標準菌株使用標準（標準菌株驗證鑑定步驟）

2023-10-09 23:40:13

1、菌種活化：乾粉標準菌株 標準貯備菌株 工作菌株；

1.1 金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌標準菌株：挑取部分乾粉溶解於0.9%無菌氯化鈉溶液中，劃線接種於營養瓊脂平板上，36℃±1℃培養18-24小時。並觀察菌落形態。

a.金黃色葡萄球菌：菌落凸起，圓形，不透明；

b.大腸埃希氏菌：菌落稍凸，圓形，溼潤，乳白色；

c.銅綠假單胞菌：菌落扁平，圓形，邊緣不整齊，光滑溼潤，可產生藍綠或黃綠色素；

d. 枯草芽孢桿菌:表面粗糙不透明，鏡檢菌體有芽孢。

1.2 白色念珠菌：挑取部分乾粉溶解於0.9%無菌氯化鈉溶液中，劃線接種於改良馬丁瓊脂培養基平板或PDA瓊脂平板上，30℃-35℃培養24-48小時。本菌細胞呈卵圓形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革蘭氏染色陽性，但著色不均勻。

黑麴黴：挑取部分乾粉溶解於0.9%無菌氯化鈉溶液中，劃線接種於改良馬丁瓊脂斜面培養基上，23℃-28℃培養48-96小時。菌叢呈黑褐色，粗糙。

1.3 生孢梭菌：挑取部分乾粉溶解於0.9%無菌氯化鈉溶液中，接種於硫乙醇酸鹽流體培養基中，30℃～35℃培養18-24小時；或在厭氧條件下接種於哥倫比亞瓊脂上，30℃～35℃厭氧培養18-24小時。

2、菌種鑑定：

2.1 金黃色葡萄球菌：

革蘭氏染色試驗：革蘭氏陽性菌(紫色)，葡萄狀排列，球菌。

兔血漿試驗：接種1個單菌落於1支兔血漿溶液中，30℃-35℃培養至6小時，每半小時觀察一次。凝固為陽性。金黃色葡萄球菌為陽性反應。

2.2 大腸埃希氏菌：

革蘭氏染色試驗：革蘭氏陰性桿菌，紅色。

IMViC生化試驗：

2.3 銅綠假單胞菌：

革蘭氏染色試驗：革蘭氏陰性桿菌，紅色。

氧化酶試驗：將氧化酶試紙用蒸餾水浸溼，用細玻璃棒或一次性接種針挑取單個菌落，塗在試紙上。在60s內變為藍色或藍紫色為陽性，不變色為陰性。

綠膿菌素試驗：取斜面培養物接種於PDP瓊脂培養基斜面上，培養24小時，加三氯甲烷3～5ml至培養管中，攪碎培養基並充分振搖。靜置片刻，將三氯甲烷相移至另一試管中，加入1mol/L鹽酸試液約1ml，振搖後，靜置片刻，觀察。若鹽酸溶液呈粉紅色，為綠膿菌素試驗陽性，否則為陰性。本菌為綠膿菌素試驗陽性。

螢光試驗：接種於金氏B培養基(或假單胞菌產螢光色素培養基)上，36℃±1℃培養18-24小時，在366nm紫色燈下有藍綠色螢光。

2.4 枯草芽孢桿菌：

菌落形態：表面粗糙不透明，有皺摺。

鏡檢：用芽孢染色液染色，菌體有芽孢。

2.5 白色念珠菌：

革蘭氏染色試驗：呈卵圓形，很象酵母菌，比葡萄球菌大5～6倍，革蘭氏染色陽性，但著色不均勻。

念球菌顯色培養基：30-35℃培養24-48小時，呈綠色菌落。

產芽管試驗：挑取1%吐溫80-玉米瓊脂培養基上的培養物，接種於加有一滴血清的載玻片上，蓋上蓋玻片，置溼潤的平皿內，置35～37℃、1～3小時，置顯微鏡下觀察，可見到由孢子長出短小芽管。

2.6 黑麴黴：23℃-28℃培養48-96小時。菌叢呈黑褐色，粗糙，有黑色孢子產生。

2.7 生孢梭菌：

革蘭氏染色試驗：革蘭陽性梭菌，有或無卵圓形或球形的芽孢。

哥倫比亞瓊脂培養基試驗：接種於含慶大黴素的哥倫比亞瓊脂培養基平板上，置厭氧條件下培養48～72小時，應生長。

過氧化氫酶試驗：滴加3%過氧化氫試液，若菌落表面有氣泡產生，為過氧化氫酶試驗陽性，否則為陰性。本菌為陰性反應。

3、所需試劑：

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