一種鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用的製作方法

2024-03-26 05:17:05 2

專利名稱：一種鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於植物基因工程領域。具體涉及一種鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用。
背景技術：
根在植物生長發育中具有吸收、固著、輸導、合成、儲藏和繁殖等重要作用；同時，根也是赤黴素、細胞分裂素和植物鹼等一些重要生物活性物質的合成部位，這些物質對植物地上部位的組織細胞生長、器官形態建成有很大影響。因此，根系發育的好壞直接影響著植物的生長發育狀況。利用大量的根發育突變體進行研究，目前雙子葉植物根發育的分子調控機制已取得了一定的進展。研究表明，生長素、細胞分裂素等植物激素在調節植物根的發育起重要作用，許多影響根系形態發育的基因是通過參與激素信號途徑來調控根系發育(Hirota et al. , 2007 ；0kushima et al. , 2007 ；Kubo et al. , 1999;Rogg et al.,2001)。與雙子葉植物相比，水稻等單子葉植物根發育的分子調控機制的研究相對落後(Loet al. , 2008; Zhaoet al.，2009)。由於單、雙子葉植物根繫結構和組成不同，推測控制兩者根系發育的分子調控機制可能不完全相同。因此，開展水稻等單子葉植物的分子遺傳的研究具有重要意義。水稻是重要的糧食作物，而根系是水稻的重要營養器官，是決定水稻生長、產量、以及抗性的重要部分。但目前對水稻根系發育分子遺傳的研究不多。與雙子葉植物一樣，目前報導的幾個影響水稻根系形態建成的基因中，多數參與了植物激素信號途徑從而影響到根系的發育。其中，影響水稻不定根生長發育的won I基因可能通過生長素信號途徑和細胞分裂途徑調控水稻不定根的生長發育(Zhaoet al. , 2009) -,CRLKCROWN ROOTLESS I)是水稻根形態建成的重要因子，該基因突變影響不定根的生長，其表達水平受生長素作用因子調節(Inukaiet al. , 2005)。C2H2型鋅指蛋白是一類普遍存在於植物中、具有指狀結構域的轉錄因子，在植物等真核生物基因組中數量多、且分布廣泛。儘管目前已有的研究表明，C2H2型鋅指蛋白對植物的生長發育、抗逆、抗病等方面均起重要作用，但絕大多數鋅指基因的具體功能並不清楚。特別是，有關C2H2型鋅指蛋白基因參與調節植物根系發育的方面的報導還很少。最近，從擬南芥從克隆了一個受Pi飢餓誘導表達的C2H2型鋅指基因ZAT6。該基因被認為是第一個報導、涉及調節根發育與養分應激反應過程有關的C2H2型鋅指基因。ZAT6過表達降低了 Pi的吸收從而影響根的發育、阻礙幼苗的生長，推測該基因的主要功能是抑制初生根的生長、控制根的結構從而動態調節植物對Pi的吸收(Devaiah et al.，2007)。此外,玉曉紅等(2011)的研究表明，過量表達AsZTPZ的轉基因幼苗因根系不能正常發育而死亡，初步推測OsZRL可能與水稻根系發育有關。

發明內容
本發明目的在於提供一種鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用，該水稻根系發育控制基因為C2H2型鋅指蛋白基因該基因能夠調節水稻根的發育，這為改良水稻的根部性狀提供了新的途徑。
本發明的技術方案如下
所述鋅指蛋白基因為C2H2型鋅指蛋白基因《517^-07，其核苷酸序列如SEQ ID NO. I所示，該基因編碼的胺基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。將含有基因的過表達真核重組質粒或含有基因的RNA幹涉表達真核重組質粒轉化水稻，獲得轉基因植株。所述過表達真核重組質粒是將基因全長編碼序列插入到真核表達載體中獲得。所述真核表達載體為PTCK303。所述RNA幹涉表達真核重組質粒是由基因片段和真核表達載體構成；所述《517^-07基因片段是位於起始密碼子下遊335bp至917bp的核苷酸序列，將所述
基因片段分別以正向和反向插入到真核表達載體中，正向插入的基因片段和反 向插入的基因片段之間存在有478bp的內含子序列。所述真核表達載體為PTCK303。本發明所述控制水稻根系發育的基因命名為(Oryza sativazinc-finger protein,位於水稻第5染色體上的第7個鋅指蛋白基因)，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID No. I所示，所編碼的胺基酸序列如SEQ ID No. 2所示，具有一個C2H2型鋅指結構域。根據水稻基因組注釋的mRNA序列(基因序列名稱為L0C_0s05g20930，從水稻基因組資料庫下載獲得)，利用網際網路提供的在線引物設計軟體Web-Primer，設計了一對擴增
基因的特異引物。因該基因無內含子序列，利用PCR技術從粳稻品種日本晴的基因組的DNA中分離到0sZPT5-07的編碼序列。將含上述基因的過量表達和幹涉表達重組質粒轉化水稻，獲得轉基因植株。實驗結果表明與野生型比較，過量表達的轉基因陽性植株的根系發達，而降低表達的轉基因陽性植株的根系生長明顯受到抑制，表明該基因能夠調節水稻根的發育，並可在水稻性狀改良中應用。


圖I :構建基因的過量表達載體其中圖I中A -.0sZPT5~07基因過量載體的結構示意圖；圖I中B :中間載體pMDT18-T-flsZ/T5-W菌液的PCR檢測(分子量標記BM5000，箭頭所示為1029bp的目標條帶);圖I中C :雙酶切檢測量表達載體Ubi/0sZPT5~07 (Marker :BM5000，箭頭所示為1029bp的目標條帶)。Hyg:潮黴素抗性基因；Nos: 一種終止子；UBI-1: —種啟動子；OTS: β-葡萄糖苷酸酶基因；LB，RB:載體的左、右邊界。圖2 :構建勺幹擾載體 AsZZ7T^-W-RNAi ;其中圖 2 中 A -.0sZPT5~07擾載體的結構示意圖；圖2中B :中間載體？了0(303- 517^-07-1的雙酶切檢測(分子量標記BM2000，箭頭所示為O. 6kb左右的目標條帶)；圖2中C :質粒？了0(303- 517^-^7的雙酶切檢測(Marker BM2000,箭頭所示為I. 7kb左右的目標條帶)。Hyg:潮黴素抗性基因；Nos: 一種終止子；UBI-1: —種啟動子；OTS: β-葡萄糖苷酸酶基因；LB，RB:載體的左、右邊界；Intron，一種水稻內含子。圖3 :增強表達的轉基因植株的檢測及其表型特徵；其中圖3中A :轉基因植株的潮黴素抗性基因片段的鑑定(Marker BM5000 ;1_4 :4個轉基因株系);圖3中B :半定量RT-PCR檢測過量表達轉基因植株中0sZPT5-07的表達水平；圖3中C :轉基因植株的表型。ACTIN :—種水稻基因；Wildtype :非轉基因水稻。圖4抑制表達的轉基因植株的檢測及其表型特徵；其中圖4中A:轉基因植株的潮黴素鑑定(Marker BM5000 ;1_6 6個轉基因植株)；圖4中B :半定量RT-PCR檢測2株0sZPT5-07-mki植株的表達水平；圖4中C :發芽7天的Tl代轉基因植株與對照的根部形態特徵。ACTIN :—種水稻基因；Wildtype :非轉基因水稻。
具體實施例方式 下面結合實例，對本發明作進一步說明。本實施例中所用弓丨物由上海生物工程公司合成,序列測定由北京三博生物科技有限公司完成。各種DNA聚合酶，限制性內切酶，T4 DNA連接酶，克隆載體pMD18-T-Simplevector,均購自TaKaRa公司，DNA回收試劑盒購自Promega公司。
實施例I :構建基因過量表達載體
用SDS法提取水稻日本晴基因組DNA。因基因(基因序列名稱為L0C_0s05g20930,從水稻基因組資料庫下載獲得)無內含子序列，可用PCR方法從水稻基因組DNA中擴增出該基因的ORF序列。利用的基因組序列設計一對引物，以日本晴基因組DNA為模板PCR擴增出長度為1029bp的基因序列並插入到含pTCK303質粒中UBI啟動子的下遊，構建了如圖I中A所示的過量表達載體PCR擴增目的基因序列所用的引物是(下劃線部分為治7/7 I和fee I的酶切位點)
上遊引物式I GGGGTACCATGGATCCAGCAAGGTACT 下遊引物 Sae I CGAGCTC GAAACACGAGTGGTGAATAA。PCR擴增產物回收後與中間載體pMDT18-T連接，隨後轉化入大腸桿菌感受態細胞中；挑取轉化後的大腸桿菌單菌落培養，菌液經PCR擴增、瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示有一條如圖I中B所示的1029bp條帶。該序列經測序確認完全正確後，提取中間載體pMDTl用兩種內切酶命/ I /Sac I 同時酶切質粒 pMDTlS-T-flsl/^-i^ 和PTCK303，將兩者分別用膠回收試劑盒回收。將兩種回收產物混勻後於16°C過夜連接後轉化入大腸桿菌中。挑取大腸桿菌單菌落培養，後提取質粒pTCK303-fls^7^-i 7，用治7/7 I /Sac I雙酶切該質粒,瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示有一條如圖I中C所示的Ikb左右的特異條帶，說明目的基因已經連入表達載體。提取該質粒，並利用凍融法轉入農桿菌EHA105感受態細胞中，挑選出陽性克隆用於水稻遺傳轉化。 PCR擴增0sZPT5_07基因序列全長的反應體系為將48ul超純水、8ul10XBuffer、9ul dntp (2. 5 mm)、7ul 引物、4ul ExTaq 和 4ul 基因組 DNA 混勻，總體積為80ul。PCR 反應程序為941預變性41^11，941變性 lmin，65°C退火 50s，72°C延伸 lmin，30個循環，72°C延伸10min，10°C保存。所用的酶切體系為30ul PCR產物或者質粒，8ul IXL Buffer，命/ \ RSac I各3ul，超純水36ul，總體積80ul，混浴後放於37°C水浴鍋保溫4_6小時。大腸桿菌感受態細胞製備的方法是接種受體菌DH5 α，挑取單菌落於無抗生素的LB液體培養基中37°C搖床培養過夜；取Iml過夜培養菌液於100ml LB培養基中，在37°C搖床上劇烈振蕩培養約2. 5-3小時；將O. IM CaCl2溶液置於冰上預冷；吸取I. 4ml培養好的菌液至I. 5ml離心管中，在冰上冷卻IOmin ;於4°C、5000rpm冷凍離心IOmin ;棄去上清，加入100 μ I預冷O. IM CaC12溶液，重新懸浮細胞，在冰放置30min ;4°C、5000rpm冷凍離心IOmin ;棄上清液，加入100 μ I預冷O. IM CaC12溶液，重新懸浮細胞。細胞懸浮液可立即用於轉化實驗或添加15% - 20%甘油後於超低溫冷凍貯存備用。大腸桿菌細胞的熱激法轉化法是取出製備好的感受態細胞，放在冰上融化；每100 μ I感受態細胞加入約5 μ I連接產物混勻，在冰上放置20min ;將離心管放置42°C水浴，熱擊60 - 90秒；快速將離心管轉移至冰浴，放置I 一 2min ;每管加400 μ I預熱至37°C的LB液體培養基，在37°C搖床溫和搖動溫育60min ;取適當體積均勻塗布於含IPTG、X-gal和抗生素的LB平板；倒置培養皿，於37°C培養12 — 16小時即可觀察到轉化菌落。質粒DNA提取方法是取含有質粒的大腸桿菌菌液於LB培養基上37°C過夜培養；用接種針挑取單菌落，接種於含有抗生素的LB培養基中，37°C搖床 200 r/min過夜培養；吸取I. 5 ml菌液至離心管中，12000 g離心lmin，收集菌體，倒掉菌液；加入120 μ I溶液I振蕩打勻，重新懸浮細胞，震蕩混勻，冰上放置2 - 3min ;加入240 μ I溶液II，輕柔顛 倒混勻，冰上放置5min ;加入180 μ I溶液III顛倒混勻，放置於冰上5min ；12000 g離心5 min ;將上清夜轉移至另一乾淨離心管中，加入等體積的苯酚氯仿抽提溶液中的蛋白等雜質。室溫離心3min，再將上清液轉移至另一乾淨的離心管中，加入2倍體積的無水乙醇，一20度下放置20min ;12000 g常溫離心5min ;倒盡上清，加75%乙醇浸洗；12000 g常溫離心5min ;超淨臺上風乾DNA ;根據實驗的目的加入10 — 20 μ I RNase A的水溶解，37° C消化半小時，質粒於_20°C保存備用。根癌農桿菌EHA105感受態細胞製備方法是挑取單菌落接種於5ml含rif的YEB液體培養基中，28 °C，振蕩培養過夜；取2ml菌液轉入50mlYEB液體培養基中，繼續培養至OD值為O. 3-0. 4 ;轉入無菌離心管,冰浴30min ；5000rpm離心5min,去上清；加入Iml20mmol/LCaC12 重懸菌液；5000rpm 離心 5min,去上清；加入 200 μ I 20mmol/L CaC12 重懸菌液，細胞懸浮液可立即用於轉化實驗或添加冷凍保護劑後超低溫冷凍貯存備用。農桿菌細胞的凍融法轉化方法是取5 μ I純化的質粒DNA，加入200 μ I感受態細胞，混勻；冰浴15min，轉入液氮冷凍lmin，迅速置37°C水浴溫浴5min ;加入600 μ IYEB液體培養基，280C，250r/min預表達4_5h ;取適當體積均勻塗布於含有抗生素YEB平板；28°C培養2天，即可觀察到轉化子。實施例2 :構建基因幹涉表達載體
利用0sZPT5-07的基因組序列設計出兩對含不同酶切位點的特異引物，以日本晴基因組DNA為模板PCR擴增出兩段基因的幹涉表達片段，將這兩段基因組序列分別以正向和反向連接的方式插入到PTCK303質粒中一段水稻內含子的兩側，構建了如圖2中A所示的基因的幹涉表達載體0sZPT5-07- RNAi。PCR擴增正向和反向連接片段所用的引物分別是(下劃線部分分別為治7/7 I /BatnH \ ^Spe I /Sac I的酶切位點)
正向連接GGGGTACCGCCAAACCAAAACTACATGA CGGGATCCTCTAGTTCTTCAACCGAGGA，
反向連接GGACTAGTGCCAAACCAAAACTACATGA CGAGCTC TCTAGTTCTTCAACCGAGGA 以日本晴基因組DNA模板和正向連接序列弓丨物PCR擴增出582bp的0sZPT5_07正向連接片段。用式μ I /BamH I同時雙酶切PCR產物及pTCK303載體。將兩者用膠回收試劑盒分別回收後，回收產物按照一定比例混勻、於16°C過夜連接後轉化入大腸桿菌中。挑取大腸桿菌單菌落培養後提取質粒,用治7/7 I /BamH I雙酶切後電泳檢測結果顯示有一條如圖2中B所示的580bp左右的條帶，表明0sZPT5-07的幹擾片段已經正向連接入載體pTCK303中，暫將該中間載體命名為口了0(303- 517^-07-1。以日本晴的基因組DNA模板和反向連接序列弓丨物PCR擴增出582bp的Z0S5-07序列。用I /Sac I同時雙酶切該PCR產物和中間載體？了0(303- 517^-07-1。將兩者用膠回收試劑盒分別回收後，將兩種回收產物按照一定比例混勻、於16°C過夜連接後轉化入大腸桿菌中。挑取大腸桿菌單菌落搖菌培養後提取質粒，用I /Sac I雙酶切後電泳檢測結果顯示有一條如圖2中C所示的I. 7kb左右的條帶(包括兩段0sZPT5-07的幹擾片段和PTCK303質粒上原有的一段水稻內含子序列)，表明的幹擾片段已經反向連接入中間載體pTCK303-flsZ/^-07-l中。至此，兩段0sZPT5-07的幹擾片段分別以正向和反向連接入PTCK303質粒中，提取該質粒並轉入農桿菌EHA105中，挑選出陽性克隆用於水稻遺傳轉化。 擴增0sZPT5_07幹擾片段的PCR反應體系是將48ul超純水、8ul IOXExTaq Buffer、9ul dntp (2. 5 mm)、7ul引物、4ul ExTaq酶和4ul基因組DNA充分混勻，總體積為80ul。PCR 反應程序為94°C預變性 4min，94°C變性 lmin，65°C退火 30s，72°C延伸 40s, 32個循環，72°C延伸10min，10°C保存。所用的酶切體系為30ul PCR產物或者質粒，8ul I XL Buffer，每種內切酶3ul，無菌水36 ul，總體積80ul。混勻後放於37°C水浴鍋保溫4-6小時。質粒DNA的提取、大腸桿菌感受態細胞製備和與熱激法轉化、根癌農桿菌EHA105感受態細胞製備與凍融法轉化的方法同實施例I。實施例3 :過量表達和幹涉表達重組質粒轉化水稻 ⑴水稻遺傳轉化
將粳稻品種中花15的種子放入50ml的三角瓶中，用70%的乙醇消毒2分鐘後加入3%的次氯酸繼續消毒滅菌25min ;種子用無菌水清洗2_3次後轉入無菌的濾紙上於超淨工作檯上晾乾；將種子接到NB培養基上，每皿以15 20粒為宜，置於27° C恆溫箱中暗培養2周；將種子長出的芽和根掐掉，留下的愈傷組織經過1-2次繼代培養；挑選生長迅速、顏色鮮黃、表面光滑、質地緻密、直徑大小為2-3mm的胚性愈傷組織顆粒用於遺傳轉化。將挑選出的愈傷組織置於27°C預培養3 5天；分別將活化好的帶有過量表達和幹涉表達重組質粒的農桿菌EHA105懸浮於添加有IOOuM乙醯丁香酮的AMM液體培養基中，於超淨臺中混勻後靜置I 2h形成農桿菌懸浮液；將預培養3 5天的愈傷轉入農桿菌懸浮液中，30min後倒掉菌液，將愈傷組織置於無菌紙上晾乾後轉入添加有IOOuM乙醯丁香酮的NB培養基上，於25°C條件下暗培養3天；用含潮黴素和抗生素的無菌水將愈傷組織經表面的農桿菌洗脫後置於在含有30 mg/L潮黴素的篩選培養基上培養15天，後再重複篩選培養一次；30天後，將篩選出的愈傷組織轉至含有50 mg/L潮黴素的篩選培養基上繼續篩選一周。將繼續增生分裂的抗性愈傷轉入分化培養基上於光照條件下培養，一周後愈傷開始轉綠，三周後開始長出幼芽和根，當芽長至2-3cm時，移至1/2MS培養基上；待幼苗在生根培養基上生長10天、在水中煉苗3天後再移至大田。⑵增強0sZPT5_07表達的轉基因植株表型
利用農桿菌介導法將基因過量表達的重組質粒轉化中花15後分化出23個Ttl株系。提取葉片的DNA，用潮黴素抗性基因的特異引物對Ttl株系進行PCR檢測(轉基因水稻能擴增出780bp的片段)。結果顯示有18個Ttl株系能擴增出一條如圖3中A所示的780bp左右的特異條帶，說明這18個Ttl株系就是轉基因植株，按單株收穫其種子。同時，提取這些轉基因Ttl植株根系的RNA，用半定量RT-PCR分析0sZPT5_07在轉基因水稻中的表達水平。結果如圖3中B所示，所有檢測的轉基因植株中0sZPT5-07的表達水平明顯增強。用於檢測轉基因水稻的PCR擴增潮黴素抗性基因片段的引物是上遊引物為ATGCCTGAACTCACCGCGAC，下遊引物為 CTATTCCTTTGCCCTCGGAC。PCR 擴增的體系為超純水13 ul, IOXExTaq Buffer2ul,2. 5 mm dNTP O. 4ul，引物 I. 6ul，ExTaq 酶O. 2ul，基因組DNA1.6ul。PCR 反應程序為:94°〇預變性41^11，941變性 lmin，68°C退火 40s，72°C延伸 40s，32個循環，72°C延伸10min，10°C保存。半定量RT-PCR分析方法是用TRIZOL法(Invitrogen)提取水稻幼根中的總RNA。用SYBRk Primescript RT-PCR kit將總RNA反轉錄成cDNA，稀釋10倍後用於半定·量RT-PCR分析，並以JOT#基因作對照。半定量RT-PCR分析所用基因的引物序列是上遊引物為GCCAAACCAAAACTACATGA，和下遊引物為TCTAGTTCTTCAACCGAGGA ;半定量RT-PCR分析所用JCTJtV引物序列是上遊引物為CCAGATCATGTTTGAGACCT，下遊引物為GTACCACCACTGAGAACGAT。為了觀察0sZPT5_07過量表達對水稻根系發育的影響，將6個轉基因T1株系的種子發芽後用自來水於28°C光照培養箱中進行水培；一周後每個株系選取生長基本一致的植株，換用營養液繼續培養2周。同時提取幼苗葉片DNA，用潮黴素特異引物進行PCR鑑定，將T1株系中的植株區分為轉基因植株與非轉基因植株。結果如圖3中C所示，轉基因水稻幼苗的根系生長明顯旺盛，其主根的平均長度比對照長 3cm(轉基因幼苗的主根長度平均
5.52±0. 87cm，非轉基因幼苗主根長度平均2. 55±0. 69cm)，而且側根的數量也比對照明顯增多。表明增強0sZPT5-07的表達明顯促進了稻幼苗的根系的生長。⑶減少0sZPT5_07基因表達的轉基因植株表型
利用農桿菌介導法將幹擾基因表達的重組質粒轉化中花15後分化出37個Ttl株系。提取葉片的DNA，用潮黴素抗性基因特異引物對這些Ttl株系進行PCR檢測。結果顯示有21個Ttl株系能擴增出一條如圖4中A所示的780bp左右的特異條帶，說明這21個Ttl株系就是轉基因植株，按單株收穫其種子。同時，提取這些轉基因Ttl植株根系的RNA，用半定量RT-PCR分析在轉基因水稻中的表達水平。結果如圖4中B所示，所有檢測的轉基因植株中基因在根系中的表達量明顯下降。轉基因植株的鑑定和基因表達水平的半定量RT-PCR分析方法與上述⑵相同。為了觀察幹擾表達對水稻根系發育的影響，將21個轉基因T1株系中的8個株系的種子發芽後用自來水於28°C光照培養箱中進行水培。從發芽後3天起，每隔2天記錄單株的幼苗的根部形態。同時，提取幼苗葉片DNA，用潮黴素特異引物進行PCR鑑定，將T1株系中的植株區分為轉基因植株與非轉基因植株。結果如圖4中C所示，降低
表達的轉基因水稻幼苗的根系生長明顯受到抑制。其中，發芽後7天的轉Z0K7-RNAi幼苗根平均為4. 18±0· 57 cm,比對照非轉基因幼苗主根(平均為6. 43±0· 81 cm)短 2cm (圖3中C);同時，轉基因水稻幼苗側根的數目和長度也比對照明顯減少。表明降低表達明顯抑制了水稻幼苗根系的生長。
參考文獻
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權利要求
1.一種鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用，其特徵在於，所述鋅指蛋白基因為C2H2型鋅指蛋白基因其核苷酸序列如SEQ ID NO. I所示，該基因編碼的胺基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。
2.根據權利要求I所述的鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用，其特徵在於，將含有基因的過表達真核重組質粒或含有基因的RNA幹涉表達真核重組質粒轉化水稻，獲得轉基因植株。
3.根據權利要求I所述的鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用，其特徵在於，所述過表達真核重組質粒是將基因全長編碼序列插入到真核表達載體中獲得。
4.根據權利要求3所述的鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用，其特徵在於，所述真核表達載體為PTCK303。
5.根據權利要求I所述的鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用，其特徵在於，所述RNA幹涉表達真核重組質粒是由基因片段和真核表達載體構成；所述0sZPT5-07基因片段是位於起始密碼子下遊335bp至917bp的核苷酸序列，將所述基因片段分別以正向和反向插入到真核表達載體中，正向插入的基因片段和反向插入的基因片段之間存在有478bp的內含子序列。
6.根據權利要求5所述的基因的RNA幹涉表達真核重組質粒，其特徵在於，所述真核表達載體為PTCK303。
全文摘要
本發明屬於植物基因工程領域。具體涉及一種鋅指蛋白基因在調節水稻根系發育中的應用。其核苷酸序列如序列表SEQIDNO.1所示，其編碼的胺基酸序列如序列表SEQIDNO.2所示。將所述基因全長編碼序列、所述基因片段正向和反向插入到真核載體中，獲得本發明所述OsZPT5-07基因過量表達、RNA幹涉表達的真核重組質粒。將上述兩種重組質粒轉化水稻，分別獲得OsZPT5-07過量表達和降低表達的轉基因植株。實驗表明與野生型相比，增強OsZPT5-07表達的水稻幼苗根系發達，而減少OsZPT5-07表達的水稻幼苗根系短而少。因此，本發明所述的基因對水稻根系的發育具有調控作用，可以用於改良水稻根系性狀。
文檔編號A01H5/00GK102796760SQ201210283798
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月10日 優先權日2012年8月10日
發明者段遠霖, 吳為人, 王傳蕾 申請人:福建農林大學