實時螢光定量pcr反應的基本步驟（快速認識螢光定量PCR原理）

2023-05-29 11:31:17 1

螢光定量PCR技術，是指在普通PCR技術的基礎上，在PCR反應體系中加入螢光基團，利用螢光信號積累監測整個PCR進程，最後通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。主要有兩種方法：

1、染料法：SYBR Green 染料

在PCR反應體系中，加入過量SYBR螢光染料，SYBR螢光染料特異性地摻入DNA雙鏈後，發射螢光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何螢光信號，從而保證螢光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。

2、TaqMan探針法：

探針完整時，報告基團發射的螢光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告螢光基團和淬滅螢光基團分離，從而螢光監測系統可接收到螢光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個螢光分子形成，實現了螢光信號的累積與PCR產物的形成完全同步。

1、Ct值含義

Ct值(Cycle threshold，循環閾值)的含義為:每個反應管內的螢光信號到達設定閾值時所經歷的循環數。

2、Ct值與初始模板的關係