肪族或雜脂肪族部分都可以包含稠合到其上的芳基或雜芳基部分。通常可用的取代基的另外的實例通過在此所述的實施例中所示的特定實施方案說明。在此所用的術語"雜脂肪族的"是指主鏈中的一個或多個碳原子已經被雜原子取代的脂肪族部分。因此，雜脂肪族基團是指含有例如替代碳原子的一個或多個氧、硫、氮、磷或矽原子的脂肪鏈。雜脂肪族部分可以是帶支鏈的或線性不帶支鏈的。在某些實施方案中，雜脂肪族部分通過用一個或多個通常如上所述的取代基獨立地替代其上的一個或多個氫原子而取代。通常可用的取代基的另外的實例通過在此所述的實施例中所示的特定實施方案說明。在此所用的術語"雜脂環族的"是指結合雜脂肪族和環狀化合物的特性的化合物，包括但不限於飽和的和不飽和的單或多環雜環，例如嗎啉基、吡咯烷基、呋喃基、瘞吩基、吡咯基等，其任選地被如在此所限定的一個或多個官能團取代。此外，應該理解，如上和在此所述的任何的脂環族或雜脂環族部分都可以包含稠合到其上的芳基或雜芳基部分。通常可用的取代基的另外的實例通過在此所述的實施例中所示的特定實施方案說明。在此所用的術語"卣"和"卣素，，是指選自氟、氯、溴和碘的原子。術語"卣烷基"表示如上所限定的具有一個、兩個或三個卣素原子連接到其上的烷基，並以例如氯甲基、溴乙基、三氟甲基等基團為例。在此所用的術語"雜環烷基"或"雜環"是指非芳族的5-、6-或7-元環或多環基團，包括但不限於包含具有獨立地選自氧、硫和氮的一個到三個雜原子的稠合的六元環的二或三環基團，其中(i)每個5-元環具有01個雙鍵並且每個6-元環具有0~2個雙鍵，(ii)氮和硫雜原子可以任選地被氧化，(iii)氮雜原子可以任選地4皮季銨化，和(iv)任意的上述雜環可以被稠合到取代的或未取代的芳環或雜芳環上。典型的雜環包括但不限於吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌咬基、哌*基、"惡唑烷基、異嚅唑烷基、嗎啉基、噻唑烷基、異噻唑烷基和四氫呋喃基。在某些實施方案中，使用"取代的雜環烷基或雜環"基團，並如在此所用的是指如上所限定的通過用一個或多個通常如上所述的取代基獨立地替代其上的一個或多個氫原子而取代的雜環烷基或雜環基團。通常方案說明。在此所用的術語"脂肪族的"、"雜脂肪族的"、"烷基"、"烯基"、"炔基"、"雜烷基"、"雜烯基"、"雜炔基"等包括取代的和未取代的、飽和的和不飽和的以及線性的和帶支鏈的基團。類似地，術語"脂環族的"、"雜脂環族的"、"雜環烷基"、"雜環"等包括取代的和未取代的以及飽和的和不飽和的基團。此外，術語"環烷基"、"環烯基"、"環炔基"、"雜環烷基"、"雜環烯基"、"雜環炔基"、"芳基"、"雜芳基"等包括取代的和未取代的基團。此外，E6020包含不對稱的碳原子，並因此可作為立體異構體而存在，即對映體和非對映體。本領域技術人員將認識到本發明的方法可適於製備E6020的任意的所有可能的立體異構體。雖然在此提供的實施例公開了特定異構體的製備，但是認為用於製備E6020的其它立體異構體的方法落在本發明的範圍內。發明詳述一方面，本發明提供一種用於合成具有如下結構的TLR-4受體激動劑E6020的方法E6020是有效的TLR-4受體激動劑，因此所述化合物在與抗原例如用於細菌性疾病和病毒性疾病的疫苗共施用時用作免疫佐劑。例如，E6020可與任何合適的例如選自來自病原和非病原的生物體、病毒和真菌的抗原的抗原劑的抗原或疫苗組分組合使用。作為另一個實例，E6020可與對例如天花、黃熱病、癌、瘟熱、霍亂、禽痘、猩紅熱、白喉、破傷風、百日咳、流感、狂犬病、腮腺炎、麻滲、口蹄疫和脊髓灰質炎的病狀和病情有藥理活性的蛋白質、肽、抗原和疫苗組合使用。在某些實施方案中，E6020和抗原各自以有效量存在，以在將其施用於所接種疫苗的宿主動物、胎或卵時引起免疫應答。另一方面，本發明包括用於合成TLR-4受體激動劑E6020的任意立體異構體的方法。因此，在此提供用於製備具有如下結構的化合物的方法I.磷酸酯脲基二聚體的製備在某些實施方案中，本發明方法包括如下步驟:(a)使具有如下結構的化合物formulaseeoriginaldocumentpage18(1)其中，R"是烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基、雜環炔基、芳基、雜芳基、亞磷酸酯氧保護基或磷酸酯氧保護基；和Rh和R"各自獨立地是氫或合適的氮保護基，或者Rh和R化一起形成5-或6-元雜環；其中Rh和R化不同時為氫；與光氣在適當的條件下反應，形成具有如下結構的脲基二聚體formulaseeoriginaldocumentpage18(2)(b)在適當的條件下使在步驟(a)中形成的脲基二聚體(2)脫保護形成具有如下結構的部分脫保護的二聚體(3):以formulaseeoriginaldocumentpage18(C)在適當的條件下使在步驟(b)中形成的部分脫保護的二聚體與合適的試劑反應，以形成具有如下結構的保護的二聚體(4):formulaseeoriginaldocumentpage19;和formulaseeoriginaldocumentpage19(d)在適當的條件下用一種或多種合適的試劑處理在步驟(c)中形成的二聚體，以形成具有如下結構的鈉鹽formulaseeoriginaldocumentpage19(5)在某些實施方案中，上述化合物1~5具有如下的立體化學:formulaseeoriginaldocumentpage20(la)formulaseeoriginaldocumentpage20(3a)formulaseeoriginaldocumentpage20(4a)formulaseeoriginaldocumentpage20(5a)在另一些實施方案中，在適當的條件下用一種或多種合適的試劑處理在步驟(c)中形成的二聚體的步驟導致具有如下結構的化合物的形成formulaseeoriginaldocumentpage21■(CH2)6CH3(CH2〉10CH3然後其被純化，產生相應的二鈉鹽formulaseeoriginaldocumentpage21在某些實施方案中，例如如上所示的那些，出現的每個R"獨立地是氫、dQ的烷基、C3C6的烯基、C3C6的炔基或亞磷酸酯氧保護基或磷酸酯氧保護基。在某些示例性的實施方案中，每個R"是烯丙基。在某些實施方案中，R^和R"各自獨立地是氫、烷基、烯基、-C(=0)Rx、-C(=0)ORx、-SRX、S02Rx,或者R2a和R2b—起形成具有二CRXRy結構的部分，其中Rh和R"不同時為氫並且RX和Ry各自獨立地是氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基、雜環炔基、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、-C(-O)RA或-ZRA，其中Z是-O-、-S-、-NRB，其中出現的每個RA和RB獨立地是氫或烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基、雜環炔基、雜脂肪族、雜脂環族、芳基或雜芳基部分。在某些示例性的實施方案中，Rh是氫且iP是-C(-0)ORX，其中Rx是取代的或未取代的低級烷基。在某些其它示例性的實施方案中，Rh是氫且R"是-C(-0)0出u。在某些實施方案中，步驟(a)中的反應條件包括在適當溶劑中的光氣。在某些示例性的實施方案中，所述溶劑是CH2Cl2、甲笨或其組合。在某些實施方案中，步驟(a)中的反應條件還包括弱鹼。在某些示例性的實施方案中，所述弱鹼是NaHC03水溶液。在某些實施方案中，步驟(b)中的脫保護反應條件包括在適當溶劑中的強酸。在某些示例性的實施方案中，所述溶劑是CH2C12。在某些其它示例性的實施方案中，R"是氫，R2b是-<:(=0)0出11，且所述強酸是TFA。在某些實施方案中，步驟(c)中的試劑是3-氧代-十四烷酸衍生物。如在此所用的，"羧酸衍生物"(例如，3-氧代-十四烷酸或十二烷酸衍生物)是指RC(=0)X結構的化合物，其中R是羧基，並且X是適於通過與伯胺反應形成醯胺的化學基團，或者X是可被化學轉化以通過與伯胺反應形成醯胺的化學基團。在某些實施方案中，X是卣素、羥基、-OR、-SH、-811或-<:(卣)3;其中，R是烷基或芳基。在某些示例性的實施方案中，試劑是3-氧代-十四烷酸。在某些實施方案中，步驟(c)中的試劑是3-氧代-十四烷酸並且用於使脫保護的二聚體與試劑反應的反應條件包括鹼。在某些實施方案中，所述鹼是l-羥基苯並三唑。在某些實施方案中，鹼是Hunig's鹼。在某些實施方案中，步驟(c)的反應條件包括羧酸活化劑，例如DCC。在某些實施方案中，所述羧酸活化劑是l-[3-(二曱氨基)丙基-3-乙基碳二亞胺。在某些實施方案中，所述羧酸活化劑是HBTU。在某些其它實施方案中，出現的每個R"是烯丙基，並且步驟(d)中的反應條件包括在適當溶劑中的Pd(PPh3)4。在某些示例性的實施方案中，步驟(d)中的處理條件還包括三苯膦和苯基矽烷。在某些示例性的實施方案中，溶劑是THF。在另一些實施方案中，純化具有如下結構的化合物formulaseeoriginaldocumentpage23包括色譜分離並用鹼處理。在某些示例性的實施方案中，所述純化過程包括(i)離子交換色鐠，(ii)C-4Kromasil洗脫和(iii)用NaOAc水溶液處理。在某些示例性的實施方案中，所述純化過程包括(i)BiotageKP-二氧化珪色i普，(ii)BiotageKPHS-C18色鐠和(iii)用NaOAc水溶液處理。n.用於製備中間體i的方法在某些示例性的實施方案中，具有如下結構的化合物通過包括如下步驟的方法製備其中，R"是氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基、雜環炔基、芳基、雜芳基或亞磷酸酯氧保護基或磷酸酯氧保護基；和Rh和R化各自獨立地是氫或合適的氮保護基，或者R"和R化一起形成5-或6-元雜環；其中R^和R^不同時為氫；(a)使具有如下結構的醇與具有如下結構的合適的部分保護的二醇反應formulaseeoriginaldocumentpage24其中，-0^表示合適的離去基;以形成具有如下結構的醇formulaseeoriginaldocumentpage24(b)在適當的條件下使醇8與合適的十二烷酸衍生物反應，以形成具有如下結構的酯formulaseeoriginaldocumentpage24(c)在適當的條件下使酯9脫保護，以形成具有如下結構的羥胺:formulaseeoriginaldocumentpage24(d)在適當的條件下部分地保護羥胺lO，以形成具有如下結構的醇:formulaseeoriginaldocumentpage24其中，R2a和R2b如上所限定；(e)在適當的條件下用一種或多種合適的試劑處理醇11，以形成具有如下結構的磷酸酯-y^CH2)6CH3cv(ch2)10ch3其中，R"是氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基、雜環炔基、芳基或雜芳基、亞磷酸酯氧保護基或磷酸酯氧保護基；和R3a和R3b各自獨立地是氫或合適的氮保護基，或者R3a和R3b—起形成5-或6-元雜環；其中R^和R"不同時為氫；和(f)在適當的條件下4吏12部分地脫保護，形成胺l:在某些實施方案中，出現的每個R"獨立地是氫、dC6的烷基、C3~C6的烯基、C3~C6的炔基或亞磷酸酯氧保護基或磷酸酯氧保護基。在某些示例性的實施方案中，出現的每個R"是烯丙基。在某些實施方案中，R"和R"各自獨立地是氫、烷基、烯基、-C(-O)RX、-C(=0)ORx、-SRX、S02Rx，或者R2a和R2b一起形成具有二CRXRy結構的部分，其中R"和R"不同時為氫並且RX和Ry各自獨立地是氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基、雜環炔基、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、-(:(=0)1^或-21^，其中z是-o-、-s-、-NRB，其中出現的每個RA和RB獨立地是氬或烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基、雜環炔基、雜脂肪族、雜脂環族、芳基或雜芳基部分。在某些示例性的實施方案中，R"是氫且R"是-C(-0)ORX，其中Rx是取代的或未取代的低級烷基。在某些其它示例性的實施方案中，Rh是氫且R"是-CeO)0出u。在某些示例性的實施方案中，f是甲苯磺醯基。在某些實施方案中，步驟(b)的十二烷酸衍生物是十二烷酸。在某些實施方案中，步驟(b)的試劑是十二烷酸並且用於使醇8反應的反應條件包括鹼。在某些實施方案中，所述鹼是4-二甲氨基吡啶(DMAP)。在某些實施方案中，步驟(b)的反應條件包括羧酸活化劑，例如DCC。在某些實施方案中，所述羧酸活化劑是l-[3-(二甲氨基)丙基l-3-乙基碳二亞胺。在某些實施方案中，步驟(c)的脫保護反應條件包括催化氫解和合適的溶劑。在某些示例性的實施方案中，步驟(c)的脫保護反應條件包括H2和Pd/C。在某些示例性的實施方案中，溶劑是異丙醇(IPA)。在某些示例性的實施方案中，R^是氫且R化是-C^O)0出u,步驟(d)的反應條件包括二碳酸二叔丁酯和合適的溶劑。在某些實施方案中，所述溶劑是醇。在某些示例性的實施方案中，溶劑是異丙醇(IPA)。在某些實施方案中，步驟(e)包括(i)原位形成具有如下結構的氨基亞磷酸酯(phosphoramidous其中，Rla、R2a、R2b、R3a和R3b如上所限定。在某些其它實施方案中，處理步驟(e)包含磷醯化劑，並導致氨基亞磷酸酯13的原位形成。在某些示例性的實施方案中，所述磷醯化劑是在二烷基胺存在下的烯丙基四異丙基亞磷醯二胺(tetraisopropylphosphorodiamidite)。在某些其它實施方案中，處理步驟(e)包含三氟乙酸吡啶鏃。在某些示例性的實施方案中，二烷基胺是二其中R"和R"獨立地是低級烷基；和(ii)原位形成具有如下結構的亞磷酸酯:異丙胺並且所述氨基亞磷酸酯13具有如下結構formulaseeoriginaldocumentpage27在某些實施方案中，處理步驟(e)包括原位形成氨基亞磷酸酯13,隨後與具有如下結構的保護的乙醇胺反應formulaseeoriginaldocumentpage27其中，Rh和R"各自獨立地是氬或合適的氮保護基，或者1133和R"—起形成5-或6-元雜環；其中R^和R化不同時為氫。在某些示例性的實施方案中，Rh和R化各自獨立地是氫、烷基、烯基、-C(=0)Rx、-C(=0)ORx、-SRX、S02Rx，或者Rh和R3b—起形成具有-CRXRy結構的部分，其中Rh和R"不同時為氫並且W和Ry各自獨立地是氫、烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜烷基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基、雜環炔基、雜脂肪族、雜脂環族、芳基、雜芳基、-C(-O)RA或-ZRA，其中Z是-O-、-S-、-NRB,其中出現的每個RA和RB獨立地是氫或烷基、烯基、炔基、環烷基、環烯基、環炔基、雜垸基、雜烯基、雜炔基、雜環烷基、雜環烯基、雜環炔基、雜脂肪族、雜脂環族、芳基或雜芳基部分。在某些示例性的實施方案中，R^是氫且R"是-CeO)ORX,其中Rx是芳烷基。在某些其它示例性的實施方案中，R3a是氫且R3b是-C^O)ORX，其中RX是9-藥甲基(即，R3b是Fmoc)。在某些示例性的實施方案中，處理步驟(e)包括氨基亞砩酸酯13與保護的乙醇胺15的原位反應，其中R"是氬且RSb是Fmoc,並且反應條件包括乙酸和三氟乙酸吡啶鏃。在某些實施方案中，處理步驟(e)包括亞磷酸酯14的原位形成，隨後在合適的氧化劑的存在下氧化形成磷酸酯12:formulaseeoriginaldocumentpage28在某些示例性的實施方案中，所述氧化劑是11202。在某些實施方案中，R"是氫且R"是-C(-0)0,Bu，步驟(f)的反應條件包括二烷基胺和合適的溶劑。在某些示例性的實施方案中，二烷基胺是二曱胺。在某些示例性的實施方案中，溶劑是THF。在某些實施方案中，中間體6-13、13a和14具有如下的立體化學O八N眾'(CH2)6CH3'OHx1CT(6a)HO。H2<CH2)SCH3(7a)R2a\,HON'0、a/{CH2)6CH3CX^(CH2)10CH3o(10a)眾OH(8a)'(CH2)6CH3O/(CH2)10CH3.0、a/(CH2)6CH31ar2《,R。\Yo(11a)R3、丁S、N乂CH2)6CH36Y(CH2)10CH3(12a)fU、(13a)R1aO:)6CH3、廣廣N'R2bR化。RVR:Oy{CH2)10CH3o(13b)R、OR3bCy(CH2)10CH3(14a)合成綜述本領域技術人員可利用已經存在的磷脂化學的文獻，與本文包含的信息相結合，以指導用於合成E6020及其立體異構體的合成策略、保護基以及其它材料和方法。各種專利文獻和在此引用的其它參考文獻在製備特定的單糖初始原料方面提供有益的背景資料。具體地，在6,551,600、6,290,973和6,521,776中描述了特定的試劑和初始原料，其全部內容在此通過引用併入。此外，本領域技術人員可關注該文獻提供的關於用於合成E6020及其立體異構體的示例性的中間體的具體指導和實施例。在E6020合成中的上述化合物有庚基和十一烷基側鏈。在具有不同烷基鏈長度的E6020類似物的合成中，通過使用合適的試劑，這些側鏈可以具有不同的長度。因此，本發明涉及具有下式(15)的化合物formulaseeoriginaldocumentpage29O(15)在式(15)中，A是-(CH2)x-0-或共價鍵，n是0或l，x為l6。當A是-(CH2)x-0-時，亞甲基連接到NR化R化的氮原子上，且氧連接到亞磷酸酯或磷酸酯基團的磷原子上。優選地，x為24，並最優選為2。當n是0時，式(15)的化合物含有亞磷酸酯基團。當n是l時，式(15)的化合物含有磷酸酯基團。Rh是氫、C廣C6的烷基、C3C6的烯基、C3C6的炔基或亞磷酸酯氧保護基或磷酸酯氧保護基。所述保護基在本領域內是已知的，其示例性的列舉如上所述。特別優選的基團R"是烯丙基。在式(15)中，R^和R"之一是H，另一個是一價氮保護基；或者R"和R2b—起是二價氮保護基。對於Rh和R3b來說，當A是-(12)-0-時，R"和RSb之一是H,另一個是一價氮保護基；或者R^和R"—起是二價氮保護基。當A是共價鍵時，Rh和R"獨立地選自C廣Q的烷基或者一起是-(CH2)4-、-(12)5-或-((:112)20(032)2-。優選地，當A是共價鍵時，R"和RSb是C2-C6的烷基，例如乙基、丙基或丁基並更優選為異丙基。在式(15)的化合物中，與Rh和R化連接的氮上的保護基可以在選自酸性、鹼性、氧化和還原條件的第一條件下脫除；與Rh和R^連接的氮上的保護基可以在選自不同於所述第一條件的其餘三種條件的第二條件下脫除。優選的氮保護基選自Boc、Fmoc、TROC、TMS-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基、(C6H5)2C=、四氯鄰苯二醯胺或疊氮化物。一般而言，有四種類型的條件可用於脫除氮保護基，即酸性、鹼性、氧化或還原條件。在優選實施方案中，在這四種條件之一下選擇性地脫除一個氮保護基，並使用剩下的三種條件之一選擇性地脫除另一個氮保護基。在一個實施方案中，分別用溫和的酸性或溫和的鹼性條件脫除氮保護基。與R2a和R2b連接的氮可用Boc基團保護且與R3a和R3b連接的氮可以用Fmoc基團保護，或者反之亦然。Boc基團可選擇性地在酸性條件下(在室溫下在例如二氯甲烷的溶劑中的甲磺酸、三氟乙酸或甲酸)脫除。Fmoc基團可在當使用在溶劑例如THF中的仲胺如哌咬或二甲胺時在室溫下選擇性地脫除。作為替代方案，與1123和R"連接的氮可用Troc基團保護且與R3a和R"連接的氮可以用Fmoc基團保護，或者反之亦然。Fmoc基團可在如上所述的條件下選擇性地脫除，Troc基團可在還原條件(例如在THF、水中的鋅)下斷裂。在另一個實例中，與Rh和R化連接的氮可用Troc基團保護且與Rh和R"連接的氮可以用Boc基團保護，或者反之亦然。Troc基團可在還原條件(例如在THF、水中的鋅)下斷裂，Boc基團可在如上所述的條件下選擇性地脫除。R4是C廣d2的烷基或C廣d2的烯基。114是C廣Cu的烷基，優選為CsC9的烷基，更優選為C7的烷基，並最優選為正庚基。R5是C廣ds的烷基或C廣ds的烯基。R5是C廣ds的烷基，優選為C7d3的烷基，更優選為Cu的烷基，並最優選為正十一烷基。式(15)的化合物的鹽可以在合成過程中出現，或者也可以通過使式(I)的化合物與酸或鹼反應得到。優選為酸加成鹽。優選的式(15)的化合物如下(a)其中，A是-(CH2)2-0-,n是0，R4是Q的烷基，並且R5是Cn的烷基；(b)其中，A是-(CH2)2-0-，n是l,114是<:7的烷基，並且RS是Cn的烷基；(c)其中，A是共價鍵，n是0，W是C7的烷基，並且RS是Cn的烷基；和(d)其中，A是共價鍵，n是0,Rh和R"各自為異丙基，114是<:7的烷基，並且R5是Cu的烷基。這樣的中間體用於製備具有下式(16)的E6020類似物和前體formulaseeoriginaldocumentpage31在式(16)中，如上式(I)所述的，n是0或l。R"是氫、dC6的烷基、C2C6的烯基、C2C6的炔基、亞磷酸酯氧保護基或磷酸酯氧保護基。優選的用於基團R"的取代基與上面討論的那些相同。例如，R2a和R2e之一是H,另一個是一價氮保護基或《(0)012(:(0)116;或者Rh和R2e—起是二價氮保護基。除了Rh或R"之一也可以優選為-C(0)CH2C(0)R6之外，優選的用於R2a和R2e的基團與上面討論的用於R2a和R2b的那些相同。R4是C5d2的烷基或C5Cu的烯基，具有與式(15)相同的優選基團。115和116獨立地是(:5~(:15的烷基或Csds的烯基，具有與上述用於RS的那些相同的優選取代基。優選的式(16)的化合物如下(a)其中，n是l，R"是C7的烷基，並且RS是Cu的烷基；(b)其中，n是l，R"是烯丙基，iP是氫，R"是Boc，R4是C7的烷基，並且R7是Cu的烷基；(c)其中，n是1，R2a是氫，R2e是-C(0)CH2C(0)R6,R4是C7的烷基，R5是Cu的垸基，並且R6是Cu的烷基；(d)其中，n是0，R"是烯丙基，11251是氫，R"是Boc，R4是C7的烷基，並且R5是Cn的烷基；(e)其中，n是1，R"是烯丙基，Rh是氫，R"是氫，R"是C7的烷基，並且RS是Cu的烷基；和(f)其中，n是0，R"是烯丙基，R2a是氫，R2e是-C(0)CH2C(0)R6,R"是C7的烷基，RS是Cn的烷基，並且I^是Cu的烷基。式(16)的化合物的鹽可以在合成的過程中出現，或者也可以通過使式(I)的化合物與酸或鹼反應得到。優選為酸加成鹽。本發明還包括式(17)的化合物(17)在式(17)中，R是氫或d~C6的烷基並優選為氫。式(17)中的R2a和R化之一是H,另一個是一價氮保護基；或者Rh和R化一起是二價氮保護基。Rh和R"的優選基團是用於上述式(15)的那些。R"是Cs-C12的烷基或C5~C12的烯基且R5是C5~C15的烷基或C5~C15的烯基。R4和RS的優選基團也是用於上述式(15)的那些。優選的式(17)的化合物包括如下這些化合物(a)其中，R是氫，R2a和R"是氫，114是(:7的烷基，並且RS是Cu的烷基；和(b)其中，R是氫，Rh是氫，R"是氮保護基，R"是C7的烷基，並且RS是Cu的烷基。本發明還包括式(18)的化合物O在式(18)中，114是C5~C12的烷基或C5~C12的烯基；並且115是C5~ds的烷基或Csd5的烯基。W和I^的優選基團如上所述。優選的式(18)的化合物是ER-819509。用於實施本發明的合成方法的實例如下所示，在合成路線1~5和本文的具體實例中詳述。應該理解，在此所述的方法可適用於在此公開的化合物中的每一個及其等同物。此外，試劑和初始原料對本領域技術人員是公知的。雖然下面的合成路線描述特定示例性的中間體和保護基，但是應該理解使用可替代的初始原料、保護基和/或試劑會產生其它中間體，這被認為落在本發明的範圍內合成路線1formulaseeoriginaldocumentpage33在本發明的某些示例性的實施方案中，酯ER-81卯59的製備由三個步驟實現，用合適的基團選擇性地官能化二醇ER-028694,由此將伯羥基轉化為離去基。例如，二醇ER-028694的伯羥基被曱苯磺醯化以得到相應的加合物ER-028695。然後甲苯磺醯酯ER-028695與醇ER-807277在鹼(例如NaHMDS)存在下偶合，以得到相應的醚ER-806158。用月桂酸酯化醇ER-806158,隨後氬解苯基二氫喁唑基團，得到羥胺ER-819120。氨基的Boc保護得到ER-819302。formulaseeoriginaldocumentpage34formulaseeoriginaldocumentpage35階段9:TFA.階段IO:3-氣代-十四烷酸，EDC,DMF.階段ll:Pd(PPh3)4,PhSiH3.如在合成路線2和3中所描述的，可以用6步將Boc-保護的ER-819302轉化為E6020。例如，在雙(烯丙氧基)二異丙基氨基膦和二異丙胺存在下磷酸化ER-819302,隨後與FmocNH(CH2)2OH原位反應並氧化(例如，過氧化氬)，以形成磷酸化的中間體ER-819344,其在適當的條件下(例如，Me2NH)脫保護時形成脫保護的中間體ER-819385。ER-819385與光氣在適當條件下(例如，在NaHC03水溶液存在下在曱苯中的20%光氣)的反應導致二砩酸酯ER-819409的形成。使用合適的酸例如TFA使在ER-819409上的Boc-保護的仲胺脫保護，得到二胺中間體ER-807284。在偶聯劑例如EDC和DMAP的存在下用3-氧代-1-十四烷酸醯胺化游離胺，得到倒數第二個產物ER-807285。在過量的三苯基膦和質子源(苯基矽烷)的存在下利用鈀(0)試劑例如四(三苯基膦)合鈀(0)使烯丙基磷酸酯脫保護，得到可被純化(例如，合適的離子交換色譜條件，隨後用NaOAc水溶液處理)的所希望的粗產物，以得到所希望的4匕合物E6020。應該理解，在上述合成路線1、2和3中所描述的反應中的每一個可以利用所述的用於合成上述各種類型的示例性中間體的試劑和條件實施，或者其可使用其它可用的試劑、保護基或初始原料改性。例如，各種脲形成條件、磷酸化和胺保護/脫保護條件在本領域是公知的。一般地,參見March,AdvancedOrganicChemistry,第五版，JohnWiley&Sons,2001;和"ComprehensiveOrganicTransformations,aguidetofunctionalgrouppreparations",RichardC.Larock,VCHpublishers,1999;其全部內容在此通過引用併入，和"ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis，，第三版Greene,T.W.和Wuts，P.G"Eds"JohnWiley&Sons,NewYork:1999，其全部內容在此通過引用併入。總之，本發明以比先前報導的方法明顯更少的、產率更高的步驟提供E6020的合成。本發明的方法以高的總產率並通過高效的路線提供標題化合物。下面的有代表性的實例用來幫助解釋本發明，既不是用來也不應該被解釋為限制本發明的範圍。當然，除了在此所示的和描述的之外，本發明的各種變化及其許多進一步的實施方案從該文獻的全部內容(包括下面的實施例)和在此引用的科技和專利文獻的參考內容來看對於本領域技術人員是顯而易見的。還應該理解，那些被引用的參考資料的內容通過引用在此併入以幫助解釋現有技術。下面的實施例包含可適於以本發明的各種實施方案及其等同方案實施本發明的重要的附加信息、具體實例和指導。具體實施方式進一步通過實施例來解釋本發明的化合物及其製備，所述實施例舉例說明製備或使用這些化合物的方法的一部分。但是，應該理解，這些實施例不限制本發明。本發明的變化方案視為落在本發明的在此所描述的和所要求保護的範圍內。進一步通過實施例來解釋本發明的化合物及其製備，所述實施例舉例說明製備或使用這些化合物的方法的一部分。但是，應該理解，這些實施例不限制本發明。本發明的變化方案(現在已知的或進一步發展的)視為落在本發明的在此所描述的和所要求保護的範圍內。利用免疫佐劑E6020的製備來舉例說明，下面的實施例包括利用本發明的方法和化合物來合成免疫佐劑化合物的合成前體。formulaseeoriginaldocumentpage37本領域技術人員將認識到E6020的許多類似物可通過本發明的方法和由本發明的化合物製備，包括但不限於美國專利6,551,600、6,290,973和6,521,776中描述的那些E6020類似物，所述文獻的全部內容在此通過引用併入。因此，應該理解，下面通過實施例的方式描述的合成方法不限制通過所附的權利要求限定的本發明的範圍。一般的反應程序除非特別說明，否則使用磁力攪拌棒攪拌反應混合物。惰性氣氛是指乾燥的氬氣或乾燥的氮氣。通過對經過適當處理的反應混合物樣品進行薄層色鐠、質子核磁共振或高壓液相色鐠(HPLC)分析來監控反應。下面所列的縮寫用於在此提及的一些通用有機試劑ATP:烯丙基四異丙基亞磷醯二胺DMF二甲基曱醯胺EA:乙酸乙酯EDC:l-[3-(二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽HBTU:O-苯並三唑-N,N,N'，N'-四甲基脲-六氟磷酸酯HOBT:1-羥基苯並三唑IPA:異丙醇MTBE:曱基叔丁基醚NaHMDS:六甲基二矽氮烷鈉Pyr.TFA:三氟乙酸吡啶鑥TBME:叔丁基甲基醚TFA:三氟乙酸THF:四氫呋喃TsCl甲苯磺醯氯實施例1:ER-028695的製備HO^-^(CH3)6CH3-/V^-^(CH3)6CH3ER-0286MER-02B695製備l:用9分鐘的時間將在乾燥的四氫呋喃(THF)(1041g)中的ER-028694(952g,5.46mol)加到在0。C下、氮氣氛下、乾燥的22L反應器中的在乾燥的THF(2408g)中的對甲苯磺醯氯(1704g，8.938mol)的攪拌溶液中。用無水THF(364g)將殘留的ER-028694衝洗到反應器中。用19分鐘的時間將三乙胺(1.35Kg，13.4mol)逐滴地加到澄清的黃色反應溶液中，在此期間溶液變混濁。用乾燥的THF(30g)將殘留的三乙胺衝洗到反應混合物中。在0。C下再攪拌15小時17分鐘之後，用緩慢加入的l.OM的鹽酸(2120g)用36分鐘的時間結束反應，溫度從O.rC變為5.9°C。用3分鐘的時間加入鹽水(785mL)，再繼續攪拌5分鐘，隨後用THF(0.57Kg)將反應混合物(~22L)轉移到50L的處理反應器中。有機層與水層分離(pH=6)。用1.0M的鹽酸(2120g)和鹽水(785mL)的混合物洗滌有機層。然後再用水(2120mL)和鹽水(980mL)的混合物洗滌有機層。將有機層轉移到乾淨的22L的反應器中，隨後在氮氣氛下加入THF(1.6Kg)。在攪拌下將溶液冷卻到O'C(水水浴)，隨後用7分鐘的時間加入10%的NaOH水溶液(2.04Kg),溫度從-0.4。C變為2.3°C。在用6分鐘的時間加入28%的NH40H水溶液(935g)之後，溫度從1.9。C變為12.5°C,攪拌混合物25分鐘，隨後加入庚烷(l.lKg)。用庚烷(0.532Kg)將反應混合物轉移到50L的處理反應器中，充分混合，靜置，排出水層(pH14)。用10%的NaOH水溶液(2.04Kg)洗滌有機層，然後用水(2.04Kg)洗。蒸發有機層的溶劑(在真空室中(housevacuum))並使殘餘物與庚烷(l.lKg)共沸，得到澄清的橙色油狀物。將分離出來的物質(1.839Kg)不經進一步純化而用於下一步。ER-028695的分析數據iH-NMR(CDC13,400MHz)S0.88(t,J=7.1Hz，3H),1.2-1.5(m,12H)，1.57(bs，IH)，1.6-1.7(m，1H)，1.8-1.9(m,1H)，2.45(s，3H)，3.7-3.8(m，1H)，4.1-4.2(m，1H),4.2-4.3(m,1H)，7.35，(d，J=7.8Hz，2H)，7.80(d,J=7.8Hz，2H)。MS國APESI(M+Na)C17H28Na04S計算值351.16實測值351.23。HPLC:ER-028695:ER-817864比為87.11%:11.71%。製備2:將無水THF(250mL)在氮氣氛下加到對甲苯磺醯氯(161.1g，0.845mol)的攪拌溶液中。然後在22。C的反應器溫度下加入ER-028694(卯.Og,0.516mol),隨後加入三乙胺(176mL，1.26mol)，得到澄清的黃色溶液。幾分鐘後溶液變混濁。攪拌15小時33分鐘後，取出100jiL樣品。GC分析顯示轉化率為100%。再取出100fiL樣品，並用2.0mL生產用水和3.0mL庚烷萃取。用生產用水(2.0mL)洗滌有機層兩次，然後用鹽水(2.0mL)洗滌。在減壓下蒸發所得的有機層，得到無色油狀物。無色油狀物的'H-NMR分析顯示ER-028694/ER-028695/ER國817864的比為1.00/91.93/7.07。確定反應完成後，加入1.0M的鹽酸溶液，溫度從21.4。C變為26.8°C,然後加入鹽水(74.2mL)。有機層(~0.6L)與水層(~0.4L，pH二lO)分離，並用1.0M鹽酸(201mL)和鹽水(74.2mL)的混合物洗滌，隨後用生產用水(201mL)和鹽水(92.7mL)的混合物洗滌。然後將有機層轉移到乾淨的反應器中，隨後在氮氣氛下加入THF(200mL)。伴隨攪拌將溶液冷卻到10。C，然後用2分鐘的時間加入10%的NaOH7JC溶液(193g)，同時保持反應溫度低於25。C(溫度從15.3。C變為2L3。C)。然後用5分鐘的時間加入NH4OH水溶液(88.4g)(觀察到延遲放熱)，同時仍然保持反應溫度低於25。C(溫度從15.5。C變為22.7。C)。在攪拌下將反應混合物溫熱到20。C，持續15分鐘。用庚烷(200mL)從水層提取出反應混合物，水層的pH為14。用10%的NaOH水溶液(193g)洗滌有機層，然後用生產用7JC(193mL)洗滌。用庚烷(200mL，29~32°C，4.4託)蒸發溶劑(在29~32°C，20託)並分離出殘餘物，得到澄清的橙色油狀物。將分離出來的物質不經進一步純化而用於下一步(假設100。/。的產率)。無色油狀物的iH-NMR分才斤得到ER-028694/ER-028695/ER-817864的比為0.9/90.9/8.2。KF為13.0ppm。實施例2:ER-806158的製備ER-807277。HER~806158製備l:用33分鐘的時間將在THF(3.300Kg)中的l.OM雙(三甲基二甲矽烷基)醯胺鈉加到在-rC下、氮氣氛下、乾燥的22L反應器中的在乾燥的THF(10.580Kg)中的ER-807277(1.177Kg,6.642mol)的攪拌溶液中，同時保持反應溫度為-o.84.rc。再在-o.rc下攪拌溶液17分鐘後，用5分鐘的時間將在乾燥的THF(0.968Kg)中的粗ER-028695(1.089Kg，3.316mol)加到反應溶液中，保持溫度在-0.1~3.9。C。用乾燥的THF(0.253Kg)將殘留的ER-028695衝洗到反應器中。將最終的反應混合物溫熱到室溫，在此期間澄清的橙色反應溶液變為懸浮液(約在19。C時)。在室溫下攪拌3小時31分鐘後，將完全反應混合物冷卻到0.rC,並將其傾入在50L處理反應器中的冷飽和NH4C1水溶液(4.7Kg)和鹽水(1.65L)的混合物中(放熱的，Tmax=16.2°C)。用水(2xl.0L)然後用甲苯(3.769Kg)將殘留的反應混合物沖洗到處理反應器中。攪拌混合物5分鐘後，使反應混合物靜置5分鐘，並排出所得的底部水層&11=9)。在30~34°C下在真空室內部分蒸發有機層的溶劑。用最少量的THF(0.4Kg)衝洗容器並將衝洗液與產物合併。為方便轉移，在加熱下(浴溫-30~34。C)加入曱苯(0.4Kg)，以使固體分散為漿狀物。在氮氣氛下將粗漿狀物轉移到乾淨的乾燥的22L反應器中，隨後在~19。C下在快速攪拌下加入庚烷(7.503Kg)。再攪拌6小時22分鐘後，對混合物進行真空過濾(FisherP5濾紙，編號#09-801G),並分別用0.99Kg、1.02Kg和1.01Kg的庚烷洗滌濾餅(5.4L)三次。在3034。C下在真空室內蒸發合併的濾液和洗滌液，得到混濁的橙色油狀物(1.207Kg)。在過濾漏鬥中的白色濾餅是ER-807277。將粗產物(1.206Kg)溶於甲基叔丁基醚(MTBE)/庚烷4/4(700mL)中，通過中號玻璃料過濾漏鬥過濾，然後用MTBE/庚烷4/4(300mL)沖洗濾餅，得到澄清的黃色濾液。用調到840mL/分鐘的流量(25磅/平方英寸溶劑壓力)，將粗ER-806158溶液裝載到經過預先調節的矽膠柱(用MTBE(10.46Kg),然後用MTBE/庚烷-l/4(3.140Kg/11.606Kg)處理的Biotage150L(5.62Kg,空隙體積=7.07L)柱)上。裝栽後，用MTBE/庚烷4/4(0.148Kg/0.547Kg)衝洗柱，隨後用MTBE/庚烷-l/4(2.09Kg/7.740Kg)、MTBE/庚烷-2/3(2.094Kg/2.904Kg)、MTBE/庚烷=7/3(3.661Kg/1.448Kg)並且最後用MTBE(40.298Kg)洗脫。在整個色語過程中，收集了約350mL的級分。濃縮合併的含有產物的級分並使用庚烷(0.540Kg)共沸乾燥，隨後在33'C下在真空室內乾燥1小時13分鐘，得到澄清的橙色油狀物(0.793Kg,71%)，純度為98.32面積％。ER-806158的結晶將2.376Kg的純化的ER-806158溶於庚烷(8.121Kg)中，並在氮氣氛下轉移到乾淨的、乾燥的22L反應器中，隨後攪拌。以每0.5小時4。C逐漸地將澄清的黃色溶液冷卻到-15'C。所得的白色懸浮液在-15匸下再攪拌1小時，隨後在冷卻的過濾漏鬥和濾紙上真空過濾，同時使氮氣層覆蓋濾餅。用上述過濾的冷庚烷(-12.3。C，1.387Kg)洗滌所希望的固體，並使濾餅保持在真空下14小時13分鐘(T-14.918.8'C)，同時使氮氣層覆蓋固體的上部。合併母液、洗滌液和在反應器中溶解殘留的ER-806158的溶劑以重複利用。得到2.068Kg，87.0%產率ER-806158的分析數據純度99.84wt/wt%手性純度99.72%*KF:0.21%*庚坑268ppmiH-匪R(CDC13)60.88(t，J=6.9Hz，3H)，1.2-1.6(m，12H),1.6-1.7(m,1H)，1.7-1.8(m,1H)，3.21(bs,1H),3.6-3.7(m,3H),3.7-3.8(m，2H),3.5-3.6(m，2H),4.2-4.3(m,1H),4.5(m,2H),7.42,(t，J=7.6Hz，2H),7.49,(dd，J=6.9，7.8Hz,1H),7.95(d，J=7.3Hz,2H)。元素分析(EA):C3oHs9N06計算值C，72.04;H，9.37;N;4.20實測值:C,71.83^H,9.305N,4.08。熔點(DSC)開始，26.7。C;最大，29.5。C。製備2:假設100%的產率，根據用在實施例1的步驟2中的初始ER-028694的量計算用在反應中的ER-028695的量(mol)。在氮氣氛下將ER-807277(178.3g，1006mmol)加到乾淨的乾燥的5L反應器中。伴隨攪拌加入乾燥的THF(1.8L)以製備澄清的秉色溶液，並將該溶液冷卻到0。C。用20分鐘的時間加入NaHMDS/THF(1.0M，553mL)，並使反應溫度保持在低於或等於5°C(3.8~1.3'C)。攪拌溶液10分鐘，然後冷卻到-5'C。在氮氣氛下隨著攪拌用乾燥的THF(165mL,1vol.)將粗ER-028694(計算為165g，503mmol)轉移到乾燥的乾淨的燒瓶中，得到澄清的橙色溶液。然後用6分鐘的時間將ER-028695/THF溶液加到反應溶液中，溫度從-3.2。C變為0.4°C。用乾燥的THF(40mL)將殘留的ER-028695衝洗到反應器中，並在溫水浴(23'C)中將反應混合物溫熱到室溫。在溫熱過程中，澄清的橙色反應溶液變為懸浮液。在18.7~21.3。C下攪拌1.75小時後，取出樣品(10fiL)，加到1.0mLMeCN中，並通過2nm的針筒式過濾器過濾，得到無色的澄清的濾液。HPLC分析(TM-779)檢測到轉化率為98.2%。在室溫下完全攪拌3小時後，HPLC分析顯示轉化率為99.5%。將飽和的NH4C1水溶液(0.66L)—次全部加入(放熱的，18.9~26.0。C)，然後加入生產用水(0.30L)、鹽水(0.25L)和甲苯(0.66L)。加完後繼續攪拌5分鐘。在29~32。C下在減壓下部分蒸發上部有機層的溶劑(2.6L)，得到漿狀物(481.7g)，排出下部的水層(1.4L,pH-11)。在氮氣下將漿狀物轉移到乾燥的乾淨的5L反應器中。在室溫下在快速攪拌下加入庚烷(1.65L)，持續攪拌14小時。對混合物進行真空過濾(中號濾紙)，用庚烷(0.33L)洗滌所得濾餅(0.52L)，並收集黃色的濾液(~2.8L)。在減壓下蒸發溶劑(2932。C)，得到橙色的油狀物(177.9g)。將粗產物(177.9g)溶於TBME/庚烷-l/4(178mL)中，並用調整過的~170mL/分鐘(18磅/平方英寸的溶劑壓力)的流量裝栽到用TBME(2.1L)、然後用TBME/庚烷-l/4(3.15L)調節的Biotage75L珪膠(834g，空隙體積-1.05L)的柱上。收集級分12(各個級分為~350mL)。裝載後，用TBME/庚烷-l/4(178mL)沖洗柱並用TBME/庚烷4/4(2.1L)洗脫，收集級分2~8;用TBME/庚烷-2/3(1.05L)洗脫，收集級分811;用TBME/庚烷-7/3(1.05L)洗脫，收集級分11~14;並用TBME(8.4L)洗脫，收集級分15~39。分析所收集的級分(TLC,珪膠F254;流動相，TBME;顯譜，UV和茴香醛溶液)，合併含有沒有ER-807277汙染的級分(14~35)的產物。用庚烷(2932。C,10.3託)使溶劑蒸發(29~32。C,80託)，得到澄清的橙色油狀物(114.4g),其在冷卻到室溫時固化。HPLC分析(TM-779)檢測到96面積％。在氮氣氛下伴隨攪拌用庚烷(572mL)溫熱(2932。C)橙色固體(114.4g,1wt)並轉移到1L的乾燥的乾淨反應器中。將溶液冷卻到14'C,攪拌0.5小時，並用ER-806158晶體(0.H2g)作為種晶。繼續攪拌0.5小時，在此期間可以見到固體顆粒。將反應混合物逐漸冷卻到-10。C(每0.5小時4'C)，進一步冷卻到-15'C，同時繼續攪拌1小時。通過冷(~-20'C)庚烷(200mL)得到的冷的中號過濾漏鬥，通過該漏鬥真空過濾反應混合物，隨後用冷庚烷(約-20到-15'C)洗滌。繼續施加真空1.5小時，並將氮氣層施加到濾餅的頂部。然後將所得的白色粗糙粒狀固體(98.4g,0.295mol)轉移到瓶中。分析結果顯示wt/wt%,99.95;純度，99.68，殘留的庚烷，19.1ppm;KF，1.04%。DSC顯示27。C時開始熔融。手性HPLC分析(TM-573)檢測到99.8面積％。實施例3:ER-81卯59的製備formulaseeoriginaldocumentpage43製備1:將4-二曱氨基吡啶(51g，0.417mol)加入到在氮氣氛下的在乾淨的乾燥22L燒瓶中的在乾燥二氯甲烷(CH2Cl2)(3710g)中的N-(3-二甲氨基丙基)-N，-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(904g，4.176mol)、月桂酸(純化的，881g,4.398mol)和ER誦806158(1400g，4.198mol)的攪拌溶液中。攪拌1小時13分鐘後，反應混合物變為輕微混濁的黃色溶液，且反應溫度達到26.7'C的最高值。6小時34分鐘後，發現反應完成98.9%，此時將另外的N-(3-二甲氨基丙基)-N，-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(303g,1.581mol)一次性全部加入。在室溫下總計攪拌20小時50分鐘後，將MeOH(5566g)—次全部加入到黃色的反應懸浮液中(微吸熱的，Tmin-17.1°C)。部分溶劑蒸發(在真空室內，2932-C)除去CH2Cl2(3.71Kg)，隨後用等份的庚烷(2x2.86kgea.)萃取。蒸發庚烷萃取液(在真空室內，3035。C)並使用庚烷(0.75Kg)共沸乾燥。將產物(2.192Kg)溶於庚烷(3.00Kg)中，並裝載到珪膠柱(用MTBE/庚烷4/1(15.0Kg)預處理過的Biotage150L矽膠(5.62Kg))上。用MTBE/庚烷-l/1(31.3Kg.)以調整過的~0.8417分鐘(溶劑壓力=22磅/平方英寸)的流量洗脫產物，收集約350mL洗脫液/級分。合併含有產物的級分並濃縮乾燥和真空乾燥(16。C，在真空室內，16小時13分鐘)，得到作為澄清的淺黃色油狀物的ER-81卯59(2.102Kg,86.4%產率)。ER-81卯59的分析數據參HPLC分才斤99.76面積％。*KF:0.36%庚烷725ppm工H-NMR(CDC13)S0.881(t，J=7.1Hz，3H)，0.884(t，J=6.9Hz，3H)，1.2-1.3(m，26H)，1.5-1.6(m，2H),1.6-1.7(m,2H)，1.8-1.9(m,2H)，2.28(t，J=7.6Hz，2H)，3.4-3.6(m,3H),3.69(dd,J=3.7，9.6Hz,1H),4.3-4.6(m，3H)，5.0(m,1H)，7.43，(t,J=7.6Hz,2H)，7.51,(dd，J=6.0，7.3Hz，1H)，7.95(d,J=6.0Hz，2H)。參MS-APESI(M+H)C32Hs4N04計算值516.41實測值516.48TLC:(珪膠F254):MTBE/庚烷-l/l;ER-819059的R產0.51製備2:在氮氣氛下將N-(3-二曱氨基丙基)-N，-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(1.49g，7.77mmol)、ER-806158(2.00g,6.00mmol)、DMAP(0.07g,0.59mmol)和十二烷酸(1.44g,7.19mmol)加到乾燥的50mL燒瓶中。然後在攪拌下加入乾燥的二氯甲烷(6.0mL)。在室溫下繼續攪拌，直到得到微混濁的溶液。攪拌16小時後，取出樣品(IOfiL),並加入到1.5mLMeCN中。HPLC分析(TM-780)檢測到轉化率為95.1%。然後再加入另外量的N-(3-二曱氨基丙基)-N，-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(0.307g,1.60mmol)。再攪拌8h(總共24小時)之後，取出第二樣品(10)並如前所述進行分析。HPLC分析(TM-780)檢測到轉化率為99.6%。再繼續攪拌15小時(總共39小時)，此時取出第三樣品並分析。HPLC(TM-780)分析檢測到轉化率為99.96%。然後加入飽和的NaHC03水溶液(10mL)、鹽水(IOmL)和庚烷(10mL)，同時繼續攪拌0.5小時。觀察到較差的乳狀液。然後加入庚烷(IOmL)，並充分混合，但基本上沒有改善該乳狀液。然後，加入MeOH(3.0mL)並充分混合，但其也基本上沒有改善該乳狀液。使組合物靜置0.5小時，排出在底部形成的乳狀的水層。用TBME(20mL)萃取水層，靜置約15分鐘後排出底部水層。7JC層的TLC分析(TLC，珪膠F254;流動相，TBME;顯譜，UV和茴香醛溶液)檢測到大量產物。再用TBME(20mL)萃取水層，並合併有機層。溶劑蒸發(29~32°C，7.5託)得到澄清的黃色油狀物(3.35g)。將粗產物(3.35g)溶於TBME/庚烷-l/1(12mL)中，並裝栽到用TBME/庚烷-l/1(36mL)預處理過的Biotage12M矽膠(8.99g，空隙體積=11.3mL)柱上。以調整過的~12mL/分鐘的流量洗脫產物，收集15個級分(每個6mL)。分析所收集的級分(TLC，矽膠F254;流動相,TBME/庚烷-l/l;顯鐠，UV和茴香醛溶液)，並合併含有產物的級分(3~15)。溶劑蒸發(2932。C,8.3託)得到澄清的無色油狀物(3.03g)。HPLC分析(TM-780)檢測到99.18面積％。由於較差的乳化而沒有進行水處理。實施例4:ER-819120的製備(CH2)6CH3(X^(CH2)10CH3OER-819鵬C32H53N04分子量515.77H2,Pd/CIPA(CH2)6CH3CX^(CH2)ioCH3OER-819120C25H51N04分子量429.68在氮氣氛下將ER-819059(3.03g,5.87mmol，1wt)和10%Pd/C(0.303g,0.28mmol)加到乾淨的裝有IPA(20.2mL,6.67vol.)的50mL的燒瓶中。在室溫下在快速攪拌下抽空該燒瓶，並用氫(氫壓力保持在0.04巴)吹掃。該抽空-吹掃過程再重複兩次。通過不同樣品的HPLC分析監控反應。反應完成後，約3.5天，抽空燒瓶並用氮氣吹掃三次。通過0.2卞m的針筒式過濾器過濾所得的混合物，並用IPA(2x4.0mL)沖洗。然後合併無色的澄清的濾液，粗產物/IPA溶液用於下一步反應(沒有純化，假設100%產率)。實施例5:ER-819302的製備(CH2)6CH3O、"CH2)10CH3Boc20/IPAOER-819120C25HS1N04分子量429.68(CH2)6CH3(X^(CH2)10CH3OER-819302C30H59NO6分子量529.79根據前述步驟的初始ER-819059計算ER_819120的量(mol)。在氮氣氛下在攪拌下將二碳酸二叔丁酯(1.30g,5.96mmol)—次全部加入到裝有在IPA中的ER-819120(2.52g當量的ER-8189120,5.87mmol，~31.5mL)的50mL燒瓶中。通過HPLC(樣品製備樣品15nL，並加到1.0mL的MeCN中)和TLC(TLC，矽膠F254;流動相，MeOH/CH2Cl2/NH4OH=10/89/l;顯謙，茴香醛溶液或茚三酮溶液)監控反應。TLC僅檢測到較小的ER-819120斑點。加入更多的二碳酸二叔丁酯(0.20g,0.92mmol)。TLC分析沒有觀察到改善。溶劑蒸發(29~32。C:10託)得到無色的澄清油狀物(3.21g)。用TBME/庚烷4/1(36mL，3v.v.)處理Biotage12M矽膠(8.99g，空隙體積=11.3mL)柱。將流量調整為~12mL/分鐘。在將粗產物(3.35g)溶於TBME/庚烷4/1(12mL)後，將其裝載到所述柱上，並用TBME/庚烷=1/1(70mL)洗脫。收集十五個級分(每個~6mL)並分析(TLC,矽膠F254;流動相，TBME/庚烷4/l;顯鐠，UV和茴香醛溶液)。合併級分(3~15)中的產物。溶劑蒸發(2932。C，8.3託)得到無色的澄清油狀物(3.03g)。實施例6:ER-819302的可替代的製備將10%Pd/C(99g=燒瓶1,102g=燒瓶2)加到在兩個乾淨的裝有異丙醇(IPA)(分別為4.647Kg)的12L反應器中的被平均分成兩份的ER-819059(1.970Kg,3.82mol)中。抽空(-0.79巴)燒瓶，然後用氬(0.05巴)吹掃三次，同時攪拌。反應在室溫的氫氣氛(0.04巴)下保持7天16小時，此後抽空(在真空室內)反應並用氮吹掃三次，以除去所有痕量的過量的氫，隨後在氮氣氛下冷卻到0°C。在兩個單獨的燒瓶中，在氮氣氛下將二碳酸二叔丁酯(分別為434g，1.99mol和438g，2.01mol)溶於無7JCTHF(分別為203g)中。用5分鐘的時間將冷卻的ER-819120反應混合物加到各個燒瓶中。用無水THF(分別為40g)將殘留的反應物沖洗到反應混合物中。發現反應是放熱的(4.5到io.rc)並觀察到放氣。將反應溫熱到室溫並繼續攪拌過夜。合併完成的反應並用硅藻土545(1.143Kg，裝載到FisherP524cm的過濾器上)過濾，在氮氣層下用IPA(3.091Kg)衝洗。用IPA(1,417Kg)沖洗反應器中的殘留物並過濾，隨後用IPA(13.46Kg)衝洗濾墊。再用IPA(分別為4.573Kg和6.360Kg)衝洗濾墊兩次。濃縮合併的濾液，隨後用庚烷(7.529Kg)共沸，得到澄清的無色油狀物(2.452Kg;純度為70.57面積％)。將粗產物平均分為四份純化。將粗ER-819302(611g，1wt)溶於庚烷(613g,1wt)，並裝載到Biotage150L矽膠柱[(5.620Kg)，利用700mL/分鐘的流量，用MTBE(10.48Kg)、然後用庚烷(15.51Kg)處理上。用庚烷(340g，0.56wt)沖洗殘留在柱上的ER-819302。用15%MTBE/庚烷(7.102Kg/36.994Kg)、然後用MTBE(15.72Kg)洗脫柱，此時收集約3L每份的級分。使用相同的方法單獨地層析剩下的三等份的粗ER-819302。濃縮來自四份純化產物的合併的所希望的級分並用庚烷(0.5Kg)共沸乾燥，得到作為澄清的無色油狀物的ER-819302(1.9135Kg;在97.86面積％純度下的產率為94.6%)。ER-819302-00的分4斤數據力畫匪R(CDC13)60.89(t,J=6.9Hz,6H)，1.2-1.3(m，26H)，1.46(s,9H),1.5-1.7(m,4H),1.7-1.8(m,1H)，1.8-1.9(m,1H)，2.30(t，J=7.6Hz,6H),3.3-3.4(m，1H),3.48(td,J=6.9,9.6Hz，1H),3.5-3.6(m，2H),3.69(td,J=6.1，7.1Hz,1H)，3.76(d，J=8.2Hz,2H),5.0-5.1(m,1H)，5.2(bs，1H)。MS-APESI(M+Na)C3HS9NNa06計算值552.42實測值552.52KF=0.30%庚烷=6034ppm;MTBE-未檢測到實施例7:ER-819344的製備formulaseeoriginaldocumentpage47製備1:在氮氣氛下在室溫下將三氟乙酸吡啶輸(30.9g，0.160mol)一次全部加到在無水CH2C12(200mL)中的二異丙胺(22.4mL，0.160mol)的攪拌溶液中，微放熱。一旦反應混合物回到室溫，就加入烯丙基四異丙基亞磷醯二胺(51.1mL，0.160mol),隨後攪拌10分鐘。用無水CH2C12(300mL)將ER-819302(84.4g，0.159mol)共沸乾燥若干次，直到確定水含量低於60ppm。將ER-819302溶於二氯甲烷(300mL)之後，緩慢地將溶液加到上述吡啶鑥反應混合物中，使反應溫度保持在20~30°C，隨後用另外的二氯曱烷(IOOmL)沖洗來自反應容器的殘餘物。當反應中間體ER-820116的形成完全(2小時)時，將反應混合物冷卻到0。C，隨後逐滴加入乙酸(18.2mL，0.320mol)，使反應溫度保持在0~15。C。將三氟乙酸吡咬鏃(llg，0.056mol)加到反應混合物中，並攪拌所得的反應10分鐘，之後立即將ER-222581(46.5g，0.164mol)—次性加入。在室溫下攪拌反應混合物2小時，然後將混合物冷卻到0°C，逐滴加入30wt.。/。的在水中的過氧化氬(49mL，0.480mol)，4吏最終的反應溫度保持在010。C(初始放熱很強)。將反應混合物溫熱到室溫，並再攪拌30分鐘，之後將反應混合物冷卻到0°C。通過以使反應溫度保持在010。C的加入速率緩慢地加入10wt.。/。亞硫酸氫鈉水溶液(3.5L)來結束最終的反應混合物。將結束的反應物溫熱到室溫並攪拌，直到用於兩個隨後層的負過氧化物測試(30分鐘)。用MTBE(2.0L)稀釋所得的混合物，攪拌10分鐘，然後轉移到處理容器中。使層分離並用5%的NaHCO3水溶液(2.0L)和鹽水在水中的1:1混合物分別各自洗滌有機層一次。用MTBE(1L)反萃取合併的水層。用無7jc硫酸鈉(100g)乾燥合併的有機層，過濾並濃縮，用MTBE共沸乾燥，得到ER-819344(146.6g，產率為97%，HPLC的純度為91%)。ER-819344的數據分析iH-畫R(CDC13)30.85-0.卯(m,6H)，1.20-1.36(m,26H),1.40-1.65(m，4H),1.44(s,9H),1.70-1.83(m,2H),2.27(t，J=7.6Hz，2H)，3.37-3.57(m，6H),3.卯-4.00(m,1H),4.03-4.10(m，1H),4.11-4.24(m,3H),4.35-4.40(m,2H),4.50-4.60(m，2H),4.94-5.0(m,1H),5，05畫5.15(m,1H),5.22-5.27(m，1H),5.30-5.40(m，1H)，5.85-6.0(m,2H),6.01-6.05(m，1H),7.30(dd,J=7.3，7.8Hz,2H),7.40(dd，J=7.3,7.8Hz2H)，7.61(d，J=7.8Hz，2H),7.76(d，J-7.3Hz,2H)。31P-NMR(CDC13，未校準)0.172，0.564(兩個非對映異構體)MS國APESI(M+Na)CsoH^T^NaOuP計算值937.53實測值937.65。製備2:將ER-819302(1wt,)溶於無水二氯甲烷(3vol.)中。如果水的總量大於或等於0.7mol.%的ER-819302，如通過Kf所確定的，那麼通過利用蒸發溶劑來驅逐水以將水含量降低到令人滿意的水平。將無水二氯甲烷(2vol.)裝到乾燥的反應器中，隨後加入二異丙胺和三氟乙酸吡啶錫(l當量)(加入前在浴中以控制放熱)。攪拌溶液，並在浴中將溫度調到20~25。C。然後將烯丙基四異丙基亞磷醯二胺(l當量)加到溶液中，隨後攪拌5分鐘。然後以可控的加入速率將ER-819302的二氯甲烷溶液加到溶液中，同時保持反應溫度低於30。C(用lvol.的二氯甲烷衝洗)。通過TLC(MTBE/庚烷/Et3N-40/60/l)和HPLC(TM，通過取出30ul反應混合物並用1ml乙腈稀釋來製備樣品)監控反應進程。當ER-819302:ER-820116的比大於95:5時，反應完成，這通常在2小時內發生。在中間體ER-820116形成之後，將反應混合物冷卻到0~10°C,並以保持反應溫度低於15。C的加入速率加入乙酸。將三氟乙酸吡啶鏃(0.4當量)加到反應混合物中，隨後加入ER-222581(1當量)。在室溫下攪拌混合物約20~30分鐘，直到白色懸浮液變為澄清溶液。通過TLC(MTBE/庚烷/Et3N二40/60/l)和HPLC(TM，通過取出30ul反應混合物並用1ml乙腈稀釋來製備樣品)監控反應進程。反應完成後，約1.5或2小時，將反應混合物冷卻到-50。C。然後將30wt.。/。的在水中的過氧化氫(3當量)加到反應混合物中，同時保持反應溫度低於5°C。將反應混合物溫熱到室溫，然後攪拌30分鐘。之後將其冷卻回-50。C,並加入10wt。/。亞石危酸氫鈉水溶液，同時保持反應溫度低於5'C。在加入亞石危酸氫鹽溶液後，再次將反應混合物溫熱到室溫，然後攪拌30分鐘。繼續攪拌，直到反應混合物在過氧化物測試條上指示陰性結果。將甲基叔丁基醚加入到反應中，並攪拌10分鐘。然後將反應混合物轉移到處理容器中並使層分離。如果顯示水層含有產物，則用甲基叔丁基醚反萃取水層。用5%的碳酸氫鈉水溶液洗滌有機層，然後用一半鹽水洗滌(如果水層是混濁的，則有必要用甲基叔丁基醚反萃取)，濃縮有機層(如果其變為乳狀油，則用MTBE進料並真空過濾)。用HPLC和HNMR分析粗ER-819344。最大規模的試驗得到84.4gER-819302,產率為97%，如HPLC所示。實施例8:ER-819385-00的製備formulaseeoriginaldocumentpage50在室溫下將在THF(8.5mL，17.0mmol)中的2.0M的二甲胺加到在THF(1.5mL)中的ER-819344(1.56g,1.70mmol)的攪拌溶液中，並攪拌反應混合物2小時。濃縮完成的反應混合物並用MTBE(15mL)共沸乾燥粗產物兩次。將所得的產物溶於MTBE(30mL)，並用鹽水(7.5mL)洗滌。將最終的有機層濃縮至乾燥，並用MTBE(15mL)共沸一次，得到所希望的、有些不穩定的ER-819385,其不經過純化而用於下一步。製備2:將ER-819344-00(1.56g，1.70mmol)溶於THF(1.5mL)中，並在室溫下加到在THF中的二曱胺商品溶液(2.0M,8.5mL)中，並攪拌2小時。進行TLC分析，顯示ER-819344完全消耗。將U.V.燈和對茴香醛斑點用作顯語技術。然後通過旋轉蒸發技術除去揮發物。用MTBE(2x15mL)共沸粗產物，之後將其溶於MTBE(30mL)並用鹽水(7.5mL)洗滌，以除去任何殘留的低MW的胺(例如，二甲胺、乙醇胺)。沒有得到乳狀液，因為層容易分離。該洗滌之後水層的pH為~10。將有機層濃縮至千燥並用MTBE(1x15mL)共沸，以得到所希望的胺單體ER-819385-00。實施例9:ER-819409-00的製備H2N、Ot)HBoc'OER-819385-00ER-819409-00製備1:將飽和的NaHC03溶液(12mL)加到在CH2C12(15mL)中的粗ER-819385(計算值1.18g，1.70mmol)的攪拌溶液中。將所得的混合物冷卻到0'C,隨後逐滴加入20%的在甲苯中的光氣(465^L，0.935mmol)。將反應溫熱到室溫，攪拌1小時，然後在加入笫二份20%的光氣溶液(210nL，0.425mmol)之前冷卻到O'C。將最終的反應混合物溫熱到室溫，攪拌過夜。加水(15mL)。再攪拌30分鐘後，將結束的反應轉移到分液漏鬥中，分層45分鐘。用CH2C12(30mL)萃取水層，並濃縮乾燥合併的有機層。用MTBE/乙酸乙酯(EtOAc)(1:1，50mL)共沸乾燥粗油狀物，溶於EtOAc/庚烷(l:l，50mL),並在玻璃料漏鬥上過濾以移除鹽。在矽膠(12g)上用2.5%MeOH/乙酸乙酯(50mL)、用3.8%MeOH/乙酸乙酯(50mL)並最後用5.6%MeOH/乙酸乙酯(100mL)洗脫來純化粗產物，以得到作為澄清的無色油狀物的ER-819409(984mg,產率為82%)。製備2:將ER-819385-00(1.70mmol，粗物質)溶於CH2C12(15mL)並加到飽和NaHC03溶液(12mL)中。將所得的混合物冷卻到0°C,並逐滴加入到在甲苯中的光氣商品溶液(465nL，0.55當量)中。在1小時攪拌下將反應溫熱到室溫。TLC(10%MeOH/CH2Cl2)和對茴香醛分析用來顯現反應產物，表明仍然存在大量初始原料。因此將反應冷卻到0。C，以^更第二次加入20%的光氣溶液(210nL，0.25當量)。加入後，將反應溫度緩慢地溫熱到室溫。1小時後的TLC分析仍然顯示初始原料，但沒有表現出分解的跡象。然後使反應靜置過夜，同時攪拌。第二天的TLC分析表明仍然存在初始原料，但也顯示出現基線分解。在室溫下將水(15mL)加到反應產物中並攪拌30分鐘。將混合物轉移到分液漏鬥中，在分離所述層之前使它們靜置45分鐘。用CH2C12(30mL)萃取水層，合併有機層並濃縮乾燥。水層和合併的有機層的TLC分析沒有顯示胺初始原料的存在，表明在處理過程中反應進行完全。用MTBE/EA共沸粗油狀物，再溶於~50mL的1:1的EA/庚烷，並在玻璃料漏鬥上過濾以移除鹽。在SiO2柱(50y。EA/正庚烷，100%EA,然後5-10%MeOH/EA)上純化該物質，以得到984mg以無色油狀物存在的所希望的脲ER-819409-00。這表示自Fmoc脫保護開始合起來的產率為82%。物質平衡是在脲形成階段的過夜攪拌過程中形成的基線物質。實施例10:ER-819409-00的二羥基脲的合成formulaseeoriginaldocumentpage52以保持反應溫度低於30。C的速率將二異丙胺(78.7mL,0.561mol)加到在無水乙腈(348g)中的三氟乙酸吡啶鑥(108g,0.533mol)的攪拌溶液中。使反應冷卻到室溫後，加入烯丙基四異丙基亞磷醯二胺(179mL，0.561mol)(觀察到稍微吸熱，然後放熱)，隨後再攪拌10分鐘。然後以使反應溫度保持在2030。C的加入速率加入在無水乙腈(453mL)中的ER-819302(283.2g,0.5345mol;用800mL的庚烷預驅逐)。再攪拌30分鐘後，將反應混合物冷卻到0°C，隨後緩慢加入乙酸(64mL,1.1mol)，同時保持反應溫度低於25°C。使反應混合物在室溫下平衡。將在乙腈(200mL)中的三氟乙酸吡啶錙(103g,0.533mol)加到反應混合物中。在加入三氟乙酸吡咬鏡之後，立即加入ER-812978(40g,0.27mol)，隨後用乙腈(50mL)衝洗。在室溫下攪拌反應混合物18小時，之後將其冷卻到0。C，隨後緩慢加入在水中的30wt.。/。的過氧化氫(140mL，1.37mol)，使反應溫度保持在024。C(開始時強放熱)。最終的反應混合物再攪拌30分鐘，隨後以使反應溫度保持在0~18。C的速率加入20wt。/。亞硫酸氫鈉水溶液(3000g)。將反應混合物溫熱至室溫並攪拌，直到過氧化物測試提供陰性結果。在處理容器中用MTBE(3000mL)稀釋所得的反應混合物並攪拌15分鐘。使層分離後，用10。/。碳酸氫鈉(NaHC03)水溶液(3500mL)、然後用30%NaCl水溶液(2000mL)洗滌有機層。用MTBE(3000mL)反萃取鹽水層三次。濃縮合併的有機層並用TBME/庚烷-l/1(1.4L)驅逐兩次。將殘餘物溶於MTBE(735g),並通過硅藻土墊(150g)過濾懸浮液，隨後用MTBE(300mL)洗滌容器和過濾墊三次。濃縮乾燥濾液，得到363.4g孩史混濁的油狀物。利用調整過的~800mL/分鐘的流量用TBME/庚烷-7/3(400mL)將粗ER-819302溶解並裝載到預處理過的矽膠柱[用MTBE/庚烷-7/3(15Kg)處理的Biotage150L(5.62Kg,空隙體積=7.07L)柱上。裝載後，用TBME/庚烷-7/3(500mL)沖洗殘留的ER-819302並將衝洗液裝載到柱上。用MTBE/庚烷-7/3(26Kg)、然後用MTBE/庚烷/MeOH-70/25/5(21.8Kg/7.18Kg/1.7Kg)洗脫柱。在該過程中總共收集36個級分。濃縮合併的含有產物的級分並使用庚烷(8L)共沸乾燥，隨後在真空室內乾燥，得到純度為92.69面積％的油狀物(281g，79%)。ER-820116的分衝斤數據力-醒R(CDC13)30.870(m，6H)，1.176(d，J=8.0Hz，12H)，1.254-1.282(b，28H)，1.428(b，9H),1.528(b，2H),1.603(b,2H)，1.7卯(m，2H),2.265(t，J=7.0Hz,2H),3.431(m,2H)，3.481(m,2H),3扁(m，2H),3.751(b,2H),3.847(b,1H)，3.847-4.208(m，2H)，4.950(b，1H)，5.126(d，J=10Hz，1H)，5.286(dd，J=17Hz，J，=1.5Hz，1H),5.898-5.989(m，1H)31P-NMR(CDC13，未校準)148.449和148.347(兩個非對映異構體)MS-APESI(M+Na)C39H78N207P計算值717.55實測值717.66。ER-821843的分析數據31P-NMR(CDC13，未校準)S139.832，139.868，140.170，140.327(4個非對映異構體)MS-APESI(M+Na)(:3115^&06計算值552.42實測值無質譜數據ER-819409的分析數據MeOH:未檢測到MTBE:未檢測到MeCN:185ppm庚烷1718ppm力-匪R(CDC13)S0.88(t，J=6.9Hz，12H)，1.20-1.37(m,52H)，1.44(s:18H)，1.45-1.72(m,8H),1.76-1.85(m,4H),2.28(t，J=7.6Hz,4H),3.38-3.58(m,12H)，3.85-3.97(m,2H),3.98-4.20(m，8H)，4.53-4.58(m,4H),4.95-5.0(m,2H)，5.18-5.28(m，2H)，5.26(dd,J=1.4,10.5Hz,2H)，5.37(dd，J=0.9,16.9Hz，2H),5.62-5.85(m,2H),5.87-5.99(m，2H)。MS國APESI(M+Na)C71H136N4Na019P2計算值:1433.92實測值1433.98。實施例11:ER-807284-00的製備製備l:在氮氣氛下用10分鐘的時間緩慢地將甲磺酸(13.8g,144mmol)在CH2C12(140mL)中的溶液加到在乾燥CH2C12(120mL)中的ER-819409(40.25g,28.51mmol)的攪拌溶液中，同時保持反應溫度低於20。C。將反應混合物溫熱到20°C，隨後攪拌15小時，直到確定中間體反應完全。將所得的反應混合物冷卻到0。C並用5分鐘的時間加入二異丙基乙胺(27.5mL,158mmol)。再在0。C下攪拌5分鐘後，將l-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(32.55g,170mmol)—次性加入。反應混合物在0。C下攪拌12分鐘，隨後一次性加入ER-028699(20.6g,85.0mmol)。所得的反應混合物在0。C下攪拌2小時，隨後溫熱至室溫，持續30分鐘，在此期間確定反應完全。用調整至150~200mL/分鐘的流量在預處理的Biotage75M珪膠柱[(351g珪膠，用MTBE(1L)、然後用CH2C12(2L)預處理]上洗脫完成的反應混合物的四分之一(105g)。連續地用1。/o乙醇(EtOH)/CH2Cl2(900mL)、用3%EtOH/CH2Cl2(卯0mL)、最後用6%EtOH/CH2Cl2(2250mL)洗脫柱，同時收集~150mL/級分。合併所希望的含有產物的級分、濃縮(在真空室內，3035。C)並用庚烷(100mL)共沸三次，得到formulaseeoriginaldocumentpage548.8g的ER-807285。以類似的方式純化完成的反應的剩餘物，總共得到35.2g(產率為74.5%)。兩個另外的實驗方法如下所述。其在處理階段不同。笫一種涉及標準結束，而另一種使用反相結束(reversequench)。用NH4OH/MeOH/CH2Cl2為1:9:90進行TLC分析。用對茴^醛斑點使TLC板顯色以顯現初始原料和反應產物。製備2:將ER-819409-00(995mg,0.705mmol)溶於CH2C12(7.8mL)。在室溫下用12分鐘將TFA(1.4mL)加到該混合物中。然後在室溫下攪拌反應混合物4小時。攪拌後，用冰浴冷卻反應混合物，並用25分鐘加入飽和NaHC03水溶液(16.0mL)。在中和過程中記錄的最高溫度為~8。C，平均溫度為4°C。所得的混合物再攪拌45分鐘，在此期間緩慢地將內部溫度從4。C溫熱到室溫。將混合物轉移到分液漏鬥中並加入CH2C12(11.0mL)。在分離之前4吏層靜置35分鐘。用CH2C12(5.0mL)萃取pH為8~8.5的水層。合併有機層並用10mL的通過使飽和鹽水溶液和水以3:1的比混合而製備的鹽水溶液洗滌。在分離之前使層靜置20分鐘。然後將有機層儲存在製冷器(-2(TC)中過夜。第二天早晨，從製冷器中移出有機層並溫熱至室溫。使用Na2S04乾燥，在玻璃料漏鬥上過濾，並濃縮至乾燥。將所得的油狀物再溶於CH2Ch(8.0mL)並在棉塞上過濾，以除去任何鹽殘餘物。濃縮乾燥所得的物質以得到無色的油狀物ER-807284-00(727mg,質量回收率為85%)。另外的CH2Cl2萃取提供額外的99.0mg的所希望的物質，使得質量回收率為96.8%。不必純化。ER-807284的分析數據力-匪R(CDC13)30.85-0.95(m，12H)，1.20-1.35(m,52H),1.45-1.65(m,8H),1.70-1.85(m，4H)，2.25-2.65(bs，4H),2.28(t，J=7.6Hz,4H),3,20-3.27(m，2H)，3.30-3.60(m,12H),3.98-4.22(m,IOH)，4.50-4.60(m，4H),4.95-5.05(m,2H),5.27(dd，J=0.9,10.5Hz,2H),5.38(dd,J=0.9,16.9Hz，2H)，5.90-6.0(m，2H)。MS-APESI(M+H)(:6111121!^40152計算值1211.83實測值1211.97。製備3:將CH2C12(22.3mL)裝到適當規格的反應器中。加入ER-819409-00(2.85g,2.01mmol)並溶於CH2C12中。在室溫下用1分鐘加入TFA(4.0mL)。在室溫下攪拌反應混合物4.5小時。處理:(反相結束)用1~2分鐘通過聚四氟乙烯導管將反應混合物轉移到冷卻到0'C的飽和NaHCO3溶液中。觀察到微小的升溫，最大放熱為~4°C。用CH2C12(4x2.5mL)沖洗反應燒瓶並將洗滌液加到溶液中。移除冷卻裝置並用45分鐘溫熱至室溫。再加入CH2Cl2(22mL)，並將混合物轉移到分液漏鬥中。在分離之前使混合物靜置20分鐘。用CH2C12(22mL)萃取水層並合併有機層。用鹽水溶液，即飽和鹽水氾20(比為3:1)(40mL)，洗滌合併的有機層。使所得的混合物靜置30分鐘，同時緩慢地使層分離。分層。有機層保持混濁。將有機層儲存在-20°。的製冷器中過夜。然後將其溫熱至室溫，用Na2S04乾燥，在玻璃料漏鬥上過濾並濃縮乾燥。再用CH2Cl2(22mL)反萃取鹽水溶液以回收另外的物質。質子和氟NMRi普顯示這兩組物質均^皮TFA鹽形式所汙染。NaHCOs層的pH分析顯示pH為~7(不足夠高(8~8.5)以純淨地得到游離鹼ER-807284-00)。合併上述得到的兩組並通過將有機物質溶於CH2C12(50mL)來重複處理。將合併的溶液轉移到250mL的裝備有機械攪拌裝置的三口圓底燒瓶中。加入飽和NaHC03水溶液(50mL)並在室溫下攪拌所得的混合物45分鐘。將反應器內的物質轉移到250mL的分液漏鬥中。用CH2Cl2(總共25mL)衝洗反應器。靜置混合物~lh並觀察到乳狀液。分離有機層和水層並用CH2C12(30mL)反萃取水層。合併所得的有機層，用飽和鹽水(25mL)洗滌。甚至在靜置l小時後，有機層依然保持混濁，此後分離有機層和水層。用Na2S04乾燥有機層，在玻璃料漏鬥上過濾。濾液是混濁的。用CH2C12(25mL)反萃取鹽水。在類似的乾燥步驟後，將來自CH2Cl2層的物質與其它物質合併。濃縮乾燥所得的合併的有機濾液，用MTBE(2x25mL)共沸，再溶於CH2C12(10mL)並在位於10mL注射器中的硅藻土(3mL)塞上過濾。所述注射器的尖端配備有過濾裝置以捕獲小顆粒。濃縮乾燥濾液，NMR鐠顯示得到二胺ER-807284-00並且不含TFA鹽。質量回收率超過95%。通過TLC淨化反應。必須重複該處理以純淨地產生游離鹼，通過TLC表現出某種程度的降解。控制pH可以改善該方法。實施例12:ER-807285-00的製備formulaseeoriginaldocumentpage57精確貴量165!分子奮1660.25製備l-EDC/HOBT:將ER-807284-00(1.0當量)和無7JC二氯甲烷(8.41重量)裝到適當規格的惰性反應器中。然後將l-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺(2當量)加到該反應器中，隨後加入l-羥基苯並三唑(0.18當量)。然後將3-氧代-十四烷酸(2.2當量)以三等份加入到該反應器中，攪拌反應混合物10分鐘，在每次加料之間保持Ta部在15~20°C。通過TLC監控反應，以使ER-807284完全消耗。當確定反應完成(通常在1小時後)時，將生產用水(5重量)加到反應器中。攪拌混合物20分鐘，然後分離20分鐘。將有機層放在一邊。以上述方式用乙酸乙酯(2x6重量)反萃取水層兩次。然後合併所有有機層，加入硫酸鈉(8重量)並靜置15分鐘以吸收水分。過濾有機物並用乙酸乙酯洗滌濾餅，直到得到ER-807285的陰性結果。真空(~50託，28~35。C)濃縮濾液，得到ER-807285。利用3%~6%EtOH/CH2Cl2通過矽膠色語純化該物質。合併富所希望物質的級分並通過旋轉蒸發濃縮，並用IVAC泵(0.2託)乾燥2小時。無色油狀物ER-807285的產率為50%。製備2-EDC/DMF:將ER-807284-00(208mg，0.172mmol)溶於在適當規格反應器中的DMF(2.1mL)中，並加入EDC(263mg,1.37mmol)。將混合物冷卻到0。C並用30秒逐滴加入溶於DMF(1.4mL)的3-氧代十四烷酸(166mg,0.686mmol)。在0。C下攪拌所得的反應混合物IO分鐘，同時溫熱到室溫。通過TLC(7.5%MeOH/CH2Cl2:用於初始原料和產物的對茴香醛斑點)來監控反應。~3小時後在O'C下通過加入飽和NaHC03溶液(8.0mL)、H2O(4.0mL)和1:1的MTBE/正庚烷(10mL)結束反應。將反應混合物轉移到分液漏鬥中。用少量1:1的MTBE/正庚烷衝洗反應器，然後與反應混合物合併。靜置反應混合物2030分鐘，之後分離有機層和水層。有機層的總體積為~35mL。水層的TLC分析顯示有少量DMF。不需要對水層進行二次萃取。用鹽水(4.0mL)洗滌有機層，然後靜置15分鐘。觀察到快速的分離，無乳狀液。分離有機層和水層，蒸發乾燥有機層，得到粗ER-807285-00。使用3~6%EtOH/CH2Ch溶劑體系在Si02柱上純化粗ER-807285。產率為53%,(151mgER-807285),HPLC純度為88%。製備3-HBTU/Hunig，s鹼/DMF:將ER-807284-00(232mg,0.191mmol)溶於DMF(2.5mL)。將反應器冷卻到0'C。加入HBTU(218mg,0.574mmol)和3-氧代十四烷酸(139mg，0.574mmol)。隨後用30秒逐滴加入Hunig，s鹼(106uL，0.612mmol)。反應混合物在0。C下攪拌20分鐘並在~10分鐘後變為乳狀。將反應混合物溫熱到室溫。繼續攪拌超過4小時。由於DMF用TLC監控是困難的。因此，反應時間會更短。用1:1的MTBE/正庚烷(10mL)稀釋反應混合物，並轉移到60mL的分液漏鬥中，並用通過使1.0M檸檬酸(50uL)和飽和氯化鈉(9.5mL)製備的pH為3的水溶液處理。形成並析出大量鹽，阻塞漏鬥。加水(5.0mL)以使鹽溶解，但是在此之後沒有相分離，甚至在逐漸地加入MTBE(至多15mL)之後也是如此。然後加入乙酸乙酯直到10mL，以開始恢復相分離。使層靜置~30分鐘以獲得分離。將水相的pH調整到pH為5。再用10mL如上所述製備的稀檸檬酸洗滌有機層，得到pH為3。分層。用飽和NaHC03溶液(2x5mL)洗滌有機層。分離所得的水層和有機層並蒸發乾燥有機層。ER-807285的產率為45%(143mg)，HPLC純度為91%。formulaseeoriginaldocumentpage58C83H158N4Na2019P2分子量化24.Q9在氬氣流下將在脫氣THF(1.57重量)中的ER807285(1當量)裝到適當大小的惰性容器中。用40分鐘將在四氫呋喃(2重量)中的四(三苯基膦)合鈀(0)(0.03重量)、三苯基膦(0.03重量)和苯基矽烷(0.07重量)的溶液加到反應器中(T轉通常升高至~40到45。C)。通過TLC和HPLC監控反應中ER-804057的完全消耗。當確定反應完成(通常在<10分鐘後)時，通過離子交換色鐠純化反應混合物。對於關於該純化的更多細節，參見實施例14。實施例14:E6020的純化formulaseeoriginaldocumentpage59將含有四(三苯基膦)合鈀(O)、三苯基膦和苯基矽烷的804057游離酸的粗反應混合物裝載到Source30Q離子交換柱中。然後，用甲醇/THF/水(77.5/15/5)從804057中洗脫出未結合的反應物。通過用增加的醋酸鈉線性梯度從柱中洗脫804057的鈉鹽(即E6020),所述醋酸鈉以0M開始並以0.05M結束。在該色語分析過程中除去雜質。任選的二次純化可能是希望的。該色譜分析從由前面的色語中得到的E6020/醋酸鈉離子交換溶液開始。將其直接裝載到C-4Kromasil柱上並用等度緩沖體系甲醇/THF/水/醋酸鈉(77.5/15/5/0.05M)洗脫。合併含有產物的級分，用於固相萃取。然後用水以50/50稀釋純E6020溶液並裝載到C-4Kromasil柱上。然後用水洗脫，從水到乙腈的線性梯度。這使鹽和水與純E6020分離。然後，用甲醇從柱中洗脫產物。得到純E6020在甲醇中的溶液。在25~30。C和完全真空室內在旋轉蒸發器上濃縮乾燥。凍幹玻璃質的產物或用乙酸乙酯/乙腈的溶液處理，形成白色固體。真空乾燥得到E6020。實施例15:晶體ER-806158，(R)-l-(((R)-4，5-二氫-2-苯基嚅唑-4-基)曱氧基)癸-3-醇的表徵將一部分ER-806158再溶於溫熱的甲苯中，直到所有物質全部溶解，然後冷卻。這產生單晶體，在本研究中選擇使用這樣的單晶體。用很少量的巴拉東油(paratoneoil)將大小為0.14x0.14x0.10mm的無色塊晶固定在玻璃纖維上。A.單晶X射線衍射用配備在193K下操作的OxfordCryostream低溫設備的基於BrukerSMARTAPEXCCD(電荷耦合器件)的衍射儀收集數據。用每幀0.3。的a)掃描測量數據30秒，以便收集到半球。總共收集到1271幀，最大解析度為0.76A。在數據收集結束時再收集最初的50幀，以監控衰減。用SMART軟體(SMARTV5.625(NT)Sct/hwM/wCCDZ^&"w5>他附；BrukerAnalyticalX-raySystems,Madison,WI(2001))獲取晶胞參數並用SAINT基於所有觀測到的反射進行精修。用校正Lp和衰減的SAINT軟體(SAINTV6.22(NT)5V/hvfl^>r(XT)5>他附BrukerAnalyticalX-raySystems,Madison,WI(2001)進行數據簡化。用SHELXS畫97程序(Sheldrick,G.M.SHELXS-卯，Pn^ra附>riSV/w"VwC，似/5Vn/"Mre,UniversityofG6ttingen，Germany,1990.)通過直接法來求解結構並通過最小二乘法對F2進行精修，SHELXL-97,(Sheldrick，G.M.SHELXL-97,屍rogm附le/we附ertfC，似/iftm"wre，UniversityofG6ttingen，Germany,1997.)，併入到SHELXTL-PCV6.10中，(SHELXTL6.1(PC-Version),jPngm附//6mfj/orX加"wre5Ww"WMo/ecw/flr0"/7^/cs";BrukerAnalyticalX-raySystems,Madison,WI(2000))。通過系統缺位分析在空間群P1(#l)中解得如圖1所示結構。各向異性地精修所有非氫原子。通過差值傅立葉法找到氫並各向異性地精修。在數據收集過程中用於衍射研究的晶體沒有顯示分解。在50%橢球下繪製所有圖。圖2是沿著a軸的晶胞堆積圖，其表示在晶體內氬鍵結合的最好的圖，虛線。表l.晶體數據和結構精修波長晶系空間群晶胞尺寸體積z密度(計算值)吸收係數F(OOO)晶體尺寸數據收集e範圍指數範圍收集到的反射獨立反射到0=27.93°的完全度吸收校正最大和最小透射率精修方法數據/約束/參數對FZ的擬合度最終的R指數[1>21:(1)R指數(所有數據)絕對結構參數最大衍射峰和孔三斜晶系Pla=4.6047(ll)Ab-8.1161(19)人c=13.579(3)A477.0(2)A3a=106.008(4)。(5=95.604(4)。y=98.696(4)。1.161Mg/m30.077mm-11820.14x0.14x0.10mm31.58~27.93。-6<h￡6，-10$kS7，-12^1￡17329326R(int)=0.043198.3%無0.9924和0.9893對F"的全矩陣最小二乘法2663/3/3421.006Rl=0.0474,wR2=0.1231Rl=0.0527，wR2=0.12750.0(16)0.252和-0.252e.A陽3B.粉末X射線衍射使用石英片在Scintag衍射儀上在常規粉末衍射條件下在5~70。的20範圍內用銅照射採集數據並在表2所示的條件下分析。不使用背景校正。圖3表示晶體ER-896158的PXRD圖案。晶體ER-896158的PXRD圖案的特徵峰在表3中列出。表2:測量條件X射線衍射儀Scintag乾Cu檢測器鋰漂移二極體管電壓40kV管電流30mA狹縫DS1.0，RS0.3mm,SS2mm管，0.5m檢測器掃描速度1°/分鐘步進I取樣0.02"掃描範圍5~70"樣品架石英架(25mmx25mm)測角儀e-e,固定的水平支架，測角儀濾波器電子的單色儀未使用表3:粉末X射線衍射特徵峰(29±0.226)tableseeoriginaldocumentpage62C.晶體ER-806158的DSC表徵。通過差示掃描量熱法(DSC，毛細管技術)確定晶體ER-806158的固態特徵。使用5.17000mg的晶體ER-806158樣品，在50mL/分鐘的氮吹掃下，在具有氧化鋁盤的以10。C/分鐘加熱到200。C的2920DSCV2.5F量熱計上進行DSC操作。圖4表示在氮存在下在27。C(初始溫度)下熔融的晶體ER-806158吸收+29.2卡/克的溫鐠圖。在樣品的二次加熱過程中觀察到先有放熱現象的熔融，這表明該ER-806158在液相中可以在至多到200。C的溫度下是穩定的。D.晶體ER-806158的紅外光i瞽晶體ER-806158的FTIR吸收光譜記錄了純晶體粉末。晶體ER-806158的IR吸收光鐠如圖5所示。權利要求1.式(15)的化合物或其鹽其中A是-(CH2)x-O-或共價鍵；n是0或1；x為1～6；R1a是氫、C1～C6的烷基、C3～C6的烯基、C3～C6的炔基或亞磷酸酯氧保護基或磷酸酯氧保護基；R2a和R2b之一是H，另一個是一價氮保護基；或者R2a和R2b一起是二價氮保護基；當A是-(CH2)x-O-時，R3a和R3b之一是H，另一個是一價氮保護基，或者R3a和R3b一起是二價氮保護基；當A是共價鍵時，R3a和R3b是C1～C6的烷基，或者R3a和R3b一起是-(CH2)4-、-(CH2)5-或-(CH2)2O(CH2)2-；R4是C5～C12的烷基或C5～C12的烯基；以及R5是C5～C15的烷基或C5～C15的烯基。2.如權利要求1所述的化合物，其中R2a和R2b或R3a和R3b的所述氮保護基獨立地選自Boc、Fmoc、TROC、TMS-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基、(C6H5)2C=、四氯鄰苯二醯胺或疊氮化物。3.如權利要求l所述的化合物，其中與R"和R"連接的所述氮上的保護基可以在選自酸性、鹼性、氧化和還原條件的第一條件下脫除；並且與R"和R"連接的所述氮上的保護基可以在選自不同於所述第一條件的其餘三種條件的第二條件下脫除。4.如權利要求l所述的化合物，其中A是-(CH2)2-0-;n是0;R"是C，的烷基；並且W是Cu的烷基。5.如權利要求4所述的化合物，其具有式ER-820842:formulaseeoriginaldocumentpage36.如權利要求l所述的化合物，其中A是-(CH2)2-0-;n是l;R"是C:的烷基；並且RS是Cu的烷基。7.如權利要求6所述的化合物，其具有式ER-819344:formulaseeoriginaldocumentpage38.如權利要求l所述的化合物，烷基；並且RS是Cn的烷基。9.如權利要求8所述的化合物:其中A是共價鍵；n是0;R"是C7的其具有式ER-819385:ER-819385-0010.如權利要求l所述的化合物，其中A是共價鍵；n是0;1^和1131)各自是異丙基；R"是C7的烷基；並且RS是Cu的烷基。11.如權利要求10所述的化合物，其具有式ER-820116:formulaseeoriginaldocumentpage412.如權利要求l所述的化合物，其中A是-(CH2)2-0-;n是0;議4是<:7的烷基；並且RS是Cu的烷基。13.式(16)的化合物或其鹽formulaseeoriginaldocumentpage4(16)其中n是0或1;R"是氫、C廣C6的烷基、C廣C6的烯基、C廣C6的炔基、亞磷酸酯氧保護基或磷酸酯氧保護基；Rh和R"之一是H，另一個是一價氮保護基或-C(0)CH2C(0)R6;R"和R"—起是二價氮保護基；R4是C廣Cu的烷基或C廣d2的烯基；以及R5和R6獨立地是C5~C15的烷基或C5~C15的烯基。14.如權利要求13所述的化合物，其中Rh和R"的所述氮保護基獨立地選自Boc、Fmoc、TROC、TMS-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基、(C6H5)2C=、四氯鄰苯二醯胺或疊氮化物。15.如權利要求13所述的化合物，其中n是l;114是<:7的烷基；並且R5是Cu的烷基。16.如權利要求13所述的化合物，其中n是l;R"是烯丙基；R"是氫；R"是Boc;R4是C7的烷基；並且R5是Cn的烷基。17.如權利要求16所述的化合物，其具有式ER-819409:formulaseeoriginaldocumentpage518.如權利要求13所述的化合物，其中n是l;R"是氫；R"是-C(0)CH2C(0)R6;R4是C的烷基；R5是Cu的烷基；並且R6是Cn的烷基。19.如權利要求13所述的化合物，其中n是0;R"是烯丙基；iP是氫;R"是Boc;114是(:7的烷基；並且R5是Cn的烷基。20.如權利要求19所述的化合物，其具有式ER-821843:formulaseeoriginaldocumentpage521.如權利要求13所述的化合物，其中n是l;R"是烯丙基；R"是氫;R"是氫；114是<:7的烷基；並且RS是Cn的烷基。22.如權利要求21所述的化合物，其具有式ER-807284:,。十(CH2)6HNHNO、oO—P-I力NH5ER-807284Ov(CH2T)ioCOH3"CH2)6CH3Oy(CH2OH323.如權利要求13所述的化合物，其中n是0;R"是烯丙基；R^是氫；R2c是-C(0)CH2C(0)R6;114是<:7的烷基；R5是Cu的烷基；並且R6是Cu的烷基。24.如權利要求23所述的化合物，其具有式ER-807825:ooHNHNOOHNo—p-aooo、Ov(CH2)10CH3o(CH2)10CH3'(CH2)6CH3oer-807285-0025.式(17)的化合物(17)其中R是氫或dC6的烷基；Rh和R化之一是H，另一個是一價氮保護基，或者R"和R"一起是二價氮保護基；R4是C廣d2的烷基或C廣Cu的烯基；和R5是Csd5的烷基或Csds的烯基。26.如權利要求25所述的化合物，其中R"和R"的氮保護基獨立地選自Boc、Fmoc、TROC、TMS-乙基羰基、氰乙基羰基、烯丙氧基羰基、(C6H5)2C=、四氯鄰苯二醯胺或疊氮化物。27.如權利要求25所述的化合物，其中R是氫；R"和R"是氫；W是Q的烷基；並且RS是Cn的烷基。28.如權利要求27所述的化合物，其具有式ER-819120:29.如權利要求25所述的化合物，其中R是氫；R^是氫；R"是氮保護基；114是<:7的烷基；並且RS是Cu的烷基。30.如權利要求29所述的化合物，其具有式ER-819302:formulaseeoriginaldocumentpage731.式(18)的化合物:formulaseeoriginaldocumentpage8其中R4是C廣Cu的烷基或C廣d2的烯基；和R5是Csds的烷基或C廣ds的烯基。32.如權利要求31所述的化合物，其具有式ER-819509:。/^。>^Y(CH2)6CH3ToER-81905933.晶體ER-806158，(/)-l-(((i)-4，5-二氬-2-苯基喁唑-4-基)甲氧基)癸-3-醇，其具有三斜晶系和P1空間群。34.如權利要求33所述的晶體ER-806158，(W)-l-(((i)-4,5-二氫-2-苯基哺唑-4-基)甲氧基)癸-3-醇，其特徵在於晶格參數為a=4.6047(ll)Aa=106.008(4)。b=8.1161(19)Ap=95.604(4)。c=13.579(3)A"98.696(4)。體積=477.0(2)13並且Z-1。全文摘要本發明提供用於製備式(I)的TLR-4受體激動劑E6020及其立體異構體的方法，當與用於細菌性疾病和病毒性疾病的抗原例如疫苗共施用時，所述化合物用作免疫佐劑。還提供了合成中間體。文檔編號C07F9/09GK101213199SQ200680023963公開日2008年7月2日申請日期2006年6月30日優先權日2005年6月30日發明者吳闊明,安德魯·萊斯卡博,弗朗西斯·G·方,林恩·霍金斯,查爾斯·萊梅林,翔牛,詹姆斯·E·福伊申請人:衛材株式會社