奧林巴斯BX43臨床顯微鏡報價和使用

2023-07-17 20:32:46 1

　　一、操作方法及步驟：

　　①取材，未能固定的組織取材，不能太大太厚，厚者冰凍費時，大者難以切完整，最好為24×24×2mm。

　　②取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放於冷凍臺上，冰凍。小組織的應先取一支承器，滴上包埋劑讓其冷凍，形成一個小臺後，再放上細小組織，滴上包埋劑。

　　③將冷凍好的組織塊，夾緊於切片機持承器上，啟動粗進退鍵，轉動旋鈕，將組織修平。

　　④調好欲切的厚度，根據不同的組織而定，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍為厚切，一般在5～10um間。

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　　二、冰凍切片時的注意事項：

　　①防卷板及切片刀和持刀架上的板塊應保持乾淨，需經常用毛筆挑除切片殘餘和用柔軟的紙張擦。有時需要每切完一張切片後就用紙擦一次。因為這個地方是切片通過和附貼的地方，如果有殘餘的包埋劑粘於刀或板上，將會破壞甚至撕裂切片，便切片不能完整切出。

　　②多例多塊組織同時需做冰凍切片時，可各自放於不同的支承器上，於冷凍臺上凍起來，然後依據不同的編號，依序切片，這樣做既不費時也不會亂。

　　③放置組織冰凍前，應視組織的形狀及走勢來放置，所謂「砍柴看柴勢」，切片也是如此，如果胡亂放置，就不能收到很好的效果。

　　④組織塊不須經各種固定液固定，尤其是含水的固定液，在未達到固定前，更不能使用。臨床快速冰凍切片，不須要預先固定，一是為了爭取時間，二是固定了的組織，反而增加了切片的難度。如果使用未完全固定的組織做冰凍切片，就會出現冰晶。這是因為含水的固定液在組織未經固定前，其中的水份也可滲入到組織中去，當冰凍發生時，這些水份就存留於組織中，形成了冰晶。

　　⑤當切片時，如果發現冰凍過度時，可將冰凍的組織連同支承器取出來，在室溫停留片刻，再行切片，或者用口中哈氣，或者用大拇指按壓組織塊，以此來軟化組織，再行切片。另者，調高冰凍點。

　　⑥用於附貼切片的載玻片，不能存放於冷凍處，於室溫存放即可。因為當附貼切片時，從室溫中取出的載玻片與冷凍箱中的切片有一種溫度差，當溫度較高的載玻片附貼上溫度較低的切片時，由於兩種物質間溫度的差別，當它們碰撞在一起時，分子彼此間發生轉移而產生了一種吸附力，使切片與載玻片牢固地附貼在一起。如果使用冷藏的載玻片來附貼切片，由於溫度相同，沒有發生上述的現象。

　　三、冰凍切片的快速染色方法：

　　① 切片固定30秒-1分鐘。

　　② 水洗。

　　③ 染蘇木素3-5分鐘。

　　④ 分化。

　　⑤ 於鹼水中返藍20秒。

　　⑥ 伊紅染色10-20秒。

　　⑦ 脫水，透明，中性樹膠封固。

　　冰凍組織1-2分鐘，切片1分鐘，固定1分鐘，染色共五分鐘。總共在10分鐘內完成快速製片過程，結果與石蠟切片不相上下。冰凍切片的方法還有很多種，如甲醇循環的半導體冰凍切片法，二氧化碳冰凍切片法，半導體冰凍切片法和氯乙烷冰凍切片法等，這些方法在目前來說已很少使用，因此在這裡不作闡述。

　　常規方法：

　　(1)冰凍切片固定 10～30 s

　　(2)稍水洗 1～2 s

　　(3)蘇木精液染色(60℃) 30～60 s

　　(4)流水洗去蘇木精液 5～10 s

　　(5)1%鹽酸乙醇 1～3 s

　　(6)稍水洗 1～2 s

　　(7)促藍液返藍 5～10 s

　　(8)流水衝洗 15～30 s

　　(9)0.5%曙紅液染色 30～60 s

　　(10)蒸餾水稍洗 1～2 s

　　(11)80%乙醇 1～2 s

　　(12)95%乙醇 1～2 s

　　(13)無水乙醇 1～2 s

　　(14)石炭酸二甲苯 2～3 s

　　(15)二甲苯(Ⅰ) 2～3 s

　　(16)二甲苯(Ⅱ) 2～3 s

　　(17)中性樹膠封固。

　　註：第(14)步如果不用石炭酸二甲苯，可改用無水乙醇，染色結果為：細胞核藍色、胞質、肌纖維、膠原纖維和紅細胞呈深淺不一的紅色。

　　封片 切片染色後封片常用中性樹膠，酸性的樹膠可使胞核褪色，如樹膠放置時間過長，因氧化而變酸。中性樹膠可用二甲苯稀釋。樹膠過濃，封片時容易導致氣泡;過稀，封片時易使膠外溢，影響美觀，也會出現由於二甲苯揮發後缺膠的現象。