鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠及其製備方法
2024-01-28 10:44:15
專利名稱：鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物劑型，具體的涉及一種鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠及其製備方法。
背景技術：
細胞生長因子自從他們的生理特性被發現後，有各種商品化產品在醫藥領域中使用，如已經開發的藥物金因肽的主要成分為重組表皮生長因子，用於治療難愈性創面，如足靴區潰瘍、糖尿病性潰瘍、褥瘡及口腔潰瘍等。藥物貝復濟主要成分為鹼性成纖維生長因子，鹼性成纖維生長因子是一種具有廣譜作用的細胞因子，研究表明它可以有效促進成骨細胞、成纖維細胞、血管內皮細胞、神經膠質細胞等增殖和分化。加速骨組織、軟組織和血管等各種組織的損傷癒合。廣泛使用於外傷、刀割切、凍傷、手術傷口及雷射創面、醫學美容術後創面。各種原因引起的潰瘍、傷口延期不愈，糖尿病潰瘍、放射性潰瘍、褥瘡、瘻竇、宮頸糜爛、口腔潰瘍等，燒燙傷、包括淺II度、深II度、肉芽創面。但是鹼性成纖維生長因子等細胞因子在體內存在著半衰期短(半衰期僅有3～10分鐘左右)，容易降解等缺點。一般作用時間不超過1小時。無論是全身和局部使用療效都不能令人滿意。在口腔使用時很快會被唾液溶解和稀釋，在皮膚使用很快會被蒸發。
發明內容
本發明的目的就是針對現有的缺陷和不足，提供鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠及其製備方法。
為實現上述發明目的，本發明採用如下技術方案一種鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠製劑，由下列重量份的組分製成鹼性成纖維生長因子1～4份重均分子量為1～35萬的1％～60％聚乳酸溶液 5000～20000份注射用水或緩衝液 25000～100000份重均分子量為3～25萬的聚乙烯醇樹脂 100～500份聚氧乙烯聚氧丙烯醚2500～30000份其中，所述的緩衝液為磷酸鹽緩衝液、D-Hank’s中的一種；所述的重均分子量為1～35萬的1％～60％聚乳酸溶液，所用的溶劑為由二氯甲烷∶甘油＝3～6∶1的混合溶劑。
一種製備上述鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠的製備方法，包括以下步驟a)、按重量份稱取各組分，將鹼性成纖維生長因子溶於緩衝液中，製成濃度為0.025％～0.1％的水相溶液；b)、將聚乳酸溶於二氯甲烷∶甘油＝3～6∶1的混合溶劑中，製成濃度為1％～60％的油相溶液；c)、將上述水相溶液、油相溶液混合，製備油包水型乳液，然後加入到由重均分子量為3～25萬的聚乙烯醇樹脂與緩衝液製成10～20％的溶液中，超聲分散1～60min，製成微乳液；d)、將步驟c)得到的微乳液在室溫下低速攪拌3～5h，通過自然揮發或抽提，除去有機溶劑二氯甲烷，即得鹼性成纖維生長因子納米微球膠體溶液；e)、在鹼性成纖維生長因子納米微球膠體溶液中，低溫攪拌下加入聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之溶解，製備成低溫4～5℃下為可流動的膠體，20～38℃下為凝膠的鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠製劑。
高分子微球包裹技術在醫藥領域得到了廣泛運用，以高分子為載體的載藥納米微球不但可以控制藥物以一定的速度釋放，而且可以通過合適的釋藥途徑延長藥物的生理活性，提高藥物的穩定性，而且具有一定的靶向性，從而使藥物的藥理活性達到較理想的效果。本研究中採用的高分子包埋材料聚乳酸在醫藥界已經得到廣泛的應用，具有組織相容性好，對人體安全無害等特點。而且是美國FDA批准的少數可以在人體中使用的高分子可降解材料。聚氧乙烯聚氧丙烯醚(泊洛沙姆)是一種高分子非離子型表面活性劑，為美國國家處方集新增加的藥物輔助材料，具有在低溫下(4～5℃)為液體，體溫下為凝膠的獨特性質。通過採用聚乳酸包封后製成納米微球具有長時間緩釋特點，而且凝膠具有黏附性能好，不易在皮膚和黏膜脫落和揮發的優點。
吸取鹼性成纖維生長因子聚乳酸膠體溶液約10ul，共10份樣本，用磷鎢酸(PTA)染色3分鐘，室溫下乾燥15分鐘後掃描電鏡觀察，微球表面光滑圓整，球體大小均勻。掃描電鏡平均粒徑為0.045±0.013μm，粒徑分布範圍較窄。雷射粒度分布測試儀測定粒徑，委託重慶科美納米醫藥有限公司完成。徑距＝(D90-D10)/D50。
取鹼性成纖維生長因子對照品約10mg，精密稱重，置於100g量瓶中，加水溶解並稀釋至刻度，搖勻，依次稀釋，使實際配置的對照品溶液濃度分別為1，5，10，20，50，100，250，500，1000ng/ml，加入到微量反應板的微孔中。按照Chemicon公司提供的操作程序，採用酶聯免疫吸附法(ELISA)在HTS7000紫外螢光高效分析儀測定標準樣品在在490nm波長的吸光度(OD)。以OD值為縱坐標，標準的bFGF濃度C進行對數直線回歸，繪製標準曲線。回歸方程為A＝-0.3671+0.3276LnC，r＝0.9634。由圖像分析可知，在1-1000nm範圍內為線性關係較好的直線方程，鹼性成纖維生長因子濃度的對數與吸收度有定量關係。
本研究進一步研究了製劑的藥物濃度、形態和粒經分布、載藥量和包封率以及體外緩釋特性。
將製備的3批緩釋鹼性成纖維生長因子微球溶液在4℃、40000rpm條件下離心，2h後分離樣品中上清液，測定bFGF濃度，分別計算bFGF的載藥量和包封率。其中載藥量公式 包封率公式為 再根據載藥量精密稱取含有1.5μg緩釋鹼性成纖維生長因子微球放入EP管中(共3組)，加入生理鹽水至1g。模擬體內環境在水浴箱中恆速振蕩(37±1℃，20rpm)，分別於0.5，1，1.5，2，2.5，3，3.5，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14d定時取樣，測定不同時點樣品上清液含量。以累計釋放量和時間擬合方程，作出緩釋bFGF微球體外釋藥曲線圖。
納米微球的包封率和載藥量分別為(91.72±1.31)％和[(27.65±0.44)×10-3]％。微球在14d內，不僅一直持續釋放鹼性成纖維生長因子，而且所釋放出的鹼性成纖維生長因子濃度可以保持在一定的水平(67.25～89 81)n g.m L-1，平均濃度為(72.47±6 26)n g.m L-1。經檢測表明突釋期僅為18.37％，14d後釋放度達75.72％。以累積釋放率和時間進行擬合，微球的體外釋藥規律符合Higuichi方程Q＝27.7636 t1/2-13.4247，r＝0 9975(n＝3)。鹼性成纖維生長因子微球的體外釋藥曲線也顯示PLA微球體外能夠持續釋藥，具有明顯的緩釋作用。
本發明的一種鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠製劑，可加速骨組織、軟組織和血管等各種組織的損傷癒合，廣泛使用於外傷、刀割切、凍傷、手術傷口及雷射創面、醫學美容術後創面，以及各種原因引起的潰瘍、傷口延期不愈，糖尿病潰瘍、放射性潰瘍、褥瘡、瘻竇、宮頸糜爛、口腔潰瘍等，燒燙傷、包括淺II度、深II度、肉芽創面等，通過合適的釋藥途徑延長藥物的生理活性，提高藥物的穩定性，而且具有一定的靶向性，從而使藥物的藥理活性達到較理想的效果。本發明的製備方法科學合理，可以將鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠製劑製成低溫4～5℃下為可流動的膠體，20～38℃下為凝膠物理狀態。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明，但並不因此將本發明限制在所述的實施例範圍之中。
實施例1稱取0.5mg鹼性成纖維生長因子藥物溶於1g磷酸鹽緩衝液中，待其全部溶解後作為水相；稱取50mg聚乳酸溶於5g有機溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min製備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入25g磷酸鹽緩衝液(磷酸鹽緩衝液中含50mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，並繼續在室溫低速攪拌3-5h，除去有機溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低於20℃)攪拌下，少量多次加入3.75g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例2稱取1mg鹼性成纖維生長因子藥物溶於2g磷酸鹽緩衝液中，待其全部溶解後作為水相；稱取100mg聚乳酸溶於10g有機溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶1)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min製備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入50g磷酸鹽緩衝液(磷酸鹽緩衝液中含100mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，並繼續在室溫低速攪拌3-5h，除去有機溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低於20℃)攪拌下，少量多次加入7.5g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例3稱取2mg鹼性成纖維生長因子藥物溶於4g磷酸鹽緩衝液中，待其全部溶解後作為水相；稱取200mg聚乳酸溶於20g有機溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min製備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入100g磷酸鹽緩衝液(磷酸鹽緩衝液中含200mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，並繼續在室溫低速攪拌3-5h，除去有機溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低於20℃)攪拌下，少量多次加入20g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例4稱取0.5mg鹼性成纖維生長因子藥物溶於1g D-Hank’s緩衝液中，待其全部溶解後作為水相；稱取50mg聚乳酸溶於5g有機溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶1)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min製備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入25g D-Hank’s緩衝液(D-Hank’s緩衝液中含50mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，並繼續在室溫低速攪拌3-5h，除去有機溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低於20℃)攪拌下，少量多次加入3.75g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例5稱取1mg鹼性成纖維生長因子藥物溶於2g D-Hank’s緩衝液中，待其全部溶解後作為水相；稱取100mg聚乳酸溶於10g有機溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min製備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入50gD-Hank’s緩衝液(D-Hank’s緩衝液中含100mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，並繼續在室溫低速攪拌3-5h，除去有機溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低於20℃)攪拌下，少量多次加入7.5g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例6稱取2mg鹼性成纖維生長因子藥物溶於4gD-Hank’s緩衝液中，待其全部溶解後作為水相；稱取200mg聚乳酸溶於20g有機溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min製備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入100gD-Hank’s緩衝液(D-Hank’s緩衝液中含200mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，並繼續在室溫低速攪拌3-5h，除去有機溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低於20℃)攪拌下，少量多次加入20g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例7稱取0.5mg鹼性成纖維生長因子藥物溶於1g注射用水中，待其全部溶解後作為水相；稱取50mg聚乳酸溶於5g有機溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min製備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入25g注射用水(含50mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，並繼續在室溫低速攪拌3-5h，除去有機溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低於20℃)攪拌下，少量多次加入3.75g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例8稱取1mg鹼性成纖維生長因子藥物溶於2g注射用水中，待其全部溶解後作為水相；稱取100mg聚乳酸溶於10g有機溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min製備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入50g注射用水(含100mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，並繼續在室溫低速攪拌3-5h，除去有機溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低於20℃)攪拌下，少量多次加入7.5g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
實施例9稱取2mg鹼性成纖維生長因子藥物溶於4g注射用水中，待其全部溶解後作為水相；稱取200mg聚乳酸溶於20g有機溶劑中(二氯甲烷∶甘油＝6∶2)作為油相；將上述水相、油相混合，超聲分散1min製備乳劑；備用。將上述乳劑緩慢加入100g注射用水(含200mg聚乙烯醇樹脂)，超聲分散5min，並繼續在室溫低速攪拌3-5h，除去有機溶劑即得bFGF納米微球膠體溶液。上述膠體溶液中在低溫(溫度低於20℃)攪拌下，少量多次加入30g聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之完全溶解即得。
動物實驗驗證上述9種鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠的療效具體實驗方法實驗用兔90支，每支約2.5kg，分為9組，9組實施例各10隻兔。購置後實驗室飼養一周。硫化鈉背部備皮，肌注速眠新麻醉後，在每個兔子背部備3個創面，創面破壞少許肌肉組織。每個創面約1.0×1.5cm大小，壓迫止血。實驗組創面搽布鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠。兩個對照組創面一個滴注貝復濟(珠海億勝公司)，一天滴注一次。另外一個滴注生理鹽水，一天滴注一次。
實驗結果
結果分析通過動物試驗表明鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠療效確切，統計學分析表明在傷後7天實驗組和貝復濟組療效比較接近，但都好於生理鹽水組。傷後10天實驗組和貝復濟組療效明顯要好於生理鹽水組，而且因為藥物的緩釋效應，實驗組療效要好於貝復濟組。同時實驗組不像對照的兩組，不用每天換藥，減少了工作量。因此動物實驗表明鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠具有實用性和創新姓。
權利要求
1.一種鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠製劑，其特徵在於由下列重量份的組分製成鹼性成纖維生長因子 1～4份重均分子量為1～35萬的1％～60％聚乳酸溶液5000～20,000份注射用水或緩衝液25,000～100,000份重均分子量為3～25萬的聚乙烯醇樹脂 100～500份聚氧乙烯聚氧丙烯醚 2500～30,000份其中，所述的緩衝液為磷酸鹽緩衝液、D-Hank’s緩衝液中的一種；所述的重均分子量為1～35萬的1％～60％聚乳酸溶液，所用的溶劑為水或由二氯甲烷∶甘油＝3～6∶1的混合溶劑。
2.一種製備如權利要求1所述鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠的製備方法，其特徵在於包括以下步驟a)、按重量份稱取各組分，將鹼性成纖維生長因子溶於緩衝液中，製成濃度為0.025％～0.1％的水相溶液；b)、將聚乳酸溶於二氯甲烷∶甘油＝3～6∶1的混合溶劑中，製成濃度為1％～60％的油相溶液；c)、將上述水相溶液、油相混合溶液，製備油包水型乳液，然後加入到由重均分子量為3～25萬的聚乙烯醇樹脂與緩衝液製成10～20％的溶液中，超聲分散1～60min，製成微乳液；d)、將步驟溶c)得到的微乳液在室溫下低速攪拌3～5h，通過自然揮發或抽提，除去有機溶劑二氯甲烷即得鹼性成纖維生長因子納米微球膠體溶液；e)、在鹼性成纖維生長因子納米微球膠體溶液中，攪拌下加入聚氧乙烯聚氧丙烯醚，使之溶解，製備成低溫4～5℃下為可流動的膠體，20～38℃下為凝膠的鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠製劑。
全文摘要
本發明公開了一種鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠及其製備方法，由鹼性成纖維生長因子、聚乳酸溶液、緩衝液、聚乙烯醇樹脂、聚氧乙烯聚氧丙烯醚等組分製成，包括以下步驟將鹼性成纖維生長因子溶於緩衝液中，製成水相溶液；將聚乳酸溶於混合溶劑中，製成濃度油相溶液；將水相、油相溶液混合，製成微乳液；除去有機溶劑，加入聚氧乙烯聚氧丙烯醚使之溶解，製備成低溫下為可流動的膠體，20～38℃下為凝膠的鹼性成纖維生長因子聚乳酸緩釋納米微球凝膠製劑。本發明的凝膠製劑，可加速骨組織、軟組織和血管等各種組織的損傷癒合，廣泛使用於外傷、潰瘍、傷口延期不愈、燒燙傷，通過合適的釋藥途徑延長藥物的生理活性，提高藥物的穩定性，從而使藥物的藥理活性達到較理想的效果。
文檔編號A61P1/02GK1985989SQ20061009531
公開日2007年6月27日 申請日期2006年12月20日 優先權日2006年12月20日
發明者張綱, 盧來春, 譚穎徽 申請人:張綱