一種鴨肉中雌二醇的專用檢測方法及其設備與流程
2024-04-10 10:10:05 2
本發明涉及食品檢測技術領域，具體為一種鴨肉中雌二醇的專用檢測方法及其設備。
背景技術：
雌二醇是一種天然的雌激素，並且廣泛存在於自然環境中，它可以從外部環境進入人體，從而擾亂人體內分泌系統功能，造成人體在神經系統、免疫系統和生殖發育等系統上的病變，女性吸收過多的雌二醇容易導致提前發育，男性吸收過多的雌二醇容易出現第二性徵，一些動物或家禽，如家鴨，不法養殖戶為提前催熟家鴨，縮短養殖期，使用雌二醇進行催熟，因此開發一種簡單的、快捷的、靈敏的針對雌二醇的檢測方法具有重大的意義。
傳統的雌二醇的檢測方法有高效液相色譜法、氣相色譜-質譜法，化學發光免疫法等等，這些方法雖然能夠達到較高的檢測限，但是都是基於實驗室中複雜昂貴的儀器，並且成本高，耗時長，難以滿足現場實時精準檢測的需要，本發明提供一種利用陽離子表面活性劑聚集納米金比色檢測雌二醇的方法。
技術實現要素：
（一）解決的技術問題
針對現有技術的不足，本發明提供了一種鴨肉中雌二醇的專用檢測方法及其設備，解決了現有雌二醇檢測方法及設備成本高和耗時長的問題。
（二）技術方案
為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種鴨肉中雌二醇的專用檢測方法，包括以下步驟：
一、採取鴨肉樣本：將新鮮鴨肉用清水洗淨，用不鏽鋼刀具順著鴨肉經絡方向割取兩塊5*5釐米的樣品，一塊用於實驗檢測，一塊用於備用，將兩塊鴨肉樣品分別放在食品級攪拌機內以每秒10圈的速度分別將兩塊鴨肉樣品攪碎，並且在攪拌的過程中添加少量清水，防止鴨肉粘貼在攪拌機內部，鴨肉攪碎後，用乾淨的勺匙分別將兩塊鴨肉樣品取出來，放置在乾淨的玻璃器皿中，暫時放在冰箱或冰櫃中冷藏5-8分鐘，溫度設為5-8攝氏度；
二、設置對照樣品：取一隻乾淨的玻璃器皿，並用馬克筆在玻璃器皿上標記為A，向玻璃器皿內添加100-120毫升的純淨水，再將步驟一中製得的兩份鴨肉樣品從冰箱或冰櫃中取出一份，另一份使用保鮮膜包裹在鴨肉樣品上，繼續冷藏，作為備用檢測樣品儲備起來，取出的鴨肉樣品用乾淨的玻璃器皿盛放，並用馬克筆在玻璃器皿上標記為B，向B器皿中添加20-30毫升的純淨水，用乾淨的攪拌勺將攪碎的鴨肉樣品進行攪拌，使其與純淨水充分融合；
三、開始試驗；S1、分別向A、B器皿中添加等量的適配體溶液，並分別用攪拌勺進行混勻和孵育5分鐘，得混合液A1、B1；
S2、分別向A1和B1中分別添加適量的等質量的二甘脂試劑，並分別用攪拌勺進行混勻，靜置1分鐘，再分別向A1、B1中添加等質量的甲基丙磺酸試劑，並分別用攪拌勺進行混勻和孵育5分鐘，得混合液A2、B2；
S3、向A2、B2中分別添加的30-40毫升等質量的納米金溶液，並分別用攪拌勺進行混勻，得混合液A3、B3；
S4、向A3、B3中分別添加15-20毫升等質量的氯化鈉與氯化鉀混合液，並分別用攪拌勺進行混勻，得混合液A4、和B4；
S5、取內徑為60*60毫米高度為60毫米的石英螢光比色皿兩個，並用馬克筆分別標記為A5和B5，洗淨並讓其自然晾乾，晾乾後，將A4、和B4混合液分別用導流管引流至A5和B5中，並將A5和B5兩個石英螢光比色皿置於螢光分光光度計內，接通電源，向螢光分光光度計內的A5和B5最終分別添加50-60毫升的等質量的羅丹明溶液，開啟螢光分光光度計進行掃描測定信號。
優選的，所述螢光分光光度計的掃描條件為：激發光狹縫為9納米，發射光狹縫為2納米，激發光波長為480納米，在此條件下進行掃描，獲得其螢光光譜信號，A5和B5的螢光強度信號分別為C1和C2，計算增強的螢光強度值為C2與C1的差值。
優選的，所述納米金溶液的製備方法如下：在100毫升的煮沸的質量百分比濃度為0.015%的氯金酸溶液中，加入4毫升質量百分比濃度為1%的檸檬酸三鈉溶液，攪拌30分鐘，移除加熱裝置後繼續攪拌混合物15分鐘，最後，使溶液達到25攝氏度並且使用0.15微米的超濾膜過濾，然後儲存在恆溫為4攝氏度的黑色玻璃瓶中備用，從而製得納米金溶液。
優選的，所述氯化鈉的濃度為0.14mol/L，羅丹明的濃度為8umol/L，甲基丙磺酸試劑的濃度為20umol/L，甲基丙磺酸試劑是作為緩衝液的作用，還可以使用乙基丙磺酸代替甲基丙磺酸試劑。
優選的，所述鴨肉中雌二醇檢測方法所涉及的製備樣品檢測體系為：取10毫升B5待測樣品，加入到離心管中，充分混勻後再將離心管置於25攝氏度條件下孵育25分鐘後，在混合液中加入30毫升濃度為0.14mol/L的氯化鈉溶液和25毫升濃度為8umol/L的羅丹明溶液，混勻，然後按照C2減C1的計算方式得到增強的螢光強度值。
優選的，所述鴨肉中雌二醇的專用檢測設備，包括機體，機體內固定安裝有滑杆，所述滑杆上滑動套接有滑座，所述滑座的底部固定連接有雷射掃描儀，所述機體內設置有檢測臺，所述檢測臺頂部的右側開設有凹槽且凹槽內固定連接有減震墊，所述減震墊的頂部設置有兩個器皿，且兩個器皿之間通過隔板隔開，所述機體內壁的頂部固定安裝有遮光板，所述機體的兩側均固定安裝有通風窗，所述機體的底部固定安裝有底座。
（三）有益效果
本發明提供了一種鴨肉中雌二醇的專用檢測方法。具備以下有益效果：
（1）、本發明通過將鴨肉攪碎後支撐液態狀並與納米金溶液混合，使得雌二醇適配體包裹在納米金的表面，當鴨肉中存在雌二醇時，包裹在納米金上的適配體會與雌二醇特異性結合，從而釋放出遊離的納米金，加入氯化鈉和氯化鉀溶液之後，游離的納米金產生聚集，加入羅金丹對聚集的納米金螢光沒有猝滅作用，當檢測物中沒有加入羅丹明時，納米金處於游離狀態，而納米金對於游離狀態的納米金具有很強的螢光猝滅作用，試驗通過設置對比例的方式，起到很直觀的對比作用，具有明確的辨別鴨肉中是否含有雌二醇的效果，並且通過螢光的對比強度，還可判斷鴨肉中所含雌二醇的濃度高低，並且該檢測方法具有操作簡單、檢測耗時短、成本較低的優點。
附圖說明
圖1為本發明結構示意圖。
圖中：1機體、2滑杆、3滑座、4雷射掃描儀、5檢測臺、6減震墊、7器皿、8隔板、9遮光板、10通風窗、11底座。
具體實施方式
下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。
如圖1所示，本發明提供一種技術方案：一種鴨肉中雌二醇的專用檢測方法，包括以下步驟：
一、採取鴨肉樣本：將新鮮鴨肉用清水洗淨，用不鏽鋼刀具順著鴨肉經絡方向割取兩塊5*5釐米的樣品，一塊用於實驗檢測，一塊用於備用，將兩塊鴨肉樣品分別放在食品級攪拌機內以每秒10圈的速度分別將兩塊鴨肉樣品攪碎，並且在攪拌的過程中添加少量清水，防止鴨肉粘貼在攪拌機內部，鴨肉攪碎後，用乾淨的勺匙分別將兩塊鴨肉樣品取出來，放置在乾淨的玻璃器皿中，暫時放在冰箱或冰櫃中冷藏5-8分鐘，溫度設為5-8攝氏度；
二、設置對照樣品：取一隻乾淨的玻璃器皿，並用馬克筆在玻璃器皿上標記為A，向玻璃器皿內添加100-120毫升的純淨水，再將步驟一中製得的兩份鴨肉樣品從冰箱或冰櫃中取出一份，另一份使用保鮮膜包裹在鴨肉樣品上，繼續冷藏，作為備用檢測樣品儲備起來，取出的鴨肉樣品用乾淨的玻璃器皿盛放，並用馬克筆在玻璃器皿上標記為B，向B器皿中添加20-30毫升的純淨水，用乾淨的攪拌勺將攪碎的鴨肉樣品進行攪拌，使其與純淨水充分融合；
三、開始試驗；S1、分別向A、B器皿中添加等量的適配體溶液，並分別用攪拌勺進行混勻和孵育5分鐘，得混合液A1、B1；
S2、分別向A1和B1中分別添加適量的等質量的二甘脂試劑，並分別用攪拌勺進行混勻，靜置1分鐘，再分別向A1、B1中添加等質量的甲基丙磺酸試劑，並分別用攪拌勺進行混勻和孵育5分鐘，得混合液A2、B2；
S3、向A2、B2中分別添加的30-40毫升等質量的納米金溶液，納米金溶液的製備方法如下：在100毫升的煮沸的質量百分比濃度為0.015%的氯金酸溶液中，加入4毫升質量百分比濃度為1%的檸檬酸三鈉溶液，攪拌30分鐘，移除加熱裝置後繼續攪拌混合物15分鐘，最後，使溶液達到25攝氏度並且使用0.15微米的超濾膜過濾，然後儲存在恆溫為4攝氏度的黑色玻璃瓶中備用，從而製得納米金溶液，並分別用攪拌勺進行混勻，得混合液A3、B3；
S4、向A3、B3中分別添加15-20毫升等質量的氯化鈉與氯化鉀混合液，氯化鈉的濃度為0.14mol/L，羅丹明的濃度為8umol/L，甲基丙磺酸試劑的濃度為20umol/L，甲基丙磺酸試劑是作為緩衝液的作用，還可以使用乙基丙磺酸代替甲基丙磺酸試劑，並分別用攪拌勺進行混勻，得混合液A4、和B4；
S5、取內徑為60*60毫米高度為60毫米的石英螢光比色皿兩個，並用馬克筆分別標記為A5和B5，洗淨並讓其自然晾乾，晾乾後，將A4、和B4混合液分別用導流管引流至A5和B5中，並將A5和B5兩個石英螢光比色皿置於螢光分光光度計內，接通電源，向螢光分光光度計內的A5和B5最終分別添加50-60毫升的等質量的羅丹明溶液，鴨肉中雌二醇檢測方法所涉及的製備樣品檢測體系為：取10毫升B5待測樣品，加入到離心管中，充分混勻後再將離心管置於25攝氏度條件下孵育25分鐘後，在混合液中加入30毫升濃度為0.14mol/L的氯化鈉溶液和25毫升濃度為8umol/L的羅丹明溶液，混勻，然後按照C2減C1的計算方式得到增強的螢光強度值，開啟螢光分光光度計進行掃描測定信號，螢光分光光度計的掃描條件為：激發光狹縫為9納米，發射光狹縫為2納米，激發光波長為480納米，在此條件下進行掃描，獲得其螢光光譜信號，A5和B5的螢光強度信號分別為C1和C2，計算增強的螢光強度值為C2與C1的差值，鴨肉中雌二醇的專用檢測設備，包括機體1，機體1內固定安裝有滑杆2，滑杆2上滑動套接有滑座3，滑杆2可以自由在滑座3上滑動，滑座3的底部固定連接有雷射掃描儀4，機體1內設置有檢測臺5，檢測臺5頂部的右側開設有凹槽且凹槽內固定連接有減震墊6，減震墊6起到減震的作用，減震墊6的頂部設置有兩個器皿7，兩個器皿7內分別盛裝有鴨肉樣品和空白對照樣，且兩個器皿7之間通過隔板8隔開，機體1內壁的頂部固定安裝有遮光板9，設置遮光板9起到增強螢光亮度顯示的效果，機體1的兩側均固定安裝有通風窗10，機體1的底部固定安裝有底座11。
使用時，本發明通過將鴨肉攪碎後支撐液態狀並與納米金溶液混合，使得雌二醇適配體包裹在納米金的表面，當鴨肉中存在雌二醇時，包裹在納米金上的適配體會與雌二醇特異性結合，從而釋放出遊離的納米金，加入氯化鈉和氯化鉀溶液之後，游離的納米金產生聚集，加入羅金丹對聚集的納米金螢光沒有猝滅作用，當檢測物中沒有加入羅丹明時，納米金處於游離狀態，而納米金對於游離狀態的納米金具有很強的螢光猝滅作用，試驗通過設置對比例的方式，起到很直觀的對比作用，具有明確的辨別鴨肉中是否含有雌二醇的效果，並且通過螢光的對比強度，還可判斷鴨肉中所含雌二醇的濃度高低，並且該檢測方法具有操作簡單、檢測耗時短、成本較低的優點。
綜上可得，該鴨肉中雌二醇的專用檢測設備，通過設置滑杆2、滑座3、雷射掃描儀4、隔板8和遮光板9，解決了現有雌二醇檢測方法及設備成本高和耗時長的問題。
需要說明的是，在本文中，諸如第一和第二等之類的關係術語僅僅用來將一個實體或者操作與另一個實體或操作區分開來，而不一定要求或者暗示這些實體或操作之間存在任何這種實際的關係或者順序。而且，術語「包括」、「包含」或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含，從而使得包括一系列要素的過程、方法、物品或者設備不僅包括那些要素，而且還包括沒有明確列出的其他要素，或者是還包括為這種過程、方法、物品或者設備所固有的要素。在沒有更多限制的情況下，由語句「包括一個……」限定的要素，並不排除在包括所述要素的過程、方法、物品或者設備中還存在另外的相同要素。
儘管已經示出和描述了本發明的實施例，對於本領域的普通技術人員而言，可以理解在不脫離本發明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發明的範圍由所附權利要求及其等同物限定。