一種雷公藤作藥引的中藥製劑及其製備方法和應用與流程

2023-12-12 04:45:32 1

本發明涉及中醫藥製備技術領域，具體而言，涉及一種雷公藤作藥引的中藥製劑及其製備方法和應用。

背景技術：

類風溼關節炎是一種以累及周圍關節為主的慢性、多系統性、炎症性自身免疫病。其臨床表現主要為對稱性、持續性關節腫脹和疼痛，常伴有晨僵。病理表現為關節滑膜的慢性炎症、血管翳形成，並出現關節和軟骨的破壞。全球有1％的人受此病困擾，導致嚴重功能障礙、永久性殘疾，且死亡率有上升趨勢。目前國際上治療類風溼關節炎的常用藥物有非甾體抗炎藥、改善病情抗風溼藥、生物製劑、糖皮質激素。以上藥物雖然療效明確，但其不良反應較多，如胃腸道症狀、肝腎功能損害以及可能增加的心血管和感染等不良事件。中醫藥治療類風溼關節炎最為突出的單味中藥當推雷公藤。雷公藤是衛矛科植物雷公藤的根、葉及花，藥性苦、辛、寒，有大毒，主要功效為祛風溼、活血通絡、消腫止痛。

雷公藤及其相關製劑作為治療類風溼關節炎的有效藥物，在臨床上已經被廣泛應用。但雷公藤具有一定的毒性，有效治療量與最小中毒量比較接近。治療劑量範圍內發生不良反應較多，對消化、泌尿、生殖、心血管、骨髓及血液等系統均有明確的損害。近年來對於關於雷公藤及其製劑在類風溼關節炎治療的文獻報導中，主要是分別針對雷公藤的炮製減毒工藝、製劑劑型改良、複方中藥配伍、聯合西藥和針灸配合等方面展開，但未從根本上解決臨床用雷公藤治療類風溼關節炎的毒副作用。

有鑑於此，特提出本發明。

技術實現要素：

本發明的第一目的在於提供一種雷公藤作藥引的中藥製劑，以解決現有雷公藤在治療類風溼性關節炎毒副作用大的問題，所述的雷公藤作藥引的中藥製劑，具有有效率高、不良反應率低、毒性弱等優點。

本發明的第二目的在於提供一種所述的雷公藤作藥引的中藥製劑的製備方法，該方法用陳皮和雷公藤的提取液溶化複方中藥製劑，然後加入飲用白酒，製成酒劑，具有方便、簡單、易於操作等優點，適合批量生產和廣泛應用。

本發明的第三目的在於提供一種所述的雷公藤作藥引的中藥製劑在製備治療類風溼關節炎，尤其是中醫辨證為風寒溼痺型類風溼關節炎的藥物中的應用

為了實現本發明的上述目的，特採用以下技術方案：

一種雷公藤作藥引的中藥製劑，按照重量份數計，包括由300～400份雷公藤和100～200份陳皮製成的藥引液和複方中藥製劑；

所述複方中藥製劑，包括按照重量份數計的如下組份：

羌活30～50份，獨活90～110份，海風藤50～70份，秦艽40～60份，桂枝70～90份，當歸50～70份，川芎40～60份，乳香10～30份，木香10～30份，甘草50～70份，防風50～70份，白芷50～70份，淡附片50～70份，制川烏50～70份，細辛20～40份，防己50～70份，萆薢40～60份，薏苡仁90～110份，黃芪90～110份，炒白芍50～70份，桑寄生20～40份，牛膝20～40份，蜈蚣10～15份，烏梢蛇3～6份和地龍10～30份。

雷公藤，又叫黃藤、黃臘藤、菜蟲藥、紅藥、水莽草。味苦、辛，性涼，大毒。歸肝、腎經。具有祛風除溼、通絡止痛、消腫止痛、解毒殺蟲之功效。但是，雷公藤有大毒，會使患者產生腹部不適、噁心或者腹瀉等症狀，因此對其在使用的過程中應須謹慎。

陳皮，味苦、辛，性溫。歸肺、脾經。具有理氣健脾，燥溼化痰。與雷公藤同煮，可以有效降低雷公藤的毒性，並且將陳皮與雷公藤預先水提，有助於雷公藤中的有效成分析出，同時降低其毒性。

羌活，味辛、苦，性溫。入膀胱、腎經。具有解表散寒、祛風勝溼、止痛的功效。

獨活，味辛、苦，性微溫。歸腎、膀胱經。具有祛風除溼、散痺止痛的功效。

海風藤，味辛、苦，性微溫。歸肝經。具有祛風溼、通經絡、止痺痛的功效。

秦艽，味辛、苦，性平。歸胃、肝、膽經。具有有祛風溼、清溼熱、止痺痛、退虛熱的作用。

當歸，味甘、辛，性溫。歸肝、心、脾經。具有補血活血、潤腸通便的功效。

川芎，味辛，性溫。入肝、膽經。具有行氣開鬱、祛風燥溼、活血止痛的功效。

乳香，味辛、苦，性溫。歸心、肝、脾經。具有活血行氣止痛、消腫生肌的功效。

木香，味辛，苦；性溫。歸脾、大腸、三焦經。具有行氣、止痛、健脾、消食的功效。

防風，味辛、甘，性微溫。歸膀胱、肺、脾、肝經。具有祛風解表、勝溼止痛、止痙的功效。

白芷，味辛，性溫。歸肺，脾，胃經。具有解表散寒、祛風止痛、通鼻竅、燥溼止帶、消腫排膿、祛風止癢的功效。

淡附片，大辛、大熱。歸心、脾、腎經，具有回陽救逆、補火助陽、逐風寒溼邪的功效。

制川烏，味辛、苦，性熱。歸心、肝、腎、脾經。具有祛風除溼、溫經止痛的功效。

細辛，味辛，性溫。歸心、肺、腎經，具有祛風散寒、祛風止痛、通竅、溫肺化飲的功效。

桂枝，樟科植物肉桂的乾燥嫩枝。味辛、甘，性溫。歸肺、心、膀胱經。具有發汗解表、散寒止痛、通陽化氣。

甘草，味甘，性平。歸心、肺、脾、胃經。具有補脾益氣，清熱解毒，的功效，此外還有調和諸藥，使各中藥藥效平衡的作用。另外，其清熱解毒的功效可以有效緩解雷公藤的毒性。

防己，味辛、苦，性寒。歸膀胱、肺經。具有祛風止痛、利水消腫的功效。

薏苡仁，別稱薏米。味甘、淡，性涼。歸脾、胃、肺經。有利水滲透溼，健脾止瀉，除痺，排膿，解毒散結的作用。用於治療水腫、小便不利、脾虛洩瀉、溼痺拘攣、肺癰和腸癰。

萆薢，味苦、性平。歸腎、胃經。具有利溼去濁、祛風除痺的功效。

黃芪，性溫，味甘。歸肺、脾、肝、腎經。具有補氣固表、託毒排膿、利尿、生肌的功效。

炒白芍，性味苦、酸，微寒。歸肝、脾經。具有平肝止痛、養血調經、斂陰止汗的功效。

桑寄生，味苦、甘，性平。歸肝、腎經。具有祛風溼、補肝腎、強筋骨的作用。

牛膝，性味：苦、甘、酸，平。歸經：歸肝、腎經。具有逐瘀通經、補肝腎、強筋骨、利尿通淋、引血下行的功效。

蜈蚣，辛，溫。歸肝經。具有息風鎮痙，通絡止痛，攻毒散結的功效。

烏梢蛇，味甘，性平。入肺、脾、肝經。具有祛風溼，通經絡，止痙。

地龍，具有利尿、鎮痛、平喘、降壓、解熱、抗驚厥等作用，還可以通經活絡、活血化瘀、預防治療心腦血管疾病作用。

本申請所提供的中藥製劑，採用雷公藤作為藥引，為了減弱雷公藤的毒性，採用陳皮與雷公藤進行水提得到水提液，以降低毒性。在複合中藥製劑中，採用傳統治療風溼病的中藥，如羌活、獨活、海風藤、秦艽、蜈蚣和烏鞘蛇等，再輔以熱性藥物，散寒除溼，在既定份數內，對風寒溼痺型類風溼關節炎，療效顯著。另外，搭配健脾開胃的中藥，歸經胃、肝、腎、肺，在多方面養胃、排熱、利尿，從而降低雷公藤作用過程中的毒性，達到全面治療風溼病的功效。其中，羌活、秦艽、白芷、淡附片和桂枝在本申請所提供的搭配範圍內，具有很好的溫陽、散寒的功效。

優選的，所述的雷公藤作藥引的中藥製劑，按照重量份數計，包括320～380份雷公藤和150～200份陳皮製成的藥引液和複方中藥製劑；

所述複方中藥製劑，包括按照重量份數計的如下組份：

羌活35～45份，獨活95～105份，海風藤55～65份，秦艽45～55份，桂枝75～85份，當歸55～65份，川芎45～55份，乳香15～25份，木香15～25份，甘草55～65份，防風55～65份，白芷55～65份，淡附片55～65份，制川烏55～65份，細辛25～35份，防己55～65份，萆薢45～55份，薏苡仁95～105份，黃芪95～105份，炒白芍55～65份，桑寄生25～35份，牛膝25～35份，蜈蚣12～14份，烏梢蛇2～5份和地龍15～25份。

可以對中藥製劑的組份進行優選。

優選的，所述雷公藤為雷公藤的地下部分帶皮的根。

地下部分的根，帶黃色根皮者，其皮含多種化學成分，作用力強，為治療類風溼關節炎有效藥物。

優選的，所述藥引液的製備方法包括以下步驟：

將雷公藤和陳皮加入雷公藤質量10～12倍的水中浸泡，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮，得到相當於所述雷公藤質量2～4倍的藥引液。

優選的，所述武火的溫度大於180℃，所述文火的溫度為80～120℃。

優選的，所述浸泡的時間為2～3小時，所述文火煎煮的時間為2～3小時。

對雷公藤和陳皮採用水提的方法進行提取，作為藥引液，可以有效減弱雷公藤的毒性。

優選的，還包括飲用白酒，所述飲用白酒與所述藥引液的體積比為(0.8～1.0)：1。

優選的，所述飲用白酒的度數為40～50度。

在中藥製劑中加入飲用白酒，製備成藥酒，可以對中藥中的有效成分進行萃取，對中藥中的有效成分進行更好的吸收。

如上所述的雷公藤作藥引的中藥製劑的製備方法，包括以下步驟：

將複方中藥製劑加入藥引液中，加熱使之溶化，降溫後，加入飲用白酒，混勻後得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑；

更優選的，所述複方中藥製劑選用免煎中藥。

如上所述的雷公藤作藥引的中藥製劑在製備治療類風溼關節炎中的藥物中的應用，尤其是中醫辨證為風寒溼痺的類風溼關節炎的藥物中的應用。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

(1)本申請所提供的雷公藤作藥引的中藥製劑，採用陳皮和雷公藤製備的提取液作為藥引，有效降低雷公藤的毒性，配合散寒祛溼的中藥，可以有效治療風溼，並且中藥製劑中還含有健脾開胃、利尿的成分，與治療風溼的中藥在份數上合理搭配，有效降低雷公藤的毒性和緩解對患者腹部造成的不適，起到增效減毒的作用。

(2)本申請所提供的雷公藤作藥引的中藥製劑的製備方法，具有方便、簡單、易於操作等優點，適合批量生產和廣泛應用。

具體實施方式

下面將結合具體實施方式對本發明的技術方案進行清楚、完整地描述，但是本領域技術人員將會理解，下列所描述的實施例是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例，僅用於說明本發明，而不應視為限制本發明的範圍。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。實施例中未註明具體條件者，按照常規條件或製造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。

實施例1

本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥製劑，包括由300g雷公藤和100g陳皮製備的藥引液，和如下中藥組份：羌活30g，獨活90g，海風藤50g，秦艽40g，桂枝70g，當歸50g，川芎40g，乳香10g，木香10g，甘草50g，防風50g，白芷50g，淡附片50g，制川烏50g，細辛20g，防己50g，萆薢40g，薏苡仁90g，黃芪90g，炒白芍50g，桑寄生20g，牛膝20g，蜈蚣10g，烏梢蛇3g和地龍10g。

其製備方法，包括以下步驟：

(1)、將雷公藤和陳皮加入3000ml的水中浸泡2小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮2小時，得到800ml藥引液；

(2)、將上述免煎的複方中藥製劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫後加入40度飲用白酒800ml，混勻後得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。

實施例2

本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥製劑，包括由400g雷公藤和200g陳皮製備的藥引液，和如下中藥組份：羌活50g，獨活110g，海風藤70g，秦艽60g，桂枝90g，當歸70g，川芎60g，乳香30g，木香30g，甘草70g，防風70g，白芷70g，淡附片70g，制川烏70g，細辛40g，防己70g，萆薢60g，薏苡仁110g，黃芪110g，炒白芍70g，桑寄生40g，牛膝40g，蜈蚣15g，烏梢蛇6g和地龍30g。

其製備方法，包括以下步驟：

(1)、將雷公藤和陳皮加入3500ml的水中浸泡2小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮2小時，得到1200ml藥引液；

(2)、將上述免煎的複方中藥製劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫後加入50度飲用白酒1000ml，混勻後得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。

實施例3

本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥製劑，包括由320g雷公藤和150g陳皮製備的藥引液，和如下中藥組份：羌活35g，獨活95g，海風藤55g，秦艽45g，桂枝75g，當歸55g，川芎45g，乳香15g，木香15g，甘草55g，防風55g，白芷55g，淡附片55g，制川烏55g，細辛25g，防己55g，萆薢45g，薏苡仁95g，黃芪95g，炒白芍55g，桑寄生25g，牛膝25g，蜈蚣12g，烏梢蛇2g和地龍15g。

其製備方法，包括以下步驟：

(1)、將雷公藤和陳皮加入3000ml的水中浸泡3小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮3小時，得到1000ml藥引液；

(2)、將上述免煎的複方中藥製劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫後加入50度飲用白酒800ml，混勻後得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。

實施例4

本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥製劑，包括由380g雷公藤和200g陳皮製備的藥引液，和如下中藥組份：羌活45g，獨活105g，海風藤65g，秦艽55g，桂枝85g，當歸65g，川芎55g，乳香25g，木香25g，甘草65g，防風65g，白芷65g，淡附片65g，制川烏65g，細辛35g，防己65g，萆薢55g，薏苡仁105g，黃芪105g，炒白芍65g，桑寄生35g，牛膝35g，蜈蚣14g，烏梢蛇5g和地龍25g。

其製備方法，包括以下步驟：

(1)、將雷公藤和陳皮加入4000ml的水中浸泡3小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮2小時，得到1100ml藥引液；

(2)、將上述免煎的複方中藥製劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫後加入50度飲用白酒1000ml，混勻後得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。

實施例5

本實施例提供的雷公藤作藥引的中藥製劑，包括由350g雷公藤和150g陳皮製備的藥引液，和如下中藥組份：羌活40g，獨活100g，海風藤60g，秦艽50g，桂枝80g，當歸60g，川芎50g，乳香20g，木香20g，甘草60g，防風60g，白芷60g，淡附片60g，制川烏60g，細辛30g，防己60g，萆薢50g，薏苡仁100g，黃芪100g，炒白芍60g，桑寄生30g，牛膝30g，蜈蚣13g，烏梢蛇3g和地龍20g。

其製備方法，包括以下步驟：

(1)、將雷公藤和陳皮加入4000ml的水中浸泡2～3小時，先用武火加熱至沸騰，再改為文火煎煮2～3小時，得到1000ml藥引液；

(2)、將上述免煎的複方中藥製劑加入步驟(1)中的藥引液中，加熱使中藥融化，降至室溫後加入50度飲用白酒1000ml，混勻後得到該雷公藤作藥引的中藥酒劑。

對比例1

對比例1為實施例5步驟(1)中所提供的藥引液。

對比例2

對比例2與實施例5基本相同，只是在煎煮藥引液時，只加入350g雷公藤而不加入陳皮。

對比例3

對比例3與實施例5基本相同，只是複方中藥製劑中，去除開胃健脾的中藥：當歸、甘草、薏苡仁、乳香、木香、白芷、黃芪和炒白芍。

對比例4

對比例4與實施例5基本相同，只是複方中藥製劑中，去除祛風散寒的中藥：羌活、秦艽、白芷、淡附片和桂枝。

實驗例1雷公藤作藥引的中藥製劑對Ⅱ型膠原誘導大鼠類風溼性關節炎的影響

(一)實驗對象

Wistar大白鼠，體重(180±20)g，湖北省醫學科學院實驗動物中心，合格證號SCXK(鄂)200320005。

(二)實驗藥物

本申請所實施例1-5所提供的雷公藤作藥引的中藥製劑，以及對比例1-4所提供的中藥。

(三)實驗方法

大鼠CIA模型的建立，將酸性CⅡ溶解於0.1mol/L乙酸(含量2mg/mL)，實驗前將CⅡ溶解加至冷的不完全弗氏佐劑中(1mg/mL)，於每隻大鼠左後足蹠皮內注射0.25mL致炎。

取Wistar大鼠110隻，雌雄各半，隨機分為11組，即正常對照組、模型對照組，實施例1-5給藥組和對比例1-4給藥組(劑量1mg/kg)。正常對照組注射等量生理鹽水作致炎物質。致炎當日給藥，連續28d。分別於致炎前，致炎後第14、16、18、20、24、28天用毛細管放大測量法測右後足體積，以致炎前體積為基礎值，求出腫脹增長百分率[(給藥後值-給藥前值)/給藥前值]×100。

大鼠致炎後第28天處死，無菌常規製備脾淋巴細胞懸液，臺盼藍染液進行活細胞計算大於95，調整細胞濃度至終濃度為1×106/mL，用含體積分數為10的RPMI-1640培養液培養細胞，按每孔100μL接種於96孔細胞培養板，給予100μLConA(5μg/mL)或LPS(5μg/mL)分別刺激T、B淋巴細胞，另設不給予ConA和LPS刺激的自身空白對照孔，每個樣品每實驗點設3復孔。37℃、5CO2培養44h；每孔加入20μLMIT(5mg/mL)，繼續培養至48h，終止培養，吸棄培養液，每孔加入200μLDMSO終止反應，振蕩搖勻。酶標儀檢測(570/630nm)A值。

大鼠處死後，迅速在右足踝關節上方0.5cm處摘取腫脹足爪。縱向切開，放入5mL冷生理鹽水中，於4℃浸泡過夜，離心取上清，過濾除菌，-20℃，保存待測NO、PGE2的含量。

取足下蹠部位的組織，用10％中性緩衝福馬林及時固定，石蠟包埋，切片，貼片(載玻片預先用多聚賴氨酸浸泡，撈片後60℃加熱60min，以使切片緊密貼附)，常規脫蠟至水，0.1mol/LPBS(pH＝7.4)浸泡5min。微波修復抗原，然後滴加封閉液，甩去多餘液體。滴加50稀釋的NF-кβ/p65羊IgG單克隆抗體和MMP-9小鼠IgG單克隆抗體，陰性對照以PBS代替一抗，於4℃孵育過夜。0.1mol/LPBS洗滌3次，每次5分鐘。

結果判斷：以胞漿出現淡黃色細顆粒狀著色為陽性細胞，光學顯微鏡下觀察，每組隨機計數500個細胞，計算陽性表達率，同時觀察染色強度，按染色強度著色淡黃為弱陽性(+)，棕黃為陽性(++)，棕褐色為強陽性(+++)，無著色為陰性(-)。

實驗結果以x±s表示，用t-test進行組間顯著性檢驗，數據分析採用spss10.0軟體。

藥物對CⅡ誘導大鼠足腫脹的抑制作用實驗結果如表1所示。對CIA大鼠脾T、B淋巴細胞增殖反應的影響實驗結果如表2所示。對CIA大鼠脾細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響如表3所示。對CIA大鼠關節浸液內NO、PGE2含量的影響如表4所示。對CIA大鼠組爪組織中NF-кβ/p65蛋白陽性表達率和MMP-9蛋白陽性表達率的影響如表5所示。

表1對CⅡ誘導大鼠足腫脹的抑制作用(x±s,n＝10)

與模型組比較:*P<0.05,**P<0.01；與正常組比較△△P<0.01(表2、3、4同)

實驗結果表明，模型組大鼠於致炎後14d左右出現繼發足腫脹，致炎20d左右腫脹度達峰值。與模型組比較，本申請所供的雷公藤作藥引的中藥製劑表現出抑制足腫脹的作用，表明該中藥製劑能顯著抑制CIA大鼠的繼發病變。並且，實施例組的效果優於對比例組。

表2對CIA大鼠脾T、B淋巴細胞增殖活性的影響(x±s,n＝10)

實驗結果表明，與正常組相比，模型組大鼠ConA、LPS誘導的脾T、B淋巴細胞增殖活性明顯升高(P<0.01)；與模型組比較本申請所供的雷公藤作藥引的中藥製劑抑制CIA大鼠ConA誘導的T淋巴細胞的增殖活性(P<0.01)，和對LPS誘導的B淋巴細胞增殖活性(P<0.01)。並且，實施例組的效果優於對比例組。

表3對CIA大鼠脾細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6含量的影響

模型組大鼠脾細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6含量均比正常組顯著升高(P<0.01)，本申請所供的雷公藤作藥引的中藥製劑組和對比例組各項指標較模型組均顯著下降(P<0.05,P<0.01)，提示該中藥製劑能顯著抑制CIA大鼠脾細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平。並且，實施例組的效果優於對比例組。

表4對CIA大鼠關節浸液內NO、PGE2含量的影響

模型組大鼠關節浸液中NO、PGE2含量與正常組相比明顯增高(P<0.01)，本申請所供的雷公藤作藥引的中藥製劑組關節浸液內NO、PGE2含量顯著低於模型組(P<0.01)。表明該中藥製劑顯著抑制CIA大鼠關節浸液內NO、PGE2的水平。並且，實施例組的效果優於對比例組。

表5對CIA大鼠組爪組織中NF-кβ/p65蛋白陽性表達率和MMP-9蛋白陽性表達率的影響

實驗結果表明，本申請所供的雷公藤作藥引的中藥製劑組可以明顯降低NF-кβ/p65蛋白和MMP-9蛋白陽性表達率(P<0.01)。表明該中藥製劑顯著降低兩種蛋白的陽性表達率。並且，實施例組的效果優於對比例組。

綜上，本申請所提供的雷公藤作藥引的中藥製劑，能對關節炎有顯著療效。通過對比例和實驗例組的對比，對比例1為不添加任何中藥的單純的雷公藤提取液，毒性大，效果差。而對比例2可以證明，陳皮的添加可以有效抑制雷公藤的毒性，提高藥效。對比例3和對比例4分別證明了，所添加的健脾開胃和溫熱散寒的中藥均對藥效有促進作用，並且添加的健脾開胃的中藥可以有效抑制雷公藤的毒性。

實驗例2雷公藤作藥引的中藥製劑不良反應測試

(一)實驗動物

SPF級KM小鼠，雌雄各半，體重18～22g，適齡，健康。購自山東大學實驗動物中心，動物許可證號：SCXK(魯)20090001。實驗動物配合飼料(鼠)，生產許可證號：SCXK(魯)20090014。

(二)實驗方法

取小鼠90隻，雌雄各半，禁食不禁水12h，以濃度為1mg/kg將實施例1-5所提供的雷公藤作藥引的中藥製劑和對比例1-4所提供的中藥進行連續灌胃3次，每八小時一次。每次都要觀察記錄藥後15min，30min，1h，2h，4h，8h的毒性反應和死亡情況。

實驗結果如表6所示。

表6不良反應記錄結果

實驗結果表明，採用對比例1所提供的藥物餵藥後，小鼠死亡率高，首先發生時的時間幾種在藥後24-72h間，而對比例2-4比對比例1的死亡率有所降低，但是缺少恰當的中藥配比，影響了對雷公藤水提液的毒性緩釋作用，造成小鼠不良反應率和死亡率高。

實驗例3雷公藤作藥引的中藥製劑對雄性小鼠生殖細胞毒性研究

(一)實驗動物及染毒

健康昆明種雄性小鼠66隻，體重30～35g，隨機分為11組，將本申請實施例1-5所提供的雷公藤作藥引的中藥製劑以及對比例所提供的中藥製劑(劑量1mg/kg)。陰性對照組，灌服1mg/kg的生理鹽水，每日灌服，持續三周，每周按體重調整一次劑量。停藥後24h處死。陽性對照組，腹腔注射環磷醯胺100mg/kg，注射2d，第3d處死。

(二)實驗方法

(1)骨髓微核實驗

頸椎脫臼法處死小鼠，迅速取後肢股骨，小牛血清清洗骨髓腔，推片。甲醇固定15min，Giensa染色10～15min，風乾。油鏡下每隻小鼠計數1000個嗜多染紅細胞中含微核的嗜多染紅細胞，計算微核千分率。

(2)精子畸形實驗

觀察每隻動物的300個精子，記錄畸變發生率。

實驗結果如表7所示。

表7骨髓微核實驗和精子畸形實驗結果

實驗結果表明，微核率可以反應致畸因素對細胞損傷程度和染色體的穩定性。採用本申請實施例和對比例所提供的中藥製劑，對細胞有不同程度的誘變效應。採用對比例1所提供的藥物餵藥後，小鼠細胞微核率高，而對比例2-4比對比例1的微核率有所降低，但是缺少恰當的中藥配比，影響了對雷公藤水提液的毒性緩釋作用，造成小鼠細胞微核率和精子畸形率高。其中，對比例1為不添加任何中藥的單純的雷公藤提取液，毒性大，效果差。而對比例2可以證明，陳皮的添加可以有效抑制雷公藤的毒性，提高藥效。對比例3和對比例4分別證明了，所添加的健脾開胃和溫熱散寒的中藥均對藥效有促進作用，並且添加的健脾開胃的中藥可以有效抑制雷公藤的毒性。

儘管已用具體實施例來說明和描述了本發明，然而應意識到，以上各實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；本領域的普通技術人員應當理解：在不背離本發明的精神和範圍的情況下，可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術特徵進行等同替換；而這些修改或者替換，並不使相應技術方案的本質脫離本發明各實施例技術方案的範圍；因此，這意味著在所附權利要求中包括屬於本發明範圍內的所有這些替換和修改。